CC BY
271
УДК 615. 262 : 615. 454. 1. 224. 07
О. Н. Немерешина (к.биол.н., доц.)1, Н. Ф. Гусев (д.биол.н., доц.)2, Т. Л. Малкова (д.фарм. н., проф., зав. каф.)3
ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИСТЬЕВ ПОДОРОЖНИКА ЛАНЦЕТНОГО PLANTAGO LANCEOLATA
1 Оренбургская государственная медицинская академия, кафедра биохимии 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6; тел. (3532) 776103, е-mail: orgma@esoo.ru, olga.nemerech@gmail.com 2Оренбургский государственный аграрный университет, кафедра биоэкологии 460014, г. Оренбург, ул. Челюскинцев, 18; тел/факс 8(3532) 775230, е-mail:nikolajj.gusev19@gmail.com 3Пермская государственная фармацевтическая академия, кафедра токсикологической химии 614990, г. Пермь, ул. Екатерининская, 101, e-mail: kaftox@mail.ru
O. N. Nemereshina1, N. F. Gusev2, T. L. Malkova3
A STUDY OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES AND THE ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF PLANTAGO LANCEOLATA LEAFS
1 Orenburg State Medical Academy 6, Sovetskaya Str, 460000, Orenburg, Russia; ph.: (3532) 776103, e-mail: orgma@esoo.ru, olga.nemerech@gmail.com 2Orenburg State Agrarian University 18, Chelyuskintsev Str., 460014, Orenburg, Russia; ph.: 8(3532) 775230, e-mail:nikolajj.gusev19@gmail.com 3Perm State Pharmaceutical Academy 101, Ekaterininskaya Str, 614990, Perm, Russia, e-mail: kaftox@mail.ru
Изложены результаты фитохимического анализа сырья подорожника ланцетолистного Plantago lanceolata. Обнаружены флавоноиды, иридоиды, фенолкарбоновые кислоты, токоферол, ситостерол, изосорбид, сквален, аскорбиновая кислота. Антиоксидантная активность настоя Plantago lanceolata составила 10.6 ± 0.2 по кверцетину. Выявлено антимикробное действие настоя и настойки Plantago lanceolata в отношении Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Candida albicans.
Ключевые слова: антимикробная активность; биологически активные вещества; Plantago lanceolata; химический анализ.
The results of phytochemical analysis of raw materials Plantago lanceolata (leaf) are stated. Discovered flavonoids, iridoids, phenol carbonic acid, tocopherol, sitosterol, isosorbide, squalene, ascorbic acid. The antioxidant activity of the infusion Plantago lanceolata was 10.6 ± 0.2 to quercetin. Identified antimicrobial effect of infusion and tincture of Plantago lanceolata against Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Candida albicans.
Key words: antimicrobial activity; biologically active substances; chemical analysis; Plantago lanceolata.
Формирование микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью делает малоэффективным применение многих антибиотических средств и поэтому важной задачей современной науки является поиск новых антимикробных средств с иным механизмом действия. Источником таких средств могут стать лекарственные растения. Поэтому
Дата поступления 03.10.14
Всемирная организация здравоохранения и ряд других международных и государственных организаций объединяют свои усилия по реализации потенциала биологической активности соединений растительного происхождения 2. В настоящее время описано значительное количество лекарственных растений, препараты из которых проявляют антимикробное действие в отношении различных штаммов
микроорганизмов 3. Тем не менее, потенциал лекарственных растений в этом отношении еще далеко не исчерпан.
Лекарственные растения способны вырабатывать и накапливать фармакологически активные вещества, оказывающие комплексное действие на организм человека—сахара, глико-зиды, флавоноиды, таниды, иридоиды, кума-рины, эфирные и жирные масла, алкалоиды, полисахариды, витамины, микроэлементы и другие соединения 4. Имея сложный химический состав, препараты из лекарственных растений обладают широким спектром действия, низкой токсичностью, мягким комбинированным действием, возможностью длительного применения и отсутствием побочных явлений 5. Водные извлечения из лекарственного растительного сырья способны стабилизировать нормальную микрофлору кишечника 6'7.
