CC BY
3
УДК: 03.03.01
Жаббаров О. О. Каримов Х.Я Даминов Б. Т.
Бобоев К.Т.
Ташкентская медицинская академия НИИ гематологии и переливания крови МЗ РУз Ташкентский педиатрический медицинский институт
Zhabbarov O. O. Karimov H. Ya. Daminov B. T.
Boboev K.T.
Tashkent Medical Academy Research Institute of Hematology and Blood
Transfusion, MHRUz Tashkent Pediatric Medical Institute ИЗУЧЕНИЕ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ ГЕНОТИПОВ ПОЛИМОРФНОГО МАРКЕРА LEU28PRO ГЕНА APOE ПРИ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТИИ У БОЛЬНЫХ СД 2 ТИПА Аннотация: Целью настоящего исследования явилось изучение 129 пациентов с диабетом 2-типа и 110 здоровых людей, чтобы определить, связаны ли полиморфные маркеры Leu28Pro гена APOE с развитием диабетической нефропатии (ДН). Пациенты в основной группе: 65 пациентов с длительностью заболевания до 10 лет, без диабетической нефропатии (33 пациента) и с диабетической нефропатии (32 пациента), 64 пациентами - с диабетом, продолжающимся более 10-20 лет, с без диабетической нефропатии (31 пациента) и диабетической нефропатии (33 пациента). Генотипирование проводилось методом полимеразной цепной реакции. Исследование показало, что ассоциацию аллеля Pro и генотипа Leu/Pro гена APOE играют роль при развитии диабетической нефропатии у больных сахарным диабетом 2-го типа в исследуемой узбекской нации.
Ключевые слова: диабетическая нефропатия, сахарный диабет, ген, полиморфизм, аллел, генотип.
STUDY OF THE FREQUENCY OF MEETING OF GENOTYPESOF THE
LEU28PRO POLYMORPHIC MARKER OF THE APOE GENE IN DIABETIC NEPHROPATHY IN PATIENTS WITH TYPE 2 DIABETES
Abstract: The aim of this study was to study 129 patients with type 2 diabetes and 110 healthy people to determine whether the Leu28Pro polymorphic markers of the APOE gene are associated with the development of diabetic nephropathy (DN). Patients in the main group: 65 patients with a disease duration of up to 10 years, without diabetic nephropathy (33 patients) and with diabetic nephropathy (32 patients), 64 patients with diabetes lasting more than 10-20 years, with no diabetic nephropathy (31 patients ) and diabetic nephropathy (33 patients). Genotyping was carried out by polymerase chain reaction. The study showed that the association of the Pro allele and the Leu / Pro genotype of the ENOS3 gene play
a role in the development of diabetic nephropathy in patients with type 2 diabetes mellitus in the studied Uzbek nation.
Key words: diabetic nephropathy, diabetes mellitus, gene, polymorphism, allele, genotype.
Введение. Диабетическая нефропатия (ДН) — микрососудистое осложнение сахарного диабета (СД), развитие которого значительно ухудшает течение и дальнейший прогноз заболевания. При ДН наблюдается поражение мелких кровеносных сосудов фильтрирующего аппарата почек, приводящее в дальнейшем к увеличению количества белка, выделяющегося с мочой (протеинурии) [3, 7]. ДН развивается у 13-15% лиц в общей популяции и гораздо чаще - до 40-50% - в группах риска, к которым относятся пациенты с СД2-типа [2,4]. По прогнозам Международной диабетической федерации, количество больных СД в мире к 2035 г. увеличится до 587 млн человек, из них 95% - пациенты с СД2 [1].
В последние годы, риск развития нефропатии определенно детерминирован генетическими факторами. Только приблизительно у 40-50% пациентов как с СД 1 типа, так и СД 2 типа в последующем развивается ДН [8]. Генетические факторы могут непосредственно влиять на развитие ДН и/или действовать совместно с генами, влияющими на кардиоваскулярные заболевания. Поиск генетических маркеров предрасположенности или, напротив, устойчивости к заболеваниям одна из наиболее актуальных задач медицинской науки. [5,9]
Ранее проведенные исследования ассоциации большой группы генов-кандидатов показали, что только полиморфные маркеры гена фермента, пре -вращающего ангиотензин I (АСЕ), и гена NO-синтетазы клеток эндотелия сосудов (NOS3) ассоциированы с ДН у больных СД типа 2 [6]. Ассоциацию генов, кодирующих липопротеины, ранее не изучали среди узбекской нации, хотя и считается, что одним из факторов риска ДН при СД типа 2 является повышенная концентрация липидов в плазме, поскольку определенные группы липопротеинов обладают сильным сродством к сосудистой стенке и могут способствовать ее повреждению. По некоторым данным, измененный липидный профиль на ранних стадиях может быть причиной развития нефропатии нормоальбуминурического типа у пациентов с СД типа 2. Поэтому гены, кодирующие аполипопротеины В и Е, индивидуальные концентрации и свойства которых в значительной мере определяют липидный обмен у конкретного больного, представляют несомненный интерес для исследования в качестве генов-кандидатов, определяющих предрасположенность к развитию сосудистых осложнений при СД типа 2.
