CC BY
20
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ИЗМЕНЕНИЕ СЫВОРОТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ... 23 1
УДК 618.19-006.6-08:616.15-097.1
И.Ю. Филюшкина1, Н.В. Голубцова, В.В.Новиков2, М.А. Барышникова1, З.А. Соколова1, А.И. Чкалина2, Е.В. Борисова 2, П.К. Иванов1, И.К. Воротников1, А.Ю. Барышников1 ИЗМЕНЕНИЕ СЫВОРОТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ РАСТВОРИМЫХ ЛЕЙКОЦИТАРНЫХ АНТИГЕНОВ У БОЛЬНЫХ РМЖ
1ФГБУ «РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН», Москва 2ННГУ им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород
Контактная информация:
Филюшкина Инна Юрьевна, академический аспирант хирургического отделения №5 НИИ клинической онкологии адрес: 115478 Москва, Каширское шоссе, 24; тел: +7(499)324-28-30 e-mail: masikmoj23@mail.ru
Статья поступила 03.02.2014, принята к печати 07.02.2014.
Резюме
Исследовано относительное содержание сывороточных уровней растворимых лейкоцитарных антигенов у пациентов со II стадией рака молочной железы до хирургического удаления опухоли. В качестве контроля использовались образцы сывороток крови 63 здоровых женщин.
Пациентки (п=64) делились на две группы. Группу №1 составили первичные нелеченые больные (п=58), группа №2 (п=6) включала пациенток после неоадьювантной терапии. Выявлены различия в содержании растворимых форм антигенов в образцах сывороток крови в обеих группах больных. Сывороточный уровень растворимой формы молекул ИЬЛ I класса в группе №1 был сопоставим со значениями данного показателя в контрольной группе доноров, а в образцах сывороток крови больных группы №2 относительное содержание сывороточного уровня растворимого ИЬЛ I класса оказалось в 3 раза выше, чем таковой в группе доноров (р<0,05). Сывороточный уровень растворимого комплекса СБ8-ИЬЛ I в группе №1 также был сопоставим с показателями в группе здоровых доноров, и был повышен в 1,5 раза относительно контроля (доноры) у больных группы №2 (р<0,05). Выявлены пониженные показатели содержания сывороточного уровня растворимого антигена СБ54 в 1,1 раза в группе №1 и повышенные значения уровня СБ54 в 1,6 раза в образцах сывороток крови группы №2 (р<0,05). Установлено, что сывороточный уровень растворимого СБ18 в группе №1 сопоставим со значениями в группе доноров, а в образцах сывороток крови больных группы №2 относительное содержание сывороточного уровня растворимого ИЬЛ I класса было в 1,7 раза выше контроля - доноры (р<0,05). Сывороточный уровень растворимого комплекса СБ18- СБ54 в группе №1 был в 1,5 раза ниже, а в группе №2 был выше в 5 раз, чем в контрольной группе доноров (р<0,05). Таким образом, проведенные исследования выявили изменения сывороточных уровней растворимых лейкоцитарных антигенов в группах леченных и нелеченных больных РМЖ, повышенные показатели выявлены у пациенток, получавших неоадьювантную терапию перед хирургическим удалением опухоли.
Ключевые слова: растворимые лейкоцитарные антигены, иммунная система, неоадьювантная терапия, рак молочной железы.