Лекарственные растения Урала и Поволжья являются ценнейшим биологическим ресурсом, и поэтому их изучение заслуживает пристального внимания исследователей.В процессе изучения флоры Волго-Уральского региона мы обратили внимание на подорожник ланцетный, широко распространенный в фито-ценозах Южного Предуралья и Поволжья.
Цель исследования: изучение биологически активных веществ (БАВ) и антимикробной активности настоя и настойки подорожника ланцетного, собранного на территории Южного Предуралья.
Материалы и методы исследования
Объект нашего исследования — растительное сырье подорожника ланцетного Р\апЬадо 1апсео1аЬа Ь., семейства Подорожниковые Р1апЬад1пасеае Подорожник ланцетный — травянистое стержнекорневое многолетнее растение. Листья, собранные в розетки, ланцетные или ланцетно-эллиптические, заостренные, цельнокрайние или по краю слегка зубчатые, с клиновидным основанием, с 3—7 жилками, опушенные или голые, на более или менее длинных (2—13 см) при основании слегка опушенных черешках. Цветочные стрелки гранис-то-ребристые, в несколько раз длиннее листьев, опушенные. Соцветие — ложный колос, коротко-цилиндрическое, длиной до 5 см. Цветет и плодоносит с мая по сентябрь. Растение имеет широкий ареал произрастания на территории России— европейская часть, Кавказ, Средний и Южный Урал, Западная и Восточная Сибирь, Дальний Восток. Произрастает на лугах, лесных полянах, вдоль дорог, по мусор-
ным местам, огородам, садам. На территории Урала и Поволжья подорожник ланцетный обычно встречается на карбонатных и песчаных почвах 8'9.
Растительный материал (лист) подорожника ланцетного был собран нами в период цветения растений в окрестностях с. Каменно-озерное в 30 км к юго-востоку от г. Оренбурга на суходольном лугу в типчаково-разнотрав-ной ассоциации и высушен воздушно-теневым способом.
Для удаления сопутствующих веществ (смолы, хлорофилл, воск и др.), затрудняющих проведение анализа, растительное сырье обрабатывали хлороформом в аппарате Со-кслета и высушивали. Затем навеску измельченного и высушенного сырья в количестве 3 г помещали в стеклянную колбу и исчерпывающе экстрагировали этанолом различной концентрации (96%, 60%, 40%) на кипящей водяной бане. Извлечение фильтровали, упаривали, а спиртовый экстракт использовали для проведения нижеследующих качественных реакций на флавоноиды и их хроматографичес-1
кого исследования :
1. Проба Синода (цианидиновая реакция). Реакция основана на способности окисленных форм флавоноидов восстанавливаться водородом, выделяющимся при реакции магния в солянокислой среде (М^+НС1) до анто-цианидинов. При этом оксониевые соли дают окрашивание от оранжевого и оранжево-красного до красно-фиолетового и вишнево-красного, что зависит от структуры флавоноидов.
2. Проба Брианта проводится при положительной цианидиновой реакции и дает возможность определить присутствие в сырье гли-козидов и агликонов флавоноидов 1.
После проведения цианидиновой реакции в эти же пробирки добавляли октанол, в котором растворимы только агликоны. После встряхивания содержимого пробирок наблюдали окрашивание обоих слоев, что свидетельствует о присутствии в сырье гликозидов и аг-ликонов флавоноидов.
3. Характерной реакцией на флавоноиды является реакция с 1%-м спиртовым раствором гидроксида натрия. Реакция заключается в образовании окрашенного комплексного соединения, указывающего на наличие флавоноидов и их группу.
В результате реакции в извлечениях наблюдали окрашивание от слабо желтого до ярко желтого, характерное для флавоноидов группы флавона 10.
Для изучения индивидуальных флавоно-вых веществ в растительном сырье подорожника ланцетного нами также был применен метод двумерной хроматографии на бумаге ме-танольных извлечений в системах растворителей: н-бутанол—уксусная кислота—вода (БУВ 4:1:5 и БУВ 4:1:2) — система I и уксусная кислота—вода (15:85) — система II.
Высушенные хроматограммы просматривали в ультрафиолетовом свете при длине волны 360 нм. Видимые пятна веществ обводили карандашом, отмечая их цвет условными знаками и нумеровали.
