CC BY
18ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л
УДК 57.083.3 - 035.2:(612.176+599.323.4)
С. А. Шнайдер, д. мед. наук
Государственное учреждение «Институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Национальной академии медицинских наук Украины»
ИЗУЧЕНИЕ АДАПТОГЕННЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА РАСТИТЕЛЬНЫХ ПОЛИФЕНОЛОВ В УСЛОВИЯХ ВОСПРОИЗВЕДЕНИЯ ОСТРОГО ЭМОЦИОНАЛЬНО-БОЛЕВОГО СТРЕССА
В экспериментах на 24 белых крысах изучено влияние препарата растительных полифенолов (ПФ) - фи-тоседа и стандартного транквилизатора диазепама на показатели периферической крови, состояние тест-органов и ульцерогенные эффекты при воспроизведении острого эмоционально-болевого стресса (ЭБС) у крыс. Установлены стресс-протективые эффекты диазепама и ярко выраженные защитные адаптогенные свойства препарата фитосед в условиях воспроизведения острого эмоционально-болевого стресса.
Ключевые слова: острый эмоционально-болевой стресс, растительные полифенолы, фитосед, диазепам, адаптогенные эффекты.
С. А. Шнайдер
Державна установа «1нститут стоматологи та щелепно-лицево! xipyprii' Нащонально! академи медичних наук Укра!ни»
ВИВЧЕННЯ АДАПТОГЕНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ ПРЕПАРАТУ РОСЛИНИХ ПОЛ1ФЕНОЛ1В В УМОВАХ В1ДТВОРЕННЯ ГОСТРОГО ЕМОЦШНО-БОЛЬОВОГО СТРЕСУ
В до^дах на 24 бших щурах вивчено вплив препарату рослиних полiфенолiв (ПФ) - фтоседу та стандартного транквтзатору - дiазепаму на показники перiферичноi кровi, стан тест- органiв та ульцерогеннi ефе-кти в умовах вiдтворення гострого емлоцшно-больового стресу (ЕБС) у щурiв. Встановленi стрес-протективнi ефекти дiазепаму та яскраво виражет захисш адаптогет властивостi препарату фiтосед в умовах вiдтворення гострогь емоцшно-больового стресу.
Ключовi слова: гострий емоцшно-больовий стрес, рослинi полiфеноли, фтосед, дiазепам, адаптогеш ефекти.
S. A. Schneider
State Establishment "The Institute of Stomatology and Maxillo-Facial Surgery National Academy of
Medical Science of Ukraine"
STUDY OF THE ADAPTOGENIC PROPERTIES PREPARATION OF PLANT POLYPHENOLS AND IN CONDITIONS OF ACUTE EMOTIONALLY-ALGESIC STRESS OF RATS
ABSTRACT
The aim of study is the studying protective properties preparation of plant polyphenols phitosed and tranquilizer diazepam in conditions of manifestations emotionally-algesic stress of rats.
Materials and methods. The experiment was carried out on 5-month-old 24 male rats. They were devided into 4 groups (6 rats per group). The first group was intact; second, third and fourth groups were in conditions of acute emo-tionally-algesic stress. The rats were given per os : second group - water, third group - diazepam at a dose 1,25 mg/kg body weight of rats; fourth group - phitosed at a dose 1,0 ml/kg (at a dilution of 1:1) for 60 minutes before of stressing.
Conclusions. Researches showed stress-protective effects of diazepam and strongly pronounced protective adaptogenic properties ofphitosed in conditions of acute emotionally-algesic stress of rats.
Key words: acute emotionally-algesic stress, plant polyphenols, phitosed, diazepam, adaptogenic effects.
© Шнайдер С. А., 2018.
Стоматологические вмешательства, сопровождающиеся эмоционально-болевым стрессом (ЭБС), приводят к торможению регенерацион-ных процессов в тканях ротовой полости, а применение известных седативных препаратов-анксиолитиков не всегда устраняет его последствия [1].
В последнее время установлено, что полифенолы (ПФ) растительного происхождения участвуют в обеспечении общей и локальной резистентности организма, являясь дублерами гормонов, гуморальных регуляторов и др. [2].
Противовоспалительным действием обладают представители всех основных классов и групп фенольных соединений. Флавоноиды, кверцетин, рутин, кемпферол и их гликозиды - признанные противовоспалительные средства. Противовоспалительная активность обнаружена у байкалеи-на, апигенина, лютеолина и их гликозидов [3]. В природе флавоноиды, в основном, обнаружены в высших растениях и встречаются в виде гликозидов, реже - агликонов.
