CC BY
81
БИОХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ
УДК 615. 272.6
В. А. Константинов, П. А. Гуревич, В. А. Антипов, Т. Б. Пахомова,
В. В. Зайцев, Б. П. Струнин, Л. Ф.Саттарова
ИЗУЧЕНИЕ ЭМБРИОТОКСИЧЕСКОГО И ТЕРАТОГЕННОГО ВЛИЯНИЯ СТИМУЛЯТОРА ПРОДУКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА «ПОЛИЗОН»
Ключевые слова: стимулятор продуктивности, эмбриотоксичность, тератогенность.
Исследовано тератогенное и эмбриотоксическое влияние стимулятора продуктивности животных и птиц на эмбрионы кур.
Keywords: Stimulator productivity, embryotoxicity, teratogenicity.
The investigated the teratogenic and embryotoxic effects of a stimulator of efficiency of animals and birds on embryos of hens.
Стабильное развитие птицеводства и повышение его рентабельности, во многом зависит от кормовой базы и использования средств, позволяющих более полно реализовать продуктивные качества кур. Разработка эффективных и малотоксичных стимуляторов продуктивности является актуальной задачей.
Целью исследования была оценка эмбриотоксической и тератогенной активности стимулятора продуктивности животных и птиц препарата «Полизон» [1] на эмбрионах кур.
Исследования проводили на 7-дневных эмбрионах кур. Препарат «Полизон» вводили в трёх дозах: 1/2, 1/10 и 1/100 LD50 для эмбрионов, установленных ранее при изучении острой токсичности [2-4].
Перед введением изучаемого вещества произвели овоскопию эмбрионов и обвели карандашом на скорлупе границу воздушного пространства, а также обозначили место нахождения зародыша. В этих местах специально заточенным скальпелем в виде копья сделали по одному отверстию. Перед введением препарата боковую поверхность и тупой конец яйца протёрли сначала 5%-ной настойкой йода, а затем спиртом. Проникающее в воздушную камеру отверстие необходимо для того, чтобы введённое в желточный мешок вещество не вытекало обратно. При горизонтальном положении яйца через отверстие в боковой поверхности на глубине 2-3 см вводили иглу и при помощи однограммового шприца (с делением 0,01 мл) инъецировали препарат «Полизон» в объёме 0,1-0,2 мл. После инъекции раствора отверстия в скорлупе заливали стерильным расплавленным парафином.
Препарат «Полизон» вводили в желточный мешок в различных дозах (3 дозы по 10 эмбрионов на каждую дозу). Параллельно с этим равному количеству подопытных эмбрионов (30 штук) в желточный мешок вводили изотонический раствор хлорида натрия. Эмбрионов инкубировали в течение 14 дней по общепринятому режиму инкубации куриных яиц.
Ежедневно проводили овоскопирование, что позволяло определять их жизнеспособность.
На 19-е сутки инкубации, умерщвлённые в морозильной камере плоды взвешивали, измеряли их кранио-каудальный размер, длину передних и задних конечностей. При наружном осмотре не выявлено различий между плодами контрольных и опытных групп. Длина передних и задних конечностей, масса тела также не имели статистически достоверных отличий (табл. 1). Не наблюдалось видимых изменений в скелете грудных (свободного крыла) и тазовых конечностей, в лицевом черепе.
