Изучение ассоциации однонуклеотидного полиморфизма rs4129267 гена рецептора интерлейкина-6 (IL6R) с риском развития бронхиальной астмы

Разводовская Анастасия Владимировна; Черкашина Ирина Ивановна; Никулина Светлана Юрьевна; Шестовицкий Владимир Андреевич; Воевода Михаил Иванович; Максимов Владимир Николаевич

ИЗУЧЕНИЕ АССОЦИАЦИИ ОДНОНУКЛЕОТИДНОГО ПОЛИМОРФИЗМА RS4129267 ГЕНА РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА-6 (IL6R) С РИСКОМ РАЗВИТИЯ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ

Анастасия Владимировна Разводовская h2, Ирина Ивановна Черкашина2, Светлана Юрьевна Никулина2, Владимир Андреевич Шестовицкий3, Михаил Иванович Воевода3, Владимир Николаевич Максимов2 ('Красноярская городская поликлиника №6, Красноярск, гл. врач - Н.Д. Павлова; 2Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого, ректор - д.м.н., проф. И.П. Артюхов, кафедра внутренних болезней №1, зав.- д.м.н., проф. С.Ю. Никулина, кафедра терапии ИПО, зав.- д.м.н., проф. Ю.И. Гринштейн; 3НИИ терапии СО РАМН, Новосибирск, директор - член корр. РАМН

М.И. Воевода)

Резюме. В данной статье обсуждается оценка вклада rs4129267 полиморфизма гена IL6R в формирование предрасположенности к бронхиальной астме у жителей г. Красноярска. Геномную ДНК выделяли из 10 мл венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции. Однонуклеотидный полиморфизм гена тестировали с помощью полимеразной цепной реакцией в реальном времени в соответствии с протоколом фирмы производителя (зонды TaqMan, AppliedBiosystems, USA) на приборе ABI 7900HT. Группа больных бронхиальной астмой - 108 человек, контрольная группа - 282 человека. При изучении распределения генотипов полиморфизма rs4129267 гена IL6R среди мужчин и женщин больных аллергической и неаллергической бронхиальной астмой и лицами контрольной группы выявлены статистически значимые различия. Для группы мужчин, больных аллергической бронхиальной астмой, показано отсутствие редких гомозигот ТТ (отношение шансов (ОШ) - 0,88; 95%-ный доверительный интервал (ДИ) 0,84-0,92; р=0,023), носителей генотипа ТТ среди женщин неаллергической БА было также меньше, чем в контрольной группе (2,9% и 10,9% соответственно, р=0,032), что может свидетельствовать о протективном значении генотипа ТТ ОНП rs4129267 гена IL6R в развитии заболевания. Вышеизложенное свидетельствует о необходимости дальнейших исследований генетических механизмов развития бронхиальной астмы для оценки индивидуальной предрасположенности конкретного больного к развитию заболевания, что является основой персонализированной медицины.

Ключевые слова: однонуклеотидный полиморфизм (ОНП), ген rs4129267 IL6R, бронхиальная астма.

STUDY OF ASSOCIATION OF SINGLE-NUCLEOTIDE POLYMORPHISM RS4129267OF THE INTERLEUKIN -6 RECEPTIR GENE (IL6R) WITH THE RISK OF BRONCHIAL STHMA DEVELOPMENT

A.V. Razvodovskaya1,2, I.I. Cherkashina2, S.Yu. Nikulina2, V.A. Shestovitsky3, M.I. Voevoda3, V.N. Maksimov2

('Krasnoyarsk City Polyclinic №6, Krasnoyarsk, Russia; ^Krasnoyarsk State Medical University named after Professor V.F. Voino-Yasenetsky, Russia; 3Internal Diseases Research Institute of Russian Academy of Medical Sciences,

Novosibirsk, Russia)

