CC BY
57
Therapeutic gastroenterology
ИЗМЕНЕНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА У БОЛЬНЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КИШЕЧНИКА ПОД ВЛИЯНИЕМ ТЕРАПИИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫМИ СТРОМАЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ И ИНФЛИКСИМАБОМ
ЛазебникЛ.Б.1, Сагынбаева В.Э.1, Князев О.В.1, Парфенов А.И.1, Ефремов Л.И.1, Гусейнзаде М.Г.1, Ручкина И.Н.1, Коноплянников А.Г.3, Яковлева М.В.2, Астрелина Т.А.2
1 ГУ Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии ДЗ г. Москвы
2 ГУЗ «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения г. Москвы»
3 Медицинский радиологический научный центр РАМН, г. Обнинск
Сагынбаева Венера Эсенбаевна 111123, Москва, шоссе Энтузиастов, д. 86 Тел.:8 (495) 304 3026 E-mail: [email protected]
РЕЗЮМЕ
Из 28 больных воспалительными заболеваниями кишечника у 11 (39,3%) выявлено наличие аутоанти-тел к париетальным клеткам желудка. Назначение МСК и инфликсимаба не привело к снижению уровня антител, более того, у 6 (21,4%) больных отмечено дальнейшее повышение содержания названных аутоантител. Выявление аутоантител к париетальным клеткам желудка принято расценивать как присоединение к ВЗК аутоиммунного гастрита (формирование системного процесса), что диктует необходимость подключения кортикостероидов. Трансплантация мезенхимальных стромальных клеток при ВЗК способствует снижению повышенной циркуляции аутоантител к антигенам цитоплазматических структур нейтрофилов, тем самым уменьшая выраженность аутоиммунных реакций. Трансплантация МСК снижает уровень аутоагрессии у больных язвенным колитом, уменьшая аутореактивный клон В-лимфоцитов (CD19+CD5+). Анализ динамики уровня провоспалительных и противовоспалительных цитокинов позволяет оценить эффективность проводимой терапии. Определение уровня аутоантител к инфликсимабу позволяет судить не только об эффективности антицитокиновой терапии, но и о целесообразности дальнейшего ее проведения. Трансплантация МСК при ВЗК оказывает системный иммунорегулирующий эффект: с одной стороны, стимулируется угнетенный синтез цитокинов, с другой — интенсивность аутоиммунных реакций и активность патологических процессов снижается. Инфликсимаб селективно блокирует ФНО-а, не влияя на другие провоспалительные цитокины. Ключевые слова: язвенный колит; болезнь Крона; инфликсимаб; мезенхимальные стромальные клетки; аутоантитела к париетальным клеткам желудка и к антигенам цитоплазмы нейтрофилов; провоспалительные и антивоспалительные цитокины; антитела к ремикейду.
SUMMARY
Out of 28 patients with inflammatory bowel disease in 11 (39.3%) revealed the presence of autoantibodies to gastric parietal cells. Appointment of MSC and infliximab did not lead to a reduction in antibody levels, in fact, in 6 (21.4%) patients had a further increase in the content of mentioned autoantibodies. Identification of autoantibodies to gastric parietal cells is considered as adherence to IBD autoimmune gastritis (formation of a systemic process) that requires use of corticosteroids. Transplantation of mesenchymal stromal cells in IBD reduces enhanced circulation of autoantibodies against antigens of neutrophils cytoplasmic structures, thereby reducing the severity of autoimmune reactions. Transplantation of MSCs reduces autoaggression in patients with ulcerative colitis, reducing the autoreactive clone of B lymphocytes (CD19+CD5+). Analysis of the dynamics of levels of roinflammatory and anti-inflammatory cytokines allow evaluating the
effectiveness of the therapy. Transplantation of MSCs in IBD has a systemic immunoregulatory effect: on the one hand, stimulates oppressed cytokine synthesis, on the other - reduses the intensity of the autoimmune reactions and activity of pathological processes. Infliximab selectively blocks TNF -a, without affecting other proinflammatory cytokines.