I.YFilyushkina1, N.V. Golubzsova1, V.V. Novikov2, M.A. Baryshnikova1, Z.A. Sokolova1, A.I. Chkalina , E.V. Borisova2, P.K. Ivanov1, I.K. Vorotnikov1, A.Yu. Baryshnikov1 VARIATION FEATURES
OF SOLUBLE LEUKOCYTE ANTIGENS IN PATIENTS WITH BC
1FSBI «N.N. Blokin RCRC» RAMS, Moscow 2N.I. Lobachevsky Nizhny Novgorod State University
Abstract
In this study we have estimated the serum levels of soluble leukocyte antigens in patients with stage II breast cancer before surgical removal of the tumor . As control samples 63 sera from healthy women. Patients (n = 64 ) were divided into two groups. Group №1 comprised primary untreated patients (n = 58), group №2 (n = 6) consisted of patients after neoadjuvant therapy. The differences in the content of soluble forms of the antigens in the sera of patients in both groups. Serum levels of soluble form of HLA I molecules class group №1 was comparable with the values of this indicator in the control group of donors , and in sera of patients group № 2 relative content of serum levels of soluble HLA I class was 3 times higher than in the group of donors (p <0,05). The serum level of soluble complex CD8 - HLA I in group 1 number was also comparable with those in the group of healthy donors was increased by 1.5 -fold relative to a control ( the donor ) patients group number 2 (p <0,05). Figures revealed decreased levels of serum soluble CD54 antigen 1.1 times the number in the group 1 and values of the level of CD54 increased by 1.6 times in the sera group number 2 (p <0,05). Found that serum levels of soluble CD18 in the group number 1 is comparable with the values in the group of donors , and in sera of patients group number 2 relative content of serum levels of soluble HLA I class was 1.7 times higher than the control - donors (p < 0 , 05). Serum levels of soluble CD18-CD54 in a group number 1 was 1.5 times lower , and in the group number 2 was 5 times higher than in the control group donors (p <0,05). Thus, studies have revealed changes in serum levels of soluble leukocyte antigens in groups treated and untreated patients with breast cancer , increased rates were observed in patients treated with neoadjuvant therapy prior to surgical removal of the tumor.
Key words: soluble leukocyte antigens, the immune system, neoadjuvant therapy, breast cancer.
№ 1/tom 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
24 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ИЗМЕНЕНИЕ СЫВОРОТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ...
Введение Материалы и методы Растворимые формы мембранных антигенов Материалом для исследования служили об-клеток иммунной системы, образующиеся за счет их разцы сывороток периферической крови 64 боль-шеддинга с поверхности клеток или альтернативно- ных РМЖ II стадии до хирургического удаления го сплайсинга матричной РНК играют важную роль опухоли. в регуляции противоопухолевого иммунного ответа Больные были разделены на 2 группы. Известно, что они могут выполнять функции огра- Группу №1 (n=58) состояла из нелеченных ничителей иммунных реакций или же выступать в пациенток, а группу №2 (n=6) составили пациент-роли активаторов иммунологических процессов [13- ки, которые перед операцией получали неоадью-18]. В норме растворимые формы мембранных анти- вантную терапию. В качестве контроля использо-генов находятся в равновесном состоянии. Измене- вались образцы сывороток крови 63 здоровых ния их концентрации в крови и других биологиче- женщин. ских жидкостях организма обнаружено при различ- Определение сывороточных уровней раство-ных нарушениях гомеостаза, отражая активность римых антигенов проводилось иммуноферментным патологических процессов, протекающих в организ- методом, разработанным в Нижегородском госуни-ме [13; 17]. Сохранение растворимыми сывороточ- верситете им. Н.И.Лобачевского (Новиков В.