CC BY
48
РЕГУЛЯЦИЯ ИММУНИТЕТА
РЕГУЛЯЦИЯ ИММУНИТЕТА
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 612.017.1:579.22].083.3
Д. Г. Дерябин1, Н. А. Романенко1, Г. И. Эль-Регистан2 ИЗМЕНЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ АНТИТЕЛ В ПРИСУТСТВИИ
дякилоксиБЕНзолов - химических аналогов бактериальных ауторегуляторных молекул
1ГОУ ВПО Оренбургский государственный университет (460018, г. Оренбург, пр. Победы, д. 13); 2Институт микробиологии Ран им. С. Н. Виноградского (117312, г Москва, пр. 60-летия Октября, д. 7, корп. 2)
Установлено, что химические аналоги бактериальных ауторегуляторных молекул из группы алкилоксибензолов при взаимодействии с антителами (АТ) способны изменять характер их взаимодействия с антигенами. Спектр регистрируемых эффектов включает блокирование связывания с гомологичным и перекрестно реагирующими антигенами, а также частичное изменение специфичности АТ с формированием возможности их взаимодействия с исходно не реагирующими гетерологичными антигенами.
Ключевые слова: антитела, алкилоксибензолы, гаптены, специфичность антител, блокирование антител D.G., Deryabin, N.A., Romanenko, G.I. El-Registan
CHANGING THE SPECIFICITY oF ANTIBoDIES IN THE PRESENCE oF ALKYL PHENYL ALCoHoL - CHEMICAL analogs of bacterial autoregulation molecules
It is established that the chemical analogues of bacterial autoregulation molecules from the group of alkyl phenyl alcohol when interacting with antibodies are capable of changing the nature of their interaction with antigens. The range of reported effects include blocking the binding with homologic and cross-reactive antigens, as well as the partial change of the specificity of antibodies with the formation of their possible interaction with initially unresponsive heterological antigens.
Keywords: antibodies, alkyl phenyl alcohol, haptens, the specificity of antibodies, blocking antibodies
Алкилоксибензолы (АОБ) представляют собой обширную группу вторичных продуктов липидного обмена, образуемых бактериями, грибами и растениями [21]. Особенности физико-химических характеристик АОБ определяют их способность к нековалентным взаимодействиям с различными биологическими макромолекулами, включая возможность функциональной модификации ферментных и неферментных белков [8, 20]. Следствием этого является роль АОБ в микробных системах как ауторегуляторов с функциями адап-тогенов [10], а также как индукторов перехода воспринимающих их бактериальных клеток в анабиотическое состояние [1, 22], в том числе через ингибирование мембранных и цитозольных ферментативных процессов [6, 14]. При этом свойствами адаптогенов преимущественно обладают короткоцепочечные, а индукторов анабиоза - длинноцепочечные АОБ [13].
В связи с тем, что АОБ в значимом количестве могут поступать в организм человека и животных с пищей, а также эндогенно образовываться некоторыми представителями микробиоценоза, их присутствие в биологических жидкостях и тканях достигает нано- и микромолярных концентраций [17, 19]. Одновременно универсальность молекулярной организации и функциональной активности АОБ определяет возможность развития ряда обусловленных ими регуляторных эффектов и в названных гетерологичных системах. В частности, известными примерами являются изменение каталитической активности ряда ферментных белков животного происхождения в присутствии АОБ [9, 11], а также вызываемое
Дерябин Дмитрий Геннадьевич - д-р мед. наук, проф., зав. каф., тел. 8(909)613-11-63, e-mail: [email protected]
ими снижение аффинности рецепторов к фибриногену на поверхности тромбоцитов [16].
В подобном контексте достаточно вероятной представляется и воздействие АОБ на имеющие белковую природу факторы иммунитета [5]. Подтверждением данного предположения стали результаты наших исследований, демонстрирующие изменения функциональной активности [3] и стабильности [4] антител (АТ) как результата их взаимодействия с химическими аналогами АОБ микробного происхождения. При этом регистрируемые эффекты были делокализованы по молекуле АТ, затрагивая его как Fab-, так и Fc-фрагменты [12], а также включали в себя модификацию поверхностных свойств антигенов [2].