Keywords: ulcerative colitis; Crohn's disease; infliximab; mesenchymal stromal cells; autoantibodies to the parietal cells of stomach and to antigens of the cytoplasm of neutrophils; proinflammatory and antiinflammatory cytokines; antibodies to Remicade.
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), к которым относятся язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК), представляют одну из наиболее серьезных и нерешенных проблем в современной гастроэнтерологии. Распространенность В3К значительно уступает другим болезням органов пищеварения, но по тяжести течения, частоте осложнений и летальности они во всем мире занимают одно из ведущих положений в структуре заболеваний желудочно-кишечного тракта.
Этиологические факторы при ВЗК до сих пор остаются неясными, однако хорошо известно, что в патогенезе ЯК и БК ключевую роль играют цитоки-ны. Иммунорегуляторные цитокины: ИЛ-1^, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИФН-у, ФНО-а усиливают воспалительный ответ, активируя иммунокомпетентные клетки. Концентрации противовоспалительных цитокинов: ИЛ-4, ИЛ-10, ТФР-1(3 значительно возрастают при активном воспалении и почти не определяются при неактивном ВЗК и у здоровых лиц [1-3].
Нарушение баланса продукции цитокинов Th1/ ^2-клетками имеет важное значение в иммунопа-тогенезе при ВЗК [4; 5].
В пользу аутоиммунной природы заболевания свидетельствуют присутствие антинейтрофильных цитоплазматических антител (ANCA) и ассоциация с некоторыми аутоиммунными болезнями. Аутоантитела против париетальных клеток слизистой оболочки желудка имеют место в ранних стадиях гастрита типа А. Повышенная частота встречаемости антител к париетальным клеткам чаще наблюдается у больных ассоциированными аутоиммунными заболеваниями [6; 7].
Несмотря на прогресс в изучении патогенеза ВЗК, лечение данной патологии по-прежнему остается трудной задачей. Поиск альтернативных методов лечения больных ВЗК привел к развитию биологической терапии (БТ). Одним из таких направлений является терапия антицитокиновыми агентами, в частности инфликсимабом. Терапия селективными иммунодепрессантами позволяет достигнуть определённого прогресса, однако эффективность данного метода лечения составляет около 60-70%. Данное обстоятельство требует разработки новых методов лечения больных ВЗК.
Новым направлением в лечении ВЗК является клеточная терапия мезенхимальными стро-мальными клетками (МСК). Первые результаты
исследований показали, что трансплантация МСК костного мозга улучшает клиническое течение ЯК и БК [8]. С 2008 г. трансплантация МСК рассматривается как потенциально новое стратегическое направление в терапии ВЗК. Это связано с тем, что МСК способны дифференцироваться в клетки самых разных типов тканей взрослого организма, доказано их системное иммуномодулирующее действие. Эти особенности обеспечивают перспективность их успешного клинического использования с целью усиления репаративного, противовоспалительного и иммуномодулирующего процессов [9].
Помимо того что МСК костного мозга человека являются гипоиммуногенными, они также обладают иммуномодулирующим и противовоспалительным эффектом. Гипоиммуногенность МСК обусловлена особенностями их иммунофенотипа: отсутствием костимулирующих молекул В7-1, В7-2, CD40, CD40-L, относительно низким уровнем экспрессии МНС I класса и отсутствием экспрессии МНС II класса. Этот феномен объясняет отсутствие реакции «хозяин против трансплантата» в аллоген-ном и ксеногенном организме при введении МСК. Доказано, что, несмотря на экспрессию МНС II класса, аллогенные МСК не вызывают дополнительной активации цитотоксических лимфоцитов и не способны вызывать Т-клеточный ответ [10; 11].
Более того, исследователям удалось доказать, что при трансплантации костного мозга МСК дифференцируются в эпителиальные клетки тимуса, которые определяют селекцию Т-клеток, что способствует развитию у реципиента иммунологической толерантности к клеткам донора [12].