Summary. Study of the influence of polymorphism rs 4129267 of IL6R gene on the susceptibility to the development of bronchial asthma among the population of Krasnoyarsk is discussed in present article. Genome DNA was extracted from 10 ml of venous blood with phenol-chloroform extraction technique. Mononucleotide gene polymorphism was tested with the help of polymerase chain reaction in real time in accordance with the firm producer protocol (probes TaqMan, Applied Biosystems, USA) on the apparatus ABI 7900HT. The group of bronchial asthma patients consisted of 108 people; the control group included 282 people. While studying the polymorphism rs 4129267 of gene IL6R genotype distribution among men and women suffering from allergic and non-atopic bronchial asthma and the control group we have revealed some statistically valid differences. The group of allergic bronchial asthma male patients showed the absence of rare homozygotes GG (CR - 0,88; 95%-CI - 0,84-0,92; р=0,023). The number of genotype GG carriers among non-atopic bronchial asthma female patients was less than in the control group (2,9% and 10,9% accordingly, р=0,032), which can be the evidence of protective significance of the genotype GG SNP rs4129267 IL6R gene in the development of bronchial asthma. The above-mentioned facts say about the necessity of further investigations of genetic mechanisms of bronchial asthma development for assessing the individual susceptibility of a particular patient to the development of the disease, which is the basis of personalized medicine.

Key words: single-nucleotide polymorphism (SNP), rs4129267 IL6R gene, bronchial asthma.

Бронхиальная астма (БА) является одним из самых сложных распространенных много факторных заболеваний, развивающихся при взаимодействии многочисленных факторов окружающей среды и наследственной предрасположенности [1]. Молекулярно-генетические исследования при БА в последние годы стали областью пристального внимания многих ученых. Так, согласно результатам полногеномных анализов и многочисленных ассоциативных исследований показано, что в патогенезе БА принимает участие большое количество функционально взаимосвязанных генов [4,6]. К настоящему моменту опубликованы исследования ассоциаций БА примерно с 1117 генами-кандидатами [5].

По современным представлениям, основным морфологическим признаком БА, определяющим ее клинико-функциональные проявления, является воспаление дыхательных путей [1]. Цитокины регулируют воспалительный процесс при Ба [2]. Многие исследователи указывают на повышенное содержание в сыворотке крови

больных БА различных цитокинов, в том числе и интер-лейкина-6 (]Х-6). В дыхательных путях при аллергическом воспалении, ]Х-6 регулирует продукцию провос-палительных и противовоспалительных факторов [2].

ГЬ-6 представляет собой многофункциональный цитокин, который продуцируют как лимфоидные, так и нелимфоидные клетки. ]Х-6 состоит из 184 аминокислотных остатков и имеет молекулярный вес 21 кД. Он оказывает существенное влияние на многие органы и системы, обладает пирогенными свойствами, участвует в регуляции функций эндокринной системы (стимулирует секрецию соматотропного гормона и подавляет секрецию тиреотропного гормона). ]Х-6 является одним из наиболее активных цитокинов, участвующих в реализации иммунного ответа и воспалительной реакции. Действие ]Х-6 связано с его участием в качестве кофактора при дифференцировке В-лимфоцитов, их созревании и преобразовании в плазматические клетки, секре-тирующие иммуноглобулины. Продукция этого интер-

лейкина активируется провоспалительными цитокина-ми (]Х1 и ТОТ-а), а подавляется белками-супрессорами опухоли (р53 и КБ1) и гормонами-эстрогенами. Сам же ингибирует продукцию IL-1 и ТОТ-а и активирует противовоспалительные цитокины IL1RA и IL-10 [9].

^-6 сообщает клетке свою биологическую активность через два типа белков. Один из них является рецептором ^-6, белком, связывающим лиганды, с молекулярной массой около 80 кДа, к которому присоединяется ^-6. Рецептор ^-6 обнаружен не только в мембрано-связанной форме, которая проникает и экс-прессируется в клеточной мембране, но также и в форме растворимого ^-6 рецептора, обнаруживаемого в большинстве экстраклеточных областей. Другой белок представляет собой мембрано-связанный белок §р130, имеющий молекулярную массу около 130 кДа, который вовлечен в передачу сигнала без связывания лигандов. ^-6 и рецептор ^-6 образуют комплекс ^-6/рецептор ^-6, который после связывания с §р130 передает клетке биологически активный сигнал от ^-6 [13].

