CC BY
42
точтТ№4Мсшр7т7-т Оригинальные статьи
© 2000, СПб РО РААКИ
ИЗОТИПИЧЕСКИЙ СОСТАВ И ЭПИТОПНАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ АУТОАНТИТЕЛ ПРОТИВ ТИРЕОГЛОБУЛИНА*
Климович В.Б., Руденко И.Я., Василевский Д.И., Львова О.А.
Центральный научно-исследовательский рентгенорадиологический институт М3 РФ, Санкт-Петербург
Резюме. Аутоантитела против тиреоглобулина (ТГ, АА ) выявляли в непрямом варианте твердофазного им-муноферментного анализа (ИФА) с ТГ, иммобилизованным в лунках планшетов. При определении суммарных титров и изотипического состава ААт[ использовали полученные в лаборатории меченые пероксидазой моноклональные антитела (МКАТ) против легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов (Ig) человека. В сыворотках доноров (37 проб) преобладали АА классов IgM и IgA, а титры варьировали от 0 до 1/540. У пациентов с аутоиммунным тиреоидитом и диффузно-токсическим зобом (86 и 36 проб соответственно) доминировали АА подкласса lgG4, второе место по высоте титров занимали ААт| класса IgM, а суммарные титры были существенно выше, чем у доноров (от 1/100 до 1/81000). В сыворотках пациентов выявлено достоверное снижение содержания и встречаемости АА класса IgA.
ТГ
Эпитопную специфичность ААтг изучали с помощью полученной в лаборатории панели МКАТ против ТГ. Методом конкурентного ИФА оценивали влияние индивидуальных сывороток доноров или пациентов на взаимодействие меченых МКАТ с адсорбированным антигеном. В сыворотках доноров обнаружены АА , которые ингибируют взаимодействие с антигеном шести МКАТ, направленных к различным эпитопам ТГ, в том числе - представленным на ТГ животных других видов. АА_ пациентов с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы в 40% случаев ингибируют взаимодействие с ТГ только одного МКАТ. Ряд АА с эпитопной специфичностью, характерной для здоровых людей, в сыворотках пациентов не обнаружен. Таким образом, установлено, что АА , синтезируемые при аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы, отличаются от ААтг здоровых людей изотопическим составом и эпитопной направленностью. В целом полученные данные указывают на существование качественных различий между АА здоровых людей и пациентов с АИТ и ДТЗ.
Klimovich V.B., Rudenko I.Y., Vasilrvsky D.L, Lvova О.A.
ISOTYPIC SPECTRA AND EPITOPE SPECIFICITY OF ANTITHYROGLOBULIN AUTOANTIBODIES
Abstract. The total titers and isotypic spectra of autoantibodies (AA) against thyroglobulin (Tg, AATg) were studied
by means of solid-phase immuno-enzymic assay using peroxidase-labeled monoclonal antibodies (MAb) against light
and heavy polypeptide chains of human immunoglobulins.
The titers of AATg in donor’s sera (37 samples) varied between 0 and 1/540 and IgM and IgA were dominating classes.
In sera of patients with autoimmune thyroiditis and diffuse toxic goiter (86 and 36 samples respectively) the titers were
substantially higher (between 1/100 and 1/81 000) and dominating isotypes were IgM and IgG4. The incidence and the
amount of AATg belonging to IgA class in patients were significantly lower than in donors’ sera.
Epitope specificity of AATg was studied by means of panel of MAb against human Tg created in this laboratory. The
capacity of human sera containing AATg to compete with MAb against different epitopes of human, bovine or pig Tg was
investigated. In donors’ sera AATg that inhibit interaction of MAbs against 6 different epitopes of Tg were found. Among
them there were AATg against antigenic sites shared by human and other animal species Tg. In 40 % of sera from patients
with autoimmune thyroid diseases an AATg against to single epitope of human Tg was revealed. A number of AATg
„ ---------------------—------- , , ---------- presenting in donors’ sera were not found in sera from pa-
Работа выполнена при поддержке РФФИ . , .
, ,, ‘ tients mentioned above.