Полученные результаты стали основанием для продолжения исследований в обозначенном направлении, определив цель настоящей работы - установить влияние химических аналогов бактериальных ауторегуляторных молекул из группы АОБ на специфичность АТ, оцениваемую на основе количественных параметров их связывания с гомологичными и гетерологичными антигенами. Методологическим же условием для выполнения данного исследования стало применение технологии конкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием в качестве модельных антигенов тиреоидных и стероидных гормонов, что позволило оценить преимущественное воздействие АОБ именно на антигенсвя-зывающие центры АТ.
Материалы и методы. Использованные в работе иммунные белки были представлены препаратами моноклональных АТ, специфичных к трийодтиронину (Т3), тироксину (Т4), эстрадиолу (ЭД), прогестерону (ПГ) и кортизолу (КЗ). Названные АТ были иммобилизованы в лунках полистироловых планшетов для ИФА (НВО "Иммунотех", Россия).
В качестве аналогов бактериальных ауторегуляторных
- 27 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013
молекул использовали химически синтезированные гомологи АОБ, различающиеся длиной алкильного радикала: метилоксибензол (С1-АОБ), пропилоксибензол (С3-АОБ), гексилоксибензол (С6-АОБ) и додецилоксибензол (С-АОБ) со степенью очистки 99,9% (табл. 1). Непосредственно перед проведением экспериментов готовили серии водных растворов данных веществ (в случае с С12-АОБ растворов в 5% этаноле) в концентрации 10-5М, 2,5-10-5М, 5-10-5М, 10-4М, 2,540-4М, 5-10-4М и 10-3М. Растворы АОБ в объеме 50 мкл вносили в лунки полистироловых планшетов с сорбированными АТ. Для формирования устойчивых взаимодействий в системе АТ - АОБ планшеты инкубировали при 37°С в течение 60 мин, после чего несвязанные АОБ удаляли однократной отмывкой растворителем. В контрольные варианты вносили аналогичные объемы дистиллированной воды или 5% раствора этанола и выдерживали при тех же условиях.
Связывание нативных и модифицированных АОБ АТ различной специфичности с гомологичными и гетерологичными антигенами исследовали методом ИФА, внося в лунки планшетов по 50 мкл конъюгантов Т3, Т4, ЭД, ПГ или КЗ с пероксидазой. После 60 мин инкубации при 37°С осуществляли повторную отмывку, в лунки планшета вносили по 100 мкл раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина, инкубировали в течение 15 мин при 22-24°С, после чего вносили по 100 мкл стоп-реагента. Количество связавшихся конъюгантов оценивали на основании измерения оптической плотности при X = 450 нм на планшетном ридере "Униплан" (ЗАО "Пикон", Россия). Относительные показатели связывания гомологичных и гетерологичных антигенов с нативными и модифицированными АОБ АТ рассчитывали по формуле:
ОП
опыт
-------100%,
Таблица 1
АОБ - химические аналоги микробных ауторегуляторов
Показатель Структурная формула Молекулярная масса, Производитель
Cj-АОБ т о Л 124 "Sigma", США
С3-АОБ но, но/ СН2 СН3 152 "Enamine", Украина
C -АОБ 6 но (О) сн2 сн2 сн3 но' сн2 сн2 сн2 194 "Sigma", США
с12-аоб но (О) сн2 СН2 СН2 СН2 СН2 СНз но сн2 сн2 сн2 сн2 сн2 сн2 278 "Enamine", Украина
ОП
где ОП - оптическая плотность соответствующего контрольного, а ОПопыт - опытного (модифицированного) образца.
Все эксперименты выполнили как минимум в пяти повторностях. Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики с использованием пакета компьютерных программ Statistica v.8 ("StatSoft Inc.", США).
результаты и обсуждение. В первой серии экспериментов оценили количественные характеристики специфического взаимодействия модифицированных АОБ АТ с соответствующими антигенами. Полученные результаты в значительной степени согласовались с обнаруженными ранее эффектами АОБ на функциональную активность данных иммунных белков [2, 3], заключающимися в блокировании взаимодействия в гомологичных парах антиген - антитело. При этом дополнительно могли быть констатированы зависимости блокирования антигенсвязывающей способности АТ как от особенностей молекулярной организации АОБ, так и от исходной специфичности АТ.