Среди большинства генов, которые могут принимать участие в формировании предрасположенности к развитию БА, внимание привлекает ген рецептора ин-терлейкина-6 (IL6R), который кодирует ГЬ-6. Ген К6Я расположен на хромосоме 1Ц13.5. [9]. В последние годы проведен ряд исследований, посвященных изучению однонуклеотидного полиморфизма (ОНП) данного гена и его возможному влиянию на развитие различных заболеваний, в том числе и БА. Так, в китайской популяции был определен полиморфизм промотора гена IL6R, который влияет на синтез цитокинов и связан с предрасположенностью к развитию туберкулеза [15]. Среди корейского населения показана ассоциация полиморфизмов п1800796 и п4845617 IL6R с высоким риском развития сухости глаз [12]. Имеются данные о взаимосвязи полиморфизма данного гена с предрасположенностью к развитию сахарного диабета и ревматоидным артритом [11,14].

Работ по изучению взаимосвязи п4129267 полиморфизма гена IL6R с риском возникновения БА немного. При этом, полученные результаты весьма противоречивы и не дают однозначного ответа на вопрос о его патогенетической роли в развитии БА. Для двух локусов хромосомы 1Ц13.5 была подтверждена связь с риском развития неаллергической БА [9]. Генетические маркеры К4129267 гена IL6R и к2228145 ^р358А1а) гена IL6R, показали свое влияние на предрасположенность к развитию БА у лиц европейского происхождения. Рядом авторов доказано участие ОНП гена IL6R в развитии и функционировании регуляторных Т-клеток, ассоциированных с атопией и БА [8]. Показано, что комплекс ^-6/рецептор ^-6 играет роль при воспалении в дыхательных путях и замена Азр(358)А1а в аминокислотной последовательности белка IL6R влияет на его функциональные свойства у пациентов с астмой [7,10].

Целью нашего исследования было оценить вклад п4129267 полиморфизма гена IL6R в формирование предрасположенности к бронхиальной астме у жителей г. Красноярска.

Материалы и методы

В исследование включены больные БА в возрасте от 16 до 70 лет. Всеми больными подписано информированное согласие на участие в исследовании. Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом КрасГМУ Больные БА обследованы в период 2011-2012 гг. на базе МБУЗ Городская поликлиника №6.

Критерии включения:

1. наличие подтверждённого диагноза БА;

2. способность больного выполнять необходимые процедуры;

3. согласие на исследование.

Критерии исключения:

1. больные с неуточнённым диагнозом БА;

2. больные БА с другими хроническими и острыми заболеваниями легких (ХОБЛ, рак легких, туберкулёз, пневмония и др.);

3. больные БА в сочетании с ХОБЛ;

4. больные БА с тяжёлой сопутствующей и сочетан-ной патологией (инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия, застойная сердечная недостаточность и др.).

Всем обследуемым было проведено клинико-инструментальное исследование: клинический осмотр, спирометрия с бронходилатационной пробой, аллерго-логическое обследование.

Обследовано 108 больных БА жителей г. Красноярска (женщин было 81 чел., муж - 27 чел). Они составили основную группу. Средний возраст больных БА составил 50,0 (37,0; 57,0) лет.

Диагноз БА у всех больных был ранее установлен. Степень тяжести, уровень контроля, форма заболевания установлены в соответствии с рекомендациями, изложенными в документе «Глобальная стратегия лечения и профилактики БА» GINA 2011 [1].

Среди наблюдавшихся больных диагностированы следующие формы БА: аллергическая - у 75 (69,4%) и неаллергическая - у 33 (30,6%). По уровню контроля: контролируемая БА была у 21 (19,4%) больных, частично контролируемая - у 72 (66,7%) и неконтролируемая - у 15 (11,9%).

Длительность заболевания у больных БА в среднем составила: с аллергической БА - 7,0 (4,0;14,5) лет; с неаллергической БА - 8,0 (4,0;12,5) лет.

Среди сопутствующих заболеваний у больных БА выделены: внелегочные аллергические заболевания - 25 (23,1%), ишемическая болезнь сердца - 6 (5,6%), артериальная гипертензия - 21 (19,4%), заболевания органов пищеварения - 3 (2,8%), заболевания суставов - 2 (1,9%), заболевания эндокринной системы - 3 (2,8%).

В качестве контроля использовали популяционную выборку здоровых лиц, жителей г. Новосибирска в количестве 290 человек, медиана возраста - 49,0 [15,0; 61,0] лет. Группы были сопоставимы по полу и возрасту (р>0,05).