В связи с этим ПФ из растений привлекают внимание исследователей в качестве перспективных веществ для получения лекарственных препаратов.
Цель настоящего исследования. Изучение защитных свойств препарата растительных полифенолов - фитоседа и транквилизатора диазе-пама в условиях проявлений острого эмоционально-болевого стресса у крыс.
Материалы и методы. Эксперимент проведен на 24 белых крысах-самцах 5-ти мес. возраста линии Вистар стадного разведения. Изучено влияние фитоседа (АО «Эффект», Харьков, Украина) и стандартного анксиолитика диазепама (ХДФП «Здоров'я народу», Украина) на показатели периферической крови, состояние тест-органов и ульцерогенные эффекты при воспроизведении у них острого эмоционально-болевого стресса (ЭБС) по Дезидерато [4].
Все животные (по 6 крыс в каждой группе) содержались на стандартном рационе вивария: 1-я группа - интактная; крысам 2-й - 4-й групп воспроизводили острый ЭБС. За 60 минут до стрессирования крысы per os получали: 2-й группы - воду, 3-й группы - диазепам (сибазон) в дозе 1,25 мг/кг массы тела крыс; 4-й группы -фитосед в дозе 1,0 мл/кг (в разведении 1:1).
Фитосед (Phytosed) - комплекс растительных ПФ, обладающий седативными, анксиолитиче-скими свойствами. Содержит экстракты плодов боярышника, кориандра, овса; травы мелиссы, донника, пустырника; соплодия хмеля. Биологически активными веществами фитоседа являются полифенолы - флавоноиды, кумарины, феноль-ные кислоты и эфирные масла. Наиболее изуче-
ны из них флавоноиды: кверцетин, кверцетрин, витексин, гликозиды апигенина, лютеолин, рутин и др.
Острый ЭБС тревожного ожидания болевого воздействия воспроизводили 3-х часовым содержанием крыс в клетках конструкции Дезидерато, в которой подача постоянного тока силой 5-6 мА производилась со случайными интервалами времени либо на пол клетки, либо на платформу, расположенную над полом [4].
После окончания стрессирования прижизненно из хвостовой вены у крыс брали периферическую кровь и подсчитывали число нейтро-филов, эозинофилов, моноцитов, лимфоцитов, общее число лейкоцитов.
Животных выводили из опыта путем тотального кровопускания из сердца, проводимого под тиопенталовым наркозом (40 мг/кг). После забоя у животных определяли относительную массу надпочечников и селезенки [масса органа (мг)/масса крысы (г)]х100, а также ульцероген-ный эффект. Выделяли желудок, вскрывали его по малой кривизне, промывали, высушивали салфеткой и измеряли толщину стенки слизистой оболочки желудка (СОЖ). Затем подсчитывали количество поражений, возникших на СОЖ, и измеряли их линейный размер (в мм) при помощи штангенциркуля. Определяли частоту поражений СОЖ (в %); множественность поражений - число эрозий и язв. Тяжесть поражений СОЖ оценивали по 4-балльной системе: до 1 мм - 1 балл, 1-2,9 мм - 2 балла, 3-4,9 мм - 3 балла, 5 мм и более - 4 балла.
Полученные в ходе исследований результаты обрабатывали общепринятым методом с определением ^критериев достоверности различий по Стьюденту.
Результаты исследования. Прижизненное исследование форменных элементов периферической крови крыс после воспроизведения у них острого ЭБС показали значительные изменения ее клеточного состава. Так, в 2,7 раза увеличилось число сегментоядерных нейтрофилов (р=0,03) и в 3,2 раза снизилось число лимфоцитов (р<0,001 ; табл. 1).
Под действием диазепама, вводимого на фоне острого ЭБС, нормализовалось количество палочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов. Число сегментоядерных нейтрофи-лов и лимфоцитов практически находилось на уровне данных контрольных групп. Диазепам на фоне стресса вызвал достоверное снижение общего числа лейкоцитов (Г/л) по сравнению с контрольной (р!<0,001) и интактной (р=0,004) группами (табл. 1).
Результаты исследований клеточного состава крови крыс под влиянием растительных ПФ пре-
парата фитосед выявили следующее. Число па-лочкоядерных нейтрофилов, эозинофилов, моноцитов, а также общее число лейкоцитов под влиянием фитоседа существенно не отличались от данных интактных групп. Число сегментоя-дерных нейтрофилов и лимфоцитов изменялось
недостоверно по сравнению с данными контрольных групп. В то же время число лимфоцитов снижалось в 2,2 раза (р=0,002), а сегментоя-дерных нейтрофилов увеличивалось (р<0,001) относительно интактной группы (табл. 1).
