CC BY
3
© Коллектив авторов, 2023
Низяева Н.В.1, Амирасланов Э.Ю.2, Артемьева К.А.1, Степанова И.И.1, Шамаракова М.В.2
Изменение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 в миометрии при преэклампсии
1 Научно-исследовательский институт морфологии человека имени академика А.П. Авцына Государственного научного центра Российской Федерации - Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 119991, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В. И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Преэклампсия (ПЭ) характеризуется избыточной и прогрессирующей активацией иммунной системы на фоне повышения уровня провоспалительных цито-кинов и антиангиогенных факторов в плаценте, а также в эндотелии сосудов у беременных. При этом основное внимание исследователи уделяют патологии плаценты, в то время как состояние миометрия при этой патологии остается неясным. Паттерн-распоз-нающие рецепторы (ПРР): Toll-подобные (TLRs), NOD-подобные (NLRs), RIG-подобные (RLRs), а также DAI (Z-DNA-binding protein 1, ZBP-1) - играют важную роль во врожденном иммунитете и экспрессируются не только в иммунных, но и в неиммунных клетках. Предполагается, что некоторые клинические проявления ПЭ вызваны основными общими воспалительными механизмами, регулируемыми ПРР.
Цель исследования - оценить уровень экспрессии ПРР (TLR8, NOD-1, RIG-1 и ZBP-1) в миоцитах, эндотелии и в фибробластоподобных клетках (ФБК) стенки матки при ПЭ и неосложненной беременности.
Материал и методы. Исследование выполнено на образцах миометрия, полученных во время кесарева сечения (КС) с передней стенки матки 22 женщин репродуктивного возраста (18-43 лет), на сроке гестации 27-39 нед, причем у 12 пациенток диагностировали ПЭ (6 пациенток с тяжелым течением ПЭ, 6 - с умеренным). Группу сравнения составили 10 женщин с неосложненной доношенной беременностью. На серийных срезах образцов ткани матки было выполнено иммуногистохимическое (ИГХ) исследование с применением поликлональных антител к NOD-1, TLR8, ZBP-1 (DLM/DAI), RIG-1.
Результаты. В результате исследования у пациенток с неосложненной беременностью выявили однородную экспрессию всех исследуемых ПРР в гладкомышечных клетках, эндотелии сосудов и ФБК. При ПЭ обнаружили выраженную неравномерность окрашивания миометрия. При умеренной ПЭ отмечали усиление экспрессии ZBP-1 в ФБК и эндотелии, NOD-1 в эндотелии относительно группы сравнения. Тяжелая ПЭ, в свою очередь, в отличие от умеренной, характеризовалась низкой экспрессией RIG-1 в эндотелии и ФБК, пониженной экспрессией NOD1 и усилением экспрессии TLR8 в эндотелии сосудов.
Заключение. При ПЭ значительно меняются ИГХ особенности экспрессии рецепторов врожденного иммунитета в миометрии, что дает новое понимание патогенеза ПЭ.
Ключевые слова: миометрий; преэклампсия; паттерн-распознающие рецепторы; фибробластоподобные клетки; воспаление
Статья получена 07.06.2023. Принята в печать 20.07.2023
Для цитирования: Низяева Н.В., Амирасланов Э.Ю., Артемьева К.А., Степанова И.И., Шамаракова М.В. Изменение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 в миометрии при преэклампсии. Иммунология. 2023; 44 (5): 607-615. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2023-44-5-607-615
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Низяева Н.В., Шамаракова М.В.; сбор и обработка материала - Амирасланов Э.Ю., Артемьева К.А., Степанова И.И.; статистическая обработка - Артемьева К.А.; написание текста - Артемьева К.А., Низяева Н.В.; редактирование - Шамаракова М.В.
Для корреспонденции
Артемьева Ксения Александровна -кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории патологии репродукции НИИ морфологии человека им. акад. А.П. Авцына ГНЦ РФ ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: sunset_whitch@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-1014-752X
Nizyaeva N.V.1, Amiraslanov E.Yu.2, Artem'eva K.A.1, Stepanova I.I.1, Shamarakova M.V.2
Changes of the expression of innate immunity receptors NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 in myometrium during preeclampsia
1 A.P. Avtsyn Research Institute of Human Morphology of «B.V. Petrovsky National Research Centre of Surgery» of the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, 119991, Moscow, Russian Federation
2 V.I. Kulakov National Medical Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. Preeclampsia (PE) is characterized by excessive and progressive activation of the immune system against the background of increased levels of pro-inflammatory cyto-kines and antiangiogenic factors in the placenta as well as in vascular endothelium in pregnant women. At the same time, researchers focus on the pathology of the placenta, while the state of the myometrium in this pathology remains unclear. Pattern recognition receptors (PRRs): Toll-like (TLRs), NOD-like (NLRs), RIG-like (RLRs) and DAI (DNA-binding protein 1, ZBP-1) play an important role in innate immunity and are expressed not only in immune, but also in non-immune cells. It is assumed that some of the clinical manifestations of PE are caused by common underlying inflammatory mechanisms regulated by PRRs.
Aim - to analyze the expression of TLR8, NOD-1, RIG-1 and ZBP-1 in myocytes, endothelium and mesenchymal fibroblast-like cells (FBC) in uterine wall during PE.
