CC BY
93
УДК [615.451.16.012:582.998.2; 582.782]. 076.9. 015.11
ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ СТАБИЛИЗИРОВАННЫХ ВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ РОМАШКИ, ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА, КАЛЕНДУЛЫ, КРУШИНЫ
Шаталова1 Т.А., Сергеева1 Е.О., Мичник1 Л.А., Мичник1 О.В., Клишина2 И.И.
1Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО Волгоградский государственный медицинский университет, г. Пятигорск, Российская Федерация. 2 ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, г. Москва, Российская Федерация.
Аннотация. Водные настои из растительного сырья являются популярной лекарственной формой. Однако, водные извлечения нестабильны, подвержены химической и микробиологической деструкции, срок их хранения не превышает 3 дней. Стабилизированный настои могут быть получены по следующей технологии: использование кипящей воды очищенной при экстрагировании, добавление стабилизаторов: нипагина до 0,15%, натрия метабисульфита до 0,5%, трилон Б до 0,5%. Срок хранения таких извлечений составляет 12 месяцев и более. Цель работы -- изучение фармакологической активности стабилизированных водных настоев коры крушины (Frangula alnus), цветков ромашки лекарственный (Matricaria chamomTlla), цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis), травы тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium) в сравнении с настоями, приготовленными по технологии, указанной в Государственной фармакопее. Исследования показали, что фармакологический эффект стабилизированных водных извлечений после 12 месяцев хранения в естественных условиях, не отличается от действия свежеприготовленных настоев, приготовленных согласно рекомендациям Государственной фармакопеи. Таким образом, стабилизация водных извлечений из сырья крушины, ромашки, тысячелистника, календулы позволяет увеличить срок их использования и не влияет на основные фармакологические эффекты, связанные с применением данных растений. Ключевые слова: стабилизированные водные извлечения, настои, отвары, кора крушины, цветки ромашки, трава тысячелистника, цветки календулы, фармакологический эффект
Настои и отвары из лекарственных растений являются одной из популярных лекарственных форм. Однако известно, что водные извлечения из лекарственных растений сохраняют микробиологическую стабильность в течение 3 дней. Биологически активные вещества (БАВ) настоев и отваров с течением времени подвергаются химической деструкции и окислению. В результате ранее проведенных исследований [4] установлено, что оптимальными условиями получения извлечений, стабильных в течение до двух лет, являются: экстрагирование сырья кипящей водой очищенной, микробиологическая стабилизация путем добавления нипагина в концентрации 0,15%, химическая стабилизация путем добавления натрия мета- бисульфита (0,5%) и трилона Б (0,5%).
Цель исследования: изучение фармакологической активности стабилизированных водных извлечений крушины, ромашки, календулы, тысячелистника (1:10) в сравнении с прототипами - отваром из коры крушины, настоями травы тысячелистника, цветков ромашки, цветков календулы (1:10), приготовленными по технологии, изложенной в Государственной фармакопее [2].
Материалы и методы исследования. Объектами исследований являлись стабилизированные водные из-
влечения крушины, тысячелистника, ромашки, календулы, после 12 месяцев хранения в естественных условиях [4] и их аналоги (в дальнейшем - «обычные»), полученные по технологии, изложенной в Государственной фармакопее, (отвар из коры крушины, настои травы тысячелистника, цветков ромашки, цветков календулы,). Стабилизированные извлечения были получены по следующей технологии: растительное сырье экстрагировали кипящей водой очищенной, проводили стабилизацию: микробиологическую (добавляли нипагин в концентрации 0,15%) и химическую (добавляли натрия ме-табисульфит (0,5%) и трилон Б (0,5%)). Отвары крушины сравнивали, изучая их слабительный эффект. Для настоев тысячелистника определяли желчегонную активность, для настоев ромашки и календулы - противовоспалительное действие.
Исследование отваров крушины проводили в двух сериях опытов. В первой серии оценивали слабительный эффект отваров крушины 1:10 (стабилизированного и обычного). При этом определялась величина дефекации животных [1, 6]. Белым мышам, массой 20-22 г, получавшим пищу и воду без ограничений, вводили исследуемые вещества в дозе 0,2 г/кг в 0,5 мл водного раствора. Фекалии взвешивали через 3; 8 и 24 часа. Контрольная
—--—
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
группа животных получала физиологический раствор. Во второй серии опытов оценивали способность отваров крушины влиять на эвакуаторную способность кишечника крыс по продвижению метки [1]. Животные не получали пищу в течение суток, питье не ограничивалось. Крысам массой 180-200 г вводили натощак взвесь 5% активированного угля в 2 мл воды очищенной. Через 15 мин животные опытных групп перорально получали, соответственно, отвар крушины стабилизированный и отвар крушины обычный в дозе 0,2 г/кг в 1 мл воды очищенной, контрольной - 1 мл физиологического раствора. Через 2 часа после введения исследуемых веществ животных забивали декапитированием и измеряли степень продвижения метки по кишечнику.
