CC BY
49
УДК: 619:614.48:616.98:579.873.21
ИЗУЧЕНИЕ БАКТЕРИЦИДНЫХ СВОЙСТВ ОТНОСИТЕЛЬНО МИКОБАКТЕРИЙ
НЕКОТОРЫХ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ
STUDY ON BACTERICIDAL PROPERTIES MYCOBACTERIA SOME DISINFECTANTS
А.П. Палий, кандидат ветеринарных наук
A.P. Paly, Candidate veterinary science, Veterinary Professor
Национальный научный центр «Институт экспериментальной и клинической
ветеринарной медицины», Украина
National Science Center "Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine", Ukraine
В статье представлены результаты изучения бактерицидных свойств дезинфицирующих препаратов «Аван-септ», «Аламинол», «Дезофран», «ФАГ» относительно атипичных микобактерий и возбудителя туберкулеза сельскохозяйственных животных. Проведенными исследованиями установлено, что из изученных дезинфектан-тов только препарат «ФАГ» проявляет туберкулоцидные свойства и может быть рекомендован для практической ветеринарии.
In the article the results of study of bactericidal properties of disinfectant preparations of «Avansept», «Alaminol», «De-zofran», «FAG», are presented in relation to atypical mycobacterium and exciter of tuberculosis of agricultural animals. It is set the conducted researches, that from studied disinfectant preparations only preparation «FAG» shows tuberculocidal properties and can be recommended for practical veterinary science.
Ключевые слова: дезинфицирующий препарат, микобактерии, концентрация, экспозиция, бактерицидное действие.
Key words: disinfectant preparation, mycobacterium, concentration, exposition, bactericidal action.
За последние два десятилетия эпизоотическая ситуация по туберкулезу животных в Украине значительно улучшилась, однако полного оздоровления от данной инфекции еще не достигнуто. В период с 2007 по 2012 гг. неблагополучные по туберкулезу пункты в Украине были выявлены в Винницкой, Житомирской, Запорожской, Киевской, Кировоградской, Полтавской, Сумской, Тернопольской, Харьковской областях. За 5 последних лет наибольшее количество неблагополучных хозяйств (38) было выявлено в Киевской области. Заболевание было зарегистрировано у 10 и 16 хозяйствах Черкасской и Сумской областей соответственно. У других 9 областях количество неблагополучных хозяйств составило от 1 до 4 пунктов. Вместе с тем в 12 областях Украины и АР Крым туберкулезная инфекция зарегистрирована не была. Начиная с 2007 г. благодаря проведенным широкомасштабным плановым противотуберкулезным мероприятиям количество неблагополучных пунктов начало стремительно уменьшаться и на 01.03.2013 г. осталось лишь 1 хозяйство (Кировоградская обл.) где зарегистрировано туберкулез крупного рогатого скота.
При этом установлено, что одной из основных причин неблагополучия хозяйств по туберкулезу в некоторых областях Украины было применение однотипных дезинфицирующих средств, используемых в комплексе оздоровительных ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий. Кроме того, в последние годы значительно возросла устойчивость микобактерий к действию дезинфицирующих препаратов и их способность длительное время сохраняться в объектах внешней среды [1, 2].
По данным Ощепкова В.Г., проведенными в 1983 - 2000 гг. исследованиями установлено, что 42 % микобактерий M. bovis стали устойчивыми к 3 % ще-
лочному раствору формальдегида, 34,7 % - к 5 % раствору гипохлорита кальция, 43,8 % - к 5 % раствору хлорной извести [3]. Целым рядом экспериментов определено, что большинство дезинфицирующих препаратов, предлагаемых для применения при туберкулезе животных, проявляют только бактериостатическое действие на микобактерии и не обуславливают их эр-радикацию [4, 5].
В связи с этим возникает необходимость в поиске и разработке новых дезинфицирующих препаратов, обеспечивающих полное уничтожение возбудителей туберкулеза в объектах внешней среды [6].
