CC BY
62
практически полностью занимали аксоплазму (рис. 1). В более сохранных аксонах в центральных отделах обнаруживались митохондрии округлой формы с ламинарными кристами, а также мелкие везикулы с содержимым умеренной электронной плотности. Миелиновая оболочка в части волокон была разрыхлена, отмечалось увеличение расстояния между ламеллами. Кроме того, наблюдались ультраструктурные признаки повреждения синаптического аппарата аксосоматических синапсов в виде резко выраженного отёка в пресинаптических частях, расширения синаптических щелей, а в ряде случаев и разрушения синапсов. В других аксосоматических синапсах, которые отличались более сохранными ультраструктурными элементами, помимо выраженного отёка в пре- и постсинаптических частях, выявлялось разрушение части синаптических везикул.
Рис. 1. Ультраструктура нейрона шейно-грудных отделов передних рогов
спинного мозга. Вакуоли различных размеров с содержимым низкой электронной плотности на 7 сутки эксперимента при лихорадке Западного Нила. Электронная микрофотограмма. Ув. Х 6000.
Заключение. Обнаруженные нами ультраструктурные изменения в перикарионах нейронов передних рогов спинного мозга при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила путем подкожного заражения свидетельствуют о возникновении обратимых а в ряде нейронов и необратимых изменений, что подтверждается клиническими проявлениями, возникновением парезов и параличей. Подобная клиническая картина на 6-9 сутки западно-нильского энцефалита наблюдалась при внут-рибрюшинном заражении [7]. В нашем исследовании отмечено наличие геморрагического экссудата в спинном мозге, что соответствует данным C. Cantile [9] о геморрагическом характере воспалительного процесса в спинном мозге у части животных при моделировании ЛЗН на мышах в сочетании с различной степенью повреждения нейронов спинного мозга.
Таким образом, при экспериментальном моделировании лихорадки Западного Нила обнаружены выраженные ультраструктурные изменения в перикарионах нейронов передних рогов спинного мозга, характеризующиеся вакуолизацией цитоплазмы, расширением цистерн гранулярной и агранулярной эндоплазма-тической сети, значительным повреждением миелиновых нервных волокон.
Максимально выраженные ультраструктурные изменения нейронов передних рогов спинного мозга выявляются на 7 сутки от момента подкожного заражения вирусом Западного Нила, соответствуют стадии развёрнутых клинических проявлений инфекционного процесса и подтверждают наличие обратимых и необратимых повреждений синного мозга, сопровождающихся развитием серозно-геморрагического миелита.
Литература
1. Лихорадка Западного Нила: по материалам вспышек в Волгоградской области в 1999-2002 гг./ Львов Д.К. и др. - Волгоград, 2004.
2. Dai J., Wang P., Bai F., Town T., Fikrig E. ICAM-1 participates in the entry of West Nile virus into the central nervous system. // J. Virol.- 2008, №6.-Р. 4164-8.
3. Григорьева Н.В. Патоморфология органов и систем при лихорадке Западного Нила (клинико-экспериментальное исследование): Дисс...докт. мед. наук.- Волгоград, 2005.
4. Писарев В.Б., Бутенко А.М. Смирнов А.В., Хуторецкая Н.В. Почепцов А.Я., Шмидт М.В., Глухов В.А. Ультраструктурная
изменения в нейронах головного мозга при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Бюллетень волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области.- 2008.- №1.-С.21-24.
5. Шмидт М.В., Писарев В.Б., Смирнов А.В., Бутенко А.М. Морфологическая реакция астроцитов различных отделов головного мозга мышей при моделировании лихорадки Западного Нила // Архив патологии.- 2006.- Т. 68, №4.-С.25-27.
6. Писарев В.Б., Григорьева Н.В., Петров В.А., Бутенко А.М. Патоморфология лихорадки западного Нила. // Архив патологии.- 2004 - №5.-С.15-18.
7. Писарев В.Б., Смирнов А.В., Почепцов А.Я., Шмидт М.В., Глухов В.А. Ультраструктурная характеристика нейронов и элементов гематоэнцефалического барьера продолговатого мозга при моделировании вирусного энцефалита // Бюллетень волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области.- 2006 - №3.-С. 11-13.