Установили, что выраженность блокирования возрастает с увеличением длины алкильного радикала модифицирующего АОБ, определяющего степень гидрофобности данной молекулы (см. рисунок). Так, короткоцепочечный С1-АОБ не оказал влияния ни в одной из исследованных систем (см. рисунок, а), а С3-АОБ достоверно (на 13,9 ± 0,7%; p < 0,05) снижал показатели специфического связывания только АТ к ЭД (см. рисунок, б). На этом фоне выраженные эффекты зафиксировали при использовании С6-АОБ, блокирующего АТ почти ко всем антигенам, а в наибольшей степени оказывающего воздействие на специфическое связывание Т3 и ЭД (на 29,4 ± 1,4 и 25,8 ± 1,2 % от контрольных значений;p < 0,001) (см. рисунок, в). Наконец, наиболее длинноцепочечный го-
молог С12-АОБ также значимо блокировал АТ к Т3, Т4 и ЭД, где относительные показатели связывания в большинстве подобных случаев оказывались ниже контрольных значений на 16-26 % (см. рисунок, г).
Одновременно использование в настоящей работе достаточно широкого спектра реакционных систем позволило выявить частичную зависимость выраженности блокирующих эффектов АОБ не только от их структуры и концентрации, но и от специфичности взаимодействующей пары антиген - АТ. Так, в вариантах модификации АТ длинноцепочечными гомологами С6-АОБ и С12-АОБ наиболее устойчивое и воспроизводимое подавление их связывания выявили в отношении ЭД и Т4, в то время как специфическое взаимодействие АТ к КЗ и ПГ с гомологичными антигенами оказалось относительно устойчивым к белокмодифицирующему воздействию названных АОБ (см. рисунок, в, г).
Полученные результаты могут рассматриваться как проявление прямого контакта АОБ с активными центрами АТ, что приводит к блокированию их специфического связывания с соответствующими антигенами. При этом вероятным механизмом подобного эффекта представляется взаимодействие неполярных алкильных радикалов АОБ с присутствующими в гипервариабельных участках АТ остатками ароматических аминокислот, на что указывает преимущественная выраженность блокирующих эффектов у длинноцепочечных гидрофобных гомологов АОБ. Одновременно предложенная модель предполагает возможность частичного изменения исходной структуры активных центров АТ, что наряду с подавлением связывания с гомологичными антигенами может обусловливать реагирование иммунных белков с иными "неродственными" молекулами.
Проверка данного предположения была начата нами с исследования исходных возможностей перекрестного реагирования в анализируемых системах антиген - АТ. Полученные результаты позволили констатировать, что в большинстве случаев используемые АТ демонстрировали высокую специфичность, которая характеризовалась менее чем 5% перекрестных реакций. На этом фоне умеренно выраженные реакции на уровне от 6,5 ± 0,5 до 7,4 ± 0,3% отметили в парах АТ к ЭД - КЗ, АТ к Т3-Т4 и некоторых других, что могло объясняться частичным сходством строения молекул гомологичного и перекрестно реагирующего антигенов. С этим же, возможно, связано наиболее выраженное перекрестное реагирование на уровне 32,7 ± 3,4% гомологичного взаимодействия, зарегистрированное в паре АТ к Т4-Т3.
На этом фоне предварительная модификация АТ АОБ до их взаимодействия с гетерологичными антигенами значительно влияла на частоту перекрестных реакций. При этом, как и
- 28 -
РЕГУЛЯЦИЯ ИММУНИТЕТА
Связывание АТ с гомологичными антигенами в присутствии различных концентраций Ц-АОБ (а), С3-АОБ (б), С6-АОБ (в) и С12-АОБ (г).
По оси абсцисс - концентрация (в 10-6 M) АОБ; по оси ординат - относительные показатели (в % от контроля) связывания конъюгантов Т3 (1), Т4 (2), КЗ (3), ПГ (4), ЭД (5).
в варианте специфического связывания, выявили зависимость регистрируемых эффектов от структуры АОБ, наиболее выраженных при использовании их длинноцепочечных гомологов, а также характера формируемых пар антиген - АТ.