Затем хроматограммы просматривали в ультрафиолетовом свете при обработке парами аммиака и отмечали изменения в окраске отдельных пятен. Далее хроматограммы опрыскивали 1%-м спиртовым раствором хлорида алюминия, являющимся чувствительным реактивом на полифенольные вещества. Хромато-граммы высушивали и снова просматривали в ультрафиолетовом свете, отмечая характер окраски пятен. При этом флавоновые вещества группы бензо- -пирана принимали желтую, желто-зеленую или желтовато-зеленую окраску, а фенолкарбоновые кислоты — сине-голубую и зеленовато-голубую флуоресценцию.
Количественное определение суммы фла-воноидов в растительном сырье Р. 1апево1аЬа проводили фотоэлектроколориметрическим методом. Определение флавоноидов основано на реакции их комплексообразования с растворами хлорида алюминия и ацетата натрия, дающих окрашенные растворимые комплексы, что позволяет использовать это качество для их фотометрического определения 10.
Точную навеску измельченного, просеянного (сито № 10 с диаметром отверстий 1.0 мм) и обессмоленного сырья в количестве 1.0 г многократно экстрагировали этанолом различной концентрации с добавлением нескольких капель концентрированной соляной кислоты. Извлечения отфильтровывали в мерную колбу емкостью 100 мл и доводили до метки 96%-м этанолом. Из этой колбы отбирали 2 мл экстракта и помещали в мерную колбу емкостью 25 мл, куда прибавляли 5 мл 2%-го водного раствора хлорида алюминия и 5 мл 8%-го водного раствора ацетата натрия. Объем смеси в мерной колбе доводили до метки 95%-м этанолом, перемешивали и через 10—12 мин колориметри-ровали. Оптическую плотность раствора замеряли на фотоэлектроколориметрах марки ФЭК-56П и КФК-М в кюветах с толщиной слоя 0.5 см, с синим светофильтром и длиной
волны 400 нм. В качестве раствора сравнения использовали извлечение из сырья и этанол (в мерной колбе емкостью 25 мл).
Расчет концентрации флавоноидов определяли по калибровочному графику, построенному по чистому цинарозиду.
Определение суммы флавоноидов проводили с учетом влажности сырья (6.42%) и относительной погрешности опыта (0.34%).
Флавоноиды обладают значительной интенсивностью поглощения в УФ-области спектра, обнаруживая максимумы, относящиеся к первой и второй полосе, что использовано в
спектрофотометрическом методе определения
" 9
указанных соединений .
Для обнаружения на хроматограммах фе-нолкарбоновых кислот использовалась флуоресценция этих соединений в УФ-свете до и после проявления парами аммиака, а также
проявлением 1%-м спиртовым раствором хло-
1
рида окисного железа .
Для подтверждения данных о наличии в сырье Р. 1апево1аЬа кофейной и хлорогеновой кислот мы выделили их в индивидуальном виде и исследовали физические, химические и спектрофотометрические свойства 1.
Количественное определение суммы фе-нолкарбоновых кислот проводили общепринятыми методами 9. Метод основан на разделении свободных полифенолов и собственно та-нидов диэтиловым эфиром в делительной воронке и во вставке Пейно. Для этого водное извлечение из травы растений помещали во вставку Пейно, которую вставляли в аппарат Сокслета и экстрагировали диэтиловым эфиром на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 10—12 ч. Эфирные фракции объединяли, упаривали под вакуумом, а остаток растворяли в дистиллированной воде и определяли на содержание фенолкарбо-новых кислот.
Для определения танидов в растениях Р. 1апево1аЬа определяли водные извлечения из растительного сырья 9. При этом использовали реакции осаждения как общепринятые методы обнаружения танидов 10. Реакции проводили в пробирках и на часовых стеклах.
Количественное определение общей суммы дубильных веществ в исследуемых материалах проводили по общепринятой методике 10. Метод основан на легкой окисляемости дубильных веществ раствором перманганата калия в присутствии индигосульфокислоты, которая является катализатором реакции окисления и индикатором. В точке эквивалентности
индигосульфокислота переходит в изатин, и цвет раствора меняется от синего до золотисто-желтого. Содержание общей суммы дубильных веществ в процентах вычисляли с учетом влажности растительного сырья.