Material and methods. The study was performed on myometrial samples obtained during caesarean section (CS) from the anterior wall of the uterus of 22 women of reproductive age (1843 years), at a period of 27-39 weeks of gestation, of which 12 patients were diagnosed with PE (6 patients had severe PE, 6 - moderate). The group of comparison consisted of 10 women with uncomplicated full-term pregnancy. An immunohistochemical (IHC) study was performed on serial sections of the uterus using polyclonal antibodies to NOD-1, TLR8, ZBP-1 (DLM/DAI), RIG-1.
Results. The study in the patients with uncomplicated pregnancy revealed a uniform expression of all the examined PRRs in smooth muscle cells, vascular endothelium and FBC. In PE we detected a pronounced irregularity in staining of myometrium. In moderate PE, an increase in the expression of ZBP-1 in the FBC and endothelium and NOD-1 in the endothelium was noted relative to the group of comparison. Severe PE, in turn, unlike moderate PE, was characterized by low expression of RIG-1 in the endothelium and FBC, decreased expression of NOD1, and increased expression of TLR8 in the vascular endothelium.
Conclusion. IHC features of innate immunity receptor expression in the myometrium are significantly altered in PE, providing new insights into the pathogenesis of PE.
Keywords: myometrium; preeclampsia; pattern-recognizing receptors; fibroblast-like cells; inflammation
Received 07.06.2023. Accepted 20.07.2023.
For citation: Nizyaeva N.V., Amiraslanov E.Yu., Artem'eva K.A., Stepanova I.I., Shamarakova M.V. Changes of the expression of innate immunity receptors NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 in myometrium during preeclampsia. Immu-nologiya. 2023; 44 (5): 607-15. DOI: https://doi.org/10.33029/1816-2134-2023-44-5-607-615 (in Russian)
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. Authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Research conception and design - Nizyaeva N.V., Shamarakova M.V.; material collection and processing - Amiraslanov E.Yu., Artem'eva K.A., Stepanova I.I.; statistical processing - Artem'eva K.A.; text writing - Artem'eva K.A., Nizyaeva N.V.; editing - Shamarakova M.V.
For correspondence
Ksenia A. Artem'eva -PhD, Senior Researcher of the Reproduction Pathology Laboratory, A.P. Avtsyn RIHM, B.V. Petrovsky NRCS, MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: sunset_whitch@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-1014-752X
Введение
Известно, что при беременности уровень воспалительного ответа может изменяться, значительно возрастая при ее патологии. К одной из таких относится преэклампсия (ПЭ), характеризующаяся повышением
артериального давления de novo выше 140/90 мм рт.ст. и появлением в моче > 0,3 г белка в сутки [1]. Наиболее изученной причиной развития ПЭ является слабая инвазия трофобласта и связанное с ней неполноценное ремоделирование спиральных артерий. Основное вни-
Низяева Н.В., Амирасланов Э.Ю., Артемьева К.А., Степанова И.И., Шамаракова М.В. Изменение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета N00-1, ТЬИ8, 7БР-1, МО-1 в миометрии при преэклампсии
мание при этом исследователи уделяют изменениям, происходящим в плаценте [2], в то время как состояние миометрия при этой патологии остается неясным. В свою очередь, можно предположить, что ремоделиро-вание спиральных артерий матки - процесс, в котором инвазивный трофобласт и миометрий оказывают друг на друга определенное взаимовлияние.
Женщины с преэкламптической беременностью имеют до 8 раз более высокий риск сердечно-сосудистых заболеваний в более позднем возрасте. Генетические, клинические и молекулярные методы исследования подтверждают общие основные воспалительные механизмы этих заболеваний [3]. Рецепторы распознавания образов, или паттерн-распознающие рецепторы (ПРР), непосредственно воспринимают воспалительные стимулы и активируют врожденные иммунные механизмы.
Толл-подобные рецепторы (Toll-like receptors, TLR) образуют основное семейство ПРР, участвующих во врожденном иммунитете. На границе матери и плода TLR экспрессируются не только в иммунных, но и в неиммунных клетках, таких как трофобласт и деци-дуальные клетки. Их экспрессия варьирует в зависимости от стадии беременности [4].
Предполагается, что некоторые клинические проявления ПЭ вызваны общими основными воспалительными механизмами, регулируемыми ПРР. ПРР активируют воспалительные реакции путем распознавания эндогенных молекулярных паттернов, высвобождаемых из поврежденных или погибших клеток и тканей, включая продукты деградации компонентов внеклеточного матрикса, белки теплового шока, нуклеиновые кислоты и др.
Известно, что при ПЭ эти связанные с повреждением паттерны способствуют как местному плацентарному, так и системному воспалению и эндотелиальной дисфункции [3]. Клетки трофобласта воспринимают инфекционные патоген-ассоциированные молекулярные паттерны через экспрессируемые TLR и NOD-и RIG-I (retinoic acid-inducible gene 1)-подобные рецепторы. Через эти рецепторы они также реагируют на неинфекционные стимулы, связанные с повреждением клеток собственного организма, такие как мочевая кислота, амфотерин, глюкоза и некоторые ауто-антитела [5].