8. Шмидт М.В. Морфологическая характеристика гемато-энцефалического барьера при экспериментальном воспроизведении лихорадки Западного Нила // Дисс... канд. мед наук. - В., 2006.
9. Cantile C., Di Guardo G., Eleni C., Arispici M. Clinical and neuropathological features of West Nile virus equine encephalomyelitis in Italy // Equine Vet.- 2000, № 32.-Р.31-35.
10. Crichlow R., Bailey J., Gardner C. Cerebrospinal Fluid Neutrophilic Pleocytosis in Hospitalized West Nile virus Patients // The Journal of the American Board of Family Practice.- 2004, № 17.-Р.470-472.
11. Del Piero F., Wilkins P.A., Dubovi E.J., Biolatti B, Cantile C. Clinical, pathological, immunohistochemical, virological findings of eastern equine encephalitis in two horses. // Vet. Pathol.- 2001, №38.-Р.451-456.
12. Guarner J., Shieh W.J., Hunter S., Paddock C.D., Morken T., Campbell G.L., Marfin A. A., Zaki S.R. Clinicopathologic study and laboratory diagnosis of 23 cases with West Nile virus encephalo-myelitis // Hum. Pathol.-2004, №35.-Р.983-990.
13. Samuel M.A., Morrey J.D., Diamond M.S. Caspase 3-Dependent Cell Death of Neurons Contributes to the Pathogenesis of West Nile Virus Encephalitis // Journal of Virology.- 2007.- Vol. 81, № 6.-P. 2614-2623.
14. Shrestha B., Gottlieb D., Diamond M.S. Infection and Injury of Neurons by West Nile Encephalitis Virus. // J. Virol.- 2003.-Vol.77, №24. -Р. 13203-13213.
15. Shahar A., Schupper H., Lustig S., Levin R., Friedmann A., Fuchs P. Neuronal cell cultures as a model for assessing neurotoxicity induced by encephalitic viruses // Neurotoxicology.- 1992.- Vol.13, № 1.-Р. 171-177.
ULTRASTRUCTURAL CHANGES OF SPINAL CORD NEURONS
IN EXPERIMENTAL REPRODUCTION OF WEST NILE FEVER
A.V. SMIRNOV, A.M. BUTENKO, V.A. GLUKHOV, D.YU. GUROV, V.F. LARICHEV, A.YA. POCHEPTSOV, M.V. SCHMIDT, N.V. KHUTORETSKAYA
Volgograd State Medical University, Chair of Pathologoanatomy
Volgograd Scientific Centre of the Volgograd Region Administration Research Institute of Virology after D.I. Ivanovsky
During experimental simulation of West Nile Fever pronounced ultrastructural changes in the spinal cord anterior horn neuron perikaryons characterized by cytoplasmic vacuolization, expansion of cisterns of granular and agranular endoplasmic reticulum and significant damage of myelinated fibers were detected.
Key words: spinal cord, changes of neurons.
УДК 612. 0: 616- 005. 2: 615. 825
ИЗМЕНЕНИЯ В СИСЕТМЕ ГЕМОСТАЗА В ОТВЕТ НА ОДНОКРАТНУЮ
ФИЗИЧЕСКУЮ НАГРУЗКУ РАЗЛИЧНОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ
И.И. ШАХМАТОВ, В.М. ВДОВИН*
На 92 крысах линии Wistar было изучено влияние однократ-
* ГОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет Мин-здравсоцразвития», 656038, Барнаул, пр. Ленина, 40, e-mail: iish59@yandex.ru. erytrab@gmail.com
Алтайский филиал УРАМН «НИИ физиологии СО РАМН, 656031, Барнаул, ул. Папанинцев, 126
ной кратковременной физической нагрузки различной интенсивности на систему гемостаза (ходьба в тредбане течение 30 минут со скоростью вращения 6-8 м/мин и 28-30 м/мин). Реакции системы гемостаза имеют зависимость от интенсивности предложенных нагрузок. При этом однократные интенсивные физические нагрузки способны приводить к значимым сдвигам в системе гемостаза, которые могут неблагоприятно отразиться на реологических свойствах крови. Ключевые слова: физическая нагрузка, гемостаз, адаптация.
