CC BY
23
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунологические проблемы в педиатрии Immunological problems in pediatrics
висимого свечения, величина которой прямо коррелирует с образованием супероксид-анион-радикалов) и S luc+zym — светосумму стимулированного опсонизиро-ванным зимозаном свечения. Регистрировали коэффициент стимуляции (отношение уровней S luc+zym/ S luc), раскрывающий величину резервных возможностей гра-нулоцитов.
Результаты. У детей младшей возрастной подгруппы спонтанная генерация супероксид радикала гранулоци-тами цельной крови превышала контрольные значения в 2,6 раза. При стимуляции клеточного ответа показатели превышали контрольные — в 2,1 раза. Исследование коэффициента стимуляции позволило зарегистрировать снижение резервных возможностей гранулоцитов крови — коэффициент стимуляции был ниже контрольных значений в 1,2 раза. У пациентов старшей возрастной подгруппы была зарегистрирована аналогичная динамика параметров люцигенин-зависимой хемилюминесцен-ции.
Заключение. Снижение резервных возможностей гранулоцитарной системы у детей с ХВЗЛ в периоде ремиссии на фоне гиперпродукции этими клетками супероксид-анион радикала может иметь важное значение в персистировании воспалительного процесса в бронхо-легочной системе.
ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ CD14+CD16+ У НОВОРОЖДЕННЫХ В КРИТИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ
Дударева М.В.1, Сизякина Л.П.2, Дударев И.В.2
1ФГБУ«Институт акушерства и педиатрии» Министерства здравоохранения РФ, Ростов-на-Дону, Россия
2 ФГБУ ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет», Ростов-на-Дону, Россия
Одно из самых грозных осложнений неонатального периода связанно с аспирацией амниотической жидкости загрязненной меконием. Синдром мекониальной аспирации (СМА) осложняет от 1,7 до 35,8% своевременных родов, при этом летальность новорожденных от СМА составляет 5-40%. Не вызывает сомнения ведущая роль иммунной системы в развитии, клиническом течении и исходах гнойно-воспалительных заболеваний у этих детей. В связи с этим остается актуальным поиск объективных высокочувствительных и специфичных маркеров для ранней диагностики сепсиса у новорожденных.
Цель. Изучение экспрессии CD14+CD16+ у новорожденных с синдромом мекониальной аспирации.
Материалы и методы. Для решения поставленной задачи было обследовано 175 новорожденных с СМА. Исследования проводили на 3-х цветном проточном цито-метре Beckman Coulter (США) с использованием реагентов фирмы Beckman Coulter.
Моноцитарно-макрофагальная система участвует в острых и хронических воспалительных реакциях, играет важную роль в защите организма. По экспрессии рецепторов CD14+ и CD16+ выделяют 2 субпопуляции: классические моноциты с фенотипом CD14+CD16- и резидентные моноциты с фенотипом CD14+CD16+.
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что здоровые новорожденные имели значительно более низкий процент CD14+CD16+ моноцитов, чем у новорожденных с СМА (5,51±0,15% против 9,72±0,52%) (Р < 0,05). Существенное увеличение экспрессии CD14+CD16+
моноцитов наблюдалось у новорожденных с СМА осложненных сепсисом (22,25±3,57%) (Р < 0,05). У этих детей отмечено достоверное снижение ГЬ-ф и Ш-4 при одновременном повышении плазменного уровеня ГЬ-6, ГЬ-8. Благодаря ранней диагностике и своевременной модификации антибактериальной и интенсивной терапии лишь у 2 пациентов этой группы зарегистрирован летальный исход. При патолого-анатомическом исследовании у всех погибших детей выявили признаки неонатального сепсиса. Найдено, что уровень ГЬ-ф в крови у новорожденных, умерших с основным диагнозом «септическая инфекция», в исходе заболевания резко снижался до минимальных цифр, граничащих с чувствительностью тест-системы. Было определено повышение экспрессии на моноцитах CD16+ рецепторов до 33,4±3,1% (Р < 0,05). Таким образом, резкое снижение концентрации ГЬ-ф и существенное повышение экспрессии на моноцитах CD16+ рецепторов в крови детей в критическом состоянии может расцениваться как неблагоприятный прогностический признак. Очевидно, что мониторинговое определение относительного содержания CD16+ на моноцитах позволяет с высокой степенью вероятности диагностировать развитие неонатального сепсиса у новорожденных детей с СМА на доклинической стадии. Полученные результаты позволяют оптимизировать интенсивную терапию в плане проведения обоснованной иммунокоррекции.