(грант °______________was conc|ucjecj ¡n autoimmune thyroid diseases
Адрес для переписки: Климович Владимир Борисович AATg differ from those detected in healthy individuals in
дм.н., профессор, руководитель лаборатории respect of their isotypic composition and epitope specifici-
гибридомной технологии Центрального научно- , „ ,, .. , , ,■
‘ -л i ty. Generally it may be supposed that there are some quali-
исследовательскогорентгенорадиологического J . ,..P , . , ,,
института. 197136, г. Санкт-Петербург, Гатчин- tative differences between AATg produced in healthy or-
ская ул., д. 9, кв. 18. Тел.: (812)596-87-21,233-48-85. ganisms and in autoimmune diseases. (Med.Immunol,
E-mail: vklim@mail.line.ru 2000, vol.2, N 4, pp 377-383)
Тиреоглобулин (ТГ), белок-предшественник гормонов щитовидной железы (ЩЖ), является одним из основных аутоантигенов этого органа. Аутоантитела (АА) против ТГ (АА ) со времени их первого обнаружения [21,24] и до настоящего времени представляют собой объект интенсивных исследований. Их обнаруживают в низких концентрациях у большинства людей с нормальной функцией ЩЖ. У пациентов с аутоиммунным тиреоидитом (АИТ) и диффузным токсическим зобом (ДТЗ) содержание ААтг может быть повышено в 10 и более раз [23].
АА относят к категории естественных АА, продукция которых начинается еще в период эмбрионального развития без очевидной связи с иммунизацией и продолжается на протяжении всей последующей жизни [16]. Характерными свойствами этих АА являются их относительно низкий аффинитет (10'4-10-7), способность реагировать с несколькими чужеродными и аутологичными антигенами (полиреактивность), а также преобладание молекул класса в раннем периоде жизни и классов ^А и у взрослых [4, 17]. Большинство естественных А А являются продуктами генов зародышевой линии и не подвержены процессу созревания аффинитета, свойственному “обычным” антителам, индуцированным иммунизацией [12]. Роль естественных АА в целом и АА.гг в частности в здоровом организме и в развитии патологических процессов до настоящего времени не определена. Наиболее распространена точка зрения, согласно которой аутоиммунное поражение ЩЖ сопровождается увеличением продукции тех же АА-п_, которые синтезируются в здоровом организме [5].
В ранний период изучения антигенности молекулы ТГ на ней при помощи поликлональной кроличьей антисыворотки было выявлено около 40 антигенных детерминант [7]. В последние годы для идентификации участков молекулы ТГ, связывающих АА^, и изучения роли этих детерминант в аутоиммунном процессе используют моноклональные антитела (МКАТ) против ТГ. Это позволяет с большей определенностью картировать эпитопы ТГ [7] и характеризовать специфичность АА.. Данные некоторых авторов указывают на то, что ААтг обладают ограниченной эпитопной специфичностью и распознают на молекуле ТГ четыре-шесть антигенных участков [20]. По другим данным, АА.^. полиреактив-ны и распознают большее количество эпитопов [10]. В ряде публикаций есть указания на то, что между АА пациентов и здоровых людей существуют различия структурного и функционального характера [8]. Так, известны данные о различиях в эпитопной специфичности АА здоровых людей и пациентов с аутоиммунными заболеваниями ЩЖ [6], а также о более высоком аффинитете АА у пациентов с АИТ и ДТЗ [9]. Отмечено, что при аутоиммунных заболеваниях ЩЖ доля АА класса снижается, пре-
обладающими становятся ААтг класса а среди них, по данным одних авторов, доминируют ^С1 и ^04 [18], по данным других - ^в2 и ^04 [И]. Таким образом, существующие данные о свойствах АА. противоречивы. С одной стороны, они отчасти согласуются с мнением о том, что ААт[. представляют собою определенную фракцию естественных АА. С другой стороны, ряд признаков свидетельствуют о том, что иммунный ответ на ТГ подвержен процессу созревания аффинитета и, следовательно, ААт|. должны быть отнесены к категории “обычных”. Эти расхождения могут указывать на то, что популяция АА.гг гетерогенна и содержит молекулы, относящиеся как к первой, так и ко второй из названных категорий.