С целью изучения влияния молекулярно-генетического маркера на предрасположенность к развитию БА сравнивались частоты встречаемости генотипов у больных БА и лиц группы контроля. Молекулярно-генетическое исследование больных БА проводилось в ФГБУ лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний ФГБУ «НИИ ТПМ» СО РАМН (г. Новосибирск). Геномную ДНК выделяли из 10 мл венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции [4]. Генотипирование осуществляли с помощью ПЦР в реальном времени в соответствии с протоколом фирмы производителя (зонды TaqMan, Applied Biosystems, USA) на приборе ABI 7900HT.

Статистическая обработка полученных данных выполнялась при помощи программы SPSS, версии 19.0. Описательная статистика результатов исследования представлена для качественных признаков в виде процентных долей и их стандартных ошибок [3]. Для количественных нормально распределенных (по критерию Шапиро-Уилкса) признаков в описательной статистике использовались средние арифметические (М), стандартные отклонения (а), в остальных случаях медианы и перцентили Ме (V25;V75). Значимость различий качественных признаков в группах наблюдения оценивали при помощи непараметрического критерия х2 Пирсона с поправкой на непрерывность. При частоте встречаемости признака 5 и менее использовался точный критерий Фишера. Различия во всех случаях оценивали как статистически значимые при р<0,05.

Для оценки риска развития БА по конкретному или генотипу производили оценку отношения шансов (ОШ) в таблицах сопряженности 2х2 с расчетом доверительных интервалов. ОШ считали статистически значимым, если в его доверительный интервал не попадала единица.

Результаты и обсуждение

По полиморфизму т$4129267 гена 1Ь6Я были проге-нотипированы 108 больных с диагнозом БА и 290 лица контрольной группы.

При сравнении основной и контрольной групп по частоте встречаемости генотипов и аллелей полиморфизма т$4129267 гена 1Ь6Я значимых различий не получено.

Таблица 1

Частоты встречаемости генотипов и аллелей

т$4129267 гена И-6К среди больных бронхиальной астмой и контрольной группы

Основная группа (п=108) Контрольная группа (п= 290)

Генотипы абс. % абс. %

ГС 58 53,7 134 46,2

СТ 41 38,0 124 42,8

"ГГ 9 8,3 32 11,0

р 0,365

Аллель С 157 72,7 235 67,1

Аллель Т 59 27,3 115 32,9

Р 0,1 96

ОШ; 95% ДИ 1,302; 0,897-1,891

Частоты встречаемости генотипов в группе больных БА составили для распространенного гомозиготного генотипа СС - 53,7%, гетерозиготного генотипа СТ - 38,0% и редкого гомозиготного генотипа ТТ - 8,3%. В контрольной группе частоты генотипов составили 46,2%, 42,8% и 11,0% соответственно. У больных БА частота аллеля Т была ниже, чем в контроле, но, статистически значимых различий получено не было (ОШ - 1,302[95% ДИ; 0,8971,891], р=0,196) (табл. 1).

Таблица 2

Частота встречаемости генотипов Т54129267 гена И-6К среди больных аллергической бронхиальной астмой и контрольной группах

Основная группа (п=75) Контрольная группа (п=290)

Генотипы абс. % абс. %

СС 39 52,0 134 46,2

СТ 29 38,7 124 42,8

ТТ 7 9,3 32 11,0

р 0,663

Генотипы СС+СТ 68 90,7 258 89,0

Генотип ТТ 7 9,3 32 11,0

р 0,671

ОШ; 95% ДИ 1,205; 0,51-0,84

Генотип СС 39 52,0 134 46,2

Генотип СТ+ТТ 36 48,0 156 53,8

р 0,370

ОШ; 95% ДИ 1,261; 0,75-2,09

Примечание: р - критерий значимости при сравнении частоты встречаемости генотипов среди больных аллергической БА с показателями группы контроля.

На следующем этапе анализа сравнили частоты встречаемости генотипов гена ]Х6К. в группе больных аллергической БА с контролем - различий также не обнаружили. Частота распространения гомозиготного генотипа по распространенному аллелю (СС) у больных аллергической БА составила 52,0%, в контрольной группе 46,2%. Частота гетерозиготного генотипа (СТ) у больных аллергической БА была 38,7%, в контроле -42,8%. Частота генотипа (ТТ) у больных аллергической БА составила 9,3% и в контроле - 11,0% (табл. 2).