Причем, как установлено, толерантность к МСК со стороны иммунной системы реципиента обусловлена не только низкой экспрессией главного комплекса гистосовместимости (MHC) I класса, но и отсутствием экспрессии костимулирующих молекул B7-1, B7-2 и CD40 [13]. В отсутствие этих молекул контакт Т-клеточного рецептора и MHC приводит к состоянию анергии Т-лимфоцитов [14]. Согласуясь с приведенными данными, в экспериментах in vivo при аллогенной трансплантации МСК и их дифференцировке не отмечалось каких-либо иммунологических реакций отторжения при отсутствии иммуносупрессии [15].
Влияние МСК на иммунную систему реципиента может происходить на нескольких уровнях развития
реакции отторжения. Во-первых, МСК способны влиять на Т-клетки, во-вторых, МСК способны взаимодействовать с антигенпрезентирующими клетками, в-третьих, МСК воздействуют на популяцию натуральных киллеров [16]. Кроме того, повышалась средняя выживаемость пациентов с сочетанной трансплантацией ГСК и МСК [17].
Итак, МСК не отторгаются при алло- и ксено-трансплантации. При введении реципиенту МСК не вызывают иммунного ответа, не лизируются цитотоксическими Т-лимфоцитами и натуральными киллерами. Иными словами, МСК в организме реципиента становятся «невидимыми» для Т-лимфоцитов [18-20]. Результаты, полученные в условиях in vivo, подтвердились в экспериментах in vitro. Они свидетельствуют о том, что МСК проявляют слабые иммуногенные свойства и вызывают супрессию аллогенных и аутогенных Т-клеток [21-25]. При этом выяснилось, что МСК от аллоген-ного или ксеногенного донора обладают большей супрессирующей активностью, чем аутологичные клетки [26].
Мигрируя в область воспаления по хемотак-сическому градиенту, МСК выделяют вещества, ингибирующие продукцию провоспалительных цитокинов. МСК способны дифференцироваться в клетки костной, хрящевой, жировой и нервной тканей, мышц (включая кардиомиоциты), сосудистого эндотелия, печени и т. д., синтезировать цитокины и молекулы адгезии, фактор роста эндотелия сосудов, стимулирующий ангиогенез, и непосредственно участвовать в процессах восстановительной регенерации поврежденных тканей [27].
Таким образом, трансплантация МСК может рассматриваться как новое направление биологической терапии язвенного колита и болезни Крона.
Клинические исследования последних лет продемонстрировали высокую эффективность инфлик-симаба при ВЗК. Как известно, ФНО-а является ключевым цитокином в развитии воспалительного процесса при ВЗК. Помимо прочих реакций, ФНО-а принимает непосредственное участие в формировании эпителиоидных гранулем в стенке кишки при БК. Эти гранулемы состоят из гигантских многоядерных клеток, которые формируются из макрофагов и CD4+ Т-лимфоцитов при обязательном участии цитокинов, в том числе ФНО-а. Одним из мощных индукторов ФНО-а являются бактериальные липополисахариды, в большом количестве присутствующие в просвете толстой кишки при ВЗК. Закономерно, что применение моноклональ-ных антител к ФНО-а является сегодня наиболее перспективным направлением антицитокиновой терапии ВЗК. Инфликсимаб официально зарегистрирован в России для лечения БК с 2001 г. За этот период получены успешные результаты у пациентов со среднетяжелым и тяжелым течением заболевания ВЗК. Применение препарата трехкратно в дозе 5 мг/кг способствует снижению индекса гистологической активности илеоколита,
уменьшению воспалительной инфильтрации [28]. Длительное лечение инфликсимабом в течение 11 месяцев оказалось эффективным методом купирования всех основных проявлений БК, в том числе суставных проявлений. При поддерживающей терапии сохранялась ремиссия в течение более года у 39% больных, при этом удавалось полностью отказаться от применения глюкокортико-идов. Сходные результаты получены при исследовании инфликсимаба у больных ЯК. Показана высокая частота клинического и эндоскопического ответа среди больных, получавших инфликсимаб, по сравнению с плацебо. У части пациентов удалось избежать колэктомии.