Цель настоящей работы состояла в том, чтобы установить пределы гетерогенности ААт[_, изучив при помощи полученных в лаборатории панелей МКАТ против ТГ и против иммуноглобулинов (^) человека изотипический состав и эпитопную специфичность АА в сыворотках доноров и пациентов с АИТ и ДТЗ. ТГ
Материалы и методы
Образцы сыворотки крови штатных доноров (39 образцов) были получены из Санкт-Петербургско-го НИИ гематологии и трансфузиологии. Сыворотки пациентов с АИТ и с ДТЗ (86 и 36 образцов соответственно) были получены в ходе обследования и лечения в эндокринном отделении Мариинской больницы Санкт-Петербурга. Диагноз аутоиммунного заболевания ЩЖ был поставлен на основании клинических и лабораторных данных, а также подтвержден патоморфологически.
Антигены и антитела. В качестве антигена использовали ТГ, выделенный из ткани щитовидной железы человека и очищенный с помощью гель-фильтрации на колонке с Сефадексом С-200 [22].
Для определения титров и изотипического состава АА,., использовали полученные в лаборатории МКАТ1,' позволяющие выявлять типы, изотипы и субизотипы ^ человека [2]. Для изучения эпитопной специфичности АА из 15-ти описанных ранее МКАТ против ТГ человека [1] были отобраны 10 реагентов, каждый из которых распознает один пространственно изолированный участок на молекуле антигена. Выделение МКАТ из асцитических жидкостей проводили путем осаждения балластных белков риванолом [14]. Конъюгаты МКАТ с перокси-дазой получали методом периодатного окисления [19].
Твердофазный иммуноферментный анализ
(ИФА). Непрямой вариант ИФА с ТГ, иммобилизованным в лунках планшетов, использовали для определения суммарных титров АА.., и их изотипи-ческой принадлежности. В первом случае выявляю-
щим реагентом служила смесь конъюгатов перокси-дазы с МКАТ против легких цепей каппа- и лямбда-типов. Во втором случае применяли конъюгаты с МКАТ против классов и подклассов Ig человека [2].
Для исследования эпитопной специфичности АА использовали конкурентный вариант И ФА, Меченые пероксидазой МКАТ против ТГ смешивали в соотношении 1:1с образцами сывороток, разведенных фосфатно-солевым раствором (ФСР) в 5,50, 100 или 1000 раз. После инкубации в лунках планшетов с ТГ отмывали несвязавшиеся компоненты и затем выявляли активность связанной с твердой фазой пероксидазы. Подавление связывания меченого МКАТ с ТГ указывало на то, что в исследуемой сыворотке содержатся АА.г|., совпадающие по эпитопной специфичности с использованным МКАТ.
Для определения изотипической принадлежности А А.,., направленных к определенному эпитопу молекулы ТГ, использовали 5 сывороток больных АИТ и 3 сыворотки пациентов с ДТЗ. Равные объемы разведенных в 50 раз сывороток и ФСР или немеченых МКАТ против ТГ (1, 5 или 50 мкг/мл) смешивали и инкубировали в планшетах с адсорбированным ТГ. После отмывания связанные с твердой фазой АА выявляли с помощью меченых МКАТ против классов и подклассов Ig человека. Снижение или блокирование связывания АА определенного класса или подкласса в присутствии МКАТ указывало на изотопическую принадлежность связавшихся с ТГ ААт| данной эпитопной специфичности.
Во всех вариантах ИФА активность связанной с твердой фазой пероксидазы выявляли с помощью стандартной субстрат-хромогенной смеси, содержащей перекись водорода и о-фенилендиамип. Интенсивность окраски определяли на планшетном фотометре при длине волны 450 нм.
При постановке конкурентного варианта ИФА оптическую плотность проб, не содержащих ингибиторы, принимали за 100 %. Ингибирование связывания на 60% и более считали полным, на 30-59% -частичным, менее чем на 30% - недостоверным.