Таблица 1 - Сравнительная оценка развития эмбрионов кур при различной дозировке препарата «Полизон»
Группы эмбрио- нов Количество Передние конечности, мм Задние конечности, мм Кранио-каудальный размер, мм Масса тела, г
Конт- рольная 30 31,0±0,40 62,0±0,16 74,9±0,10 22,9±0,32
группа
Опытные группы (препарат «Полизон», мг/кг):
1/2 ЬБбо 30 30,8±0,22 63,8±0,18 75,1±0,46 23,9±0,10
1/10 Ббо 30 31,6±0,50 63,6±0,10 76,8±0,10 23,1±0,08
1/100 ЬБ5о 30 30,2±0,42 62,7±0,25 74,2±0,12 22,9±0,14
Интакт- ные 20 31,6±0,23 65,5±0,77 76,0±0,12 24,8±0,99
После внешнего осмотра половину эмбрионов фиксировали в жидкости Буэна для последующего изучения состояния внутренних органов, другую половину в 96%-ном спирте для изучения скелета. Внутренние органы исследованы по методу Вильсона, модифицированному в отделе эмбриологии Института экспериментальной медицины АМН СССР. Декальцинировали ткани эмбрионов в жидкости Буэна (перенасыщенный раствор пикриновой кислоты - 15 частей, 40%-ный формалин - 3 части, ледяная уксусная кислота - 1 часть). Эмбрионов в этой жидкости выдерживали 10 суток, после чего на столике острым скальпелем делали сегментарные срезы: 1 - носовые пазухи, 2 - большие полушария, 3 -мозжечок, продолговатый мозг, 4 - трахея, пищевод, сосуды, 5 - сердце, лёгкие, 6 -кишечник, печень, 7 - почки.
При исследовании внутренних органов и скелетной системы контрольных эмбрионов и тех, которым вводили максимальные дозы препарата «Полизон», на серии параллельных разрезов тела, шеи и голов, а также на тотальных препаратах выявлялась следующая картина.
При осмотре обонятельных луковиц и глазных яблок никаких изменений патологического характера не обнаружено. Глазные яблоки овальные и крупные. Радужная оболочка равномерно пигментирована.
Все отделы конечного и промежуточного мозга выражены достаточно чётко и соответствуют норме.
На всех разрезах мозжечка и продолговатого мозга выявлялось нормальное развитие.
Пищевод с рельефной складчатой слизистой оболочкой. Трахея круглая, в ней хорошо просматриваются кольца. У основания шеи обнаруживается зоб. Крупные сосуды имеют нормальную топографию и ветвление, их стенки не имеют морфологических отклонений.
На разрезах через каждые 0,5 см аномалий в топографии и анатомии пищевода, желудка, сердца, лёгких и крупных кровеносных сосудов не выявлено. У эмбрионов опытных групп, как и в контроле, сердце четырёхкамерное, лёгкое - двудольное, печень - обычной консистенции, крупная.
Слизистая оболочка желудка имеет выраженную складчатость, без патологических изменений. Почки на разрезе не дифференцированы на корковой и мозговой слои, что соответствует анатомическим особенностям. Семенники парные и имеют бобовидную форму. Изменений в развитии яичников и яйцеводов у самок не наблюдалось.
Для изучения скелета использовали метод Даусона, модифицированный в отделе эмбриологии Института экспериментальной медицины АМН СССР [5,6]. Для этого вскрывали брюшную полость эмбрионов, извлекали внутренние органы, взвешивали их. Эмбрионов фиксировали в 96%-ном спирте 7 дней, периодически (5 раз) меняя при этом спирт, затем эмбрионов погружали в 1%-ный раствор едкого калия для просветлённых тканей. Время нахождения в этом растворе определяли эмпирически: когда были видны закладки костей, эмбрионов вынимали из щёлочи и промывали водопроводной водой. Затем переносили их в раствор А (150 мл глицерина, 800 мл дистиллированной воды и 10 г КОН), к которому перед употреблением добавляли раствор Б (1%-ный раствор красного ализарина) до появления светло-фиолетового цвета. Через 4-5 дней окостеневшие участки скелета окрашивались в интенсивно красно-фиолетовый цвет. Для окончательного просветления эмбрионов переносили в чистый раствор А на 15 дней, затем производили их медленную проводку через смеси спирта, глицерина и воды в разных пропорциях (1:2:7, 2:2:6, 4:4:2 соответственно, равные части спирта и глицерина, чистый глицерин к которому добавляли 1-2 капли формалина), чтобы предупредить загнивание. Эмбрионов с окрашенным скелетом изучали под микроскопом, при помощи окуляр микрометра определяли длину закладок окостенения, подсчитывали количество рёбер и позвонков. Все полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики.
Состояние костной системы оценивали по степени оссификации стволового скелета, головы, грудных и тазовых конечностей, хвостовых позвонков, количеству рёбер и их общему пространственному расположению.