Однако сведения о влиянии мезенхималь-ных стромальных клеток и инфликсимаба на аутологичные антитела в литературе отсутствуют. Вышеизложенные обстоятельства определили цель настоящего исследования.
Цель исследования — изучение содержания и соотношения аутоантител к париетальным клеткам (anti-PCA) и к антигенам цитоплазмы нейтрофилов (ANCA), цитокинов in vivo, выявление антител к инфликсимабу при ВЗК на фоне проводимой терапии для определения эффективности трансплантации МСК и терапии инфликсимабом.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Обследовано 52 больных ВЗК в возрасте 18-60 лет, из них 41 больной с диагнозом ЯК (20 мужчин и 21 женщина) , 11 больных — с диагнозом БК (4 мужчин и 7 женщин). Диагноз подтвержден данными клинических, лабораторных, гистологических и инструментальных методов исследования. Больные были разделены на две группы в зависимости от проводимой терапии: 1-я группа (24 человека) — получали комплексную терапию с применением мезенхимальных стромальных клеток, 2-я группа (28 человек) получала инфликсимаб. Аутологичные антитела к антигенам цитоплазмы и ядра нейтро-филов (ANCA), к париетальным клеткам (anti-PCA), цитокинов in vivo определяли в сыворотке крови больных иммуноферментным методом с применением тест-систем Euroimmun (Германия), Orgentec (Германия), Bender MedSystems (Австрия), «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург). Семи больным ЯК в периферической крови до и через 1 месяц после трансплантации МССК определяли показатели клеточного иммунитета (абсолютное количество CD19+, CD19+CD5+, CD19+CD5-, CD19+CD10+) методом проточной цитофлюори-метрии. Для суждения об эффективности проводимой терапии у больных, получавших инфлик-симаб, определяли аутоантитела к инфликсимабу в сыворотке крови иммуноферментным методом с применением тест-систем Matriks biotek (Турция).
Б >
ст
So L с Oü
<Е ое
Щ CT hi í í
8s ¡^
U ID L Б ID v
Ü <U T
s
I-
(D <U С ID
a ш i-
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При ВЗК среди 28 больных, увеличение содержания апИ-РСА в сыворотке крови отмечено у 11 больных (39,3%). Концентрация аутоантител к апИ-РСА в сыворотке крови в среднем достигала 9,5 ± 1,5 Ед/мл.
В группе получавших инфликсимаб до и после терапии отмечалось повышение содержания апИ-РСА с 10,4 ± 2,5 до 11,5 ± 2,7 Ед/мл при норме меньше 10 Ед/мл. В группе же получавших МСК до и после трансплантации МСК средние концентрации апИ-РСА были в пределах нормы (8,2 ± 1,4 и 9,8 ± 1,4). Однако необходимо отметить, что среди больных, получавших инфликсимаб и МСК, несмотря на проводимую терапию, у 6 больных выявлено дальнейшее повышение содержания аутоантител к апИ-РСА в сыворотке крови (21,4%), а у 4 — сохранялось повышенным (14,3%).
Среди 20 больных ВЗК у 7 (35%) обнаружено увеличение содержания аутоантител к антигенным структурам нейтрофилов. Содержание аутоантител к антигенам цитоплазматических структур нейтрофилов в среднем составляло: аутоантитела к про-теиназе-3 — 2,3 ± 0,8, к эластазе нейтрофилов — 1,1 ± 0,1. Повышение содержания аутоантител к антигенам цитоплазматических структур нейтрофилов обнаружено у больных с хроническим непрерывным и рецидивирующим течением ЯК. После трансплантации МСК отмечено снижение содержания аутоантител к антигенам цитоплазматических структур нейтрофилов на 17% — с 3,5 ± 1,6 до 1,6 ± 0,6 ^ = 0,004). В группе больных, получавших инфликсимаб, уровень аутоантител к антигенам цитоплазматических структур нейтрофилов уменьшился с 1,3 ± 0,05
до 1,2 ± 0, ^ = 0,002). В обеих группах это снижение носило достоверный характер ^ < 0,05) (рис. 1).