Есть данные о том, что лигандами для ПРР могут стать фрагменты фетальной ДНК и РНК [6]. Значительное повышение уровня внеклеточной ДНК плода обнаружено в крови у женщин с ПЭ по сравнению с неосложненной беременностью. Фрагменты поврежденных плацентарных клеток, преимущественно тро-фобласта, попадают в материнский кровоток и являются источником бесклеточной ДНК плода и потенциальным лигандом для Z-ДНК-связывающего белка 1 (Z-DNA-binding protein 1, ZBP-1) [7]. Связывание рецепторов с лигандами запускает синтез провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухоли (ФНО) а, интер-лейкина (ИЛ)-1р, интерферона (ИФН) у, что приводит
к изменению воспалительного ответа по Th1- и Th17-типу, обусловливая нарушение иммунной толерантности, характерное для ПЭ [8].
В нормальном функционировании миометрия важную роль играют как гладкомышечные и эндоте-лиальные, так и фибробластоподобные клетки (ФБК). Показано, что различное содержание кислорода (в том числе ишемия, наблюдаемая в матке даже при нормальной беременности) влияет на морфологию мезен-химальных клеток [9]. Нарушение распределения ПРР в плаценте при ПЭ описано в литературе [6], однако их экспрессия в миометрии при патологии беременности практически не изучена.
Цель исследования - оценить уровень экспрессии ПРР (TLR8, NOD-1, RIG-1 и ZBP-1) в миоцитах, эндотелии и ФБК стенки матки при ПЭ и неосложненной беременности.
Материал и методы
Исследование выполнено на образцах миометрия 22 женщин репродуктивного возраста (18-43 лет), на сроке гестации 27-39 нед, причем у 12 пациенток диагностировали ПЭ (6 пациенток с тяжелым течением ПЭ, 6 - с умеренным). Группу сравнения составили 10 женщин с неосложненной доношенной беременностью. Образцы миометрия (размеры 1*0,5-0,7*0,3 см3) от всех групп женщин получены сходным образом во время кесарева сечения (КС) с передней стенки матки (вне области плацентарной площадки).
Критерии включения в группу с умеренной и тяжелой ПЭ определяли в соответствии с принятыми рекомендациями [1].
Критерии включения для группы сравнения: физиологическое течение беременности, родоразрешение путем КС по поводу рубца на матке после ранее выполненных оперативных вмешательств, неправильного положения плода, анатомически узкого таза, нарушения состояния плода по данным функциональных методов исследования, угрозы отслоения сетчатки и прогрес-сирования миопии. На проведение исследования получено положительное решение комиссии по этике биомедицинских исследований ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (протокол заседания комитета № 6 от 09.06.2016). Все женщины подписали добровольное информированное согласие на участие в исследовании.
Иммуногистохимическое исследование. После депарафинирования и регидратирования срезов матки проводили демаскировку антигенов кипячением в течение 30 мин в цитратном (pH 6,0) буфере (Dako, Denmark). Для блокирования эндогенной перокси-дазы срезы инкубировали в течение 5 мин с 3 % H2O2. Во избежание неспецифического связывания антител срезы инкубировали с 1 % раствором бычьего сывороточного альбумина при температуре 18-20 °С.
На серийных срезах образцов ткани матки было выполнено иммуногистохимическое (ИГХ) исследование с применением поликлональных антител к NOD-1
(1 : 100, Invitrogen, UK), TLR8 (1 : 250; GenTex, USA), ZBP-1 (DLM/DAI) (1 : 1000, Thermo Fisher Scientific, USA), RIG-1 (1 : 500; GenTex, USA).
Срезы инкубировали с первичными антителами при 4 °С в течение 1 сут. Для визуализации использовали набор Lab Vision™ UltraVision™ LP Detection System: HRP Polymer/DAB Plus Chromogen (TL-015-HD), Thermo Scientific™ (Cheshire, UK).
Для отрицательного контроля выполняли ИГХ-реакцию без экспозиции с первичными антителами. Положительный контроль был поставлен в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя.
По окончании инкубации с антителами срезы докрашивали гематоксилином Майера. Продукт реакции визуализировался в виде коричневого окрашивания в мембране и цитоплазме клеток. Экспрессию маркеров в ФБК оценивали без их подразделений на подтипы (фибробласты, фиброциты, телоциты). Интенсивность ИГХ-окрашивания клеток эндотелия, ФБК и миоцитов в миометрии оценивали при помощи системы анализа изображения в единицах оптической плотности на базе микроскопа Nikon Eclipse (Nikon, Япония) с использованием программного обеспечения NIS-Elements (Laboratory Imaging LTD, Чехия) при увеличении ><400. В каждом случае оценивали не менее 20 клеток каждого вида.
Статистический анализ. Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Sigma Stat 3.5 (Systat Software, Inc., США). Использовали метод парных сравнений с помощью непараметрического ^-критерия Манна-Уитни. Результаты представляли в виде медианы и квартилей. Различия считали значимыми приp < 0,05.