Определение наличия иридоидов в сырье P. lanceolata проводили с помощью реактива Трим-Хилла 1 и методом хроматографии на бумаге 10. Экстракцию иридоидов из растительного сырья проводили этанолом различной концентрации на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Извлечение в количестве 2—3 мл помещали в пробирки, смешивали с небольшим количеством (0.5 мл) реактива Трим-Хилла (смесь уксусной кислоты, соляной кислоты и 0.2%-го водного раствора сульфата меди в соотношении 20:1:2) и нагревали на водяной бане в течение 1—2 мин, наблюдая изменение окраски раствора. Реакционная смесь в пробирках принимала синюю или сине-голубую окраску, по интенсивности которого судили о наличии иридоидов в исследуемых извлечениях.
Изучение качественного состава иридои-дов в сырье P. lanceolata мы проводили методом хроматографии на бумаге 10. Экстракт исследовали методом восходящей хроматографии на бумаге марки FN-1 <^Шгак» в системе растворителей: н-бутанол—уксусная кислота-вода в соотношении 4:1:5. После разделения суммы иридоидов в указанной системе растворителей хроматограммы высушивали и просматривали в ультрафиолетовом свете, при этом пятен, обладающих свечением, на хрома-тограммах не отмечено. Затем хроматограммы обрабатывали 1%-м спиртовым раствором п-диметиламинобензальдегида в присутствии концентрированной соляной кислоты, высушивали на воздухе и в сушильном шкафу при температуре 95—105о в течение 10-15 мин 9.
Определение содержания суммы иридои-дов P. lanceolata проводили колориметрическим методом на фотоэлектроколориметре марки ФЭК-М по методике, описанной в фундаментальных источниках 1. Метод определения иридоидов основан на получении окрашенных соединений извлечений с реактивом Трим-Хилла 9, представляющих смесь уксусной и хлористоводородной кислот, а также 0.2%-го водного раствора сульфата меди в соотношении 20:1:2.
Определение содержания аскорбиновой кислоты в исследуемом сырье проводили по способности данного соединения в водной среде восстанавливать окрашенную форму
2,6-дихлордифенилиндофенола (синего цвета), превращая его в бесцветное состояние в настое растений, содержащем определяемое вещество 10.
Исследование методом газовой хроматографии с масс-селективной детекцией проводилось в следующих условиях: газовый хроматограф Agilent 7890A с масс-спектрометром Agilent 5975C; колонка неполярная HP-5ms; ионизация осуществлялась методом электронного удара; скорость потока газа-носителя (гелий) 1 мл/мин; без деления потока; температура испарителя 280 оС; температура колонки программируемая: 5 мин 70 оС, затем со скоростью 18 оС/мин поднималась до 310 оС и выдерживалась 10 мин; регистрацию масс-спектров проводили по полному ионному току; полученные масс-спектры сравнивали с масс-спектрами библиотеки NIST08; настройку масс-спектрометрического детектора осуществляли по стандартной программе настройки Autotune.
Для испытания антимикробной активности биологически активных веществ подорожника ланцетного из растительного сырья были изготовлены водные извлечения (отвары). Отвары готовили в соотношении 1 : 10 как из сырья, содержащего дубильные вещества, по методике, изложенной в Государственной Фармакопее 9. Испытание на антимикробную активность проводили в отношении грамполо-жительных и грамотрицательных бактерий. В качестве тест-микроорганизмов были использованы Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Candida albicans. Антибактериальная активность настоек анализировалась согласно методике 11. Опытные и контрольные посевы инкубировали в термостате при температуре 30 оС в течение 24 ч. Эксперимент проводился в трех повторностях для подтверждения стабильности наблюдаемого результата.
Результаты и их обсуждение
На основании проведенных исследований установлено, что сырье (лист) P. lanceolata характеризуется высоким содержанием иридо-идов, аскорбиновой кислоты и полифеноль-ных соединений (таниды, флавоноиды, фенол-карбоновые кислоты).