Таблица 1
Влияние дипиридамола на показатели резорбции костных структур пародонта крыс (М±m; p; р^
Группы животных Резорбция (%)
Продолжительность воздействия
35 дней 70 дней
Нижняя челюсть Верхняя челюсть Нижняя челюсть Верхняя челюсть
Контрольная (К) 33,3±0,8 23,3±0,8 35,5±0,7 23,5±0,8
К+ДЛ 27,8±1,1 р=0,003 17,4±1,1 р=0,001 31,9±1,4 р1=0,04 21,0±1,5
Прим еч ание : в табл.1-4 показатель достоверности р рассчитан относительно контрольной группы (35 дней опыта); р! — // — // — (70 дней опыта);
р2 — показатели после 70 дней опыта относительно 35-дневного.
Результаты исследований, представленные в табл. 2, свидетельствуют о том, что острый ЭБС вызвал существенное снижение относительной массы селезенки и тенденцию снижения массы надпочечников, что соответствует общеизвестным представлениям о последствиях воспроизведенного стресса.
В группе с введением диазепама на фоне стресса относительная масса тест-органов крыс существенно не отличалась от таковых у интакт-ных животных. Под действием фитоседа относи-
тельная масса надпочечников увеличивалась по сравнению с контрольной группой (р!=0,06) и достигала уровня интактной (табл. 2). Таким образом, фитосед нормализовал относительную массу надпочечников стрессированных крыс. В то же время относительная масса селезенки была достоверно ниже, чем в интактной группе.
Результаты морфометрических исследований слизистой оболочки желудка крыс с целью установления ульцерогенного эффекта представлены в табл. 3.
Таблица 2
Влияние дипиридамола на содержание МДА в сыворотке крови (мкмоль/мл) и тканях крыс (мкмоль/г) (М±т; р; р^ р2)
Группы животных Содержание МДА
35 дней 1 70 дней
Сыворотка крови
Контрольная (К) 3,85±0,13 3,84±0,19
К+ДЛ 3,60±0,26 4,40±0,54
Печень
Контрольная (К) 39,1±3,9 40,3±1,0
К+ДЛ 44,4±7,4 52,8±6,0 р:=0,06
Десна
Контрольная (К) 80,4±11,8 68,2±18,7
К+ДЛ 79,7±21,5 36,7±4,41 р2=0,07
Щека
Контрольная (К) 91,2±30,7 101±15,6
К+ДЛ 59,0±8,9 66,8±4,6 р1=0,05
Таблица 3
Влияние дипиридамола на активность антиоксидантных ферментов в сыворотке крови
и тканях крыс (М±m; р; р1; р2)
Группы Активность
животных ГПО (мкат/мл; мкат/г) СОД (у.е.)
35 дней 70 дней 35 дней 70 дней
Сыворотка крови
Контрольная (К) 0,22±0,054 0,47±0,13 0,69±0,16 0,94±0,26
К+ДЛ 0,55±0,11 р=0,02 0,38±0,16 0,97±0,16 1,20±0,12
Печень
Контрольная (К) 24,0±4,27 29,1±10,6 0,31±0,032 0,094±0,024
К+ДЛ 40,2±6,80 р=0,06 26,8±4,84 0,31±0,052 0,044±0,015 р1=0,08
Десна
Контрольная (К) 33,4±6,90 93,5±15,9 0,59±0,15 0,33±0,069
К+ДЛ 106±14,1 128±17,9 0,47±0,12 0,58±0,12
р<0,001 р1=0,10
Щека
Контрольная (К) 121±11,9 75,0±9,42 0,59±0,082 0,45±0,080
К+ДЛ 54,8±6,64 р<0,001 62,6±2,24 0,58±0,071 0,57±0,067
Таблица 4
Влияние дипиридамола на активность эластазы в сыворотке крови (нкат/л) и тканях ротовой полости крыс (нкат/г) (М±m; р; р1; р2)
Группы Активность эластазы
животных 35 дней 70 дней
Сыворотка крови
Контрольная (К) 7,30±0,83 10,02±0,91
3,89±0,34 2,63±0,26
К+ДЛ р=0,004 р1<0,001 р2=0,003
Десна
Контрольная (К) 1,24±0,19 2,81±0,42
К+ДЛ 1,28±0,20 0,93±0,16 р1<0,001
Щека
Контрольная (К) 1,31±0,17 1,83±0,41
К+ДЛ 1,09±0,16 1,17±0,12
Исследования показали, что острый ЭБС вызвал достоверное снижение (в 1,3 раза; р=0,03) толщины слизистой оболочки желудка крыс (табл. 3). Количество эрозий под действием ЭБС увеличивалось в 2,3 раза (тенденция; р=0,08), а количество язв - в 20,3 раза ^=0,02). Острый ЭБС вызвал 100 % частоту поражений СОЖ крыс по сравнению с 5,7 % в интактной группе. После воспроизведенного стресса наблюдалось появление большого числа крупных эрозий, а также язв на слизистой желудка. Так, тяжесть поражений эрозиями (в баллах) увеличивалась втрое, а язвами - в 24,3 раза (табл. 3).