Результаты
У пациенток группы сравнения выявили равномерную экспрессию всех исследуемых ПРР в гладко-мышечных клетках, эндотелии сосудов и ФБК (рис., табл.). При ПЭ обнаружили выраженную неоднородность окрашивания структур миометрия. Отмечали снижение экспрессии NOD1 в ФБК при тяжелой ПЭ относительно показателей группы сравнения и повышение его экспрессии в эндотелии сосудов при умеренной ПЭ относительно показателей групп сравнения и тяжелой ПЭ (см. рис., табл.). Выявили повышение экспрессии TLR8 при тяжелой ПЭ в эндотелии сосудов относительно показателей групп сравнения и умеренной ПЭ (см. рис., табл.). Отмечали усиление экспрессии ZBP-1 в ФБК при умеренной и тяжелой ПЭ относительно контрольных показателей и в эндотелии при умеренной ПЭ относительно групп сравнения и тяжелой ПЭ (см. рис., табл.). При тяжелой ПЭ выявили значимое снижение экспрессии RIG-1 в миоцитах по отношению к группе сравнения и в эндотелии и ФБК относительно групп сравнения и умеренной ПЭ (см. рис., табл.).
Обсуждение
Активация ZBP-1, важного регулятора апоптоза, некроптоза и пироптоза, усиливает связанные с нек-
розом воспаление и иммунный ответ [10]. В нашей работе выявлено усиление экспресии 2БР-1 в ФБК при умеренной и тяжелой ПЭ и в эндотелии при умеренной ПЭ. О.Я. Баеу и соавт. также отмечали повышенную экспрессию 2БР-1 в синцитиотрофобласте при ПЭ [7].
ТЬЯ могут модулировать врожденный иммунный ответ и, по-видимому, являются факторами, способствующими патогенезу ПЭ. Обнаруженное нами повышение экспрессии ТЬЯ8 при тяжелой ПЭ в эндотелии сосудов миометрия согласуется с исследованиями последних лет, показавшими связь усиления трофобластической экспрессии ТЬЯ с патофизиологией ПЭ и ранней спонтанной потерей беременности [11].
Важно отметить, что биологические эффекты передачи сигналов ТЬЯ на множественных контактах матери и плода могут способствовать возникновению ряда патологий беременности, связанных с дисфункцией плаценты, включая ПЭ, задержку внутриутробного развития и преждевременные роды.
Так, повышение экспрессии ТЬЯ4 и ТЬЯ9 оказывает супрессивное действие на миграцию клеток трофо-бласта. Вследствие аберрантной плацентации, плацентарной гипоксии и чрезмерного клеточного апоптоза/ некроза могут активироваться ТЬЯ7 и ТЬЯ8, индуцируя секрецию №-кБ-производных провоспалительных цитокинов и хемокинов [12].
Известно, что регуляторные Т-клетки (Т^) индуцируют иммуносупрессивную микросреду. Передача сигналов ТЬЯ8, но не других ТЬЯ, напрямую обращала вспять супрессивную функцию, опосредованную пТ^-и у5Т^-клетками [13]. У пациентов с ПЭ наблюдается сниженное количество и увеличение провоспалительных субпопуляций ТЫ- и ТЫ7-лимфоцитов в периферической крови и в децидуальной оболочке. Снижение количества Treg, в свою очередь, ведет к повышению продукция эндотелина-1 и усилению вазо-констрикции маточных артерий [14]. Агонист ТЬЯ-8 ssRNA40 вызывал повышение уровня ИЛ-6 и ИЛ-8 в плаценте, хориодецидуальной оболочке и амнионе [15].
N001 способствует воспалению на границе между матерью и плодом при нормальной беременности и ПЭ и играет важную роль в прямом взаимодействии матери и плода [16]. Известно, что децидуальные стромальные клетки (ДСК) регулируют инвазию трофобласта с помощью еще не раскрытого полностью механизма. N001 может влиять на взаимодействие ДСК-трофо-бласт.
Показано, что ИЛ-8, продуцируемый ДСК, может играть роль в повышении инвазивности клеток трофобласта в децидуальную оболочку через N001/JNK-путь [17], а экспрессия ^ЫЬЯРЗ была выше в миометрии после экспериментального воздействия провоспалительными цитокинами ФНОа и ИЛ-1Р [18].
Мы отметили повышение экспрессии N001 в эндотелии сосудов при умеренной ПЭ относительно показателей групп сравнения и тяжелой ПЭ. Вероятно, N0D1-опосредованное воспаление при нормальной беременности регулируется локально, в то время как
Низяева Н.В., Амирасланов Э.Ю., Артемьева К. А., Степанова И.И., Шамаракова М.В. Изменение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета N00-1, ТЬИ8, 7БР-1, ШО-1 в миометрии при преэклампсии
Иммуногистохимические особенности экспрессии NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 в миометрии
А-В — экспрессия NOD1 при неосложненной беременности (А), при умеренной (Б) и тяжелой ПЭ (В); Г—Е — экспрессия TLR8 при неосложненной беременности (Г), при умеренной (Д) и тяжелой ПЭ (Е); Ж—И — экспрессия ZBP1 (DAI) при неосложненной беременности (Ж), при умеренной (З) при тяжелой ПЭ (И); К—М — экспрессия RIG-1 при неосложненной беременности (К), при умеренной ПЭ (Л) и при тяжелой ПЭ (М). Увеличение *400.