Исследование действия настоев тысячелистника проводили путем определения их желчегонной активности. Эксперимент проводили на белых крысах - самках массой 200-220 г по методу Литвинчука М.Д. и Новоси-лец В.И. [5]. Исследуемые объекты: настой тысячелистника стабилизированный 1:10 и его прототип - настой тысячелистника обычный 1: 10 вводили в дозе 0,04 г/кг в 1 мл дистиллированной воды перорально либо однократно, либо в течение 7 дней до начала эксперимента. Желчь собирали через катетер, вставленный в резервуар для сбора желчи, сформированный из участка 12 перст-ной кишки. Предварительно животные голодали в течение 12 часов. Учитывали общее количество желчи, выделившееся за 4 часа наблюдения. Определяли концентрацию желчных кислот, холестерина, рассчитывали величину холато- холестеринового коэффициента, а также
Влияние отваров крушины на ве
общее количество этих веществ, выделяемых в составе желчи [3, 6].
Исследование действия настоев ромашки и календулы проводили путем определения их противовоспалительной активности. Действие настоев ромашки стабилизированного 1:10, календулы стабилизированного 1:10 и их прототипов - настоя ромашки обычного 1: 10, настоя календулы обычного 1:10 изучали на модели гистаминового отека [1]. Эксперимент был проведен на белых неполовозрелых беспородных крысах обоего пола, массой 70-90 г. Каждая группа включала 10 животных (5 самцов и 5 самок). Животным 1-й группы вводили через зонд в желудок в течение 7 дней настои стабилизированные в терапевтической дозе 0,08 г/кг в объеме 1 мл водного раствора, 2-й группы - настои обычные в соответствующей дозе. Животные контрольной группы в эти же сроки получали изотонический раствор хлорида натрия. Воспаление вызывали субплантарным введением в заднюю лапку крысы 0,1 мл 0,1% раствора гистамина дигидрохлорида. Противовоспалительное действие оценивали по величине прироста объема лапки в процентах к исходному. Объем стопы измеряли онкометрически. Результаты опытов обрабатывались методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента
Результаты исследования. Результаты опытов по изучению влияния стабилизированного отвара крушины (ОК стаб) и отвара крушины обычного (ОК) на величину дефекации приведены в таблице 1.
Таблица 1
тану дефекации у животных (мыши)
Условия опыта Масса фекалий в г, выделяемая за интервал
3 часа % 8 часов % 24 часа %
Контроль 0,140±0,008 100,0 0,47±0,025 100,0 1,02±0,07 100,0
Животные, получавшие ОК стаб 0,150±0,010 107,1 0,78±0,05х 165,9 1,14±0,09 111,8
Животные, получавшие ОК 0,148±0,011 105,7 0,76±0,045х 161,2 1,13±0,09 110,8
Примечание: х - достоверно по отношению к контролю (р < 0,01).
Результаты, представленные в таблице 1, показывают, что через 3 часа после введения исследуемых веществ масса фекалий у животных опытных групп не отличалась от таковой у животных контрольной группы. Через 8 часов наблюдения масса фекалий достоверно увеличивалась у животных, получавших отвары крушины, и превышала результаты животных контрольной группы на 65,9% и 61,2% соответственно, что согласуется с данными о начале действия антрагликозидов через 8-12 часов после приема [3, 4]. Через 24 часа наблюдений
общее количество фекалий, выделенное животными, получавшими отвары, практически совпадало. Макроскопическое исследование кала [6] не выявило различий у животных контрольной и опытной групп. У всех животных кал имел характерную для мышей форму колбасо-видных фрагментов, мягкую консистенцию и коричневый цвет. Слизи, крови и гноя не отмечено. Результаты изучения влияния отваров крушины эвакуаторную способность кишечника крыс приведены в таблице 2.
