CC BY
51
УДК 615.451.16.015.4
ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТОВ ЖИДКИХ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ТРЕХ ВИДОВ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
© 2009 г. Н.В. Кобыльченко, О.Н. Денисенко, Т.И. Блинова, С.А. Кулешова, Г.С. Гутенева
Пятигорская государственная фармацевтическая академия, Pyatigorsk State Pharmaceutical Academy,
пр. Калинина, 11, г. Пятигорск, 357532, Kalinin Ave, 11, Pyatigorsk, 357532,
[email protected] [email protected]
Разработаны технологические схемы получения экстрактов жидких в соотношении 1:2 на основе травы эхинацеи пурпурной, сушеницы топяной, синюхи голубой с использованием спирто-водных смесей трех концентраций — 70, 40, 20 0%. Выявлено, что экстракт жидкий 1:2, полученный с использованием спирта этилового 70%о-й концентрации, обладает противовоспалительной активностью, сопоставимой с эффектом препарата сравнения — эхинацеи настойка. Установлено, что применение экстракта жидкого 1:2 (экстрагент спирто-водная смесь 20%-й концентрации) ускоряет процесс заживления послеоперационных ран и ово-лосенение поврежденного слоя кожи. Исследуемые фитокомплексы в опытах проявили себя в качестве стимуляторов клеточного (экстракт жидкий 1:2 — спирт этиловый 20%>-й концентрации) и гуморального иммунитета (экстракт жидкий 1:2 — спирт этиловый 70%-й концентрации).
Ключевые слова: жидкий экстракт, эхинацеи пурпурной трава, спирто-водный экстрагент, антиоксидантная и иммуннотропная активность.
The technological schemes developed of 1:2 fluid extracts preparations on the basis of Echinacea purpurea herbs using 70, 40, 20 % alcohol-water mixes as an extragent. The 1:2 fluid extract obtained with 70 °% ethyl alcohol has been shown to possess anti-inflammatory activity comparable with that of Echinacea tincture. Application of 1:2 fluid extract (20 °% alcohol-water extragent) has been found to accelerate wound healing and hair restoration on the injured skin layer. Experimentally, the phytocomplexes studied proved to stimulate cellular (1:2 fluid extract with 20 °% ethyl alcohol) and humoral immunity (1:2 fluid extract with 70 °% ethyl alcohol).
Keywords: fluid extract, Echinacea purpurea herb, alcohol-water extragent, anti-inflammatory and immunotropic activity.
Проблема сохранения, укрепления и увеличения продолжительности жизни человека всегда была и остается одной из самых важных в медицине. Использование природных компонентов растительного происхождения и их применение с профилактической и лечебной целью известно с глубокой древности. Актуальность применения лекарственных препаратов из растительного сырья все больше возрастает, так как они биологически доступны организму по природе, практически не токсичны, не имеют побочного действия или оказывают его минимально. Роль биологически активных веществ некоторых лекарственных растений важна в укреплении или стимулировании иммунной системы и повышении защитных функций организма.
Терапевтическое действие препаратов растительного происхождения определяется не только основным действующим веществом, а совокупностью различных комплексов биологически активных соединений, фармакологическая эффективность которых обусловлена их гармоничным сочетанием. Наиболее перспективны в этом случае суммарные препараты или фитокомплексы.
В традиционной и научной медицине известно такое растение, как эхинацея пурпурная, которая заслужила мировую славу как стимулятор естественного происхождения, активизирующий неспецифическую резистентность организма. Она также оказывает ан-
тиоксидантное действие, способствует заживлению ран, язв.
Предыдущие исследования по получению фито-комплекса из смеси трех видов лекарственного растительного сырья позволили определить необходимые технологические параметры и разработать технологические схемы получения экстрактов жидких в соотношении 1:2 на основе травы эхинацеи пурпурной с использованием в качестве экстрагента спирто-водных смесей трех концентраций - 70, 40, 20 %.