В. и ными антигенами способности связывать раствори- др., 2008) с использованием МКА серии ИКО [2; 3] мые гомологи мембранных партнеров подразумевает против соответствующих антигенов, меченных невозможность существования в биологических жид- роксидазой хрена, и поликлональных антител про-костях белковых комплексов (ассоциатов), таких как тив мононуклеарных клеток периферической крови CD8-HLA I, CD18-CD54 и CD18-CD50 соответст- человека. венно[5-8; 19]. Растворимую форму сывороточного Учет результатов проводился спектрофото-HLA I секретируют in vivo как Т- так и В- метрически при X 492 нм. Результаты выражали в лимфоциты. Увеличение концентрации растворимо- условных единицах (МЕ/мл). го HLA I происходит в случаях, когда активированы Статистический анализ данных проводился с популяции Т-лимфоцитов. Изменения концентрации помощью пакета программ EXCEL 2003, растворимых молекул HLA I класса и растворимого STATISTICA 10.0, SPSS 20.0. Результаты считались Fas-лиганда обнаружены в крови больных острым статистически достоверными при уровне значимо-миелобластным лейкозом, раком молочной железы сти p < 0,05. [1; 7-9; 22; 24; 25]. Получены данные об изменении уровня растворимой формы HLA I, CD8-aHTHreHa, Результаты и обсуждение комплекса HLA-I-CD8 при хроническом миелолей- козе, при развитии рака легкого [1; 11; 21]. Обнару- Был проведен сравнительный анализ исслежены изменения сывороточного содержания раство- дуемых показателей в образцах сыворотки крови римых молекул HLA I класса и растворимого анти- всех больных РМЖ II (табл. 1) гена CD8 и показано их прогностическое значение у Как видно из представленных данных досто-больных диссеминированной меланомой в ходе вак- верного изменения сывороточного содержания ис-цинотерапии аутологичными дендритными клетка- следуемых растворимых антигенов, кроме CD54, ми [8; 9; 20]. Обнаружено появление противоопухо- выявлено не было (p>0,05). Полученные полевых антител в крови вакцинированных больных, казатели растворимых антигенов имели сильные страдающих меланомой [10], выявлено изменение колебания. Для унификации анализа высчитывали экспрессии и показано прогностическое значение процент угнетения или стимуляции уровня по растворимого CD44-aHTHreHa у больных метастати- сравнению с контролем: ческой меланомой в ходе проводимой терапии [4]. Обнаружены изменения сывороточного содержания опыт — контполъ растворимой формы антигена CD38 при различных -—-х 100 иммунологических нарушениях [22]. Выявлены из- контроль менения растворимой формы CD18-aHTHreHa в крови больных вирусными гепатитами, пациентов с в качестве контр0ля было принято среднее термическими ожогами 119; 231. r г г г т-т значение исследуемого показателя в группе здоро-Показаны различия сывороточного содержа- J fj^f i 11 вых доноров. ния растворимых форм дифференцировочных анти- Бо^ьные были ны на генов при диагностике миомы матки и рака эндо- ^ , ' ^ ri -л т-> пы. Ipynny 1 составили первичные нелеченые метрия [12]. Важную роль в процессах адгезии игра- больные (n=58) rnvnna 2 (n=6) состояла из болЬ- /-чтлг л /тл А л í 1 \ ti А- ииЛЬЙЫС V11 JO 1, I UylIIICl A. Ill Ul tUWlUílJld Ш UUJlb" ет молекула CD54 (ICAM-1). Растворимая форма v ^ t-j v / J г г г ч-г ных после неоадъювантнои терапии (табл. 2). CD54 может быть образована двумя способами: пу- . r v ' r J J Анализ относительного содержания данных тем шеддинга с поверхности клеток или альтерна- г ~ „ г „ т,ттт/- r - антигенов выявил следующее: сывороточный уро-тивного сплаисинга матричнои РНК, кодирующей -л, тгтлт , тт г r ' rj вень растворимой формы молекул HLA I класса в ICAM-1. Наиболее высокие значения сывороточного r ,f, í ^ r J г^т-ъсл группе №1 был сопоставим со значениями данного уровня растворимого CD54 выявлены при метаста- - с r r г показателя в контрольной группе доноров, а в об-зировании злокачественных опухолей, поэтому сы- ^ с хп F J ' разцах сывороток крови больных группы №2 отме-вороточное содержание растворимого CD54- r ^ г t-j r r г г чено повышенное в 3 раза относительное содержа-антигена используется в качестве мониторингового UTf. т J ^ г ние сывороточного уровня растворимого HLA I показателя при развитии онкологических заболева- r / ^п п«ч г" [13 18] класса, чем в группе доноров (p<0,05). Сывороточ- L тт , ный уровень растворимого комплекса CD8-HLA I в целью настоящего исследования явилось лг i г ^ ^ группе №1 также был сопоставим с показателями в определение сывороточного содержания раствори- , -г ттт Лгт r r г группе здоровых доноров, но был повышен в 1,5 мых молекул HLA I класса, растворимого антигена r ч,-/^т^ю /^т^о ш Л раза относительно контроля (доноры) у больных CD18, CD54 и растворимых комплексов CD8- HLA- г ппы№2 ( <0 05) I и CD18-CD54 у больных раком молочной железы. группы » (p , ).