Таблица 2
Величина пассажа по толстому кишечнику крыс, получавших отвары крушины
Условия опыта Величина пассажа
см %
Контроль 3,8 ± 0,35 100,0
Животные, получавшие ОК стаб 11,8 ± 1,20х 310,5
Животные, получавшие ОК 11,7 ± 0,86х 307,9
Примечание: х - достоверно по отношению к контролю (р < 0,001).
Данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о достоверном увеличении эвакуаторной способности кишечника крыс под влиянием как обычных, так и стабилизированных отваров крушины.
Результаты изучения действия настоев тысячелистника стабилизированного (НТ стаб) и обычного (НТ) на секрецию и химический состав желчи у крыс представлены в таблице 3.
Таблица 3
Влияние настоев тысячелистника на секрецию и химический состав желчи у крыс
Условия опыта Общее количество желчи за 4 ч мл/кг Общее количество мг/кг за 4ч Холато-холестериновый
Желчных кислот холестерина
Контроль 8,9±0,63 32,7±2,0 1,67±0,16 20,4±2,3
Животные, получавшие НТ стаб (однократное введение) 10,5+0,87 35,4±1,8 1,86+0,07 21,3+1,7
Животные, получавшие НТ (однократное введение) 9,8+0,77 33,8+3,5 1,47+0,15 20,3±1,9
Животные, получавшие НТ стаб (курсовое введение) 11,7+0,71х 56,8±4,0Х 3,42±0,31х 19,2+2,3*
Животные, получавшие НТ (курсовое введение) 11,5±0,61х 57,2±2,9Х 3,43±0,22х 19,2±1,3*4
Примечание: х - достоверно по отношению к контролю (р < 0,02)
Данные эксперимента показывают, что при однократном применении настоев тысячелистника общее количество желчи за 4 часа наблюдений, содержание в ней желчных кислот и холестерина у животных обеих опытных групп были такими же, как и у животных контрольной группы. Однако курсовое введение исследуемых веществ выявило отчетливый желчегонный эффект. Это проявилось в увеличении общего количества желчи на 31,5% у животных, получавших настой тысячелистника стабилизированный, и на 29,2% у животных, получавших настой тысячелистника обычный. Также достоверно возросло суммарное содержание в желчи холатов на 73,7% и экскреция холестерина на 104,8% у животных получавших стабилизированнй настой, и на 74,9% и 105,4% соответственно у живот-
ных, получавших обычный настой по сравнению с контролем. Величина холато-холестеринового коэффициента во всех исследуемых группах не отличалась от данного показателя в контрольной группе.
Результаты изучения противовоспалительной активности настоев ромашки стабилизированного (НР стаб) 1:10, календулы стабилизированного (НК стаб) 1:10 и их прототипов - настоя ромашки обычного (НР) 1:10. настоя календулы обычного (НК) 1:10 приведены в таблице 4.
Анализ результатов исследования, представленных в таблице 4, показывает, что введение исследуемых объектов в терапевтических дозах при курсовом введении, вызывает уменьшение воспалительной реакции, достоверно снижает отек ко 2-му и 3-му часам наблюдений.
Таблица 4
Динамика нарастания отека стопы крыс при субплантарном введении гистамина на фоне введения настоев календулы и ромашки
Условия опыта Прирост объема стопы крысы к исходному, %
Время 1/2 часа 1 час 2 час 3 час
Контроль 54,0 ± 5,3 46,8 ± 2,8 35,7 ± 3,2 24,2 ±2,1
НР стаб 49,9 ± 2,8 39,5 + 4,1 23,6 ± 2,3х 14,4+ 1,8х
НР 51,1 ±3,5 40,7 ± 4,2 24,0 ± 2,2 х 15,2 ± 2,2х
НК стаб 49,7 ± 2,5 38,4 + 3,1 25,2 ± 2,1х 16,3+ 1,7х
НК 52,2 ±2,8 39,6 ± 3,2 26,1 ± 2,4 х 17,2 ± 1,9х
Примечание: х - достоверно (р < 0,05) по отношению к контролю
Выводы. Сравнительные фармакологические исследования стабилизированных водных извлечений крушины, ромашки, тысячелистника, календулы и их аналогов, полученных по технологии, изложенной в Государственной фармакопее, показали, что их фармакологическое действие идентично. Таким образом, стабилизация водных извлечений из сырья крушины, ромашки, тысячелистника, календулы позволяет увеличить срок их использования и не влияет на основные фармакологические эффекты, связанные с применением данных растений.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
[1] Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. - М.: Медицина, 1974.