Цель: Изучить распределение частот аллелей и генотипов и выявить ассоциацию полиморфных маркеров Leu/Pro гена АРОЕ с развитием ДН у больных СД 2-типа у лиц узбекской националности.
Материал и методы. В Республиканском научно-практическом центре нефрологии на базе III клиники ТМА были обследованы основную группу 129
больных СД 2-го типа и контрольную группу составили 110 здоровых лиц узбекской нации, включенных по принципу «случай-контроль». Пациенты в основной группе были распределены следующим образом: 65 пациентов с длительностью заболевания до 10 лет, без диабетической нефропатии (33 пациента) и с диабетической нефропатией (32 пациента), 64 пациентами - с диабетом, продолжающимся более 10-20 лет, с без диабетической нефропатии (31 пациента) и диабетической нефропатии (33 пациента). Изучались такие показатели как результатов общих анализов крови и мочи, липидного спектра, гликемического профиля, гликозилированного гемоглобина, микроальбуминурии, скорость клубочковой фильтрации (СКФ) по формуле CKD-EPI, уровень эндотелина-1 в плазме крови, ЭхоКГ, СМАД и допплерографическое исследование сосудов почек. Тестирование полиморфизма Leu/Pro гена АРОЕ проводилось на программируемом термоциклере фирмы «Applied Biosystems» 2720 (США), с использованием тест-систем компании «Литех» (Россия), согласно инструкции производителя.
Для статистической обработки материала использовалась программа STATISTICA 6. Данные представлены в виде средних значений со стандартным отклонением ^iSD). Нормальность распределения проверялась крийтерием Колмогорова-Смирнова. Относительный риск заболевания у носителей определенного аллейля и генотипа вычислялся как показатель отношения шансов (OR - oddsratio). Распределение генотипов проверяли на отклонение от равновесия Харди-Вайнберга. Коэффициент корреляции r рассчитывали методом Спирмена. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.
Все пациенты подписывали информированное согласие перед проведением обследования.
Результаты и их обсуждение. Частота аллелей и генотипов полиморфизма Leu28Pro гена APOE у всех пациентов (основная группа) и контрольной выборке показана на рисунке 1.
Частота распределения генотипов полиморфизма Leu28Pro АРОЕ в группах пациентов СД и контроля
100 91.8%
79.0%
20.9%
0% 8.2% 0%
Основная группа п=129 Контрольная группа п=110
■ LeuLeu ■ LeuPro ■ ProPro
Рис.1
В нашем исследовании было исследовано распределение генотипов и аллелей полиморфного маркера Leu28Pro гена APOE у основных и контрольных пациентов.
Распространенность аллеля Leu в основной и контрольной группах составила 89,5% и 95,95% соответственно. Частота распространения функционального неблагоприятного аллеля Pro составила 10,4% и 4,1% соответственно. Статистический отчет показывает, что у носителей аллеля Pro вероятность развития заболевания в 2,7 раза выше, чем у носителей аллеля Leu, и разница между ними является достоверной статистической величиной (Х2 = 6,9; P = 0,008; OR = 2,7; 95% CI 1,2597-5,9608) ). Аллель Leu указывает на то, что он обладает защитным действием против прогрессирования заболевания. (%2 = 6,9; P = 0,008; OR = 0,4; 95% CI 0,1678-0,7938) (Таб.1.)
Таблица 1
Частота распределения аллелей и генотипов полиморфизма Ьеи28Рго гена АРОЕ в основной и контрольной группах пациентов СД 2-типа.
Аллел ы и генотипы Количество обследованных аллелей и генотипов х2 Р RR 95% CI OR 95% CI
основная группа N % Контроль N %
Leu 31 9,5 11 95,9 6,9278 0,0085 0,9335 0,62031,4049 0,3649 0,16780,7938
Pro 7 0,4 9 4,1 6,9278 0,0085 2,5581 1,69983,8499 2,7403 1,25975,9608
Leu/Le u 102 9,0 101 91,8 7,5421 0,006 0,8612 0,54551,3597 0,3366 0,15080,7515
Leu/Pro 7 20,9 9 8,2 7,5421 0,006 2,5581 1,62024,0388 2,9706 1,33086,6311
Pro/Pro
По результатам основных и контрольных групп, распространения генотипов Leu/Leu, Leu/Pro составила 79,0%, 20,9% и 91,8%, 8,2%, но генотип Pro/Pro в нашем анализе мутационного генотипа. Согласно статистическому расчету, вероятность заболевания у носителей генотипа Leu/Pro в 2,9 раза выше, чем у носителей генотипа Leu/Leu, и разница между ними статистически значима. (х 2 = 7,5; P = 0,006; OR = 2,9; 95% CI 1,3308-6,6311).
Генотип Leu/Leu был значительно ниже в основной группе, чем в контрольной группе, на 79,0%, 91,8% и показал защитную функцию против прогрессирования заболевания (х2 = 7,5; P = 0,006; OR = 0,3; 95% CI 0,15080,7515). (Таб.1.)