Выводы. Снижение концентрации ГЬ-ф в крови новорожденных, состояние которых осложнилось присоединением септической инфекции имеет неблагоприятную прогностическую значимость. Моноциты новорожденных с септическими осложнениями в значительно большей степени экспрессируют CD16+, чем моноциты новорожденных без таковых. Уровень CD14+CD16+ может служить прогностическим маркером септического осложнения.
ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА (VEGF) У ДЕТЕЙ С ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИЕЙ
Евсеева Г.П., Ефименко М.В., Холодок Г.Н., Савицкая Е.А.
Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания — НИИ охраны материнства и детства, Хабаровск, Россия
Проблема легочно-плевральных осложнений при внебольничной пневмонии (ВП) у детей сохраняется, что создает проблемы для врачей с выбором стартовой терапии и удорожает лечение. К настоящему времени достаточно подробно описаны изменения концентрации цитокинов при различной патологии, но роль сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) — сигнального белка, участвующего в васкулогенезе и ангиогенезе и являющегося частью системы, которая восстанавливает подачу кислорода к тканям, у детей с ВП изучена на сегодняшний день недостаточна, а его физиологическая активность вызывают большой интерес.
Целью исследования явилось изучение уровней спонтанной и митоген-индуцированной продукции VEGF у детей с осложненным плевритом и неосложненным течением ВП.
Было проведено комплексное обследование 108 детей, госпитализированных по поводу внебольничной пневмонии. Из них 84 ребенка с неосложненным тече-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
нием ВП и 24 ребенка — с ВП, осложненной плевритом. Длительность заболевания составила 3-5 дней в обеих группах и статистически не различалась. Проводилась оценка продукции клетками цельной крови интерлей-кинов: IL-1, интерферон-гамма (IFNy), фактор некроза опухолей (TNFa), сосудистый фактор роста эндотелия (VEGF) и др. Для определения спонтанной выработки цитокинов в пробирку с 1,0 мл крови добавляли 0,3 мл среды RPMI 1640. Для определения индуцированной выработки цитокинов клетки крови стимулировали микроорганизмом S. рneumonае (серотип 7, 11; штаммы 7С и 11AD). Содержание уровня цитокинов в суперна-танте спонтанной и индуцированной S. pneumoniae крови проводили иммуноферментным методом с помощью наборов ЗАО Вектор-БЕСТ (Россия, г. Новосибирск). Статистическая обработка материала проведена c применением пакета STATISTICA для Windows (версия 10.0). Учитывая, что распределение вариант выборки отличалось от нормального, для характеристики распределения вариант использовались медиана (Ме) и 25-75 квартили. Для оценки различий применялся непараметрический критерий Манна—Уитни «U-тест». Для определения взаимосвязей между показателями использовался коэффициент корреляции Спирмена. Был рассчитан индекс индуцированной активности цитокиновой продукции (ИИАЦ): отношение уровня митогениндуцированной продукции цитокинов к уровню спонтанной продукции цитокинов. Различия считали достоверными при уровне значимости р < 0,05.
У детей с ВП с неосложненным течением заболевания при поступлении спонтанная продукция VEGF составила 19,71 пг/мл (7,23-35,35), индуцированная — 23,37 пг/мл (16,46-35,96; р < 0,05). ИИАЦ составил 1,18. У детей с ВП, осложненной плевритом, уровень VEGF при поступлении был в 5,9 выше, чем в группе детей с неосложненным течением заболевания и составил 115,7 пг/мл (44,99-186,51), индуцированная продукция — 174,48 пг/мл (105,26-224,7), р < 0,05. ИИАЦ равнялся 1,5. Возможно, клетки, испытывающие больший дефицит кислорода при осложненном течении ВП, стимулируют повышение выделения VEGF. Полученные данные соотносятся с данными исследователей о том, что физиологические функции VEGF зависят от определенных уровней VEGF и защитными свойствами обладают низкие уровни VEGF. На сегодняшний день VEGF рассматривают как мультифункциональный цитокин, продуцирующийся различными типами клеток — макрофагами, фибробла-стами, лимфоцитами, полиморфноядерными клетками. Активация рецепторов на клетках ведет к включению многочисленных внутриклеточных пострецепторных сигнальных каскадов, запускающих ангиогенез и индуцирующих провоспалительные реакции. Так, корреляционный анализ выявил отрицательную взаимосвязь между концентрацией IL-1 и VEGF у детей с неосложненным течением заболевания (г = -0,46, р < 0,05) при отсутствии такой связи у детей с осложненным течением ВП и положительную зависимость между содержанием спонтанного уровня INFy и VEGF у детей с неосложненным течением ВП (г = 0,28, р < 0,05) и у детей с плевритом (г = 0,42, р < 0,05).