Результаты хроматографических проб извлечений из P. lanceolata показали, что фе-нольный комплекс представлен 13 веществами (табл. 1). Из них 7 веществ по значению Rf,
Хроматографическая характеристика БАВ подорожника ланцетного
№ веще ства Значение Rf Окраска Класс соединения
БУВ 4:1:5 15% СН3СООН УФ свет УФ свет + +NHз ^3 Р-в Гепфнера
1 0.15 0.13 Фиолетовая Желтая Бледно желтая — Флавоноиды
2 0.5 0.03 Голубая Усиление окраски — Оранжево-коричневая Фенолокислоты
3 0.63 0.03 Голубая Усиление окраски — Оранжево-коричневая Фенолокислоты
4 0.24 0.16 Фиолетовая Желтая Желтая — Флавоноиды
5 0.39 0.11 Фиолетовая Желтая Бледно желтая — Флавоноиды
6 0.13 0.26 Фиолетовая Желтая Ярко желтая — Флавоноиды
7 0.40 0.31 Фиолетовая Желтая Ярко желтая — Флавоноиды
8 0.40 0.46 — Желтая Бледно желтая — Флавоноиды
9 0.85 0.55 Фиолетовая Желтая Ярко желтая — Флавоноиды
10 0.21 0.86 Голубая Усиление окраски — Оранжево-коричневая Фенолокислоты
11 0.36 0.84 Голубая Ярко голубая — Оранжево-коричневая Фенолокислоты
12 0.47 0.82 Голубая Ярко-желто-зеленая — Оранжево-коричневая Фенолокислоты
13 0.64 0.78 Голубая Ярко желто зеленая — Оранжево-коричневая Фенолокислоты
№ Значение Rf БУВ 4:1:5 Окраска реактивом Трим-Хилла Класс соединения
видимый УФ -свет
1 0.23 Темно серая Фиолетовая Иридоиды
2 0.35 Темно серая Фиолетовая Иридоиды
3 0.56 Серо-зеленая Фиолетовая Иридоиды
окраске пятен с хромогенными реактивами отнесено к флавоноидам, а 6 веществ — к фено-локислотам. Компонентный состав иридоидов представлен 3 веществами (табл. 1).
Вещество с 0.39/0.11 имеет бледно-желтое окрашивание при проявлении хлоридом алюминия и в сравнении с аутентичным препаратом может быть идентифицировано как цинарозид. Флавоноид со значением 0.40/0.31 и окраской на хроматограмме после проявления раствором хлорида алюминия идентифицирован как лютеолин 1. Флавоноид с 0.85/0.55 в сравнении с веществом-свидетелем идентифицирован как апигенин. Другие 4 флавоноида идентифицировать не представилось возможным.
Содержание суммы флавоноидов в сырье Р. ¡апевоШа составляет 2.74±0.03 % мг на абс. сухой вес.
В сырье Р. ¡апево1аЬа методом двухмерной хроматографии было обнаружено не менее 6 фенолкарбоновых кислот (табл. 2). Вещества с 0.47/0.82 и 0.64/0.78 при сравнении со «свидетелями» идентифицированы как хло-рогеновая и неохлорогеновая кислоты.
Проведенные исследования показали присутствие в сырье Р. ¡апево1аЬа значительных
количеств танидов (9.8±0.01 % мг) и аскорбиновой кислоты (61.5±0.7 % мг).
На хроматограммах обнаружено 3 вещества иридоидной природы (табл. 1). Вещество с 0.35 имеет синее окрашивание, другие пятна окрашены слабее — в сине-сиреневый цвет. Иридоид с 0.35 по окраске в указанной системе растворителей при сравнении с аутентичным препаратом идентифицирован как аукубин. Иридоид со значением 0.23 и окраске на хроматограмме после проявления раствором п-диметиламинобензальдегида идентифицирован как каталпол 9.
Содержание суммы иридоидов в сырье Р. ¡апево1а1а составило 0.69±0.04 % мг на абсолютно сухой вес (табл. 2).
Антиоксидантная активность водного настоя Р. ¡апево1аЬа составила 10.6 ± 0.2 в пересчете на кверцетин.
Методом газовой хроматомасс-спетромет-рии в сырье Р. ¡anевo¡ata обнаружены три-терпены, принадлежащие к обширной группе изопреноидов: токоферол и сквален (рис. 1,2,4).