№ 1/том 13/2014 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ИЗМЕНЕНИЕ СЫВОРОТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ... 25 |
Таблица 1
Содержание растворимых сывороточных лейкоцитарных антигенов у больных РМЖ II стадии М±т, МЕ/мл
Группы пациентов HLA I CD8-HLA I CD54 CD18 CD 18-54
Все больные II стадия РМЖ, п=64 1080,31±699,11 67,16±34,89 107,22±65,31* 169,41±67,40 139,34± 75,64
Здоровые доноры, п=63 878,74±219,69 68,39±4,77 127,50± 46,91 162,00±52,64 113, 01±55,00
* статистически достоверные различия по сравнению с группой доноров (p< 0,05)
Таблица 2
Относительное содержание растворимых сывороточных лейкоцитарных антигенов в группах леченных и неле-ченных больных РМЖ М±т, %_
Группы пациентов HLA I CD8-HLA I CD54 CD18 CD18-54
Все больные II стадия РМЖ, п=64 123,10±38,00 99,00±51,20 84,30±41,10* 104,20±30,00 122,15±20,00
Группа №1,п=58 105,00±30,30** 93,30± 23,83** 76,20±0,10* ** 97,20±31,18** 82,10±13,00* **
Группа №2,п=6 296,20±77,40* ** 152,15±43,00* ** 164,25±40,00* ** 165,00±48,10* ** 499,00±70,40* **
* статистически достоверные различия по сравнению с группой доноров (р< 0,05); ** статистически достоверные различия между группами нелеченных больных и больных после лечения (р < 0,05)
Выявлены пониженные показатели содержания сывороточного уровня растворимого антигена СБ 54 в 1,1 раза в группе №1 и повышенные значения уровня СБ54 в 1,6 раза в образцах сывороток крови группы №2 (р<0,05). Установлено, что сывороточный уровень растворимого СБ 18 в группе №1 почти не отличался от показателей данного маркера у здоровых доноров, а в образцах сывороток крови больных группы №2 относительное содержание сывороточного уровня растворимого ИЬЛ I класса было повышенным в 1,7 раза (р<0,05). Сывороточный уровень растворимого комплекса СБ18-СБ54 в группе №1 был в 1,5 раза ниже, а в группе №2 был выше в 5 раз, чем в контрольной группе доноров (р<0,05).
Заключение
Проведенный анализ растворимых антигенов выявил различия в сывороточном содержании растворимых молекул ИЬЛ!, растворимых антигенов СБ8, СБ54, растворимых комплексов СБ8-ИЬЛ I, СБ18-СБ54 у леченых и нелеченых больных РМЖ II стадии. Повышенные показатели данных маркеров выявлены у пациенток, получавших неоадью-вантную терапию перед хирургическим удалением опухоли.
Литература
1. Алясова A.B., Пегое Р.Г., Михайлова Е.М. и др. Растворимые формы молекул HLA I класса в сыворотке крови больных раком молочной железы и легкого // Нижегородский медицинский журнал. -2008. - № 4. - С. 98-103.
2. Барышников А.Ю., Тоневицкий А.Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. - М.: Медицина, 1997. - 212 с.
3. Барышников А.Ю. Моноклональные антитела серии ИКО к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека // Гематология и трансфузиология. - 1990. - № 8. - С. 4.
4. Барышников А.Ю., Голубцова Н.В, Бурова О. С. и др. Экспрессия антигена CD44 у больных метастатической меланомой кожи // Российский биотерапевтический журнал. - 2013. - Т. 12, № 4. - С. 17-20.
5. Варшавский Л.В., Алясова A.B., Барышников А.Ю., Новиков В.В. Мембранные и растворимые формы CD50 (ICAM3) антигена при раке молочной железы// Российский биотерапевтический журнал. -2004. - Т. 3, № 2. - С. 16-7.
6. Вишневская Т.В., Масалов О.В., Шкурко Т.В. и др. Растворимые формы дифференцировочных антигенов в сыворотке крови больных гепатитом С // Медицинская иммунология. - 2005. - Т. 7, № 1. - С. 33-40.
7. Голенков А.К., Митина Т.А., Новиков В.В. и др. Клиническое значение роли растворимых молекул адгезии (sCD50-ICAM-3), апоптоза (sCD95) и sHLA класса I при лимфопролиферативных заболеваниях // Российский биотерапевтический журнал. - 2002. - Т. 1, № 1. - С. 60-4.
8. Голубцова Н.В., Михайлова И.Н., Новиков В.В. и др. Изменение сывороточного содержания растворимых молекул HLA I класса, антигена CD8 и растворимого комплекса HLA I-CD8 у больных дис-семинированной меланомой в процессе вакцинотерапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 3. - С. 41-5.
