CC BY
64
42/2005 Г*
Вестник Ставропольского государственного университета ¡ff^j
МЕЛНЦННСКНЕ ннуки I Фнзнологпл
ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИСТЬЕВ РАСТЕНИЙ РОДА ЛОПУХ И ТРАВЫ ФИАЛКИ ПОЛЕВОЙ МЕТОДАМИ ТСХ И ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА
Р.А. Бубенчиков, И.Л. Дроздова
RESEARCH OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF THE GENUS ARCTIUML. LEAVES AND VIOLA ARVENSE L. BY THE METHODS OF TLC AND CHEMOLUMI-NESCENSE.
Bubenchicov R.A., Drozdova I.L.
The article runs about results of antioxidant activity research of Viola arvense L. herb and the genus Arctium L. leaves infusion using the methods of TLC and chemoluminescense. It has been proved that antioxidant activity of infusion is due to the presence of flavonoids, coumarins, phenolcarbolic acids derivatives. According to the results of investigation the above-mentioned plants can be regarded as perspective sources of phenol compounds, possessing antioxidant activity.
В статье приведены результаты исследования антиоксидантной активности настоев травы Viola arvense L. и листьев растений рода Arctium L. методами ТСХ и хемилюминесценции. Установлено, что антиоксидантная активность настоев обусловлена наличием в них флавоноидов, кумаринов, производных фенолкарбоновых кислот. На основании полученных результатов указанные растения можно рассматривать в качестве перспективных источников соединений фе-нольного характера, обладающих антиоксидант-ной активностью.
УДК 615.32.322:[543.426+543.544]
Проблема перекисного окисления ли-пидов и образования свободных радикалов (оксидантов) как этиологического фактора и фактора, осложняющего течение различных заболеваний, привлекает внимание многих специалистов. Синтетические антиоксидан-ты (дибунол, пробукол, цистамин, мекса-мин) в клинической практике не нашли должного применения из-за их высокой токсичности (4).
Результаты научных исследований и данные клинической практики позволяют сделать вывод о перспективности применения антиоксидантов растительного происхождения, обладающих мягким воздействием на организм и сравнительно низкой токсичностью, для профилактики и коррекции патологий, возникающих в результате активации процессов свободно-радикального окисления (1). В связи с этим пока более предпочтительны природные (растительные) антиоксиданты, одними из которых могут служить растения родов Лопух и Фиалка, широко распространенных на территории областей Центральной России (3).
Цель работы: исследование антиок-сидантной активности листьев растений рода Лопух и травы фиалки полевой.
Объектом исследования служили воздушно-сухие измельченные листья лопуха большого (Arctium lappa L.), лопуха паутинистого (Arctium tomentosum Mill.), лопуха малого (Arctium minus (Mill.) Bernh.) и трава фиалки полевой (Viola arvense L.). Сырье
Бубенчиков Р.А., Дроздова И.Л.
«Изучение антиоксидантной активности листьев растений рода лопух и травы фиалки...»
заготавливалось в 2004-2005 гг. в Курской области в период цветения растений.
Для исследований использовали настои из сырья указанных видов, которые готовили по методике ГФ XI (2).
Методы исследования. Исследования антиоксидантной активности проводили методами тонкослойной хроматографии и хе-милюминесцентного анализа.