(Л 7
Интенсивность и локализация ИГХ-окрашивания рецепторов NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 в миометрии, усл. ед.: Ме (Q1;Q3)
Локализация окрашивания ПРР Группа исследования Значимость различий, р
неосложненная беременность (п = 10) 1 умеренная ПЭ (п = 6) 2 тяжелая ПЭ (п = 6) 3
Миоциты КСЮ-1 27 (26; 80) 32 (20; 48) 38 (24; 47) Р1—2 = 0,165 Р-з = 0,077 Р2_3 = 0,165
TLR8 20 (2; 22) 17 (4; 26) 20 (5; 25) Р1-2 = 0,721 р13 = 0,442 Р2 3 = 0,988
гвр-1 14 (12; 17) 20 (7; 26) 13 (8; 20) Р-2 = 0,133 Р13 = 0,264 Р2-3 = 0,257
RIG-1 10 (3; 17) 14 (7; 15) 8 (5; 12) Р1-2 = 0,423 р13 = 0,016 Р2_3 = 0,694
Фибробластоподобные клетки N00-1 30 (26; 38) 28 (22; 44) 26 (12; 30) Р- 2 = 0,303 р13 = 0,007 Р2-3 = 0,119
TLR8 13 (12; 17) 15 (12; 18) 18 (8; 28) Р1_2 = 0,589 Р13 = 0,394 Р2_3 = 0,566
гвр-1 10 (8; 17) 22 (17; 28) 24 (18; 32) р12 < 0,001 р13 < 0,001 Р2-3 = 0,234
RIG-1 20 (12; 24) 23 (17; 25) 14 (10; 19) Р1-2 = 0,234 р13 = 0,038 р-3 = 0,002
Эндотелий сосудов N0D-1 40 (24; 80) 66 (50; 76) 32 (22; 75) р12 = 0,015 Р-3 = 0,128 р23 = 0,002
TLR8 21 (17; 27) 18 (16; 29) 25 (19; 36) Р12 = 0,505 р13 = 0,038 р-З = 0,02
гвр-1 21 (18; 23) 30 (22; 35) 27 (24; 38) р 12 < 0,001 Р13 = 0,988 Р2-3 = 0,721
RIG-1 30 (12; 39) 28 (24; 35) 23 (15; 28) Р1-2 = 0,173 р13 =0,022 р2 3 = 0,002
Примечание. р - статистическая значимость различий между 1-й и 2-й группами; р2 3 - статистическая значимость различий между 2-й и 3-й группами; р13 - статистическая значимость различий между 1-й и 3-й группами.
при ПЭ можно предположить, что воспалительная регуляция имеет более распространенный характер. Эта гипотеза является результатом изучения тяжелых фенотипов ПЭ [16]. Парадоксальное снижение экспрессии NOD1 в ФБК при тяжелой ПЭ относительно показателей группы сравнения, вероятно, обусловливает более выраженное нарушение трофобластической инвазии.
Передача сигналов врожденного иммунитета, опосредованная RLR (в том числе RIG-1), играет критическую роль в ядерном перепрограммировании, способствует активации стволовых клеток и регенерации тканей [19]. В нашем исследовании при тяжелой ПЭ выявлено значимое снижение экспрессии RIG-1 в миоцитах, эндотелии и ФБК относительно групп сравнения и умеренной ПЭ. Показано, что нокдаун гена, кодирующего
iPS-1, общий адапторный белок для семейства RLR, существенно снижает ядерное перепрограммирование, индуцированное мРНК, кодирующими Oct-4, Sox2 и др. К. А. Артемьева и соавт. показали, что дефицит маркеров полипотентных/стволовых клеток Oct-4 в миометрии сопутствует спонтанным и иммунозависимым абортам у мышей [20]. Нарушение активности стволовых клеток в плаценте определяет более высокую уязвимость и сниженную регенерационную способность плацентарных тканей [21].
ПРР участвуют в защите плода от вирусов, бактерий и паразитов [22], запуская выработку провос-палительных цитокинов и хемокинов в плаценте. В то же время передача сигналов ПРР может инициировать гибель клеток трофобласта, приводя к таким ослож-
Низяева Н.В., Амирасланов Э.Ю., Артемьева К.А., Степанова И.И., Шамаракова М.В. Изменение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 в миометрии при преэклампсии
нениям, как ПЭ и невынашивание беременности [23]. Дальнейшее выяснение этой двойной роли ПРР может пролить свет на механизмы, которые защищают плод от инфекций, а также способствовать раскрытию патогенетических механизмов осложнений беременности.
Заключение
Таким образом, при умеренной ПЭ отмечается усиление экспрессии ZBP-1 в ФБК и эндотелии и NOD-1 в эндотелии относительно группы сравнения. Тяжелая ПЭ, в свою очередь, в отличие от умеренной, характеризовалась низкой экспрессией RIG-1 в эндотелии и ФБК, пониженной экспрессией NOD1 и усиленной экспрессией TLR8 в эндотелии сосудов. Сигналы от PRR в структурах трофобласта могут приводить к повреждению окружающих тканей, вызывая осложнения беременности, связанные с плацентарным воспалением. Впервые мы показали, что эти изменения затра-
■ Литература
1. Magee L.A., Singer J., Lee T., Rey E., Asztalos E., Hutton E., Helewa M., Logan A.G., Ganzevoort W., Welch R., Thornton J.G., Woo Kinshella M.L., Green M., Tsigas E., von Dadelszen P. CHIPS Study Group. The impact of pre-eclampsia definitions on the identification of adverse outcome risk in hypertensive pregnancy - analyses from the CHIPS trial (Control of Hypertension in Pregnancy Study). BJOG. 2021; 128 (8): 1373-82. DOI: https:// doi.org/10.1111/1471-0528.16602
2. Natenzon A., McFadden P., DaSilva-Arnold S.C., Zamudio S., Illsley N.P. Diminished trophoblast differentiation in early onset preeclampsia. Placenta. 2022; 120: 25-31. DOI: https://doi.org/10.1016/ j.placenta.2022.02.004.