Также методом ГХМС в сырье обнаружены фитол, ситостерол, изосорбид и 3-[3-бром-фенил]-7-хлор-3,4-дигидро-10-гидрокси-1,9(2Н,10Н)-акридиндион (рис. 3, 4, 5), (табл. 3).
Количественное содержание БАВ в сырье подорожника ланцетного
Показатель Содержание БАВ, %
флавоноиды, мг % на абс. сухой вес 2.74 ± 0.03
иридоиды, мг % на абс. сухой вес 0.69 ± 0.04
таниды, мг % на абс. сухой вес 9.8 ± 0.01
аскорбиновая кислота, мг % на абс. сухой вес 61.5 ± 0.7
антиоксидантная активность настоя (по кверцетину) 10.6 ± 0.2
Рис. 1. Хроматограмма спиртового извлечения подорожника ланцетного
Рис. 2. Масс-спектр пика со временем удерживания 19.38 мин и библиотечный масс-спектр витамина Е
Рис. 3 Масс-спектр пика со временем удерживания 14.94 мин и библиотечный масс-спектр фитола
"¿й"¡й"¿Ь"йГ'Штг7И'ЖТЗ^ЖгЗа"!^!? ЖЖ ЖЗ^ э&' зйо 'й э=о эйо зй]'з&о зЖГЛвйо 4Й ^¿"¿5Ь
Рис. 4. Масс-спектр пика со временем удерживания 20.70 мин и библиотечный масс-спектр ситостерола
Рис. 5. Масс-спектр пика со временем удерживания 18,26 мин, библиотечный масс-спектр и формула соединения 3-[3-бромфенил]-7-хлор-3,4-дигидро-10-гидрокси-1,9(2H,10H)-акридиндион
Токоферол - основной жирорастворимый антиоксидант, оказывающий выраженное ци-тозащитное действие, предохраняя клеточные мембраны от ПОЛ; стимулирует синтез гема- и гемсодержащих белков; ингибирует синтез холестерина; предупреждает гемолиз эритроцитов, повышение проницаемости и ломкость капилляров, нарушение функции семенных канальцев и тестикул, плаценты, нормализует репродуктивную функцию; препятствует развитию атеросклероза, дегенеративно-дистрофических изменений в сердечной мышце и скелетной мускулатуре.
Функциональная роль сквалена в организме изучена не до конца. Известно, что около 10% сквалена расходуется на синтез холестерина. Некоторые авторы высказывают гипотезы о роли сквалена как ингибитора синг-летного кислорода и важного компонента
фотопротекторной системы кожи человека. Также в литературе часто обсуждается антиканцерогенное и дозозависимое иммуностимулирующее действие сквалена, подтвержденное в опытах на животных 9,12.
Ситостерол обладает доказанным противовоспалительным эффектом за счет торможения 5-липоксигеназного пути арахидоновой кислоты. Антиандрогенный эффект систосте-рола обеспечивается за счет ингибирования 5 -редуктазы и затруднения связывания ди-гидротестостерона с рецепторами. В настоящее время ситостерол применяется в медицине для уменьшения содержания холестерина и липо-протеинов низкой плотности, а также профилактики раковых заболеваний.
Изосорбид увеличивает содержание оксида азота в эндотелии, активирует фермент гуа-нилатциклазу и повышает образование цикли-
Результаты исследования подорожника ланцетного хроматомасспектрометрическим методом
№ п/п Фитол Витамин Е Сито-стерол Сахара Сква-лен 3-[3-бромфенил]-7-хлор-3,4-дигидро-10-гидрокси-1,9(2H,10H)-акридиндион
Образец 1 ++ ++ + + + +
Образец 2 +++ ++++ ++ + + +
Таблица 4
Результаты испытаний антимикробной активности настоя подорожника ланцетного
OI 1= Препарат Количество микроорганизмов в мл.
Staphylococcus aureus Bacillus subtil is Escherichia coli Candida albicans
1 Водный настой подорожника (1:10) 5000 10000 5000 1000
2 Разбавленный 1/2 10000 10000 10000 1000
3 Разбавленный 1/4 10000 10000 10000 5000
4 Разбавленный 1/8 10000 10000 10000 5000
5 Контроль. Вода дист. 100000 100000 10000 10000
ческого ГМФ, снижает концентрацию кальция в клетках гладких мышц, снижает тонус стенок сосудов и вызывает вазодилатацию. Нитрат изосорбида применяют в качестве антиан-гинального, сосудорасширяющего лекарственного средства.