Первым этапом исследований явилось изучение противовоспалительной активности экстрактов жидких 1:2, полученных с использованием в качестве экс-трагентов спирто-водных смесей трех концентраций -70, 40, 20 %. [1]. Наряду с методиками, позволяющими оценить действие растительных противовоспалительных средств на экссудацию, разработан ряд методик для изучения влияния исследуемых объектов на пролиферативные процессы [2]. В основе большинства из них лежит способность изучаемых веществ тормозить образование экспериментальных гранулем, уменьшать образование грануляционной ткани в воспалительном очаге, развивающемся в месте имплантации животному стерильного ватного шарика. Различные параметры, характеризующие развитие гранулемы, позволяют судить о влиянии изучаемых объектов на отдельные фазы воспалительного процесса, возникающего при подкожной имплантации ватного шарика. О процессе экссудации судили по разнице в
весе свежей отсепарированнои гранулемы и после ее высушивания до постоянной массы. О качестве пролиферации судили по разнице между весом гранулемы после высушивания и исходным весом сухого шарика. Модель воспаления создавали на белых крысах весом 180-200 г. Для этого формировали одинаковые объемом ватные шарики массой 15 мг, затем их стерилизовали. С боковой поверхности бедра животного удаляли волосяной покров на площади 3 х 3 см. Крыс наркотизировали хлоралгидратом в дозе 300 мг/кг веса. В стерильных условиях делали разрезы в коже (1,5 см) и подкожной жировой клетчатке. В разрез вводили по одному стерильному ватному шарику. После чего на кожу накладывали швы. Животным опытных групп ежедневно вводили перорально исследуемые экстракты, группе сравнения - эхинацеи настойку в дозе 3 мл/кг. Место операции обрабатывали исследуемым объектом. В контрольной группе наблюдали процесс самоизлечения.
Вес отсепарированных гранулем крыс, получавших экстракт жидкий 1:2, полученный с использоваВ эксперименте выявлено, что экстракт жидкий
нием спирта этилового 70%-й концентрации, был достоверно ниже, чем у контрольных животных (на 23,72 %). Вес извлеченных гранулем у крыс, которым применяли эхинацеи настойку и экстракты 1:2, полученных с использованием спирта 20- и 40%-й концентрации, не имел достоверных различий в сравнении с контролем [3].
В фазу отека достоверное уменьшение экссудата наблюдали у животных, которым выдавали жидкий экстракт 1:2, полученный с использованием спирта этилового 70%-й концентрации (на 21,25 %). Синтез гранулемы наиболее выраженно и достоверно относительно контроля был замедлен на фоне жидкого экстракта 1:2, полученного с использованием спирта этилового 70%-й концентрации (на 37,93 %). Процесс пролиферации на фоне жидкого экстракта 1:2, полученного с использованием спирта этилового 70%-й концентрации, достоверно не отличался от результата действия настойки эхинацеи (табл. 1).
Таблица 1
Изучение пролиферативной активности фитокомплексов из смеси трех видов лекарственного растительного сырья, М±т, мг
Исследуемый объект Объемная доля спирта в экстрагенте, % Вес гранулем, мг Экссудация, мг Пролиферация, мг
До высушивания После высушивания
Экстракт 20 405,5±16,60 74,8±2,72 330,8±15,04 59,8±2,72
40 354,0±32,48 72,5±7,02 281,5±26,56 57,5±6,24
70 278,3±9,60* 58,2±0,80* 220,1±8,96* 43,2±0,80*
Препарат сравнения - настойка эхинацеи 308,3±48,96 59,2±7,52* 249,1±41,44 44,2±3,52*
Контроль 364,8±22,43 84,6±7,12 220,2±16,43 69,6±9,12
* - изменения достоверны по отношению к контрольным данным, р < 0,05.
1:2, полученный с использованием спирта этилового 70%-й концентрации, обладает противовоспалительной активностью, сопоставимой с эффектом препарата сравнения - настойкой эхинацеи. Установлено, что применение экстракта жидкого 1:2 (экстрагент спир-то-водная смесь 20%-й концентрации) ускоряет процесс заживления послеоперационных ран и оволосе-нение поврежденного слоя кожи.