Статистическая обработка результатов. Для вычисления значений средних геометрических обратных титров, их стандартных отклонений и достоверности различий между группами использовали компьютерные программы Sigma-Plot (Jandel Scientific) и Microsoft Excel.
тг
<F
Рис. 1. Распределение значений обратных титров ААтг в сыворотках доноров и пациентов с аутоиммунными заболеваниями ЩЖ. По оси абсцисс - интервалы значений обратных титров. По оси ординат - доля образцов (проценты) в обследованных группах.
Результаты
Суммарные титры АА . АА были обнаружены
V I 1 ТГ* уГ 1 ^
в сыворотках 90% доноров и 100% пациентов с аутоиммунными заболеваниями ГЦЖ. В группе доноров обратные титры АА варьировали в диапазоне от 0 до 540. В группе больных АИТ они находились в пределах от 100 до 62500, а в сыворотках больных ДТЗ - в диапазоне от 100 до 81000 (рис. 1).
Средние геометрические значения обратных титров в группе здоровых лиц были достоверно ниже, чем у пациентов с АИТ и ДТЗ (табл.1). У больных с ДТЗ средние значения обратных титров были достоверно выше, чем у пациентов с АИТ.
Изотипический состав АА . У доноров и у пациентов с аутоиммунными заболеваниями ЩЖ были обнаружены АА.,, трех классов: ^А, ^С и ^М. АА класса не были выявлены ни в одном случае.
Анализ средних геометрических значений обратных титров (рис. 2) показал, что у доноров доминирующим изотипом были АА класса ^М, средние уровни которых достоверно превышали титры АА класса ^А (р<0,01) и подклассов ^С1, ^С2, ^СЗ и ^С4 (во всех случаях р<0,001). Вторыми по уровню средних титров были АА класса ^А. Их содержание достоверно превышало титры ^С1, ^С2 и ^СЗ (р<0,001, р<0,001 и р<0,01 соответственно).
У пациентов с АИТ и ДТЗ содержание АА доминирующего подкласса ^04 достоверно превышало уровни 1йС1, ^С2, 1яСЗ, ^М и ^А (р<0,001 во
Табл. 1. ОБРАТНЫЕ ТИТРЫ АА^ В СЫВОРОТКАХ ДОНОРОВ И ПАЦИЕНТОВ С АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЩЖ
Обследованная группа Среднее геометрическое Стандартное отклонение Достоверность отличий (р)
от доноров от АИТ
Доноры 158,26 1,987 - <0,001
АИТ 840,11 3,569 <0,001 -
ДТЗ 1084,32 6,187 <0,001 <0,001
400
350
300
250
200
150
100
50
0
□ Доноры НАИТ
□ ДТЗ
■ дЙ-1! ..дДЬ1! , .
IgGI lgG2 lgG3 lgG4
igM
IgA
№№ сывороток Шифры МКАТ
5Е6 1F10 5А6 4F4 5G8 1G11 2F2 2G9 5F5 5G5
4 ■
6 ■
7 ■ ■
8 ■ ■ ■
9 ■ ■ ■
10 ■ ■ ■ ■
11 ■ ■ ■ ■
12 ■
14
15
17 ■ ■ ■ ■
18 ■ ■
19
20 ■
21 ■
22 ■
23
I - ингибирование связывания на 60 - 100%
- ингибирование связывания на 30 - 59%
- отсутствие ингибирования
Рис. 2. Изотипический состав АА^. По оси абсцисс -классы и подклассы ААтг. По оси ординат - обратные титры (ср. геом.±станд.откл.).
всех случаях). Вторыми по высоте обратных титров были А А класса ^М. Уровень их достоверно превышал значения обратных титров ^С1, ^С2, ^СЗ и ^А у больных с АИТ (р<0,001, <0,05, <0,001 и <0,001 соответственно) и с ДТЗ (р<0,01, <0,01, <0,001 и <0,001 соответственно).