Таким образом, у детей с осложненной ВП индуцирование иммунокомпетентых клеток цельной крови приводит к увеличению секреции VEGF. Выявленные различия концентрации спонтанного и митоген-индуцированного синтеза позволяет рассматривать его как перспективный
маркер формирования осложненного течения ВП у детей для совершенствования ранней диагностики течения заболевания.
ПОКАЗАТЕЛИ СОДЕРЖАНИЯ МОНОЦИТАРНОГО ХЕМОАТТРАКТАНТНОГО ПРОТЕИНА 1 (MCP-1) У ДЕТЕЙ С ПЛЕВРИТОМ
Ефименко М.В., Евсеева Г.П., Холодок Г.Н.
Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания — НИИ охраны материнства и детства, Хабаровск, Россия
Весьма актуальной становится задача поиска современных механизмов ранней диагностики осложненного течения внебольничной пневмонии у детей, когда первичные симптомы при неосложненной и осложненной пневмонии идентичны. В последние годы одним из ведущих направлений в диагностике заболеваний является исследование молекулярных маркеров повреждения, одним из которых можно считать моноцитарный хемоа-трактантный протеин-1 (МСР-1). Под действием хемо-таксических цитокинов осуществляется миграция лейкоцитов в очаг воспаления.
Цель. Изучение уровней спонтанной и митоген-инду-цированной продукции МСР-1 у детей с ВП, осложненной плевритом, и с неосложненным течением ВП.
Было проведено комплексное обследование 108 детей, госпитализированных по поводу внебольничной пневмонии. Из них 84 ребенка с неосложненным течением ВП и 24 ребенка — с ВП, осложненной плевритом. Длительность заболевания составила 3-5 дней в обеих группах и статистически не различалась. Проводилась оценка продукции клетками цельной крови интерлейки-нов, в том числе моноцитарного хемоатрактантного про-теина-1 (monocyte chemoattractant protein-1, МСР-1). Для определения спонтанной выработки цитокинов в пробирку с 1,0 мл крови и добавляли 0,3 мл среды RPMI 1640. Для определения индуцированной выработки ци-токинов клетки крови стимулировали микроорганизмом S. рпеитопае (серотип 7, 11; штаммы 7С и 11AD). Содержание уровня цитокинов в супернатанте спонтанной и индуцированной S. pneumoniae крови проводили иммуноферментным методом с помощью наборов ЗАО Вектор-БЕСТ (Россия, г. Новосибирск). Статистическая обработка материала проведена c применением пакета STATISTICA для Windows (версия 10.0). Учитывая, что распределение вариант выборки отличалось от нормального, для характеристики распределения вариант использовались медиана (Ме) и 25-75 квартили. Для оценки различий применялся непараметрический критерий Манна—Уитни «U-тест». Для определения взаимосвязей между показателями использовался коэффициент корреляции Спирмена. Был рассчитан индекс индуцированной активности цитокиновой продукции (ИИАЦ): отношение уровня митогениндуцированной продукции цитокинов к уровню спонтанной продукции цитокинов. Различия считали достоверными при уровне значимости р < 0,05
Результаты. У детей с ВП с неосложненным течением заболевания при поступлении спонтанный уровень МСР1 составил 225,36 пг/мл (130,11-324,52), индуцированный - 245,19пг/мл (153,24-477,01), р > 0,05. ИИАЦ составил 0. У детей с ВП, осложненной плевритом, уровень МСР-1 при поступлении был в 3,5 выше, чем в груп-