Нами выявлено незначительное снижение частоты встречаемости носителей генотипа ТТ у больных неаллергической БА в сравнении с контролем (6,1% и 11,0% соответственно, р=0,408). Но, статистически значимых различий в распределении частот генотипов по гену IX-6Я в группе больных неаллергической БА с популяци-онным контролем получено не было (табл. 3).

Изучение распределения генотипов полиморфизма

Таблица 3

Частота встречаемости генотипов тs4129267 гена И-6К среди больных неаллергической бронхиальной астмой и контрольной группах

Основная группа (п=33) Контрольная группа (п=290)

Генотипы абс. % абс. %

СС 19 57,6 134 46,2

СТ 12 36,4 124 42,8

ТТ 2 6,1 32 11,0

р 0,408

Генотипы СС+СТ 31 93,9 258 89,0

Генотип ТТ 2 6,1 32 11,0

р 0,378

ОШ; 95% ДИ 1,92; 0,43-8,41

Генотип СС 19 61,3 134 46,2

Генотипы СТ+ТТ 14 45,2 156 53,8

р 0,215

ОШ; 95% ДИ 1,580; 0,76-3,27

Примечание: р - критерий значимости при сравнении частоты встречаемости генотипов среди больных неаллергической БА с показателями группы контроля.

т$4129267 гена 1Ь6Я среди мужчин и женщин больных аллергической и неаллергической БА и лицами кон-

Таблица 4

Частота встречаемости тз4129267 гена И6К среди женщин больных аллергической бронхиальной астмой и контрольной группах

Основная группа (п=73) Контрольная группа (п=175)

Генотипы абс. % абс. %

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

СС 35 47,9 79 45,1

СТ 35 47,9 77 44,0

ТТ 3 4,1 19 10,9

р 0,233

Генотипы СС+СТ 70 95,9 156 89,1

Генотип ТТ 3 4,1 19 10,9

р 0,089

Генотип СС 35 47,9 79 45,1

Генотипы СТ+ТТ 38 52,1 96 54,9

р 0,687

ОШ; 95% ДИ 1,119; 0,64-1,93

Примечание: р - критерий значимости при сравнении частоты встречаемости генотипов среди женщин с аллергической БА с показателями группы контроля.

трольной группы выявило статистически значимые различия. Для группы мужчин больных аллергической БА показано отсутствие редких гомозигот ТТ (ОШ 0,88 95% ДИ 0,84-0,92; р=0,023). Носителей генотипа ТТ среди женщин неаллергической БА было также меньше, чем в контрольной группе (2,9% и 10,9% соответствен-

Таблица 5

Частота встречаемости т$4129267 гена И6К среди женщин больных неаллергической бронхиальной астмой и контрольной группах

Основная группа (п=35) Контрольная группа (п=175)

Генотипы абс. % абс. %

СС 24 68,6 79 45,1

СТ 10 28,6 77 44,0

ТТ 1 2,9 19 10,9

р 0,032

Генотипы СС+СТ 34 97,1 156 89,1

Генотип ТТ 1 2,9 19 10,9

р 0,141

ОШ; 95% ДИ 4,141; 0,53-32,00

Генотип СС 24 68,6 79 45,1

Генотипы СТ+ТТ 11 31,4 96 54,9

р 0,011

ОШ; 95% ДИ 2,65; 1,22-5,74

Примечание: р - критерий значимости при сравнении частоты встречаемости генотипов среди женщин с неаллергической БА с показателями группы контроля.

но, р=0,032), что может свидетельствовать о протектив-ном значении генотипа ТТ ОНП п4129267 гена IL6R в развитии заболевания (табл. 4, 5).

Таким образом, при изучении распределения генотипов и аллелей п4129267 гена IL6R выявлена ассоциация между генотипом ТТ и БА. Полученные данные позволяют сделать предположение, что генотип ТТ ОНП

к4129267 гена IL6R может явиться протективным фактором развития БА. Вышеизложенное свидетельствует о необходимости дальнейших исследований генетических механизмов развития БА для оценки индивидуальной предрасположенности конкретного больного к развитию заболевания, что является основой персонализированной медицины.

ЛИТЕРАТУРА

1. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы (пересмотр 2011 г.) / Под ред. А.С. Белевского.

- М.: Российское респираторное общество, 2012. - 108 с.

2. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины - СПб.: Фолиант, 2008. - 552 с.