Иммунотропную активность у крыс определяли методом обнаружения антителобразующих клеток (АОК). Метод позволяет количественно исследовать антитела в селезенке у крыс и оценить влияние на гуморальный иммунитет. Число АОК в селезенке крыс определяли методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов в модификации Каннингейма. Иммунный ответ оценивали по количеству АОК на 106 кариоцитов селезенки [4]. Второе исследование проводили по методу определения ро-зеткообразующих клеток (РОК). Метод позволяет оценить клеточный иммунитет. Готовили мазки, которые фиксировали, окрашивали по Романовскому. В мазке подсчитывали 200 лейкоцитов, определяя среди них РОК в пересчете на их процентное содержание.
Исследования проводили на крысах линии Вистар. Животных разделили на контрольные и опытные группы. Контрольной группе вводили физиологиче-
ский раствор в тех же объемах и в те же сроки, что и животным опытных групп. Контроля было два: 1 -биологический (интактные животные), 2 - животные, получавшие препарат сравнения. В качестве препарата сравнения использовали настойку эхинацеи - аналог по действию [3]. В качестве опытных групп были животные, получавшие исследуемые вещества.
Опыт 1 - жидкий экстракт 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 20%-й концентрации, опыт 2 - жидкий экстракт 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 40%-й концентрации, опыт 3 -жидкий экстракт 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 70%-й концентрации. Вещества вводили перорально в дозе 3 мл/кг в течение 7 дней.
Иммунизацию животных осуществляли внутри-брюшинным введением эритроцитов барана в дозе 2х108 клеток/мл. Все травматические манипуляции на животных проводили под эфирным наркозом как в контроле, так и в опытах. Животных для исследования получали из питомника лабораторных животных АМН РФ «Рапполово» и содержали в условиях вивария ПятГФА при одинаковых условиях и на стандартном рационе питания. Забой животных осуществ-
ляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».
Результаты проведенных исследований представлены в табл. 2, 3.
Из табл. 2 следует, что экстракт жидкий 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 70%-й концентрации, проявил иммуностимулирующий эффект (на 24,1 % относительно контроля 1).
Экстракт жидкий 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 20%-й концентрации, проявил иммуностимулирующий эффект по клеточному типу (на 21,68 % относительно контроля 1).
Исследуемые фитокомплексы в опытах проявили себя в качестве стимуляторов клеточного (жидкий экстракт 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 20%-й концентрации) и гуморального иммунитета (жидкий экстракт 1:2, полученный с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 70%-й концентрации).
Литература
Таблица 2
Оценка гуморального иммунитета
Исследуемый объект АОКх106 спленоцитов Относительно контроля 1, %
Контроль 1 (интактные) 91,17±3,37 -
Контроль 2 настойка (эхинацеи) 105,834±4,19* 16,08t
Опыт 1 (экстракт жидкий 1:2 на спирте этиловом 20 %) 96,17±3,18 5,48t
Опыт 2 (экстракт жидкий 1:2 на спирте этиловом 40 %) 96,17±2,89 5,48t
Опыт 3 (экстракт жидкий 1:2 на спирте этиловом 70 %) 113,17±5,39 24,13t
- изменения достоверны по отношению к контролю 1, р<0,05.
Оценка клеточного иммунитета
Таблица 3
1. Фармакотехнологические исследования по разработке фитокомплекса из смеси трех видов лекарственного растительного сырья / О.Н. Денисенко [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. Пятигорск, 2007. Вып. 62. С. 159-160.
2. Фисенко В.П. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000. 398 с.
3. Чекман И.С. Клинико-фармакологические свойства эхинацеи // Провизор. 2001. № 6. С. 40-41.
Исследуемый объект РОК в селезенке, % Относительно контроля 1,%
Контроль 1 (интактные) 31,5±2,03 -
Контроль 2 (настойка эхинацеи) 19,83±1,77* 37,04
Опыт 1 (экстракт жидкий 1:2 на спирте этиловом 20 %) 38,33±2,29* 21,68t
Опыт 2 (экстракт жидкий 1:2 на спирте этиловом 40 %) 27,83±2,83 11,654
Опыт 3 (экстракт жидкий 1:2 на спирте этиловом 70 %) 32,5±2,94 3,17t
* - изменения достоверны по отношению к контрольным данным, р<0,05.
4. ФримельН. Иммунологические методы. М., 1986. 365 с.
Поступила в редакцию
10 марта 2009 г.