Целью наших исследований явилось испытание бактерицидной активности в отношении микобактерий новых дезинфицирующих препаратов из разных химических групп: «Авансепт», «Аламинол», «Дезофран», «ФАГ».
Материалы и методы. В опытах использовали следующие дезинфектанты:
«Авансепт»: полигексаметиленгуанидин гидрохлорид - 6,0 %; алкилдиметилбензиламмоний хлорид -4,5 %; функциональные добавки; краситель; отдушка; вода.
«Аламинол»: алкилдиметилбензиламмоний хлорид - 5 %; глиоксаль - 8 %; ПАВ; краситель; вода.
«Дезофран»: N, N-бис (3-аминопропил) додеци-ламин - 5 %; полигексаметиленгуанидин гидрохлорид - 2,5 %; функциональные добавки; краситель; отдушка; вода.
«ФАГ»: 25 % глутаровый альдегид - 50 %; 37 % формальдегид - 50 %.
Исследования проводили согласно существующих методических подходов относительно быстрорастущих атипичных микобактерий вида M. fortuitum и возбудителя туберкулеза M. bovis. Результаты культуральных исследо-
ваний подтверждали проведением биопробы на лабораторных животных [7].
На первом этапе исследования по определению бактерицидных свойств дезинфицирующих препаратов проводили с помощью суспензионного метода определения бактерицидной активности химических дезин-фектантов относительно атипичных микобактерий (М /отШЫт), которые имели типичные культуральные и биологические свойства. С этой целью выросшую на среде Павловского бактериальную массу тест-культуры бактериологической петлёй вносили в стерильные 200 см3 флаконы с бусами. Путём взвешивания определяли массу внесенной бактериальной массы, а затем в флаконы добавляли необходимое количество стерильного изотонического раствора из расчёта, чтобы взвесь содержала 1 мг/см микобактерий. Флаконы встряхивали на шуттель-аппарате на протяжении 30 минут до получения однородной взвеси микобактерий. После приготовления рабочих растворов дезинфицирующих препаратов их отдельно вносили во флаконы объёмом 20 см3 по 10 см3. Затем в каждый опытный и контрольный флакон вносили отдельно по 0,2 см3 взвеси микобакте-рий и содержимое флаконов тщательно перемешивали. Через 1, 5 и 24 часа содержимое флаконов, каждого в отдельности, переносили в центрифужные пробирки, которые центрифугировали при 1500 об/мин на протяжении 30 минут. Для нейтрализации препаратов в опытных пробирках, осадок, который образовался после центрифугирования, а также контрольные пробы дважды отмывали стерильным изотоническим раствором.
Полученный осадок опытных и контрольных проб ресуспензировали в 5 см3 стерильного изотонического раствора и стерильной пипеткой высевали на 10 пробирок с питательной средой для культивирования микобактерий. Пробирки с посевами выдерживали в термостате при температуре 37°С на протяжении 3 месяцев и через каждые 3 - 5 дней проводили учёт роста культур.
Отсутствие роста колоний микобактерий в пробирках с опытными посевами, при наличии роста колоний в пробирках с контрольными посевами было признаком бактерицидного действия дезинфицирующего препарата.
Определение бактерицидных свойств препарата «ФАГ» проводили на тест-объектах (батистовых полосках, деревянных брусках, кафеле, металле, стекле), которые контаминировали возбудителем туберкулёза (M. bovis). На каждый тест-объект наносили смесь, содержащую 1 см3 взвеси тест-культуры и 0,5 см3 стерильного навоза. Тест-объекты выдерживали в стерильном боксе 5 часов. После этого опытные тест-объекты обрабатывали препаратом «ФАГ». На контрольные тест-объекты вместо раствора дезинфектанта наносили отдельно стерильный физиологический раствор. Через 5 и 24 часа с каждого контрольного и опытного тест-объектов делали смывы стерильным изотоническим раствором в чашки Петри, содержимое которых затем переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали при 1500 об/мин на протяжении 20 минут. Для нейтрализации действия препарата осадок в пробирке дважды отмывали стерильным изотоническим раствором путём центрифугирования. Полученный осадок опытных и контрольных проб ресуспен-зировали в 5 см3 стерильного изотонического раствора и стерильной пипеткой высевали на питательную среду для культивирования микобактерий. Пробирки с посевами выдерживали в термостате при температуре 37°С на протяжении 3 месяцев и через каждые 3 - 5 дней проводили учёт роста культур.