3. Michalczyk M., Celewicz A., Celewicz M., Wozniakowska-Gondek P., Rzepka R. The role of inflammation in the pathogenesis of preeclampsia. Mediators Inflamm. 2020; 2020: 3864941. DOI: https:// doi.org/10.1155/2020/3864941
4. Koga K., Izumi G., Mor G., Fujii T., Osuga Y. Toll-like receptors at the maternal-fetal interface in normal pregnancy and pregnancy complications. Am J Reprod Immunol. 2014; 72 (2): 192-205. DOI: https://doi. org/10.1111/aji.12258
5. Ilekis J.V., Tsilou E., Fisher S., Abrahams V.M., Soares M.J., Cross J.C., Zamudio S., Illsley N.P., Myatt L., Colvis C., Costantine M.M., Haas D.M., Sadovsky Y., Weiner C., Rytting E., Bidwell G. Placental origins of adverse pregnancy outcomes: potential molecular targets: an executive workshop summary of the Eunice Kennedy Shriver national institute of child health and human development. Am. J. Obstet. Gynecol. 2016; 215 (1 Suppl): S1-S46. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ajog.2016. 03.001
6. Chatterjee P., Weaver L.E., Doersch K.M., Kopriva S.E., Chias-son V.L., Allen S.J., Narayanan A.M., Young K.J., Jones K.A., Kuehl T.J., Mitchell B.M. Placental Toll-like receptor 3 and Toll-like receptor 7/8 activation contributes to preeclampsia in humans and mice. PLoS One. 2012; 7 (7): e41884. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0041884
7. Baev O.R., Karapetian A.O., Nizyaeva N.V., Sadekova А.А., Krasniy A.M. Content of free fetal DNA in maternal blood and expression of DNA recognition receptors ZBP-1 in placental tissue in preeclampsia and preterm labor. Bull. Exp. Biol. Med. 2019; 168 (1): 145-9. DOI: https://doi.org/10.1007/s10517-019-04665-z
8. Kenny L.C., Kell D.B. Immunological tolerance, pregnancy, and preeclampsia: the roles of semen microbes and the father. Front. Med. (Lausanne). 2018; 4: 239. DOI: https://doi.org/10.3389/fmed.201 7.00239
9. Матвеева Д.К., Андреева Е.Р., Новиков Н.Н., Пустовой В.И., Буравкова Л.Б. Структурная организация и состав внеклеточного матрикса мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток при различном уровне содержания кислорода in vitro. Клин. эксп. морфология. 2020; 9 (1): 57-63. DOI: https://doi.org/10.31088/CEM2020.9.1.57-63
гивают не только трофобласт и децидуальную оболочку, но и миометрий, что дает новое понимание патогенеза ПЭ. Существующие при ПЭ изменения распределения ПРР в миометрии, вероятно, могут обусловливать течение и прогрессирование этого заболевания: способствовать снижению уровня локального воспаления, необходимого для успешной инвазии трофобласта; уменьшению супрессивной активности Тге§, приводящему в том числе к усилению вазоконстрикции; нарушению регенеративных механизмов в матке и плаценте и к увеличению клеточной гибели. Полученные данные требуют дальнейших, более углубленных исследований с участием больших групп пациенток. Изучение механизмов распознавания образов, опосредованных ПРР, в частности, возможной активации «молчащих» в физиологических условиях структурных генов, поможет прояснить сигнальные пути и механизмы этого заболевания и предоставить информацию для разработки новых методов его лечения.