9. Голубцова Н.В., Михайлова И.Н., Новиков В.В и др. Прогностическое значение сывороточных уровней растворимых молекул HLA I класса и антигена CD8 у больных диссеминированной меланомой // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 4. - С. 103-6.
10. Голубцова Н.В., Степанова Е.В., Бармашов A.B. и др. Определение специфических противоопухолевых антител у больных диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 3. - С. 25-8.
11. Гостюжова Е.А., Ликов В.Ф., Караулов A.B., Новиков В.В. Особенности содержания растворимых молекул HLA I класса, CD8 антигена и их комплексов при хроническом миелолейкозе // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2008. - № 3. - С. 33-8.
№ 1/том 13/2014 РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ИЗМЕНЕНИЕ СЫВОРОТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ...
I2.
Коровушкин К.А., Бабаев A.A., Котельницкая Т.В. и др. Роль структурно-функциональных форм растворимых дифференцировочных антигенов молекул в дифференциальной диагностике миомы матки и рака эндометрия // Современные технологии в медицине. - 2010. - № 2. - С. 53-7. Новиков В.В., Караулов A.B., Барышников А.Ю. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы // Иммунология. - 2007. - № 4. - С. 249-53.
Новиков В.В., Евсегнеева И.В. Новые дифференцировочные антигены человека, утвержденные на VII Международном воркшопе // Российский биотерапевтический журнал. - 2003. - Т. 2, № 3. - С. 3-6. Новиков В.В., Евсегнеева И.В., Караулов A.B., Барышников А.Ю. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы при социально значимых инфекциях. Исследование их роли при вирусных инфекциях // Российский биотерапевтический журнал. - 2005. -Т. 4, № 3. - С. 131-45. 16. Новиков В.В., Караулов A.B.. Барышников А.Ю. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы. - М.: Изд-во МИА, 2008. - 243 с.
Новиков В.В., Караулов A.B.. Барышников А.Ю. Особенности структурного состояния пула растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы // Молекулярная медицина. - 2009. -№ 4. - С. 27-33.
Новиков В.В., Бабаев A.A., Кравченко Г.А. Растворимые ассоциаты молекул адгезии CD54 и CD18 в сыворотке крови человека // Иммунология. - 2008. - № 4. - С. 220-3.
Новиков В.В., Бурова О.С., Королев В.В. и др. Сывороточный уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы при меланоме // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. -Т. 3, № 2. - С. 6.
Пегое Р.Г., Алясова A.B., Новиков В.В., Барышников А.Ю. Содержание растворимой формы молекул HLA I класса в сыворотке крови больных раком лёгкого// Клиническая лабораторная диагностика. -2009. - № 2. - С. 38-40.
Птицын Ю.С., Лебедев М.Ю., Королев В.В. и др. Различия в содержании сывороточных форм CD38 антигена при иммунологических нарушениях разной этиологии // Медицинская иммунология. -1999. -Т. 1, № 3. - С. 82.
Тагиров О.Т., Кравченко Г.А., Козлов А.Ю. и др. Растворимый Fas(CD95) белок, ингибирующий апоптоз, как прогностический биомаркер течения рака молочной железы // Вестник Нижегородского университета им. Н.И.Лобачевского. Серия: Биология. - 2001. - № 1. - С. 21-5. 23. Evans B.J., McDovall A Taylor P. et al. Shedding of lymphocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) in a human inflammatory response // Blood. - 2006. - 107. - P. 3593-9.
LebedevM.Ju., Vilkov S.A., SholkinaM.N. et al. Peripheral blood lymphocyte immunophenotype and serum concentration of soluble HLA class I in burn patients // Burn. -2003. - 29(2). - P. 123-8. Ptisyn Y.S., Bornyakova L.A., Baryshnikov A.Yu. et al. A soluble form of FaS/apo-1 (CD95) antigen in the serum of viral hepatitis patients // International Journal on Immunorebilitation. - 1999. - 14. - P. 110.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИИ
I3.
I4.
I5.
I7.
I8.
I9.
20.
2I.
22.
24.
25.
РМЖ BC
- рак молочной железы
- Breast cancer
№ I/том I3/20I4
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