[2] Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издания, 2015. Режим доступа: http://www.femb.ru/feml.
[3] Изучение влияния отвара и спиртового извлечения травы мяты длиннолистной (Mentha longifolia l.) на секрецию желчи у крыс./Сидакова Т.М., Саджая Л.А., Сергеева Е.О., Попова О.И.//Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2011. Т. 9. № 3. С. 30-32.
[4] Изучение способов стабилизации водных извлечений из цветков ромашки, календулы, травы тысячелистника. / М.В. Гав-рилин, Т.А. Шаталова, А.Ю. Айрапетова и др. // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Т. 12. № 1(8). 2010. С. 2019-2022.
[5] Литвинчук М.Д., Новосилец З.И. Точный и быстрый метод оценки активности желчегонных средств на крысах.// Бюл. эксперим. биол. и мед. 1980. № 6. С. 750-752.
[6] Шевченко И.А. Лабораторные методы исследования при заболеваниях органов пищеварения. - Ленинград: Медицина, 1986. 231 с.
STUDYING OF PHARMACOLOGICAL ACTION OF THE STABILIZED WATER EXTRACTION OF THE FRANGULA ALNUS, CHAMOMILLAE OFFICINALIS , ACHILLEA MILLEFOLIUM, CALENDULA OFFICINALIS
Shatalova1 T.A., Sergeeva1 E. O., Michnik1 L.A., Michnik1 O. V., Klishina 2 I.I.
1Volgograd State Medical University, Pyatigorsk, Russian Federation
2First Moscow State Medical University named after I. M. Sechenov, Moscow, Russian Federation
Annotation. Water extracts of plant materials (infusions, decoctions) are a popular dosage form. However, aqueous extracts from plants are unstable, they are susceptible to chemical and microbial degradation, the shelf life does not exceed 3 days. Stable extracts can be obtained according to the following technology: the use of boiling water purified at the extraction, the addition of stabilizers: nipagin to 0.15%, sodium metabisulfite 0.5%, Trilon B to 0.5%. The shelf life of extracts is increased to 12 months or more. The aim of this work is the study of pharmacological activity of the stabilized aqueous infusions of the bark of a buckthorn (Frangula alnus), flowers of chamomile (Matricaria chamomilla), marigold flowers (Calendula officinalis), the herb yarrow (Achillea millefolium) compared to infusions prepared according to the technology specified in the State Pharmacopoeia. Studies have shown that the pharmacological effect of stabilized water extraction after 12 months of storage under natural conditions, does not differ from the action of freshly prepared infusions, prepared in accordance with the recommendations of the State Pharmacopoeia. Thus, the stabilization of aqueous extracts from raw materials of buckthorn, chamomile, yarrow, calendula allows to increase the period of use and does not affect the basic pharmacological effects associated with the use of these plants.
Key words: stable water extract, infusions, decoctions, buckthorn bark (Frangula alnus), chamomile flowers (Matricaria chamomilla), yarrow herb (Achillea millefolium), calendula flowers (Calendula officinalis), pharmacological effect
REFERENCES
[1] Gacura V. V. Methods of primary pharmacological studies of biologically active substances. - M.: Medicine, 1974. (in Russian)
[2] State Pharmacopoeia of the Russian Federation the thirteenth edition, 2015. URL: http://www.femb.ru/feml. (in Russian)
[3] The study of the influence of decoction and ethanolic extract of herb of mint longifolia (Mentha longifolia l.) on the secretion of bile in rats ./ T.M. Sidakova, L.A. Sadzhaya, E.O. Sergeeva, O.I. Popova //Voprosy biologicheskoj, medicinskoj i farmacevticheskoj himii., 2011, vol. 9, № 3, pp. 30-32. (in Russian)
[4] The study of methods of stabilizing aqueous extracts of flowers of chamomile, calendula, yarrow herb. / M.V. Gavrilin, T.A. Shata-lova, A.YU. Ajrapetova i dr. // Izvestiya Samarskogo nauchnogo centra Rossijskoj akademii nauk, vol. 12, № 1(8), 2010, pp. 20192022. (in Russian)
[5] Litvinchuk M.D., Novosilec Z.I. Accurate and quick method of assessing the activity of a choleretic funds in rats // Byulleten' ehk-sperimental'noj biologii i mediciny, 1980, № 6, pp. 750-752. (in Russian)
[6] Shevchenko I.A. Laboratory methods of research at diseases of the digestive system. - Leningrad: Medicine, 1986, 231 p. (in Russian)