В развитии воспаления при язвенном колите задействованы многочисленные механизмы тканевого и клеточного повреждения. Бактериальные и тканевые антигены вызывают стимуляцию Т- и В-лимфоцитов. При язвенном колите растет популяция В-лимфоцитов и плазмоцитов. Усиленный синтез иммуноглобулинов М сопровождается образованием иммунных комплексов и активацией системы комплемента, который, обладая цитоток-сическим действием, стимулирует хемотаксис нейтрофилов и фагоцитов с последующим выделением медиаторов воспаления, вызывающих деструкцию эпителиальных клеток. До трансплантация МСК у больных язвенным колитом в период обострения заболевания абсолютное содержание В-лимфоцитов (СБ19+) составило (0,26 ± 0,06) ■ 109/л, содержание аутореактивного клона В1-клеток (С019+С05+) — (0,04 ± 0,01) ■ 109/л, В2-лимфоцитов (С019+С05) — (0,2 ± 0,05) ■ 109/л и В-клеток предшественников (С019+С010+) — (0,04 ± 0,01) ■ 109/л. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови в группе обследуемых больных ЯК до введения МСК составило: ^М — 1,59 ± 0,009, ^С — 11,6 ± 2,6, ^А — 1,1 ± 0,2 г/л. После трансплантация МСК абсолютное содержание В-лимфоцитов у больных ЯК в обследуемой группе практически не изменилось и составило (0,27 ± 0,06) ■ 109/л, достоверно уменьшилось абсолютное содержание аутореактивного клона В1-лимфоцитов до (0,02 ± 0,007) ■ 109/л (р < 0,05), содержание В2-клеток составило (0,24 ± 0,05) ■ 109/л, содержание В-клеток предшественников имело тенденцию к снижению и составило в абсолютных значениях (0,03 ± 0,008) ■ 109/л ^ > 0,05).
Группа больных, получавших инфликсимаб
Группа больных, получавших МСК
Ш До терапии
После терапии
* p < 0,05.
Рис. 1. Содержание аутоантител к антигенам цитоплазмы нейтрофилов (ANCA) у больных ВЗК при лечении МСК и инфликсимабом
Многие аспекты, связанные с формированием и развитием иммунного ответа при ВЗК, до сих пор остаются неизвестными. Причиной рецидива ВЗК считается дисбаланс Т- и В-звеньев иммунной системы. Запуск воспалительного процесса при обострении ВЗК связан с изменением продукции цитокинов, участвующих в реализации специфического иммунного ответа.
Как показали результаты настоящего исследования, в обеих группах больных ВЗК, несмотря на проводимую терапию, как в фазе обострения, так и в фазе ремиссии заболевания отмечалось увеличение продукции провоспалительного ИЛ-lß, причем наибольший его уровень отмечался в группе больных, получавших инфликсимаб, что обусловлено тем, что препарат оказывает селективное действие только на ФНО-а (табл. 2).
Ингибиторы воспаления ИЛ-4, ИЛ-10, как известно, продуцируются Т-хелперами 2-го типа, В-лимфоцитами и обладают широким спектром противовоспалительной и иммунорегуляторной активности. Концентрация противовоспалительного ИЛ-10 при ВЗК в стадии обострения и ремиссии сохранялась в пределах нормы, а повышение уровня ИЛ-4 в стадии обострения выявлено только у 10% больных с ВЗК, которое после терапии МСК снизилось до нормы (табл. 2).
Уровень ТФР-lß перед трансплантацией МСК составил 73,4 ± 16,2 пг/мл, повышаясь через 1 неделю после введения до 792,5 ± 50,5 пг/мл, через 4 недели с момента трансплантации МСК уровень ТФР-1Р составил 448,6 ± 76,1 пг/мл.