Наиболее заметными отличиями спектра АА
1 тг
пациентов по сравнению с донорами оказались: увеличение в 10-30 раз содержания молекул подкласса
Табл. 2. ИНГИБИРОВАНИЕ СВЯЗЫВАНИЯ МЕЧЕНЫХ МКАТ ПРОТИВ ТГ СЫВОРОТКАМИ ДОНОРОВ
Рис. 3. Частота встречаемости ААтг различных классов и подклассов. По оси абсцисс - изотипы ААТГ. По оси ординат - доля образцов (%%), содержащих ААтг данного класса или подкласса.
IgG4 (р<0,001) и в 1,5 раза класса IgM (р<0,001 при АИТ и <0,05 при ДТЗ), а также снижение в 4 раза (р<0,01) уровня ААтг класса IgA.
Анализ частоты встречаемости АА., разных изотипов (рис. 3) показал, что при АИТ существенно (в
1,2-2 раза) увеличивается частота обнаружения молекул подклассов IgGI и IgG2. При ДТЗ некоторое повышение частоты выявления IgGI, IgG2 и IgG4 сопровождается снижением встречаемости IgG3. Кроме того, у пациентов с АИТ и ДТЗ в 7-8 раз снижена частота выявления АА класса IgA.
Эпитопная специфичность ААтг. На рис. 4 представлена схема, отражающая эпитопную направленность 10-ти использованных в работе МКАТ и результаты исследования с помощью теста конкурентного ингибирования специфичности АА. . присутствующих в сыворотках доноров и пациентов.
При изучении сывороток доноров (табл. 2) в 7 образцах были выявлены АА.^, ингибирующие связывание с ТГ какого-либо одного из 10-ти МКАТ. В 10-ти сыворотках АА ингибировали взаимодействие с ТГ двух, трех или четырех МКАТ. В одном образце (№ 17) были выявлены ААт , реагирующие с пятыо различными эпитопами ТГ. В то же время в 14-ти образцах не было обнаружено АА ., способных конкурировать с использованными IVÍKAT. Всего донорские сыворотки ингибировали связывание с ТГ шести МКАТ (1F10, 4F4, 5G8, 5G5, 2F2 и 5F5), из которых два последних распознают также эпитопы ТГ быка и свиньи. Два других МКАТ (2G9, 5А6), направленные против других эпитопов ТГ этих животных, с ААтг не интерферировали.
При исследовании сывороток пациентов было установлено, что 32 сыворотки (40%) пациентов с АИТ и 13 сывороток (36%) больных с ДТЗ ингибировали взаимодействие с ТГ МКАТ 1F10 (рис. 4). В остальных образцах сывороток не было обнаружено АА..^, способных конкурировать с использованными МЙАТ. Таким образом, в сыворотках значительной части пациентов, страдающих аутоиммунными заболеваниями ГЦЖ, с помощью имеющейся панели МКАТ удалось выявить АА^., направленные к одному эпитопу ТГ, распознаваемому МКАТ 1F10.
Изотипический состав АА^, интерферирующих с МКАТ1F10. После того, как была установлена ограниченная эпитопная специфичность АА. .больных с АИТ и ДТЗ, изотипический состав этой фракции был изучен в восьми образцах сывороток, содержащих АА , направленные к эпитопу 1F10.
Результаты, представленные на рис. 5, указывают на то, что МКАТ 1F10 ингибируют связывание ААтг класса IgA и всех четырех подклассов IgG. Взаимодействие с антигеном АА класса IgM было нечувствительно к присутствию МКАТ 1F10, из чего следует, что фракция АА , распознающих указанный эпитоп, не содержит молекул класса IgM.
Обсуждение
Опубликованные ранее данные об изотопическом составе АА весьма противоречивы, что отчасти может быть объяснено различиями в приемах иммуноанализа, природой и качеством использованных реагентов. Наряду со сведениями об отсутствии ограничений по изотипу [15] известны данные, согласно которым продукция АА у больных тиреоидитом Хашимото ограничена подклассами IgGl и IgG4 [18]. При исследовании сывороток людей с разными формами аутоиммунных заболеваний ЩЖ показано преобладание АА подкласса IgG4 у пациентов с ДТЗ и IgG2 - у больных АИТ [11], которое, однако, авторы не расценивают как изотопическую рестрикцию.