Физическая нагрузка, как важнейшее свойство живых существ, сопровождается естественной стимуляцией различных функций и систем организма, обеспечивающих его устойчивость к самым различным факторам окружающей среды [1,8]. Вместе с тем, физическая нагрузка является самым часто встречаемым физиологическим стрессором. Установлено, что остро возникшие крайне выраженные физические нагрузки (от значительных по силе и длительности физических нагрузок до полной иммобилизации) могут выступать уже в роли раздражителей, вызывающих реакцию дистресса с повреждением различных органов [7]. Между тем, исследования последних лет в области гемостазиологии, четко показали, что различные стрессорные воздействия способны значимо изменять гемостатический потенциал крови [3,5,10] вплоть до развития синдрома диссеминированного внутрисосу-дистого свёртывания [9,11]. Проведенные исследования параметров системы гемостаза при различных режимах локомоций не в полной мере описывают направленность и выраженность гемо-стазиологических реакций.
Цель исследования — изучение параметров системы гемостаза в ответ на однократное 30-минутное стрессорное воздействие физической нагрузки различной интенсивности.
Материал и методы исследования. Исследования были выполнены на 92 разнополых крысах линии Wistar.
Однократная физическая нагрузка различной интенсивности моделировалось у животных в виде навязанной ходьбы в тредбане в течение 30 минут. У первой опытной группы (n=10) с низкой интенсивностью физической нагрузки скорость вращения тредбана составляла 6-8 м/мин, у второй опытной группы (n=12) с высокой интенсивностью физической нагрузки - 28-30 м/мин.
Сразу по окончании воздействия, после предварительной наркотизации животных раствором Тиопенталом натрия из расчета 0,2 мл/100 г массы путём его внутрибрюшинного введения, кровь для исследования забиралась из печеночного синуса. Контролем служили показатели гемостаза, полученные у контрольной группы крыс (n=70). Оценка показателей гемостаза производилась с помощью методик, позволяющих исследовать состояние тромбоцитарного гемостаза, внутренний и внешний путь активации коагуляционного гемостаза, конечный этап образования фибринового сгустка, состояние антикоагулянтного звена, а также фибринолитической системы [2,4]. Все параметры системы гемостаза оценивались с помощью диагностических наборов фирмы «Технология-Стандарт» (Россия). Использование крыс в экспериментах осуществляли в соответствии с Европейской конвенцией по охране позвоночных животных, используемых в эксперименте и Директивами - 86/609/EEC [6]. Обезболивание и умерщвление животных проводилось в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Исследование коагулограммы проводилось при по-мощиь коагулометра Минилаб 701 (фирмы 2 А/О Юнимед», Россия). Подсчет количества тромбоцитов осуществлялся на гематологическом анализаторе Coulter (фирмы «Beckman Coulter», США).
Статистическая обработка проводилась с учетом распределения признаков в группах с использованием критерия Шапиро-Уилки. В зависимости от распределения применяли t-критерий Стьюдента для неравных дисперсий или непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Данные представлены в виде X±m, где Х - среднее арифметическое в выборочной совокупности, m - стандартная ошибка средней арифметической. Критический уровень значимости (р) при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимали равным 0,05.
Результаты и их обсуждение. Сравнительный анализ результатов, зарегистрированных в ходе экспериментов с физической нагрузкой различной интенсивности, выявил существенные отличия в реакциях системы гемостаза в ответ на увеличение интенсивности воздействия раздражителя (табл. 1).