Результаты исследований. Результаты, полученные при определении бактерицидных свойств дез-препаратов относительно M. fortuitum представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Бактерицидные свойства дезинфектантов относительно M. fortuitum (n=3)
Дезинфицирующий Концентрация, % Экспозиция, час Контроль
препарат 1 3 5 24
1,0 +++ +++ +++
Аламинол 5,0 +++ ++ ++ ++
10,0 ++ ++ ++ ++
1,0
2,0 +++ +++
Авансепт 3,0 +++ +++
4,0 +++ +++ ++ ++
5,0 +++ ++ ++ ++
1,0 +++ +++
Дезофран 3,0 +++ +++ ++ ++
5,0 ++ ++ + +
0,5 +++ +++ +++ ++
ФАГ 1,0 ++ ++ + +
2,0 + + +
Примечание: «-» - рост колоний отсутствует; «+» - до 10 колоний микобактерий; « ++» - от 10 до 20 колоний микобактерий; « +++» - от 20 до 50 колоний микобактерий; « ++++» - более чем 50 колоний микобактерий на поверхности питательной среды.
Таблица 2 - Бактерицидные свойства препарата _«ФАГ» относительно M. bovis (n=3)_
Экспози- Тест- Результат иследований
ция объект опыт контроль
Батист + ++++
Дерево + ++++
5 часов Кафель - +++
Металл - ++++
Стекло - ++++
Батист - ++++
Дерево - ++++
24 часа Кафель - +++
Металл - ++++
Стекло - ++++
Батист + ++++
Дерево + ++++
5 часов Кафель - +++
Металл - ++++
Стекло - ++++
Батист - ++++
Дерево - ++++
24 часа Кафель - +++
Металл - ++++
Стекло - ++++
Примечание: «-» - рост колоний отсутствует; «+» - до 10 колоний микобактерий; « +++» - от 20 до 50 колоний микобактерий; «++++» - более чем 50 колоний микобактерий на поверхности питательной среды.
На предварительном этапе исследований (табл. 1) было установлено, что препараты «Авансепт» (5,0 % -24 часа), «Аламинол»(10,0 % - 24 часа), «Дезофран» (5,0 % - 24 часа) действуют на быстрорастущие мико-бактерии суббактерицидно. Повышение режимов применения данных дезинфектантов является не обоснованным и дальнейшие опыты с ними не прово-дились.Дезинфектант «ФАГ» в концентрации 2,0 % при экспозиции 24 часа проявляет бактерицидные свойства относительно тест-культуры быстрорастущих микобактерий M. fortuitum. Следующим этапом наших исследований было проведение экспериментов с применением тест-объектов, контаминированных возбудителем туберкулеза M. bovis. Результаты проведенных экспериментов представлены в таблице 2.
В результате проведенных исследований (табл. 2) были установлены высокие бактерицидные свойства у препарата «ФАГ» (2,0 % - 24 час) относительно возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота. Результаты культуральных исследований подтверждены проведением биологического исследования бактерицидного действия дезинфектанта на лабораторных животных. Статистическая достоверность полученных результатов составляет 99,9 %.