Результаты, полученные в настоящем исследовании, более всего согласуются с данными последней из цитированных работ и существенно дополняют их. Высокочувствительный метод иммуноанализа, основанный на применении МКАТ против классов и подклассов Ig человека, позволил, несмотря на низкое суммарное содержание АА в сыворотках доноров, детально изучить их изотопические спектры. В сыворотках доноров и пациентов, страдающих АИТ и ДТЗ, удалось выявить АА , относящиеся к классам IgA и IgM и к четырем подклассам IgG. В сыворотках доноров доминирующими изотипами АА оказались IgM и IgA. В работах последних лет, посвященных изучению изотопического состава АА при заболеваниях ЩЖ, нет данных, касающихся АА... класса IgA. Лишь в публикации конца 70-х годов* ^3] встречается упоминание о том, что молекулы класса IgA составляют 20% от всех АА . В настоящей работе впервые установлено, что у доноров АА этого класса представлены в 80% образцов, а титры их сопоставимы или даже превышают уровень АА. отдельных подклассов IgG. У пациентов с аутоиммунными заболеваниями ЩЖ встречаемость и содержание ААтг класса IgA достоверно снижены.
Преобладание АА.. подкласса IgG4 в сыворотках пациентов с АИТ и jfl3 можно рассматривать как указание на длительность процесса антигенной сти-
4F4 6%
7%
1F10
Доноры - 30% 5G5 АИТ - 40% 26% ДТЗ - 36%
1G11
V
О
5Е6
V
О
А
5F5
45%
О
А
2F
3%
А
2G9
А
5F6
Рис.4. Эпитопная специфичность МКАТ против ТГ и интерферирующих с ними ААТГ-
Примечание: Овалами на заштрихованном поле условно обозначены эпитопы молекулы ТГ.
Эпитопы представлены только на ТГ человека
Эпитопы представлены на ТГ человека и быка
Эпитопы представлены на ТГ человека и свиньи
О) Эпитопы представлены на ТГ человека, быка и свиньи
Над или под стрелками указаны шифры МКАТ и доля сывороток (%%), содержащих ААТГ данной эпитопной специфичности.
ф МКАТ не интерферируют с ААТГ человека
МКАТ интерферируют с ААп- доноров
МКАТ интерферируют с ААГГ доноров и пациентов
120 -i 100
а
О
80 -60 4 40 20 -Ц 0
lgG1 lgG2 lgG3 lgG4 IgM Классы и подклассы
IgA
□ сыворотка+ФСР ■ сыворотка+МКАТ 1F10
Рис. 5. Ингибирование связывания ААТГ различных классов в присутствии МКАТ 1F10.
муляции, которая сопровождает развитие аутоиммунного заболевания. Содержание АА подкласса IgG2 у пациентов с АИТ было достоверно более высоким, чем у доноров и больных ДТЗ, однако, преобладающим подклассом и в этой группе был IgG4.
Исследование специфичности АА... с помощью МКАТ, распознающих десять топографически изолированных эпитопов, показало, что АА^г сывороток здоровых людей могут распознавать не менее шести антигенных участков молекулы ТГ. Вероятно, репертуар эпитопов, связывающих АА здоровых людей, на самом деле шире, поскольку часть донорских сывороток содержит АА.. , которые не интерферируют с использованными ¡vFkat.
Основной вывод, к которому приводят полученные результаты изучения специфичности АА , состоит в том, развитие аутоиммунных заболеваний ЩЖ сопровождается сужением репертуара циркулирующих АА. ,. Наряду с увеличением частоты встречаемости ^А , распознающих один эпитоп ТГ (1F10), у пациентов с АИТ и ДТЗ исчезают из кровотока АА , направленные к пяти другим антигенным участкам ТГ. Следует отметить, что АА , распознающие эпитоп 1F10, обнаружены у 36-40% больных, страдающих АИТ и ДТЗ. Поскольку у всех остальных обследованных пациентов суммарные титры АА высоки, можно думать, что у них АА мо-
£ Тг 'ГГ ТГ
гут быть направлены к эпитопам 11, которые пока не идентифицированы, т.к. они не распознаются МКАТ, использованными в настоящем исследовании. Это диктует необходимость расширения имеющейся панели МКАТ для получения исчерпывающей информации как об антигенной структуре ТГ, так и о специфичности АА .