Инфликсимаб представляет собой химерное моноклональное антитело к фактору некроза опухоли (ФНО-а) — одному из основных медиаторов
воспаления у человека. Он состоит на 75% из человеческого белка и на 25% — из мышиного и с высокой специфичностью связывает ФНО-а. Теоретическим обоснованием применения инфликсимаба при ВЗК является ключевая роль ФНО-а в развитии воспаления. Этот цитокин обладает рядом биологических эффектов: экспрессирует клеточные и сосудистые молекулы адгезии; индуцирует другие провоспалительные цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, интерферон-у); увеличивает проницаемость эндотелия и миграцию лейкоцитов; активирует нейтрофилы и эозинофилы; стимулирует синтез простагландинов и лейкотри-енов, металлопротеиназ; индуцирует синтез в печени белков острой фазы; тормозит апоптоз воспалительных клеток и т. д. Инфликсимаб, связывая ФНО-а, инактивирует провоспали-тельную активность этого цитокина [29].
Продукции цитокина ФНО-а в обеих группах после терапии инфликсимабом и трансплантации МСК отмечались в пределах нормы (табл. 2).
Концентрация ТФР-1р, несмотря на проводимую терапию, в фазе обострения сохраняется на повышенном уровне, что характерно и для фазы ремиссии.
Эпизодические инфузии инфликсимаба (ИНФ) в большинстве случаев — до 55% — приводят к образованию антител к ИНФ (АИНФ). У части пациентов регулярные инфузии ИНФ могут также вызывать образование антител к ИНФ — до 73% случаев. Несмотря на комбинированную терапию с использованием иммуносупрессоров, у ряда больных ВЗК также отмечается образование антител к
Б >
ст
50
1_ о OÜ
<Е О Л
Щ ст hi Ïï
51 ^
U ID L
Б ID
s/
û <u T
s h 0
<u с
ID
a ш h
Таблица 1
КОНЦЕНТРАЦИЯ УРОВНЯ АУТОАНТИТЕЛА К ПАРИЕТАЛЬНЫМ КЛЕТКАМ ЖЕЛУДКА ПРИ ВЗК ДО И ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ МСК И ТЕРАПИИ ИНФЛИКСИМАБОМ
№ Группы больных До лечения, n = 12 После лечения, n = 16 Р
1 Группа больных, получавших МСК 8,2 ± 1,4 9,8 ± 1,4 0,006
2 Группа больных, получавших инфликсимаб 10,4 ± 2,5 11,5 ± 2,7 0,3
Таблица 2
КОНЦЕНТРАЦИЯ УРОВНЯ ЦИТОКИНОВ ПРИ ВЗК ДО И ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ МСК И ТЕРАПИИ ИНФЛИКСИМАБОМ
№ Концентрация Группа больных, получавших МСК, n = 24 Группа больных, получавших ИНФЛ, n = 28
цитокинов in vivo в стадии обострения в стадии ремиссии в стадии обострения в стадии ремиссии
1 ИЛ-Ф 275,0 ± 107,7 77,2 ± 43,1* 471,6 ± 367,1 273,6 ± 124,8*
2 ФНО-а 135,3 ± 70,3 15,7 ± 2,3* 133,3 ± 5,85 13,9 ± 1,9*
3 ИЛ-10 7,9 ± 4,1 3,7 ± 0,5 3,6 ± 0,7 2,8 ± 0,7
4 ТФР-ф 336,4 ± 112,1 306,6 ± 62,4 614,6 ± 115,6 628,6 ± 82,7
Примечание: * p < 0,05.
инфликсимабу — до 46% [29]. Повышенный уровень АИНФ может приводить к инфузионным реакциям, уменьшению эффективности и продолжительности ответа на данную терапию.
При ВЗК после 6-8-го введения инфликсимаба, среди больных, получавших инфликсимаб, у 4-х выявлен повышенный титр антител к этому препарату — от 160 до 314 нг/мл, в среднем 236,5 ± 20,5 нг/мл. У данных больных повышение уровня АИНФ сопровождалось ухудшением клинической картины (появление болевого синдрома, увеличение частоты стула, снижение уровня гемоглобина). У одного больного инфликсимаб не оказал какого-либо эффекта: даже после третьего введения препарата титр аутоантител составил больше 240 нг/мл (норма меньше 5 нг/мл), в связи с чем препарат был отменен. У остальных больных показатели титра антител к инфликсимабу сохранялись в пределах нормы.