Таблица 1
Параметры коагулограммы, зарегистрированные при воздействии различных по интенсивности однократных 30-минутных физических нагрузках (Х±т)
Методы исследования Контрольная группа (n=70) Опытная группа 1 (n=10) Опытная группа 2 (n=12)
Тромбоциты, х10-9/л 772,1±23,9 470,0±62,5* 429,3±58,7*
Рк-,<0,001 рк-2<0,001 р1-2>0,05
Индуцированная агрегация тромбоцитов, с 21,7±0,5* 22,2±1,8 15,5±1,1
Рк-1>0,05 рк-2<0,001 р,.,<0,01
Силиконовое время, с 220,4±5,7* 249,0±18,4* 191,9±7,5*
р.-, >0,05 Рк-2<0,05 Pi-2<0,01
Каолиновое время, с 84,1±2,2* 110,5±4,4 82,1±3,3
рк1 <0,001 Рк-2>0,05 PI.,<0,001
АПТВ, с 21,8±0,4 24,2±0,8 20,6±1,1*
р.-, <0,01 Рк-2>0,05 Pu<0,02
Протромбиновое время, с 13,9±0,2* 14,4±0,3 13,0±0,2*
Рк-1>0,05 Рк-2<0,05 р12<0,001
Тромбиновое время, с 28,1±0,7* 23,8±0,3 44,4±1,7
Рк-1<0,02 рк-2<0,001 P1.2<0,001
Эхитоксовое время, с 22,7±0,5 16,2±0,7* 28,5±1,4
рк1 <0,001 рк-2<0,001 р,2<0,001
Растворимые фибрин-мономерные комплексы, мг% 3,3±0,1* 3,2±0,2* 3,5±0,3*
Рк-1>0,05 Рк-2>0,05 р1-2>0,05
Содержание фибриногена, г/л 1,77±0,07* 1,88±0,12* 2,48±0,23
Рк-1>0,05 Рк-2<0,01 р/2<0,05
Антитромбиновый резерв плазмы,%о 103,0±1,9 126,4±5,0 117,3±3,7
рк1 <0,001 рк-2<0,01 р1-2>0,05
Антитромбин III, % 97,3±1,4 107,7±1,3 88,8±1,2
рк1 <0,001 рк-2<0,001 р1-2<0,001
Спонтанный эуглобулиновый фибринолиз, мин. 332,1±14,0* 251,5±23,4 205,3±18,1*
Рк-1<0,05 рк-2<0,001 р1-2>0,05
Примечание: * - обозначены признаки, не подчиняющиеся нормальному распределению; п - число наблюдений; рк-1 - уровень статистической значимости различий между контрольной и первой опытной группами;
Рк-2 - уровень статистической значимости различий между контрольной и второй опытной группами; р 1-2 - уровень статистической значимости различий между первой и второй опытными группами.
Оценка тромбоцитарного звена гемостаза показала, что физическая нагрузка малой и выраженной интенсивности приводит к достоверному снижению количества тромбоцитов в периферической крови у опытных животных, что может расцениваться как их потребление в кровотоке. Вместе с тем изменения были отмечены и в агрегационной функции данных форменных элементов. Так, если 30-минутная ходьба со скоростью 6-8 м/мин никак не отражалась на агрегационной активности тромбоцитов, то бег на протяжении такого же времени, но с большей интенсивностью (28-30 м/мин) сопровождался уже отчётливой активацией тромбоцитарной агрегации.
Более интенсивная физическая 30-минутная нагрузка приводила и к более выраженной контактной активации свёртывания крови. Это проявлялось в укорочении силиконового времени -теста, максимально чувствительного к активации контактных факторов свёртывания, а также в исчезновении удлинения каолинового времени свёртывания, наблюдавшегося в ходе первой серии экспериментов при менее значимых нагрузках.
Показатели, характеризующие внутренний (АПТВ) и внешний (протромбиновое время) пути активации гемокоагуляции, также изменялись под воздействием физических нагрузок различной интенсивности. Так, выявленное в ходе менее интенсивной нагрузки угнетение внутреннего пути свёртывания сменялось при нарастании воздействия его нормализацией. При этом внешний путь плазменного гемостаза отреагировал на возросшие физические нагрузки активацией процесса, что не было отмечено при менее значимых нагрузках.