Так, использование С1-АОБ изменяло количественные параметры взаимодействия только в паре АТ к ЭД - Т3, в диапазоне концентраций 5-10-5 - 10-3М увеличивая показатели связывания до 121,0 ± 5,2% исходного (р < 0,01). Другой короткоцепочечный гомолог С3-АОБ во всех вариантах постановки перекрестных реакций не вызывал достоверного изменения количественных показателей связывания. На этом фоне результатом белокмодифицирующего действия С6-АОБ явился значимый рост показателей связывания до 110,6 ± 4,1-128,3 ± 7,7% исходного (р < 0,05) в семи изначально слабо взаимодействующих парах: АТ к Т4 - ПГ, АТ к КЗ - Т3 и др. В свою очередь наиболее многочисленные и количественно выраженные эффекты зарегистрировали при использовании в качестве белкового модификатора длинноцепочечного гомолога С12-АОБ, обусловливающего в концентрации 10-3М достоверное усиление перекрестного реагирования в 11 из 20 сформированных пар антиген - АТ (табл. 2), в том числе во всех тех случаях, где аналогичный эффект зафиксировали при использовании С6-АОБ. При этом подобный эффект распространялся на АТ различной специфичности, среди которых максимальные показатели связывания демонстрировали модифицированные АТ С12-АОБ к Т4 при взаимодействии с ПГ, а также АТ к КЗ и ПГ при взаимодействии с Т4: до 151,1 ± 10,6% (р < 0,01), 173,6 ± 8,7% (р <
0,001) и 187,8 ± 15,0% (р < 0,01) ис-
носится к паре "АТ к ЭД - КЗ", природа умеренно выраженной реакции в которой определялась частичным сходством строения молекул гомологичного и перекрестно реагирующего антигенов (см. выше). На этом фоне модификация АТ к ЭД С6-АОБ незначительно, а С12-АОБ до 68 ± 5,4% (р < 0,01) подавляла их связывание с КЗ по сравнению с соответствующим контролем. При этом подобный эффект вновь может рассматриваться как проявление обусловленного модификацией АОБ изменения активного центра АТ, нарушающего его взаимодействие как со специфичным, так и с исходно перекрестно реагирующим антигеном.
Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о функциональной полимодальности АОБ, выполняющих в бактериальных популяциях и сообществах роль факторов межклеточной коммуникации [9, 14] и адапто-генов [13], а при взаимодействии с молекулярными факторами иммунной системы высших эукариот обусловливающих развитие ряда иммуномодулирующих эффектов. При этом особенности химического строения АОБ и вызванные ими эффекты позволяют частично уподобить их гаптенам - низкомолекулярным веществам, также способным блокировать образование комплексов антиген - АТ. Однако в отличие от "классических" гаптенов особенностями биологической активности АОБ являются, во-первых, блокирование анти-генсвязывающей способности АТ не одной, но различной специфичности, распространяющееся как на гомологичные, так и на перекрестно реагирующие антигены, во-вторых -
Таблица 2
ходных значений соответственно.
Однако влияние длинноцепочечных гомологов С6-АОБ и С12-АОБ в подобных системах не могло быть сведено только к повышению показателей связывания в исходно не реагирующих системах антиген -АТ. Напротив, в некоторых парах, где феномен перекрестного реагирования был выражен исходно, эффект названных АОБ вновь, как и в случаях специфического связывания, заключался в блокировании АТ. Сказанное в наибольшей степени от-
Связывание АТ с гетерологичными антигенами (% от контроля) после их взаимодействия с ^^ОБ в концентрации 10-3 М
Специфичность АТ Т3 Т4 КЗ ПГ ЭД
Т3 124,6 ± 6,2* 102,4 ± 8,2 128,9 ± 6,4** 127,6 ± 7,8*
Т4 89,4 ± 7,1 102,4 ± 6,1 151,1 ± 10,6** 126,7 ± 8,9*
КЗ 111,6 ± 6,7 173,6 ± 8,7*** 131,7 ± 10,4* 135,0 ± 8,1**
ПГ 100,0 ± 6,5 187,8 ± 15,0** 106,8 ± 11,7 135,6 ± 7,9**
ЭД 102,4 ± 8,2 136,8 ± 9,6* 68,0 ± 5,4** 107,5 ± 9,7
Примечание. * - р < 0,05; ** - р < 0,01; *** - р < 0,001 по отношению к показателям в контроле.
- 29 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013
индуцируемое ими частичное изменение специфичности АТ, что обеспечивает возможность взаимодействия с рядом исходно не реагирующих гетерологичных антигенов. При этом как блокирование специфического связывания, так и индукция неспецифического взаимодействия в наибольшей степени характерны для длинноцепочечных гомологов АОБ, что позволяет рассматривать названные явления как проявление единого белокмодифицирующего механизма АОБ.