Больным, у которых были выявлены АИНФ, осуществлена однократная системная трансплантация аллогенных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) костного мозга с целью повышения эффективности проводимой противовоспалительной терапии. Через 4 недели уровень АИНФ у всех больных снизился до 7-15 нг/мл, в среднем до 8,5 ± 2,2 нг/мл ^ < 0,001). Данное снижение сопровождалось уменьшением активности ВЗК.
ВЫВОДЫ
1. Из 28 больных воспалительными заболеваниями кишечника у 11 (39,3%) больных выявлено наличие аутоантител к париетальным клеткам
желудка. Назначение МСК и инфликсимаба не привело к снижению уровня антител, более того, у 6 (21,4%) больных отмечено дальнейшее повышение содержания названных аутоантител. Выявление аутоантител к париетальным клеткам желудка принято расценивать как присоединение к ВЗК аутоиммунного гастрита (формирование системного процесса), что диктует необходимость подключения кортикостероидов.
2. Трансплантация мезенхимальных стромаль-ных клеток при ВЗК способствует снижению повышенной циркуляции аутоантител к антигенам цитоплазматических структур нейтрофилов, тем самым уменьшая выраженность аутоиммунных реакций.
3. Трансплантация МСК снижает уровень ауто-агрессии у больных язвенным колитом, уменьшая аутореактивный клон В-лимфоцитов (С019+С05+).
4. Анализ динамики уровня провоспалительных и противовоспалительных цитокинов позволяет оценить эффективность проводимой терапии.
5. Определение уровня аутоантител к инфликсимабу позволяет судить не только об эффективности антицитокиновой терапии, но и о целесообразности дальнейшего ее проведения.
6. Трансплантация МСК при ВЗК оказывает системный иммунорегулирующий эффект: с одной стороны, стимулируется угнетенный синтез цито-кинов, с другой — интенсивность аутоиммунных реакций и активность патологических процессов снижается. Инфликсимаб селективно блокирует ФНО-а, не влияя на другие провоспалительные цитокины.
ЛИТЕРАТУРА
1. Парфенов А.И. Энтерология. — М.: Триада-Х, 2002. — 774 с.
2. Парфенов А.И. Энтерология. — 2-е изд. — М.: МИА, 2009. — 880 с.
3. ХаитовР.М. Иммунология. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. — 320 с.
4. Рallоnе F., Montano S., Fais S. et а1. Studies of peripheral blood lymphocytes in Crohn's disease // Scand. J. Gastroеntеro1. — 1983. — Vol.
18. — Р. 1003-1008.
5. Striekland R. G., Korsmeyer S., Soltis R. D. et а1. Peripheral blood Т and В cells in chronic ^flamma^^ bowel disease // Gаstrоеntеrolоgy. — 1974. — VDI. 67. — Р. 569-577.
6. Воробьев А.А., Быков А.С., Караулов А.В. Иммунология и аллергология. — М.: Практическая медицина, 2006. — 288 с.
7. Бурместер Г.-Р., Пецутто А., Улрихс Т., Айхер А. Наглядная иммунология // Наглядная медицина; пер. с англ. — М., 2009.
8. Duijvestein M., Verwey M.H., Fidder H.H. et al. Autologous mesenchymal stem cell therapy in patients with refractory Crohn's disease // J. Crohn's Colitis. — 2009. — V^l. 3, № 1. — S. 46-47.
9. Frieedenstein A.J., Petrakova K.V., Kurolesova A.L., Frolova G.P. Het-rotopic of bone marrow. Analysis of precursor cells for osteogenic and hematopoetic tissue // Transplant. — 1968. — V^l. 6, № 2. — Р. 230-247.
10. Le Blanc K., Tammik C, Rosendahl K. et al. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells // Exp. Hematol. — 2003. — Ш. 31. — Р. 890-896.
11. Tse W.T., Pendleton J.D., Beyer W.M. et al. Suppression of allogeneic T-cell proliferation by human marrow stromal cells: implications in transplantation // Transplant. — 2003. — V^l. 75. — Р. 389-397.