10. Du X.K., Ge W.Y., Jing R., Pan L.H. Necroptosis in pulmonary macrophages mediates lipopolysaccharide-induced lung inflammatory injury by activating ZBP-1. Int. Immunopharmacol. 2019; 77: 105944. DOI: https://doi.org/10.10167j.intimp.2019.105944
11. Schust D.J., Bonney E.A., Sugimoto J., Ezashi T., Roberts R.M., Choi S., Zhou J. The immunology of syncytialized trophoblast. Int. J. Mol. Sci. 2021; 22 (4): 1767. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms22041767
12. Afkham A., Eghbal-Fard S., Heydarlou H., Azizi R., Aghe-bati-Maleki .L, Yousefi M. Toll-like receptors signaling network in preeclampsia: An updated review. J. Cell Physiol. 2019; 234 (3): 2229-40. DOI: https://doi.org/10.1002/jcp.27189
13. Liu X., Li L., Peng G. TLR8 reprograms human Treg metabolism and function. Aging (Albany NY). 2019; 11 (17): 6614-5. DOI: https://doi. org/10.18632/aging.102223
14. Opichka M.A., Rappelt M.W., Gutterman D.D., Grobe J.L., McIn-tosh J.J. Vascular dysfunction in preeclampsia. Cells. 2021; 10 (11): 3055. DOI: https://doi.org/10.3390/cells10113055
15. Bryant A.H., Menzies G.E., Scott L.M., Spencer-Harty S., Da-vies L.B., Smith R.A., Jones R.H., Thornton C.A. Human gestation-associated tissues express functional cytosolic nucleic acid sensing pattern recognition receptors. Clin. Exp. Immunol. 2017; 189 (1): 36-46. DOI: https:// doi.org/10.1111/cei.12960
16. Rakner J.J., Silva G.B., Mundal S.B., Thaning A.J., Elschot M., Ostrop J., Thomsen L.C.V., Bjerge L., Gierman L.M., Iversen A.C. Decidual and placental NOD1 is associated with inflammation in normal and preeclamptic pregnancies. Placenta. 2021; 105: 23-31. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.placenta.2021.01.014
17. Ryu B.J., Han J.W., Kim R.H., Yun S., Kim T.H., Hur S.E., Kim C.J., Lee S.K. Activation of NOD-1/JNK/IL-8 signal axis in decidual stromal cells facilitates trophoblast invasion. Am. J. Reprod. Immunol. 2017; 78 (2). DOI: https://doi.org/10.1111/aji.12672
18. Lim R., Lappas M. NOD-like receptor pyrin domain-containing-3 (NLRP3) regulates inflammation-induced pro-labor mediators in human myometrial cells. Am. J. Reprod. Immunol. 2018; 79 (4): e12825. DOI: https://doi.org/10.1111/aji.12825
19. Kopeina G.S., Zamarev A.V., Zhivotovsky B.D., Lavric I.N. Programmed necrosis and tissue regeneration. Genes Cells. 2018; 13 (2): 35-8. DOI: https://dx.doi.org/10.23868/201808017
20. Artem'eva K.A., Stepanova 1.1., Bogdanova I.M., Boltovs-kaya M.N., Yaglova N.V., Obernikhin S.V., Ponomarenko E.A. Changes in the expression of pluripotency factor OCT-4 and intensity of apoptosis in the uterus during spontaneous and immune-dependent abortions in mice. Bull. Exp. Biol. Med. 2022; 172 (6): 765-9. DOI: https://doi.org/10.1007/ s10517-022-05474-7
21. Sayed N., Ospino F., Himmati F., Lee J., Chanda P., Mocars-ki E.S., Cooke J.P. Retinoic acid inducible gene 1 protein (RIG1)-like
receptor pathway is required for efficient nuclear reprogramming. Stem Cells. 2017; 35 (5): 1197-207. DOI: https://doi.org/10.1002/stem.2607
22. Муругина Н.Е., Будихина А. С., Максимчик П. В., Дагиль Ю.А., Балясова Л.С., Муругин В.В., Чкадуа Г.З., Пинегин Б. В., Пащенков М. В. Синергическое взаимодействие рецепторов NOD1 и TLR4 врожденного иммунитета: транскрипционные и метаболиче-
ские аспекты. Иммунология. 2019; 40 (2): 9-16. DOI: https://doi. org/10.2411/0206-4952-2019-12002
23. Motomura K., Hara M., Ito I., Morita H., Matsumoto K. Roles of human trophoblasts' pattern recognition receptors in host defense and pregnancy complications. J. Reprod. Immunol. 2023; 156: 103811. DOI: https://doi.org/10.1016/jjri.2023.103811
■ References
1. Magee L.A., Singer J., Lee T., Rey E., Asztalos E., Hutton E., Helewa M., Logan A.G., Ganzevoort W., Welch R., Thornton J.G., Woo Kinshella M.L., Green M., Tsigas E., von Dadelszen P. CHIPS Study Group. The impact of pre-eclampsia definitions on the identification of adverse outcome risk in hypertensive pregnancy - analyses from the CHIPS trial (Control of Hypertension in Pregnancy Study). BJOG. 2021; 128 (8):1373-82. DOI: https://doi.org/10.1111/1471-0528.16602
2. Natenzon A., McFadden P., DaSilva-Arnold S.C., Zamudio S., Illsley N.P. Diminished trophoblast differentiation in early onset preeclampsia. Placenta. 2022; 120: 25-31. DOI: https://doi.org/10.1016/j. placenta.2022.02.004
3. Michalczyk M., Celewicz A., Celewicz M., Wozniakowska-Gondek P., Rzepka R. The role of inflammation in the pathogenesis of preeclampsia. Mediators Inflamm. 2020; 2020: 3864941. DOI: https://doi. org/10.1155/2020/3864941