В целом, характеризуя реакцию начальных этапов свёртывания крови на возросшее по интенсивности воздействие, можно отметить общую тенденцию к укорочению показателей, что может быть расценено как усиление гиперкоагуляционных сдвигов в системе гемостаза по мере нарастания интенсивности физических нагрузок.
В то же время со стороны показателей, характеризующих ко-
нечный этап образования фибринового сгустка, наблюдалась противоположная картина. Так, менее интенсивное воздействие физических нагрузок сопровождалось умеренной активацией конечного этапа свёртывания, не приводящей, тем не менее, к потреблению фибриногена. При увеличении интенсивности воздействия отмечалось угнетение процесса образования сгустка на конечном этапе свёртывания по данным обеих методик, что указывало на нарушение полимеризации фибрин-мономеров. Также регистрировался значимый рост уровня фибриногена в плазме крови.
Антитромбиновый резерв плазмы, отражающий гепарин-кофакторную активность антитромбина III, оставался повышенным при обоих видах 30-минутного воздействия физических нагрузок. При этом при более интенсивных нагрузках превышение исходного уровня гепарин-кофакторной активности антитромбина III в плазме крови было выражено уже в меньшей степени. Более отчётливо тенденция к некоторому снижению анти-коагулянтных свойств плазы прослеживалась на примере основного антикоагулянта плазмы крови - антитромбина III. Если слабое получасовое воздействие приводило к некоторому росту субстрата в кровотоке, то более интенсивная физическая нагрузка уже сопровождалась снижением показателя ниже исходного уровня.
Фибринолитическая система плазмы крови по данным теста спонтанного лизиса эуглобулинов реагировала на обе 30-минутные физические нагрузки стабильной активацией процесса. При этом более выраженная нагрузка приводила к усилению лизирующей способности плазмы крови в отношении эуглобули-нового сгустка.
Выводы. Таким образом, анализ результатов рассмотренных здесь экспериментов показал, что:
1. Полученные данные коагулограммы у опытных групп животных свидетельствовали о наличии зависимости реакций системы гемостаза в ответ на различные по интенсивности физические нагрузки.
2. Малоинтенсивные физические нагрузки умеренно активировали систему гемостаза, что проявлялось в снижении количества тромбоцитов, гиперкоагуляции конечного этапа свертывания плазмы крови и увеличении активности антикоагулянтной и фибринолитической систем
3. Увлечение интенсивности физической нагрузки сопровождалось значимым гиперкоаглуяционным сдвигом коагуло-граммы при снижении антикоагулянтных свойств плазмы крови, но, в тоже время, сохраненном на высоком уровне фибринолизе.
4. Острые интенсивные физические нагрузки способны приводить к значимым сдвигам в системе гемостаза, которые в последующем могут неблагоприятно отразиться на реологических свойствах крови.
Литература
1. Агаджанян, Н.А.Учение о здоровье и проблемы адаптации / Агаджанян Н.А., Баевский Р.М., Береснева А.П..- Ставрополь: Издательство СГУ, 2000.- 203 с.
2. Баркаган, З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / Баркаган З.С., Момот А.П.. - М.; Ньюдиамед-АО, 2001. - 306 с.
3. Влияние физической нагрузки на маркеры активации системы гемостаза у больных, перенесших инфаркт миокарда в молодом возрасте / Виценя М.В. [ и др.] // Терапевтический архив.-2004.- № 12.- С. 17.
4. Долгов, В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза / Долгов В.В., Свирин П.В..- М. - Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2005.- 227 с.
5. Зубаиров, Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования / Зубаиров Д.М..- Казань: Фэн, 2000.- 364 с.
6. Копаладзе, Р.А. Методы эвтаназии экспериментальных животных - этика, эстетика, безопасность персонала / Копаладзе Р. А. // Успехи физиологических наук.- 2000.- Т. 31, № 3.- С. 79-90.
7. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессовым ситуациям и физическим нагрузкам / Меерсон Ф.З., М.Г. Пшенникова.. - М.: "Медицина", 1988. - 256 с.
8. Пшенникова, М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии / Пшенникова М.Г. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 2001.- № 3.- С. 28-40.
9. Шахматов, И.И. Реакции системы гемостаза у крыс на однократную физическую нагрузку в зависимости от уровня исход-
ной тренированности / Шахматов И.И., Алексеева О.В. // Российский медико-биологический вестник им. И.П. Павлова.- 2007.- № 4.- С. 18-24.
10. Burns P., Wilmink T., Fegan C. et al. Exercise in claudicants is accompanied by excessive thrombin generation // Eur. J. Vasc. En-dovasc. Surg.- 2003.- V. 26, № 2.- Р. 150-155.
11. Gardner A.W., Killewich LA. Association between physical activity and endogenous fibrinolysis in peripheral arterial disease: a cross-sectional study // Angiology. - 2002. - V. 53, N 4. - P. 367-374.
CHANGES IN HAEMOSTATIC SYSTEM IN RESPONSE TO A SINGLE PHYSICAL LOADING OF VARIOUS INTENSITIES
I.I. SHAKHMATOV, V.M. VDOVIN
Altai State Medical University, Barnaul Research Institute of Physiology - Altai Branch, Russian Academy of Medical Sciences - Siberian Branch
The article presents the results of studying the effect of a single short-term loading of varying intensity on the haemostatic system (walking on a treadmill for 30 minutes at a speed of 6-8 m/min and 28-30 m/min) in 92 Wistar line rats. The reaction of the haemostatic system depends on the intensity of the loadings. At that, a one-time single intense loading can cause significant shifts in the haemostatic system, which can affect blood rheology adversely.
Key words: physical loading, haemostasia, adaptation.
УДК 616.31; 617.52-089
СТРУКТУРНО- ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИММУНОРЕАБИЛИТАЦИИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ГИНГИВИТАМИ ФИТОАДАПТОГЕНАМИ ЭЛЕУТЕРОКОККОМ И ФИТОВИТОМ.
ВЛИЯНИЕ СУЛЬФИДНОЙ МИНЕРАЛЬНОЙ ВОДЫ «РЕДАНТ-4»
З.К. КОЗЫРЕВА, Л.Г. ХЕТАГУРОВА, К.М. КОЗЫРЕВ*
Получены новые знания о роли нарушений временной организации физиологических функций в развитии и прогрессировании различных форм хронических гингивитов. Установлены характерные черты десинхроноза, сопровождающего указанную патологию десен, который ущербен для успешной адаптации и представляется одним из ключевых патогенетических звеньев в физиологических системах больных этой категории, особенно у лиц с амилоидзависимыми хроническими гингивитами, в частности с хроническим гипертрофическим гингивитом.
Ключевые слова: хронические гингивиты, десинхроноз, иммуно-реабилитация, фитоадаптогены.
Современные диагностические и лечебно-
реабилитационные технологии восстановительной медицины с позиции теории функциональных систем, в конечном итоге, направлены на мобилизацию защитных сил организма, восстановление его функциональных резервов и здоровья в целом, поскольку развитие патологического процесса, его течение и исход зависят в большей степени не от повреждающего болезнетворного фактора, а от резистентности организма, состояния его систем адаптации [1, 9,10].
Успехи хронопатофизиологии последнего времени позволяют решать задачи и обеспечивать новые возможности поиска путей оптимизации лечения заболеваний и дизадаптации, возникающие при хронических гингивитах и парадонтитах в целом (гингивит - начальная стадия пародонтита), основанные на новых знаниях механизмов нарушенной временной организации физиологических функций (десинхронозов), проявляющихся дизрегу-ляционной патологией [11].
В этом контексте в последнее время в стоматологической практике значительное внимание стали уделять острым и хроническими гингивитам, рост заболеваемости от которых продолжает нарастать, поэтому профилактика и лечение этой патологии представляет важную медико-социальную проблему и состоит не только в подавлении клинически активного процесса, но и в избавлении больных от сопутствующих психоэмоциональных расстройств [13,14,15].
Хронические гингивиты по своему психо-эмоциональному воздействию являются достаточно сильным раздражителем для
* Стоматологическая поликлиника ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию. 362019, г.Владикавказ, ул.Пушкинская, 40.