Одновременно представляется возможным констатировать, что изменение функциональной активности и специфичности белковых молекул в результате их модификации АОБ, по-видимому, является универсальным эффектом, распространяющимся как на иммунные, так и на ферментные белки, в частности на лизоцим [11] и оксигеназы [20]. При этом ранее полученные данные о влиянии АОБ на внутримолекулярную динамику лизоцима [7] свидетельствуют о реализации биологической активности АОБ через повышение внутримолекулярной подвижности белковой глобулы, сопровождающееся увеличением флюктуаций в области ее активного центра. Для ферментных белков это обусловливает снижение их характеризуемой константой Михаэлиса сродства к типичному субстрату с одновременным расширением спектра субстратной специфичности. В частности, вызванная АОБ модификация лизоцима наряду с изменением его активности к бактериальному пептидогликану результировалась в выраженной стимуляции гидролитической активности в отношении коллоидного хитина [11]. Проводя же аналогию между эффектами АОБ в отношении ферментных и иммунных белков, в качестве возможного следствия повышения флюктуаций в области активного центра последних считаем возможным назвать снижение их аффинности и определяемой этим силы взаимодействия с гомологичным антигеном [3], что в настоящей работе проявляется через блокирование специфического связывания. В свою очередь те же индуцируемые АОБ флюктуации в области активного центра АТ представляются в качестве причины, определяющей частичное изменение (расширение) их специфичности с возможностью реагирования с некоторыми гетерологичными антигенами.
Клиническая значимость подобных эффектов определяется возможностью возникновения иммунопатологических состояний, примерами которых являются индуцируемые АОБ растительного происхождения аллергические контактные дерматиты [15, 18]. При этом, помимо характерного для гаптенов патогенеза, подобных аутоиммунных состояний другим вероятным механизмом может являться индуцируемое АОБ частичное изменение специфичности пред-существующих АТ, потенциально сообщающее им свойство аутореактивности. Другим же важным именно для микроорганизмов проявлением биологической активности АОБ представляется блокирование специфического связывания АТ с бактериальными антигенами, потенциально позволяющее последним уклоняться от контакта с активируемыми АТ гуморальными и клеточными механизмами иммунологической защиты.
Исследования выполнены при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект 11-04-12057-офи-м).
ЛИТЕРАТУРА
1. Демкина Е. В., Соина В. С., Эль-Регистан Г. И., Звягинцев Д. Г. Репродуктивные покоящиеся формы Arthrobacter globiformis // Микробиология. - 2000. - Т. 69, № 3. - С. 377-382.
2. Дерябин Д. Г., Михайленко Н. А., Кобзева Т. Г. Дисперсионный анализ эффектов алкилоксибензолов в системах ферментсубстрат и антиген-антитело // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2008. - № 12. - С. 143-147.
3. Дерябин Д. Г., Михайленко (Романенко) Н. А., Эль-Регистан Г. И. Влияние алкилоксибензолов на антигенсвязывающую способность антител // Микробиология. - 2009. - Т. 78, № 5. - С. 629-635.
4. Дерябин Д. Г., Романенко Н. А., Эль-Регистан Г. И. Влияние алки-
локсибензолов на функциональную и операционную стабильность антител // Микробиология. - 2010. - Т. 79, № 3. - С. 314-320.
5. Казацкая Ж. А., Николаева Н. В., Липова В. В., Шушпанова О. Н. Влияние алкилоксибензолов на некоторые иммунологические реакции in vitro // Паллиативная медицина и реабилитация. -
2005. - № 1. - С. 68.
6. Колпаков А. И., Ильинская О. Н., Беспалов М. М., Куприянова-Ашина Ф. Г., Гальченко В. Ф., Курганов Б. И., Эль-Регистан Г. И. Стабилизация ферментов ауторегуляторами анабиоза как один из механизмов устойчивости покоящихся форм микроорганизмов // Микробиология. - 2000. - Т. 69, № 2. - С. 224-330.
7. Крупянский Ю. Ф., Нокс П. П., Лойко Н. Г., Абдулнасыров Э. Г., Коротина О. А., Степанов С. А., Захарова Н. И., Николаев Ю. А., Эль-Регистан Г. И., Рубин А. Б. Влияние химических шапе-ронов на свойства лизоцима и белка реакционного центра бактерий Rhodobacter sphaeroides // Биофизика. - 2011. - Т.56, № 1. - С. 13-30.
8. МартиросоваЕ. И., Карперкина Т. А., Эль-Регистан Г. И. Модифи-
кация ферментов естественными химическими шаперонами микроорганизмов // Микробиология. - 2004. - Т. 73, № 5. - С. 708-715.