В нашем исследование продемонстрировало ассоциацию между носительством Pro-аллеля (генотип Leu/Pro) гена APOE и диабетической нефропатией у больных СД 2-го типа. Полученные результаты согласуются с данными отечественных и зарубежных авторов, показавших, что носительство Pro-аллеля является независимым фактором риска ДН у пациентов с СД 2-го типа в различных этнических группах [6].
Анализ данных зарубежных исследований указывает также на связь полиморфного маркера е2/еЗ/е4 гена АРОЕ с развитием ДН как при СД 2, так и СД 1, что может указывать на то, что нарушения липидного метаболизма могут играть значительную роль в патогенезе ДН. В проведенном ранее исследовании была выявлена ассоциация полиморфного маркера e2/e3/e4 гена APOE с развитием ДН при СД 2, что носительство аллеля еЗ и генотипа еЗ/еЗ маркера е2/еЗ/е4 гена аполипопротеина Е (АРОЕ) является фактором
повышенного риска ДН при СД 1 [1]. У японских авторов описана ассоциация данного маркера с прогрессированием поражения почек при СД 2 от МАУ к протеинурии, где аллель е2 рассматривается как независимый фактор риска прогрессирования ДН [3].
Эти данные и результаты нашего исследования позволяют сделать вывод, что ген APOE играет важную роль в развитии ДН у больных сахарным диабетом 2-го типа в исследуемой узбекской нации. Однако следует отметить, что достаточно важную роль в патогенезе ранних стадий ДН играют также гены, продукты которых связаны с регуляцией сосудистого тонуса в микроциркуляторном русле, такие как АСЕ и ENOS3.
Заключение. Таким образом, oбобщая полученные данные, можно сделать вывод о несомненной вовлеченности ряда генов липидного обмена в развитие ДН при СД типа 2 у лиц узбекской национальности. Результаты настоящего исследования указывают на важность дальнейшего изучения молекулярных основ развития и прогрессирования ДН приведут к разработке новых перспективных направлений в профилактике этой патологии.
Использованные источники:
1. Викулова O.K. Клинико-лабораторные и генетические факторы развития и прогрессирования диабетической нефропатии у больных сахарным диабетом 1 типа: дисс. ... канд. мед. наук: 14.00.03 / Викулова Oльга Kонстантиновна. -М., 2003.- 123 с.
2. Железнякова А.В., Лебедева Н.О., Викулова О.К., и др. Риск развития хронической болезни почек у больных сахарным диабетом 2 типа детерминирован полиморфизмом генов NOS3, APOB, KCNJ11, TCF7L2 // Сахарный диабет. 2014. №3. С. 23-30.
3. Маслова О.В., Сунцов Ю.И., Шестакова М.В., Казаков И.В., Викулова О.К., Сухарева О.Ю., Мартынов С.А., Трубицына Н.П. Распространенность поражения почек при сахарном диабете 1 и 2 типов в Российской Федерации // Сахарный диабет - 2009 - № 4. - С. 47-51.
4. Шестакова М.В., Шамхалова М.Ш. Диабетическая нефропатия: клиника, диагностика, лечение // Методическое пособие. Москва, 2009г. -29с.
5. Шестакова М.В., Шахмалова М.Ш. Диабетическая нефропатия: клиника, диагностика, лечение. Москва 2009
6. Шестакова, М.В. Сахарный диабет и хроническая болезнь почек: достижения, нерешенные проблемы и перспективы лечения / М.В. Шестакова, М.Ш. Шамхалова, И.Я. Ярек-Мартынова, И.И. Клефортова, О.Ю. Сухарева, О.К. Викулова, Н.В. Зайцева, С.А. Мартынов, М.В. Кварацхелия, Е.В. Тарасов, Н.П. Трубицына // Сахарный диабет. - 2011. № 1. - С. 81-88.
7. Alberti G., Zimmet P., Shaw J. IDF. Epidemiology Task fo^s consensus group. The metabolic syndrome - a new worldwide definition //Lancet. - 2005. - Vol.366 - Р. 1059-1062.
8. Rodrigues, A. Genetic variants in genes related to lipid metabolism and atherosclerosis, dyslipidemia and atorvastatin response / A. Rodrigues [et al.] // Clinica Chimica Acta. - 2013. - Vol. 417. - P. 8-11.
9. Villeneuve, S. The potential applications of Apolipoprotein E in personalized medicine / S. Villeneuve, D. Brisson, N. Marchant, D Gaudet // Frontiers in Aging Neuroscience. - 2014. - Vol. 154. - P. 3-6.
10. Koopal, C. Influence of APOE-2 genotype on the relation between adiposity and plasma lipid levels in patients with vascular disease / C. Koopal, Y. van der Graaf, F. Asselbergs, J. Westerink, F. Visseren // Int J Obes Relat Metab Disord. - 2015. -Vol. 39. - № 2. - P. 265-269.