На первом этапе проводили скрининг на наличие в исследуемых видах веществ, проявляющих антиоксидантную активность. Для этого настои (0,02 мл) наносили на хро-матографические пластинки «Силуфол», предварительно обработанные в хромато-графической камере 96% спиртом этиловым и высушенные при температуре 105°С. Параллельно для каждого образца ставили по две хроматограммы. Разделение проводили в системе растворителей: этилацетат-муравьиная кислота-хлороформ (3:3:1). После кратковременного высушивания на воздухе пластинки обрабатывали 3% раствором линетола в гексане и инкубировали при температуре 70°С в течение 20-25 мин. При этом происходило образование перекисей. В пятнах хроматограмм, заключавших компоненты с антиоксидантной активностью, образование перекисей не происходило или оно протекало замедленно. Такие компоненты обнаруживали визуально при помощи проявляющих реагентов. Одну из хромато-грамм после инкубации с линетолом обрабатывали реагентом состава: 30 мл смеси этанола, уксусной кислоты и хлороформа (5:3:2, по объему) и 1 мл насыщенного водного раствора натрия иодида; антиоксидан-ты обнаруживались на пластинках в виде белых или желтоватых пятен на темно-буром фоне. Другую хроматограмму обрабатывали 0,3% раствором К,К-диметил-и-фенилендиамина в гексане; антиоксиданты проявлялись в виде светлых пятен на розовато-буром фоне (5). Оба реагента были примерно одинаковой чувствительности к исследуемым антиоксидантам. Проявление хроматограмм разными реагентами позволяло наиболее точно установить позиции активных компонентов и исключить влияние природных пигментов, которые могли ос-
таться в исследуемых полифенольных комплексах. В зависимости от хроматографиче-ской подвижности обнаруженные антиокси-данты условно подразделяли на полярные (Яг 0-20), среднеполярные (Яг 21-50), неполярные (Яг 51-100). Относительное содержание (активность) антиоксидантов в исследуемых препаратах устанавливали визуально по размеру, белизне и устойчивости пятен, проявляющихся на хроматограммах после инкубирования с линетолом и проявления иодным реагентом. Слабые, единичные и быстро (до 1 часа) исчезающие пятна оценивали одним знаком «+»; более яркие и устойчивые (до 5 часов) - «++»; множественные, яркие и устойчивые - «+++» (5).
Оценку антиоксидантной активности настоев проводили хемилюминесцентным методом. Уровень Бе2+-индуцированной хе-милюминесценции определяли на приборе биохемилюминометр БХЛ-06 по общепринятому методу (6). При проведении опытов по определению собственной антиокислительной активности настоев использовали модельную систему, при этом среда инкубации содержала 0,2 мл фосфатного буфера (20 мМ КН2 РО4, 105 мМ КС1, рН 7,40); 0,2 мл суспензии липосом; 0,2 мл раствора эозина (2,7 мМ), 0,2 мл Ре804*7И20 (38,5 мМ). После двухминутной инкубации в термостате при температуре 37°С в систему добавляли исследуемые настои (0,2 мл) и инкубировали 2 минуты. Растворы исследуемых препаратов вносили в модельную систему и определяли его ингибирующее действие на модельное свечение. Степень подавления хемилюминесценции свидетельствует о суммарной антиоксидантной активности; таким образом, данным методом проводится определение тормозящего влияния исследуемых препаратов на развитие свободнора-дикальных процессов в модельной системе. Для оценки влияния исследуемых комплексов на кинетику индуцированной хемилю-минесценции определяли степень подавления хемилюминесценции, выраженной в %. Каждый образец проанализировали в 6 по-вторностях. Результаты обработаны статистически по ГФ XI (2).
42/2005
Вестник Ставропольского государственного университета
Результаты. В результате проведенных исследований установлено, что в состав травы фиалки полевой и листьев растений рода Лопух входят соединения, проявляющие антиоксидантную активность. Повышенная антиоксидантная активность травы фиалки полевой связана с наличием в нем полярных и среднеполярных компонентов (см. табл.). Результаты качественного хро-матографического анализа показали, что в траве фиалки полевой присутствуют флаво-ноиды (рутин, ориентин, гиперозид, вице-нин, гесперидин), фенолкарбоновые кислоты (изоферуловая, феруловая, эллаговая), кумарины (умбеллиферон, дикумарин), арбутин, с которыми в основном и связывают антиокидантную активность.