Веществ флавоноидной природы методом ГХ-МС обнаружить не удалось. Для решения данной задачи необходимо продолжить исследование с использованием других методов.
Микробиологические исследования показали, что антимикробная активность настоя P. lanceolata более выражена в отношении грамположительных и грибковых организмов, чем в отношении грамотрицательных бактерий (табл. 4). Отмечается некоторый бактериоста-тический эффект цельного и разбавленного настоя P. lanceolata в отношении Candida albicans, Staphylococcus aureus и Bacillus subtilis (табл. 4).
Расчет коррелляции между содержанием БАВ и антимикробным действием настоя P. lanceolata свидетельствует о том, то, что антимикробная активность в значительной степени зависит от присутствия полифенольных соединений и аскорбата (табл. 5).
Антимикробное действие настойки P. lanceolata, приготовленной согласно ГФ РФ 10, исследовалось в ряду разведений параллельно с этанолом соответствующих концентраций: 70%, 35%, 17.5%, 8.75% (табл. 6).
Настойка P. lanceolata и 70% этанол полностью подавляют размножение исследуемых микроорганизмов. Разбавленная в 2 раза настойка P. lanceolata подавляет развитие Staphylococcus aureus в 100 раз по сравнению с этанолом 35% (табл. 6). Настойка P. lanceolata разведенная, в 4 и 8 раз в условиях in vitro проявляет пребиотическое действие в отношении Staphylococcus aureus по сравнению с контрольными разведениями этанола и дистиллированной водой. Настойка P. lanceolata
Корелляция содержания биологически активных веществ и антимикробной активности спиртовой настойки подорожника ланцетного
Таблица 6
Результаты испытаний антимикробной активности подорожника ланцетного
Корелляция флавоноиды таниды аскорбат иридоиды АО
St. aureus -0.46 -0.44 -0.50 -0.23 -0.92
Bacillussubtilis -0.34 -0.32 -0.36 -0.19 -0.39
Escherichiacoli -0.84 -0.80 -0.87 -0.74 -0.87
Candidaalbicans -0.74 -0.72 -0.81 -0.41 -0.84
№ Препарат Количество микроорганизмов в мл. Антиоксидантная
п/п Staphylococcus Bacillus Escherichia Candida активность
aureus subtilis coli albicans (по кверцетину)
1 Контроль вода дист. 100000 50000 1000000 50000 0
2 Настойка 70% 0 50000 0 0 11.22
3 Этанол 70% 0 50000 0 0 1.20
4 Настойка 35% 10 50000 0 0 6.1
5 Этанол 35% 1000 50000 0 0 0.61
6 Настойка 17.5% 1000000 50000 0 0 3.05
7 Этанол 17.5% 5000 50000 1000000 50000 0.30
8 Настойка 8.75% 1000000 50000 1000000 5000 1.53
9 Этанол 8.75% 50000 50000 1000000 50000 0.15
даже в разведениях 1/4 и 1/8 подавляет развитие Candida albicans (табл. 6).
Полученные результаты следует учитывать при планировании дальнейших исследований, направленных на выделение и иденти-
фикацию активных компонентов и оценки возможного синергизма противомикробной активности обнаруженных в растительном сырье P. lanceolata групп биологически активных веществ.
References
1. Sosnina S. A. Sravnitelnoe farmakognostiches-koe izuchenie, standartizatsiya syr'ya i fitopre-paratov vidov roda Plantago L. Avtoref. ... kand. farm. nauk [Comparative pharmacognosy study and standardization of raw materials and phytoprepa-ration on base of species Plantago L. Synopsis of PhD pharm. sci. diss.]. Perm', 2009, 26 p.
2. Rios J. L., Recio M. C., Villar A. [Antimicrobial activity of selected plants employed in the Spanish Mediterranean area]. Journal of Ethnopharmacology, 1987, v. 21, no. 2, p. 139.
3. Braga F. G. et al. [Antileishmanial and antifungal activity of plants used in traditional medicine in Brazil]. J. of Ethnopharmacology, 2007, v.111, no. 2, p. 396.