9. Николаев Ю. А., Лойко Н. Г., Степаненко И. Ю., Шаненко Е. Ф., Мартиросова Е. И., Плакунов В. К., Козлова А. Н., Борзенков И. А., Коротина О. А., Родин Д. С., Крупянский Ю. Ф., Эль-Регистан Г. И. Изменения физико-химических свойств белков, модифицированных алкилоксибензолами // Прикладная биохимия и микробиология. - 2008. - Т. 44, № 2. - С.159-167.
10. Николаев Ю. А., Мулюкин А. Л., Степаненко И. Ю., Эль-Регистан Г. И. Ауторегуляция стрессового ответа микроорганизмов // Микробиология. - 2006. - Т. 75, № 4. - С.489-496.
11. Петровский А. С., Дерябин Д. Г., Лойко Н. Г., Михайленко Н. А., Кобзева Т. Г., Канаев П. А., Николаев Ю. А., Крупянский Ю. Ф., Козлова А. Н., Эль-Регистан Г. И. Регуляция алкилоксибензола-ми функциональной активности лизоцима // Микробиология. -
2009. - Т. 78, № 2. - С. 176-185.
12. Романенко Н. А., Терехова М. С., Дерябин Д. Г. Влияние алки-локсибензолов на функциональную активность Fc-фрагментов антител // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2009. - № 12. - С. 111-114.
13. Эль-Регистан Г. И., Мулюкин А. Л., Николаев Ю. А., Сузина Н. Е., Гальченко В. Ф., Дуда В. И. Адаптогенные функции внеклеточных ауторегуляторов микроорганизмов // Микробиология. -
2006. - Т. 75, № 4. - С.446-456.
14. El-Registan G. I., Mulyukin A. L., Nikolaev Y. A., Stepanenko I. Yu., Kozlova A. N., Martirosova E. I., Shanenko E. F., Strakhovskaya M.
G. , Revina A. A. The role of microbial low-molecular-weight autoregulatory factors (alkylhydroxybenzenes) in resistance of microorganisms to radiation and heat shock // Advances in Space Research.
- 2005. - Vol. 36, № 9. - P.1718-1728.
15. Hershko K., Weinberg I., Ingber A. Exploring the mango - poison ivy connection: the riddle of discriminative plant dermatitis // Contact dermatitis. - 2005. - Vol. - 52. P. 3-5.
16. Kozubek A., Wroblewski Z. Cereal grain long chain amphiphilic re-sorcinolic lipids inhibit significantly binding of fibrinogen by platelets whereas short chain resorcinolic lipids and fatty acids do not // Studia Biophysica. - 1990. - N 139. - P 177-181.
17. Landberg R., Linko A.-M., Kamal-Eldin A., Vessby B., Adlercreutz
H. , Aman P. Human plasma kinetics and relative bioavailability of al-kylresorcinols after intake of rye bran // Journal of nutrition. - 2006.
- Vol. 136. - P. 2760-2765.
18. OkaK., Saito F., Yasuhara T., Sugimoto A. A study of cross-reactions between mango contact allergens and urushiol // Contact dermatitis.
- 2004. - Vol. 51. - P. 292-296.
19. Ross A. B., Redeuil K., Vigo M., Rezzi S., Nagy K. Quantification of alkylresorcinols in human plasma by liquid chromatography/tandem mass spectrometry // Rapid communications in mass spectrometry. -
2010. - Vol. 24, N 5. - P. 554-560.
20. Solyanikova I. P., Konovalova E. I., El-Registan G. I., Golovleva L. A. Effect of alkylhydroxybenzenes on the properties of dioxygenases // Journal of Environmental Science and Health. Part B. - 2011. -Vol. 45. - P. 810-818.
21. Stasiuk М., Kozubek А. Biological activity of phenolic lipids // Cellular and molecular life sciences. - 2010. - Vol. 67. - P. 841-860.
22. Suzina N. E., Dmitriev V. V., Shorokhova A. P., Duda V. I., Mulyukin A. L., Nikolaev Y. A., Bobkova Y. S., BarinovaE. S., Plakunov V. K., El-Registan G. I. The structural bases of long-term anabiosis in nonspore-forming bacteria // Advances in Space Research. - 2006. - Vol. 38, N 6. - P. 1209-1219.
Поступила 14.05.12
- 30 -