Диазепам, вводимый на фоне острого ЭБС, снизил на 14,3 % частоту поражений на слизистой желудка по сравнению со 100 % в группе
стрессированных крыс. Число и тяжесть поражений язвами снижалась в 1,5 раза по сравнению с контрольной группой (р>0,05). В то же время число язв и тяжесть поражения язвами под влиянием диазепама были существенно выше, чем в интактных группах, что свидетельствует о недостаточной защите этим препаратом последствий воспроизведенного острого ЭБС.
Препарат растительных ПФ - фитосед на 50 % снижал частоту поражений СОЖ крыс по сравнению с контрольной группой. Количество язв на СОЖ под действием фитоседа снижалось вдвое (р>0,05), а тяжесть поражений язвами - в 2,9 раза (тенденция; р1=0,07) по сравнению с данными контрольных групп. Число эрозий соответствовало данному показателю у интактных животных.
Таким образом, проведенные исследования продемонстрировали стресс-протективные эффекты диазепама и ярко выраженные защитные адаптогенные свойства препарата полифенолов растительного происхождения - фитоседа в условиях воспроизведения острого эмоционально-болевого стресса у крыс.
Выводы. 1. Диазепам нормализовал относительную массу тест-органов (надпочечников и селезенки) в условиях проявлений острого эмоционально-болевого стресса.
2. Фитосед оказал позитивное влияние на показатели периферической крови стрессирован-ных крыс.
3. Фитосед проявил защитные свойства в отношении слизистой оболочки желудка стресси-рованных крыс, причем степень их проявлений была существенно выше, чем у стандартного транквилизатора - диазепама.
REFERENCES
1. Mikkelsen J., Soderman A., Kiss A., Mirsza N.
Effects of benzodiazepines rezeptor agoinists on the hypothalamic - pituitary - adrenocortical axis / // Eur. J. Pharmacol. 2005;3(20): 223-230.
2. Levickij A. P., Voskresenskij O. N., No-sijchuk S. V. The role of food polyphenols in the formation of local non-specific resistance of oral cavity tissues. Visnyk stomatologii. 2005;3:2-8.
3. Theoharides T. S., Alexandrakis M. Antiinflammatory actions of flavonoids structural reguirements for new design. Int. J. Immupathol. Pharmacol. 2001; 14:119.
4. Desiderato O., Mac Kinnon J., Hisson H. Development of gastric ulcers in rats following stress termination. J. Comp. Physiol. Psyhol. 1974;87:208-214.
Поступила 01.02.18
УДК 616.31-002+616.633.445.623
Т. О. Пиндус к. мед. н.
Льв1вський медичний шститут
ПРОФШАКТИКА УСКЛАДНЕНЬ ПРИ ХРОН1ЧНОМУ ГЕНЕРАЛ1ЗОВАНОМУ ПАРОДОНТИТ1 НА ФОН1 МЕТАБОЛ1ЧНОГО СИНДРОМУ (ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ, КЛ1Н1ЧНЕ ТА КЛ1Н1КО-ЛАБОРАТОРНЕ
ДОСЛ1ДЖЕННЯ)
Показано, что метаболический синдром дополнительно ухудшает стоматологический статус пациентов и уровень гигиены полости рта, связан с значительными нарушениями в генах жирового обмена и воспаления, а моделирование метаболического синдрома у крыс привело к ухудшению биохимических показателей тканей десны, сыворотки крови, печени и костных тканей. Применение разработанного лечебно-профилактического комплекса в эксперименте позволило нормализовать большинство биохимических показателей тканей и крови животных, а в клинике улучшить стоматологический статус пациентов, оптимизировать у них экспрессию провоспалительного действия цитокинов генов ШЫ-у и Л-6, улучшить жировой обмен, архитектонику костной ткани, функциональное состояние микрокапиллярного русла десны.
Ключевые слова: хронический генерализованный пародонтит, метаболический синдром, эксперимент, клиника.
© Пиндус Т. 0.,2018.