При исследовании мозгового отдела черепа чётко идентифицируются затылочная, височная, теменные и лобные кости. Теменная кость сращена с височной и лобной. Степень оссификации костей равномерная.
В лицевой части черепа идентифицируются дорсальная, вентральная кости челюсти, резцовая, носовая, нёбные, крыловидные, квадротноскуловые и квадратные кости. У всех эмбрионов глазные орбиты практически одинаковы. Кости лицевого черепа у эмбрионов опытных групп оссифицированы идентично контрольной группе.
Стволовой скелет представлен шейным, грудным, тазовым и хвостовым отделами.
Шейный отдел Б - образно изогнут, содержит 7 позвонков, тела которых оссифицированы умеренно.
Грудной отдел представлен 7-ю позвонками, имеющими центры оссификации в теле и вентральных отростках. Позвонки не сращены друг с другом.
В тазовом отделе 14 сегментов позвонков, в хвостовом - 5. Центры оссификации определяются только в теле. Сращение пигистила с хвостовыми позвонками не отмечено.
У эмбрионов всех групп по 7 пар рёбер. Рёбра не соединены с грудиной. В рёберных лентах определяются вертебральные и стернальные костные участки, не соединённые друг с другом. Размеры рёбер с обеих сторон одинаковы.
У эмбрионов грудина хрящевая. Единичные участки оссификации определялись в среднем и рёберном её отделе.
Скелет грудных конечностей представлен ключицей, плечевой, локтевой и лучевой костями. Оссификация всех костей выражена нормально, идентично контрольной группе.
Тазовый пояс представлен подвздошной, седалищной и лонной костями, не сращенными друг с другом и с позвоночным столбом. В свободной тазовой конечности определялась бедренная, большеберцовая и малоберцовая кости. Оссификация всех костей тазового пояса и свободной тазовой конечности достаточно выражена.
В стопе и плюсне кости оссифицированы идентично контролю. Первый, второй и третий пальцы содержат по три фаланги, четвёртый - четыре.
Подводя итог проведённым исследованиям, можно заключить, что препарат «Полизон» не вызывает у эмбрионов кур отклонений в топографии и морфологии внутренних органов, в скорости оссификации костей скелета и их пространственной ориентации.
Выводы
1. Препарат «Полизон»не обладает эмбриотоксическими свойствами.
2. Стимулятор продуктивности «Полизон» не оказывает тератогенного влияния.
Литература
1. Струнин, Б.П. Разработка методов аналитического контроля препарата Полизон / Б.П. Струнин и др. // Вестник Казан. технол. ун-та. - 2010. - № 7. - С.53-56.
2. Лениндженр, А. Биохимия / А. Лениндженр. - М.: Мир, 1976. - 24 с.
3. Кудрявцева, А.А. Клиническая гематология животных / А.А. Кудрявцева, Л.А.Кудрявцева - М.: Колос, 1974. - 399 с.
4. Ступников, А.А. Токсичность гербицидов и арборицидов и профилактика отравлений животных / А.А. Ступников. - Л.: Колос (Ленингр.отд.), 1975.
5. Гацура, В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ / В.В. Гацура. - М.: Медицина, 1974. - 240 с.
6. Васильева, Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных. Изд. II / Е.А. Васильева. -М.: Россельхозиздат, 1982. - 254 с.
© В. А. Константинов - канд. с/х наук Самарской госуд. сельскохозяйственной академии; П. А. Гуревич - д-р хим. наук, проф. каф. органической химии КГТУ, petr_gurevich@mail.ru; В. А. Антипов - чл.-корр. РАСХН, ФГОУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет; Т. Б. Пахомова - асп. ООО «Поливит», г.Уфа; В. В. Зайцев - д-р биол. наук Самарской госуд. сельскохозяйственной академии; Б. П. Струнин - д-р техн. наук, проф. каф. оборудования пищевых производств КГТУ; Л. Ф. Саттарова - канд. хим. наук, науч. сотр. Ин-та нефтехимпереработки РБ, г. Уфа.