Таким образом из существующих на сегодня химических групп дезинфицирующих препаратов наиболее эффективными являются альдегидные соединения. Дезинфицирующий препарат «ФАГ» проявляет туберкулоцидное действие в концентрации 2,0 % при экспозиции 24 часа и может быть рекомендован для проведения ветеринарно-санитарных меро-
А.П. Палий - e-mail: paliy.tub@mail.ru
приятий в животноводческих хозяйствах с целью борьбы и профилактики туберкулеза. Литература:
1. Шведова, Н.И., Коган, А.М. Биологическое обеззараживание почвы при туберкулёзе // Ветеринария. - 1988. - № 9. - С. 23-27.
2. Дяченко, Г.М. и др. Адаптащя та мшливють властивостей мжобактерш рiзних видiв за впливу антибаш^альних препарапв // Сшьськогосподарсь-ка мшробюлопя. М1жв1д. темат. наук. зб. - 2009. -Вип. 9. - С. 158-165.
3. Ощепков, В.Г. До питання ошгашзаци протиту-беркульозних заходiв // Вет. медицина Укра!ни. -2006. - № 3. - С. 19-20.
4. Пономаренко, Г.В. Оцшка ефективносп бактерицидно! ди дезшфшуючих препарапв на мжобакте-ри: автореф. дис. ... канд. вет. наук : 16.00.03 / 1ЕКВМ УААН. — Х., 2004. — 20 с.
5. Палш, А.П. Розробка та вивчення дезшфшую-чих препарапв при туберкульозi альськогосподарсь-ких тварин: автореф. дис. канд. вет. наук : 16.00.03 / ННЦ 1ЕКВМ. — Х., 2007. — 24 с.
6. Шандала, М.Г. Вопросы дезинфектологическо-го обеспечения биобезопасности // Эпидемиология и инфекц. болезни. - 2002. - № 6. - С. 16-21.
7. Методичш рекомендацп «Визначення бактери-цидних властивостей дезшф^ючих засобiв, проведения дезшфекцп та контроль И якосп при туберку-льозi альськогосподарських тварин» / А.1. Завгород-нш та ш. // Затв. Науково-метод. радою Державного комггету вет. медицини Украши 20.12.2007.
Literature :
1. Shvedova , N. , Kogan , AM Biological soil disinfection in tuberculosis / / vet thorium . - 1988 . - № 9. - S. 23-27 .
2 . Dyachenko , G.M. and others that Adaptatsiya minlivist vlastivostey mikobakteriy riznih vidiv for vplivu antibakterialnih preparativ / / Silskogospodars Single mikrobiologiya . Mizhvid . temat . Sciences . ST. -2009 . - Vip . 9. - S. 158-165 .
3 . Oschepkov , V.G. Until supply optimizatsi! pro- titu-berkuloznih No. Bid initiator / / Vet. Medicine of Ukraine . - 2006 . - № 3 . - S. 19-20 .
4 . Ponomarenko , G.V. Otsinka efektivnosti tank teritsidno! di! dezinfikuyuchih preparativ on mikobak -ten! : Author. dis. ... Cand. vet. Sciences: 16.00.03 / IEKVM UAAN . - H., 2004 . - 20 .
5 . Paliy , A.P. Rozrobka that vivchennya dezinfi -kuyuchih preparativ at tuberkulozi silskogospo - darskih Tvaryny : Author. dis. Candidate . vet. Sciences: 16.00.03 / NSC IEKVM . - H. , 2007 . - 24 s.
6. Candlesticks , M.G. Questions dezinfektologiche -ray biosafety / / Epidemiology ergy and infection. disease. -2002 . - № 6. - S. 16-21 .
7. Metodichni rekomendatsi! " Viznachennya bacterial ritsidnih vlastivostey dezinfikuyuchih zasobiv , about behavior that control dezinfektsi! u yakosti with TB -kulozi silskogospodarskih Tvaryny " / A.I. Zavgo - rod-niy that in . / / Shutter . Naukovyi method. radoyu Powers strength komitetu vet. Medicine of Ukraine 20.12.2007 .
Статья поступила: 22.05.2013