Молекулы ТГ животных различных видов имеют несколько сходных по структуре (консервативных) эпитопов, которыми обусловлена перекрестная реактивность антител против ТГ. Известны данные о том, что при АИТ синтезируются АА , которые обладают строгой видовой специфичностью, т.е. распознают эпитопы, свойственные только ТГ человека, тогда как у здоровых людей АА распознают эпитопы, общие для ТГ животных различных видов [13]. В настоящей работе показано, что у здоровых людей АА распознают два эпитопа, из которых один представлен также на ТГ быка, а другой - па ТГ быка и свиньи. Ни в одном образце сывороток пациентов с АИТ и ДТЗ не обнаружено АА, , направленных против консервативных эпитоповТГ.
Ряд признаков АА сывороток доноров позволяет рассматривать их как популяцию естественных А А, в которой доминируют молекулы класса IgM, реагирующие с несколькими эпитопами ТГ, в том числе и консервативными. АА значительной части
ТГ
сывороток пациентов с АИТ и ДТЗ отличаются ограниченной энитопной специфичностью, отсутствием молекул класса IgM и резким увеличением содер-
жания IgG4. Эти признаки в большей степени соответствуют определению популяции антител, индуцированных длительной иммунизацией.
В целом полученные результаты позволяют предполагать, что
1) у здоровых лиц поддержание толерантности к ТГ сопровождается продукцией естественных АА преимущественно классов IgM и IgA, направленных к 2-5 эпитопам ТГ,
2) развитие аутоиммунных заболеваний ЩЖ сопровождается:
а) усилением продукции АА , специфичных в отношении одного эпитопа ТГ,
б) переключением на синтез АА подклассов
IgG2 и IgG4, "
в) снижением синтеза АА... класса IgA,
г) снижением или прекращением синтеза естественных АА , направленных против нескольких, в том числе - консервативных эпитопов ТГ.
Список литературы
1. Климович В.Б., Руденко И. Я., Грязева И.В. Моноклональные антитела против тиреоглобулина человека: исследование специфичности // Биотехнология. - 1998. - №4. - С.51-56.
2. Климович В.Б., Самойлович М. П..Грязева И.В-,,Крутецкая И.Ю.,Пашкова С.Ф., Руденко И. Я. Моноклональные антитела на основе репертуара иммунного ответа мышей линии SJL/J // Медицинская иммунология. - 1999. - Т.1. - № 1-2. - С.47-58.
3. Бигацци П.Е. Тиреоидит как модель аутоиммунных расстройств у человека / Механизмы иммунопатологии: (пер. с англ) / Под ред. С. Коена. -М.:Медицина. - 1983. - С. 187-202.
4. Avrameas S. Natural autoantibodies: from “horror autotoxicus” to “gnothi seauton” // Immunol. Today. -1991. - Vol.12. - P.154-159.
5. Avrameas S., Ternynk T. The natural antibody system: between hypothesis and facts // Mol. Immunol.
- 1993. - Vol.30. - P.l 133-1142.
6. Bouanani М., Bataille R., Piechaczyk М., Salhi S.L., Pau B., and Bastide M. Autoimmunity to human thyroglobulin // Arthritis Rheum. - 1991. - Vol.34. -P. 1585-1593.
7. Bouanani М., Hanin V., Bastide М., Pau B. New antigenic clusters on human thyroglobulin defined by an expanded panel of monoclonal antibodies // Immunol. Letters. - 1992. - Vol.32. - P.259-264.
8. Bouanani М., Piechaczyk М., Pau B., Bastic M. Significance of the recognition of certain antigenic regions on the human thyroglobulin molecule by natural autoantibodies from healthy subjects // J. Immunol. -1989. - Vol.134. - P.1129-1132.