Настои из листьев растений рода Лопух проявили антиоксидантное действие в неполярной, полярной и среднеполярной зонах. Уровень антиоксидантной активности указанных настоев был выше в среднепо-лярной зоне. Хроматографический анализ на наличие фенольных соединений позволил установить, что листья исследуемых видов лопуха содержат в значительном количестве фенолкарбоновые кислоты (галловую, кофейную, хлорогеновую), флавоноиды (апи-генин, кверцетин, гиперозид, гесперидин, рутин), арбутин.
Исследование влияния настоев листьев
лопуха и травы фиалки полевой на парамет-
2+
ры ^е -индуцированной хемилюминесцен-ции показало, что испытуемые препараты оказывают ингибирующее влияние на кинетику хемилюминесценции, о чем свидетельствует снижение свечения модельной системы на 37,51-39,79% у листьев растений рода Лопух и на 32,10% - у травы фиалки полевой (см. табл.).
Выводы. Исследование настоев листьев лопуха большого, лопуха малого и лопуха паутинистого и травы фиалки полевой на наличие БАВ, обладающих антиоксидант-ной активностью показало наличие в них соединений, проявляющих такую активность - флавоноидов, кумаринов, фенолкар-боновых кислот. Установлено, что настои исследуемых видов оказывают ингибирую-щее влияние на кинетику хемилюминесцен-ции, о чем свидетельствует подавление хе-милюминесценции от 32,10 до 39,79%.
На основании полученных результатов указанные растения можно рассматривать в качестве перспективных источников соединений фенольного характера, обладающих антиоксидантной активностью.
Таблица
Влияние настоев из листьев рода Лопух и травы фиалки полевой на антиоксидантную активность
Исследуемые препараты ТСХ Показатели хемилюминесценции (ХЛ)
нп сп п Интенсивность ХЛ (импульсы), М±т Снижение свечения, %
Контроль - - - 228,2±5,38 -
Лопух большой (листья), настой + ++ + 137,4±5,86* 39,79
Лопух паутинистый (листья), настой + ++ + 141,9±5,53* 37,82
Лопух малый (листья), настой + ++ + 142,6±7,53* 37,51
Фиалка полевая (трава), настой +++ ++ 163,0±5,78* 32,10
Примечание: «*» - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (п=6, Р<0,05); нп -неполярные, сп - среднеполярные, п - полярные соединения.
Бубенчиков Р.А., Дроздова И.Л.
«Изучение антиоксидантной активности листьев растений рода лопух и травы фиалки...»
ЛИТЕРАТУРА
1. Антиоксидантная активность - показатель качества эффективности фитопрепаратов / Е.И. Шкарина, Т. В. Максимова, В. П. Пахо-мов и др. // Фармация на современном этапе -проблемы и достижения: Сб. науч. тр. НИИФ. -М, 2000. - Т. 39. Ч.2. - С. 168-174.
2. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., М., 1987. - 336 с.
3. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. -СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663 с.
4. Колесова В.Г., Дадали В.А., Лойко В.И. и др. Антиоксидантная терапия растениями // Эфферентная терапия. - 1996. - Т. 2. - №1. - С. 6770.
5. Максимов О.Б., Ребачук Н.М., Богуславская Л.В. Скрининг для обнаружения антиоксидан-
тов в экстрактах из растений // Раст. ресурсы. 1985. - Т. 21. Вып. 2. - С. 216-220. 6. Сернов Л.М., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. - М., 2000. - 352 с.
Об авторах
Бубенчиков Роман Александрович, кандидат медицинских наук, врач дерматовенеролог Областного Курского кожно-венерологического диспансера (ОККВД). Автор более 60 научных трудов. Сфера научных интересов - фармакологические исследования лекарственных растений. Дроздова Ирина Леонидовна, кандидат фармацевтических наук, старший преподаватель кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Курского государственного медицинского университета. Автор более 100 научных работ. Сфера научных интересов - фитохимические и фармакологические исследования лекарственных растений.