3. Мерков А.М., Поляков Л.Е. Санитарная статистика (пособие для врачей). - М., 1974. - С.82-92.

4. Смит К., Калко С., Кантор Ч. Пульс-электрофорез и методы работы с большими молекулами ДНК // Анализ генома / Под ред. К. Дейвиса. - Пер. с англ. - М.: Мир, 1990.

- С.58-94.

5. Фрейдин М.Б., Брагина Е.Ю., Огородова Л.М. и др. Генетика атопии: современное состояние // Вестник ВОГиС.

- 2006. - Т. 10. №3. - С.492-503.

6. Фрейдин М.Б., Огородова Л.М., Цой А.Н. и др. Генетика бронхиальной астмы // Генетика бронхолегочных заболеваний / Под ред. В.П. Пузырева, Л.М. Огородовой. - М.: Атмосфера, 2010. - С.78-104.

7. Berndt A., Leme A.S., Shapiro S.D. Emerging genetics of COPD // EMBO Mol. Med. - 2012. - Vol. 4. - P.1144-1155.

8. Bottema R.W., Kerkhof M., Reijmerink N.E., et al. Genegene interaction in regulatory T-cell function in atopy and asthma development in childhood // J. Allergy Clin. Immunol. - 2010. -Vol. 126. - P.338-346.

9. Ferreira M.A., Matheson M.C., Duffy D.L., et al. Identification of IL6R and chromosome 11q13.5 as risk loci for asthma // Lancet. - 2011. - Vol. 378. - P.1006-1014.

10. Hawkins G.A., Robinson M.B., Hastie A.T., et al. The IL6R variation Asp(358)Ala is a potential modifier of lung function in subjects with asthma // J. Allergy Clin. Immunol. - 2012. - Vol. 130. - P.510-515.

11. Qi L., Rifai N., Hu F.B. Interleukin-6 Receptor Gene, Plasma C-Reactive Protein, and Diabetes Risk in Women // Diabetes. - 2009. - Vol. 58. - P.275-278.

12. Rae Rho C., Kyung-Sun Na, Jee-Won Mok, et al. A Strong Association of rs1800796 of IL6 and rs4845617 of IL6R In Korean Patients With Dry Eye Disease // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -2012. - Vol. 53. - P.541.

13. Taga T., Hibi M., Hirata Y., et al. Interleukin-6 triggers the association of its receptor with a possible signal transducer, gp130 // Cell. - 1989. - Vol. 58. S3. - P.573-581.

14. Wang J., Platt A., Upmanyu R., et al. IL-6 pathway-driven investigation of response to IL-6 receptor inhibition in rheumatoid arthritis // BMJ Open. - 2013. - Vol. 3. - P.1-11.

15. Zhang G., Zhou B., Wang W., et al. A Functional Single-Nucleotide Polymorphism in the Promoter of the Gene Encoding Interleukin 6 Is Associated With Susceptibility to Tuberculosis // The Journal of Infectious Disease. - 2012. - Vol. 205. - P.1697-1704.

REFERENCES

1. Global strategy of treatment and prevention of bronchial asthma (revision 2011) / Ed. A.S. Belevsky. - Moscow: Rossijskoe respiratornoe obshchestvo, 2012. - 108 p. (in Russian)

2. Ketlinsky S.A., Simbirtsev A.S. Cytokines. - St. Petersburg: Foliant, 2008. - 552 p. (in Russian)

3. Merkov A.M., Polyakov L.Ye. Medical statistics (textbook for doctors). - 1974. - P.82-92. (in Russian)

4. Smith K., Kalko C., Cantor Ch. ^. Pulse-electrophoresis and methods of work with large DNA molecules // Genome analysis. / Ed. K. Davis. - Translated from English. - Moscow: Mir, 1990. - P.58-94. (in Russian)

6. Freidin M.B., Bragina Ye. Yu., Ogorodova L.M., et al. Genetics of atopy: current state // Vestnik VOGiS. - 2006. - Vol. 10. №3. -P.492-503. (in Russian)

6. Freidin M.B., Ogorodova L.M., Tsoi A.N., et al. Genetics of bronchial asthma // Genetika bronholyogochnyh zabolevaniy / Ed. V.P. Puzyryov, L.M. Ogorodova. - Moscow: Atmosphera, 2010. - P.78-104. (in Russian)