9. Bresler H.S., Burek C.L., Hoffman W.H., Rose N.R. Autoantigenic determinants of human thyroglobulin.
II.Determinants recognized by autoantibodies from
patients with chronic autoimmune thyroiditis compared to autoantibodies from healthy subjects // Clin. Immunol. Immunopathol. - 1990. - Vol.54. - P.76-86.
10. Bresler H.S., Burek C.L., Rose N.R. Autoantigenic determinants of human thyroglobulin I. Determinant specificities of murine monoclonal antibodies // Clin. Immunol. Immunopathol. - 1990. -Vol.54. - P.64-75.
11. Caturegli P., Küppers R.C., Mariotti S., Burek C.L., Pinchera A., Ladenson P.W., and Rose N.R. IgG subclass distribution of thyroglobulin antibodies in patients with thyroid disease // Clin.Exp.Immunol. -1994. - Vol.98. - P.464-469.
12. Chen C., Stenzel-Poore M.P., Rittenberg M.B. Natural auto- and polyreactive antibodies differing from antigen-induced antibodies in the H chain CDR3 // J. Immunol. - 1991. -Vol.147. - P.2359
13. Chen C-T. J., Byfield P.G.H., Himsworth R.L., Shepherd P. Human autoantibodies to thyroglobulin are directed towards a restricted number of human specific epitopes // Clin. Experim. Immunol. - 1987. -Vol.69. -P.516-523.
14. Franek K. Purification of IgG monoclonal antibodies from ascitic fluid based on rivanol precipitation // Meth. in Enzymol. - 1986. - Vol.121. -P.631-636.
15. Hay F.C., Torrigiani G. The distribution of antithyroglobulin antibodies in the immunoglobulin G subclasses // Clin. Exp. Immunol. - 1973. - Vol.15. -P.17-21.
16. Lacroix-Desmazes S., Kaveri S.V., Mouthon L., Ayouba A., Malanchere E., Coutinho A., Kazatchkine M.D. Self-reactive antibodies (natural autoantibodies)
in healthy individuals //J. Immunol. Meth. - 1998. -Vol.216. - P.117-137.
17. Mclntosh-RS; Asghar MS; Watson-PF; Kemp-Eh; Weetman-AP, Cloning and analysis of IgG kappa and IgG Lambda anti-Thyroglobulin autoantibodies from a patient with Hashimotos thyroiditis: evidence for in vivo antigen - driven repertoire selection // J. Immunol. - 1996. -Vol.l57(2). - P.927-35.
18. McLachlan S. М., Bahn R., Rapoport B. Endocrine ophthalmopaty: a re-evalution of the association with thyiroid autoantibodies // Autoimmunity. - 1992. - Vol.14. - P.143-148.
19. Nakane P.R., Kawaoi A. Peroxidase labeled antibody. A new method of conjugation // J.Histochem.Cytochem. - 1974. - Vol.22. - P.1084-1091.
20. Nye L., Pontes de Carvalho and Roitt I.M. Restrictions in the response to autologous thyroglobulin in the human // Clin. Exper. Immunol. - 1980. - Vol.41.
- P.252.
21. Roit I.,D.Doniach, P.N.Campbell, R. Vaughan Hudson. Autoantibodies in Hashimoto’s thyroiditis (lymphadenoid goiter) // Lancet. - 1956. - 2. - P.820.
22. Saboori A.M., RoseN.R., Kuppers R.C., Butscher W.G., Bresler H.S., and C.L. Burek. Immunoreactivity of multiple molecular forms of human thyroglobulin // Clin. Immunol.Immunopathol. - 1994. - Vol.72. - P.121-128.
23. Weetman A. Autoimmune thyroid disease //The autoimmune diseases. Third edition. / Ed. N.R.Rose ,J.R. Mackay. Academic Press. - 1998. - P.405-429.
24. Witebski. E, Rose N. Studies on organ specificity. IV.Production of rabbit thyroid antibodies in the rabbit //J. Immunol. - 1956. - Vol.6. - P.409.
поступила в редакцию 8.10.2000 принята к печати 17.11.2000