12. Li Y., Hisha H., InabaM. et al. Evidence for migration of donor bone marrow stromal cells into recipient thymus after bone marrow transplantation plus bone grafts: A role of stromal cells in positive selection // Exp. Hematol. — 2000. — V^l. 28, № 8. — Р. 950-960.
13. MajumdarM. et al. Characterization and functionality of cell surface molecules on human mesenchymal stem cells // J. Biomed. Sci. — 2003. — Vol. 10. — Р. 228-241.
14. SchwartzR.H. A cell culture model for T lymphocyte clonal anergy // Science. — 1990. — Vol. 248. — Р. 1349-1356.
15. Djouad F. et al. Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals // Blood. — 2003. — Vol. 102. — Р. 3837-3844.
16. Кругляков П.В., Лохматова Е.А., Климович В.Б., Зарицкий А.Ю. Мезенхимные стволовые клетки и иммунопатологические состояния организма // Клет. трансплант. и ткан. инженерия. — 2006. —
Т. 3, № 5. — С. 36-41.
17. Frassoni F.L.M., Bacigalupo A., Gluckman E. Expanded mesenchymal stem cells [MSC], coinfused with HLA identical hemopoietic stem cell transplants, reduce acute and chronic graft versus host disease: a matched pair analysis [abstract] // Bone Marrow Transplant. — 2002. — V^l. 29. — Р. 75.
18. Liechty K.W., MacKenzie T.C., Shaaban A.F. et al. Human mesen-chymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep // Nat. Med. — 2000. — Vol. 11. — Р. 1282-1286.
19. Di Nicola M., Carlo-Stella C., Magni M. et al. Human bone marrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced by cellular or nonspecific mitogenic stimuli // Blood. — 2002. — уо1. 99. — Р. 3838-3843.
20. ChiuR.C. Xenogeneic cell transplant: fact or fancy? // Int. J. Cardiol. — 2004. — Ш. 95, Suppl. 1. — S. 43-44.
21. Krampera M., Glennie S., Dyson J. et al. Bone marrow mesenchymal stem cells inhibit the response of naive and memory antigen-specific T cells to their cognate peptide // Blood. — 2003. — Ш. 101. — Р. 3722-3729.
•о
22. Djouad F., Plence P., Bony С. et al. Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals // Blood. — 2003. — Vol. 102. — P. 3837-3844.
23. Le Blanc K., Tammik C., Rosendahl K. et al. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells // Exp. Hematol. — 2003. — Vol. 31. — P. 890-896.
24. Tse W.T., Pendleton J.D., Beyer W.M. et al. Suppression of allogeneic T-cell proliferation by human marrow stromal cells: implications in transplantation // Transplant. — 2003. — Vol. 75. — P. 389-397.
25. Bartholomew A., Sturgeon C, Siatskas M. et al. Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo // Exp. Hematol. — 2002. — Vol. 30. — P. 42-48.
26. Plumas J., Chaperot L, Richard M.-J. et al. Mesenchimal stem cells nduce apoptosis of activated T-cells // Leukemia. — 2005. — P. 1-8.
27. Шумаков В.И., Онищенко Н.А., Крашенинников М.Е. и др. Дифференцировка костномозговых стромальных стволовых клеток в кардиомиоцито-подобные клетки у различных видов млекопитающих // Бюлл. эксп. биол. и мед. — 2003. — Т. 135, № 4. — С. 393-396.
28. RutgeertsP.,Feagan B.G., Lichtenstein G.R. etal. Comparison of scheduled and episodic treatment strategies of infliximab in Crohn's disease // Gastroenterology. — 2004. — Vol. 126. — Р. 402-413.
29. Vermeire S., Noman M., Van Assche G. et al. Effectiveness of concomitant immunosuppressive therapy in suppressing the formation of antibodies to infliximab in Crohn's disease // Gut. — 2007. — VqI. 56, № 9. — Р. 1226-1231. Epub 2007 Jan 17.