4. Koga K., Izumi G., Mor G., Fujii T., Osuga Y. Toll-like receptors at the maternal-fetal interface in normal pregnancy and pregnancy complications. Am J Reprod Immunol. 2014; 72 (2): 192-205. DOI: https://doi. org/10.1111/aji.12258
5. Ilekis J.V., Tsilou E., Fisher S., Abrahams V.M., Soares M.J., Cross J.C., Zamudio S., Illsley N.P., Myatt L., Colvis C., Costantine M.M., Haas D.M., Sadovsky Y., Weiner C., Rytting E., Bidwell G. Placental origins of adverse pregnancy outcomes: potential molecular targets: an executive workshop summary of the eunice kennedy shriver national institute of child health and human development. Am J Obstet Gynecol. 2016; 215 (1 Suppl): S1-S46. DOI: https://doi.org/10.1016Zj.ajog.2016.03.001
6. Chatterjee P., Weaver L.E., Doersch K.M., Kopriva S.E., Chias-son V.L., Allen S.J., Narayanan A.M., Young K.J., Jones K.A., Kuehl T.J., Mitchell B.M. Placental Toll-like receptor 3 and Toll-like receptor 7/8 activation contributes to preeclampsia in humans and mice. PLoS One. 2012; 7 (7): e41884. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0041884
7. Baev O.R., Karapetian A.O., Nizyaeva N.V., Sadekova A.A., Krasniy A.M. Content of free fetal DNA in maternal blood and expression of DNA recognition receptors ZBP-1 in placental tissue in preeclampsia and preterm labor. Bull Exp Biol Med. 2019; 168 (1): 145-9. DOI: https:// doi.org/10.1007/s10517-019-04665-z
8. Kenny L.C., Kell D.B. Immunological Tolerance, pregnancy, and preeclampsia: the roles of semen microbes and the father. Front Med (Lausanne). 2018; 4: 239. DOI: https://doi.org/10.3389/fmed.2017.00239
9. Matveeva D.K., Andreeva E.R., Novikov N.N., Pustovoy V.I., Buravkova L.B. Structural organization and composition of extracellular matrix of multipotent mesenchymal stromal cells under different oxygen levels in vitro. Clin exp morphology. 2020; 9 (1): 57-63. DOI: https://doi. org/10.31088/CEM2020.9.1.57-63 (in Russian)
10. Du X.K., Ge W.Y., Jing R., Pan L.H. Necroptosis in pulmonary macrophages mediates lipopolysaccharide-induced lung inflammatory injury by activating ZBP-1. Int Immunopharmacol. 2019; 77: 105944. DOI: https://doi.org/10.1016/j.intimp.2019.105944
11. Schust D.J., Bonney E.A., Sugimoto J., Ezashi T., Roberts R.M., Choi S., Zhou J. The immunology of syncytialized trophoblast. Int J Mol Sci. 2021; 22 (4): 1767. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms22041767
12. Afkham A., Eghbal-Fard S., Heydarlou H., Azizi R., Aghe-bati-Maleki .L, Yousefi M. Toll-like receptors signaling network in pre-eclampsia: An updated review. J Cell Physiol. 2019; 234 (3): 2229-40. DOI: https://doi.org/10.1002/jcp.27189
13. Liu X., Li L., Peng G. TLR8 reprograms human Treg metabolism and function. Aging (Albany NY). 2019; 11 (17): 6614-5. DOI: https://doi. org/10.18632/aging.102223
14. Opichka M.A., Rappelt M.W., Gutterman D.D., Grobe J.L., McIn-tosh J.J. Vascular dysfunction in preeclampsia. Cells. 2021; 10 (11): 3055. DOI: https://doi.org/10.3390/cells10113055
15. Bryant A.H., Menzies G.E., Scott L.M., Spencer-Harty S., Da-vies L.B., Smith R.A., Jones R.H., Thornton C.A. Human gestation-associated tissues express functional cytosolic nucleic acid sensing pattern recognition receptors. Clin Exp Immunol. 2017; 189 (1): 36-46. DOI: https:// doi.org/10.1111/cei.12960
16. Rakner J.J., Silva G.B., Mundal S.B., Thaning A.J., Elschot M., Ostrop J., Thomsen L.C.V., Bjerge L., Gierman L.M., Iversen A.C. Decidual and placental NOD1 is associated with inflammation in normal and preeclamptic pregnancies. Placenta. 2021; 105: 23-31. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.placenta.2021.01.014
17. Ryu B.J., Han J.W., Kim R.H., Yun S., Kim T.H., Hur S.E., Kim C.J., Lee S.K. Activation of NOD-1/JNK/IL-8 signal axis in decidual stromal cells facilitates trophoblast invasion. Am J Reprod Immunol. 2017; 78 (2). DOI: https://doi.org/10.1111/aji.12672
18. Lim R., Lappas M. NOD-like receptor pyrin domain-containing-3 (NLRP3) regulates inflammation-induced pro-labor mediators in human myometrial cells. Am J Reprod Immunol. 2018; 79 (4): e12825. DOI: https://doi.org/10.1111/aji.12825
19. Kopeina G.S., Zamarev A.V., Zhivotovsky B.D., Lavric I.N. Programmed necrosis and tissue regeneration. Genes Cells. 2018; 13 (2): 35-8. DOI: https://dx.doi.org/10.23868/201808017
20. Artem'eva K.A., Stepanova 1.1., Bogdanova I.M., Boltovs-kaya M.N., Yaglova N.V., Obernikhin S.V., Ponomarenko E.A. Changes in the expression of pluripotency factor oct-4 and intensity of apoptosis in the uterus during spontaneous and immune-dependent abortions in mice. Bull Exp Biol Med. 2022; 172 (6): 765-9. DOI: https://doi.org/10.1007/ s10517-022-05474-7
21. Sayed N., Ospino F., Himmati F., Lee J., Chanda P., Mocarski E.S., Cooke J.P. