Изменения липидного спектра лимфоцитов при перитонитах Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

10. Brain norepinephrine levels after BCG stimulation of the immune system / P. Barneound, J.M. Rivet, S. Vi-tiello el al. // Immunol. Lett. - 1988. - Vol.18, N.3. -P.201-204.

11. Davis P B., Byard P.J. Beta-adrenergic responses and airway reactivity in healthy adults // Mech. Ageing Dev. - 1990. - Vol.54, N. 1. - P.29-42.

12. Galal O. Lymphocytic beta-2-adrenergic receptor density and function in children // Monatsschr. Kin-derheilkd. - 1989. - Vol.137, N.4. - P.213-217.

13. Morrow A.L., Devaud L.L., Purdy R.H. Neuroactive steroid modulators of the stress response // Stress: basic mechanisms and clinical implications. - Ann. N.Y. Acad. Sci. - 1995. - Vol.771. - P.257-272.

© САРАП П.В., БУЛЫГИН Г.В., К AM 3 А Л А КО В А H.H. -УДК 616.331-002-036

ИЗМЕНЕНИЯ ЛИПИДНОГО СПЕКТРА ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ПЕРИТОНИТАХ

П. В. Capan, Г.В. Булыгин, H.H. Камзалакова.

(Красноярская государственная медицинская академия, ректор - акад. РАЕН, акад. МАНВШ, проф., д.м.н. В.И. Прохоренков, кафедра клинической иммунологии, зав. - проф., д.м.н. Г.В. Булыгин, Красноярская краевая клиническая больница, гл. врач - засл. врач РФ Б.П. Маштаков)

Резюме. Исследованы параметры липидного состава лимфоцитов периферической крови больных перитонитом и здоровых индивидуумов. Прослежены некоторые возможные механизмы перераспределения потоков липидных субстратов в клетке на фоне развернутой клиники перитонита. Обнаружено появление при перитоните в лимфоцитах ерракции неидентифициро-ванных жирных кислот. Впервые установленные характеристики липидного и жирнокислотного спектров лимфоцитов,который адекватно отражают тяжесть состояния больных и согласуются с клинико-лабораторными показателями и литературными данными.

Иммунодефицитные состояния, развивающиеся при перитоните, сопровождаю гея изменением структурно-метаболических параметров им мунекомпетентных клеток (ИКК). Гнойная интоксикация сопровождается активацией перекисного окисления липидов (ПОЛ) структур лимфоцитов, что приводиг к появлению ассоциированных с мембранами иммунологических нарушений. Характерные для них структурные изменения описаны на уровне основных липидных фракций [3].

Жирные кислоты (ЖК) - необходимый компонент клеточных мембран, транспортных и рецепторных комплексов. Содержание ЖК в лимфоцитах существенно влияет на иммунореактивность. Изменения их баланса могут приводить к нарушению основ функционирования клетки и встречаются при критических состояниях [9]. Продукты жирнокислогного обмена, в первую очередь эйко-заноиды, являются высокоактивными биологическими веществами, определяющими функциональные перестройки ИКК в патогенезе воспаления [7].

Состав основных фракций липидов и спектр ЖК могут свидетельствовать о совокупных изменениях метаболических и функциональных резервов ИКК при перитонитах различной степени тяжести.

Материалы и методы

Обследованы 25 клинически здоровых лиц и 93 больных распространенным перитонитом согласно классификации Б.Д. Савчука (1979) [6].

Оценивались: количество лейкоцитов (Ц *109/л), абсолютное количество лимфоцитов (АКЛ) в мкл периферической крови и показатель лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) по Я.Я. Кальф-Калифу [4]. В качестве дополнительного критерия

тяжести состояния и глубины стрессовой реакции организма использован предложенный Л.Х. Гар-кави показатель "индекса стресса" (ИСтр), отражающий соотношение тонуса симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы [1,2].

Лимфоциты выделяли из периферической венозной крови с аптикоагулянтом (3% раствор ЭДТА на 0,85% забуференном растворе NaCl, рН = = 7,4) по методу A, Boyum (1974) [8] на градиенте плотности фиколл-верографина (р= 1,077 г/см°).

Липидные экстракты из лимфоцитов (4,0* 10*’-6,0*10" клеток) готовились по Folch el al. (1957) [10].

Исследование липидного спектра лимфоцитов периферической крови проводилось методом гонкослойной хроматографии. Разгонка фракций проводилась на силуфолевых пластинах UV-254 с последующим их проявлением 5% раствором фосфорномолибденовой кислоты в 96% этаноле. Пластины сканировались на "Chromoscan-200" для определения объемов липидных фракций, а идентификация последних производилась по стандартам фирмы "Sigma" и с учетом относительной подвижности фракций [5]. Оценивалось содержание в клетках фосфолипидов (ФЛ), холестерина (ХОЛ), свободных жирных кислот (СЖК), триа-цилглицеридов (ТАГ), эфиров холестерина (ЭХ) и соотношения ХОЛ/ФЛ, СЖК/ТАГ. Исследование жирнокислогного спектра проводили методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) на хроматографе "Хром-5" (Чехословакия) с плазменноионизационным детектором. Применяли стеклянную колонку, заполненную жидкой фазой - диэтилен гликольсукцинатом на хромосорбе DMCS. В жирнокисло гном спектре липидов клеточных

мембран лимфоцитов било идентифицировано 11 жирных кислот: С|б:о - пальмитиновая (РЛ), Ci6:i - пальмитоолеиновая (РОЛ), C|g:o - стеариновая (SA), ClS:t - олеиновая (ОА), C|S;2 - линоле-вая (LA), С 183 - линоленовая (LEA), С2о:з - эйко-зотриеновая (ЕТА), С204 - арахидоновая (АА), С2о:5 - эйкозопентаеновая (ЕРА), С22:„ - докозогек-саеновая (DHA) и C24:i - нервоновая кислота (NA). Затем вычисляли сумму насыщенных ЖК (PA+SA), ненасыщенных ЖК (POA+OA+LA+ +LEA+ETA+AA+EPA+DHA+NA), моноеновых ЖК (POA+OA+NA), иолиненасыщенных ЖК (ПНЖК) (LA+LEA+ETA+AA+EPA+DHA), а также коэффициенты насыщенности (насыщенные ЖК/нена-сыщенныс ЖК, насыщенные ЖК/ПНЖК) и отношения: ЕТА/АА, АА/ЕРА, EPA/DHA, сумму со-3 (LEA+AA+DHA) и (о-6 (LA+ETA+AA+NA) жирных кислот и соотношение последних (со-3 ЖК/ о>6 ЖК).

Статистические расчеты выполнены на персональном компьютере с помощью пакета статистических программ "Statistica for Windows'6.0". Результаты измерений в группах представлены средними значениями величин и их стандартными ошибками (М+т). Результаты корреляционного анализа представлены коэффициентом корреляции г. Достоверность различий оценивалась с по-

мощью Т-крнтерия Стьюдента и и-крнтерия Манна-Уитни.

Результаты н обсуждение

У больных обнаружены характерные для перитонита изменения морфологического состава периферической кровн: повышение абсолютного числа лейкоцитов, а также нарастающий с увеличением тяжести заболевания ЛИИ, что подтверждает наличие у больных выраженной интоксикации. Кроме того, уровень показателя ИСтр свидетельствует о развитии при перитоните стресс-реакции, что, в свою очередь, проявляется снижением абсолютного количества лимфоцитов (табл. 1.).

Лимфоциты больных перитонитом характеризуются повышением относительного содержания ХОЛ и отношения ХОЛ/ФЛ при снижении содержания фракции ФЛ и ЭХ. Данные различия, описанные ранее у больных гнойной хирургической инфекцией, могут быть объяснены включением механизмов защиты мембран в условиях активации процессов ПОЛ [3]. Исследование лнпндного спектра выявило достоверное снижение содержания в лимфоцитах ЭХ и СЖК.

Изменения показателей жирнокислотного спектра лимфоцитов также могут быть расценены как проявления механизмов защиты от ПОЛ. Ус-

Таблица 1.

Кяинико-пиохимические характеристики больных распространенным перитонитом

Параметры Показатели липидного состава лимфоцитов Значимость различий.Р

здоровые больные перитонитом

п М±т п М + т

Ь, * 107л 25 6,02±0,22 93 12,31+0,56 Р<0,001

ЛИИ 25 0,87±0,13 93 6,81+0,55 Р<0,001

АКЛ, мкл ' 25 1 83 0±128 93 1 402+71 Р<0,01

ИСтр 25 0,54±0,05 93 0,19+0,01 Р<0,001

РА,% 20 33,1512,53 59 40,88+2,81 Р<0,05

РОА,% 20 0,39±0,22 59 1,92+0,27 Р<0,001

АА,% 20 7,48±1,33 59 1,61+0,58 Р<0,001

НИЖК,% 20 4,73±2,80 59 24,87+2,11 Р<0,001

Насыщенные ЖК, % 20 59,58+3,1 1 59 48,23+2,15 Р<0,01

Ненасыщенные ЖК, % 20 47,23±3,98 59 27,48+2,24 Р<0,001

ПНЖК, % 20 18,27+2,03 59 10,95+1,59 Р<0,05

Моноеновые ЖК, % 20 28,22+3,50 59 16,5 3+1,12 Р<0,001

0.-6 ЖК, % 20 20,40+3,43 59 8,25+1,46 Р<0,001

ЭХ, % 17 24,89+0,94 59 8,97+1,14 Р<0,001

ТАГ. % 17 14,32+1,13 13 10,18+1,79 Р>0,05

СЖК, % 17 7,11+0,52 13 3,45+0,51 Р<0,001

ХОЛ, % 17 29,04+1,26 13 56,45+1,79 Р<0,001

ФЛ, % 17 24,65+1,10 13 20,95+1,10 Р<0,05

Коэффициент: насыщенные/ ненасыщенные ЖК 20 1,46+0,20 59 2,48+0,24 Р<0,05

- насыщенные ЖК/ПНЖК 20 4,01+0,62 59 9,93+1,13 Р<0,01

- АА/ЕРА 20 59,85+21,40 59 3,67+0,80 Р<0,001

- ЕРАЯША 20 0,79+0,21 59 2,21+0,64 Р>0,05

- со-3 ЖК/со-6 ЖК 20 0,28+0,12 59 0,57+0,06 Р<0,05

- ХОЛ/ФЛ 17 1,22+0,08 13 2,78+0,17 Р<0,001

- С Ж К/ТАГ 17 0,57+0,08 13 0,49+0,13 Р>0,05

тановлено, что при перитоните в клетках повышается содержание пальмитиновой кислоты - одной из наиболее распространенных в природе ЖК. Как и все насыщенные ЖК, данное соединение повышает резистентность клеток к процессам перекис-ного окисления, потенциал пробоя мембраны и осмотическую стабильность клетки [14]. Кроме того, пальмитиновая кислота контролирует синтез холестерина и ненасыщенных жирных кислот [13], а сама служит материалом для синтеза фосфолипидов и ЭХ. Возможной причиной обнаруженных изменений, учитывая снижение содержания ФЛ и ЭХ, может быть блокирование в лимфоцитах этого механизма. Косвенным подтверждением переключения метаболических потоков обмена ЖК является повышение содержания пальми тоолеиновой кислоты - производного пальмитиновой кислоты.

Для спектра ЖК лимфоцитов при перитоните характерно снижение содержания арахидоновой кислоты (АА) и отношения АА/ЕРА, что может свидетельствовать о повышенной продукции эй-козаноидов, в то время как гормоны стресса могут блокировать синтез АА из ее предшественника -линоленовой кислоты [11]. Возможно, АА расходуется на синтез ФЛ [12], содержание которых снижено в связи с активацией ПОЛ. Совокупноеть действия этих факторов, вероятно, и приводит к снижению содержания АА в лимфоцитах.

Уменьшение содержания со-6 ЖК и отношения Q-3 ЖК/со-6 ЖК, обнаруженные при перитоните, в целом являются характерными для стрессовых состояний [11].

В спектре ЖК лимфоцитов больных перитонитом отмечена еще одна важная, по нашему мнению, особенность разделения их на фракции, заключающаяся в появлении дополнительного пика.

расположенного за нервоновой кислотой. Процентное содержание этих веществ высоко - до 64,49% от общего количества ЖК. Состав входящих в него кислот не удалось идентифицировать с помощью стандартных меток. Подобный, но значительно меньший по величине пик, отмечен в хроматограммах лишь у 3-х из 25 обследованных группы контроля. Учитывая место пика на хроматограмме, можно предположи ть, что эти неиден-тифицированные жирные кисло ты (НИЖК) относятся к длинноцепочечным ЖК. В качестве примера приводим результаты ГЖХ больной перитонитом (рис. 1.).

Известно, что ЖК с длинной углеродной цепью повышаюг вязкость мембран, стабилизируя протекающие в ней процессы ПОЛ. Положительная корреляционная связь между показа гелями относительного содержания нейден гифицировэнных жирных кислот (НИЖК) и ХОЛ в лимфоцитах (г=0,40; Р<0,05) больных перитонитом подтверждает существование механизмов стабилизации мембранных структур не только за счет увеличения содержания ХОЛ, но и изменения спектра Ж К.

В то же время совокупное содержание насыщенных ЖК в лимфоцитах больных перитонитом снижается. За счет появления НИЖК изменяется относительное содержание других ЖК. Одновременное снижение содержания насыщенных, ненасыщенных, полиненасыщенных, моноеновых ЖК свидетельствует об уменьшении их роли в регуляции состояния мембран при развернутой клинике перитонита.

Таким образом, совокупноеть клинико-лабораторных показателей - ЛИИ, ИСтр - подтверждает наличие интоксикации и стрессовой реакции, что, как известно, сопровождается напряженным функ-

Рис. 1. Результаты газожидкостной хроматографии больной Ф., 34 г., ист. болезни №25929, диагноз: "Гнойная тубовари-альная опухоль слева. Диффузный серозно-фибринозный перитонит".

ционированием лимфоцитов и изменениями их структурно-метаболических характеристик [3]. В качестве впервые установленного элемента перестроек лимфоцитов следует отметить, наряду с известными изменениями липидного спектра этих клеток, и появление в их жирнокисло гном спектре фракции НИЖК.

В целом описанные структурные перестройки направлены на повышение вязкости липидного слоя и потенциала пробоя мембранных структур

лимфоцитов. Данное явление отражает включение защитных механизмов стабилизации функций иммунокомпегентных клеток при перитоните за счет изменения состава липофильных веществ различных классов химических соединений. Обнаруженные изменения обосновывают возможность регуляции функционирования мембран в условиях ГХИ посредством воздействия метаболическими корректорами на обмен липидов и, в частности, жирных кислот.

ALTERATIONS IN LYMPHOCYTES LIPID STRUCTURE IN PATIENTS WITH PERITONITIS

P.V. Sarap, G.V. Bulygin, N.I. Kamzaiakova (Krasnoyarsk Stale Medical Academy)

The lymphocytes lipid structure was observed in patients with peritonitis and healthy individuals. Some possible mechanisms of redistribution of lipid substrates Hows in cell on the background of developed clinical picture of peritonitis have been shown. Non-idcntificd fatty acids fraction in lymphocytes was discovered in patients with peritonitis. Lipid and fatty acids characteristics show adequately severe condition of patients with peritonitis and coordinate with clinical and laboratorial information and literature data.

Литература

1.Гаркави JI.X., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. -Ростов/Дону. 1977,- 100 с.

2. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М.А. и др. О некоторых принципах адаптационной деятельности организма // 15 Съезд Всесоюзн. физиологии, общества: Тез. докл. - Л.: Наука, 1987. - С.60.

3. Булыгин Г.В., Камзалакова H.H., Андрейчиков A.B. Метаболические основы регуляции иммунного ответа. - Новосибирск: СО РАМН, 1999. - 346 с.

4. Костюченко А.Л., Вельских A.H., Тулупов А.Н. Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса. - СПб.: Фолиант, 2000. -448 е.: 40 ил.

5. Ростовцев В.H., Резник Г.Е. Количественное определение липидных фракций плазмы крови // Лаб. дело. - 1982. -№4.-С.218-221.

6. Федоров В.Д., Гостищев В.К., Ермолов A.C., Бог-ницкая Т.Н. Современные представления о классификации перитонита и системах оценки тяжести состояния больных // Хирургия. - 2000. - №4. -С.58-62.

7. Бертрам Г. Катцунг Базисная и клиническая фармакология: в 2-х т. / Пер. с англ. - М. - СПб.: Би-ном-Невский Диалект, 1998. - T.I. - 608 с.

8. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 1968. -Vol.21 (Suppl.77). - P.77-79.

9. Bulger E.M., Maier R.V. Lipid mediators in the Pathophysiology of critical illness // Crit. Care. Med.-2000. - N.4. -y 27-36.

10. Folch J., Lees M., Stanley G.H.S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues // J. Bol. Chem. - 1957. - Vol.226. -P.497-509.

1 I. Quantitative association between altered plasma esteri-fied omega-6 fatty acid proportions and psychological stress / L.L. Williams, J.K. Kiecolt-Glaser. L.A. Hor-rocks el al. // Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. - 1992. - Vol.47~ N.2. - P. 165-170.

12. Stenson W.F., Parker C.W. Metabolism of arachidonic acid in ionophore-stimulated neutrophils. Estérification of a hydroxylated metabolite into phospholipids // J. Clin. Invest. - 1979. - Vol.64, N.5. - P. 1457-1465.

13. The SREBP pathway in Drosophila: regulation by palmitate, not sterols / A.C. Seegmiller, 1. Dobrosot-skaya, J.L. Goldstein el al. // Dev. Cell. - 2002. -JVb2. - P.229-238.

14. Zavodnik I.B., Lapshina E.A., Palecz D., Bryszcw-ska M. The effects of palmitate on human erythrocyte membrane potential and osmotic stability // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 1996. - N.5. - P. 401-407.

© МАРТЫНОВА Г.П., САВЧЕНКО A.A., ГУЛБМАН Л.A. -УДК 616.98:578-053.2+612-092.12(571.51)

СОСТОЯНИЕ ИРЕМОРБИДНОГО ФОНА И ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ТЯЖЕСТИ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

Г.П. Мартынова, A.A. Савченко, Л.А. Гулъман.

(Красноярская государственная медицинская академия, ректор - акад. РАЕН и АН ВШ, д.м.н., проф. В.И. Прохоренков, Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, г. Красноярск, директор -чл.-корр. РАМН, д.м.п., проф. В.Т. Манчук)

Резюме. У детей 1-3 и 4-7 лет в зависимости от степени тяжести ОКИ исследовано состояние преморбидного фона и особенности иммунного статуса. Установлено, что с увеличением степени тяжести ОКИ выявляется повышение недостаточности клеточного и гуморального звеньев иммунной системы, наиболее выраженное у детей 1-3 лет. Анализ анамнестических данных