4. Meyer S. L. F. et al. [Plantagolanceolata and Plantagorugelii extracts are toxic to Meloidogyne incognita but not to certain microbes]. Journal of nematology, 2006, v.38, no. 3, p. 333.
5. Izzo A. A. et al. [Biological screening of Italian medicinal plants for antibacterial activity]. Phytotherapy research., 1995, v.9, no.4, p. 281.
6. Nostro A. et al. [Extraction methods and bioautography for evaluation of medicinal plant antimicrobial activity]. Letters in Applied Microbiology, 2000, v.30, no.5, p. 379.
Литература
1. Соснина С. А. Сравнительное фармакогности-ческие изучение, стандартизация сырья и фитопрепаратов видов рода Plantago L.: Автореф. ... канд. фарм. наук. — Пермь, 2009. — 26 с.
2. Rios J. L., Recio M. C., Villar A. Antimicrobial activity of selected plants employed in the Spanish Mediterranean area //Journal of Ethnopharmacology.- 1987.- Т21, №2.- С.139.
3. Braga F. G. et al. Antileishmanial and antifungal activity of plants used in traditional medicine in Brazil //J. of Ethnopharmacology.- 2007.-Т.111, №2.- С.396.
4. Meyer S. L. F. et al. Plantagolanceolata and Plantagorugelii extracts are toxic to Meloidogyne incognita but not to certain microbes //Journal of nematology.- 2006.- Т.38, №3.- С.333.
5. Izzo A. A. et al. Biological screening of Italian medicinal plants for antibacterial activity // Phytotherapy research.- 1995.- Т.9, №4.-С. 281.
6. Nostro A. et al. Extraction methods and bioautography for evaluation of medicinal plant antimicrobial activity //Letters in Applied Microbiology.- 2000.- Т.30, №5.- С.379.
7. Yiрit D., Yiрit N., ^gen U. An investigation on the anticandidal activity of some traditional medicinal plants in Turkey //Mycoses.- 2009.-Т.52, №2.- С.135.
8. Stewart A. V. et al. Plantain (Plantago-lanceolata) — a potential pasture species // Proceedings of the Conference-New Zealand Grassland Association.— 1996.— C. 77.
9. Биргер M.O. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. M.: Медицина, 1982.
10. Немерешина O. Н., Гусев Н. Ф., Филиппова А. В., Сычева М. В. // Успехи современного естествознания. 2012. №8.— С.54.
11. Ondrey F. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma pathway targeting in carcinogenesis: implications for chemoprevention // Clin. Cancer Res. 2009. V.15. P.2.
12. Де Люка Кьяра. Сквален как акцептор проокси-дантных воздействий на кожу человека: Дисс. канд. биол. наук.— Москва, 2002.— 110 с.
7. Yipit D., Yipit N., Ц/gen U. [An investigation on the anticandidal activity of some traditional medicinal plants in Turkey]. Mycoses, 2009, v.52, no.2, p.135.
8. Stewart A. V. et al. [Plantain (Plantago-lanceolata) — a potential pasture species]. Proceedings of the Conference-New Zealand Grassland Association, 1996, p. 77.
9. Birger M. O. Spravochnik po mikrobiologicheskim i virusologicheskim metodam issledovaniya [Handbook of microbiological and virological research methods]. Moscow: Meditsina Publ., 1982.
10. Немерешина О. H., Гусев H. Ф., Филиппова А. В., Сычева M. В. Antimikribnye svoistva sukhikh ekstraktov iz syrya vidov roda Veronika L [The antimicrobial properties of dry extracts from raw materials of sorts of sort Veronica L]. Uspekhi sovremennogo estestvoznaniya [Successes contemporary science], 2012, no. 8, pp.53-58.
11. Ondrey F. [Peroxisome proliferator-activated receptor gamma pathway targeting in carci-nogenesis: implications for chemoprevention]. Clin. Cancer Res., 2009, v.15, p. 2.
12. De Lyuka Kyara Skvalen kak aktseptor prooksidantnykh vozdeistvii na kozhu cheloveka. Diss. kand. biol. nauk [Squalene as acceptor of prooxidant actions on human skin PhD biol. sci. diss.]. Moscow, 2002, 110 p.
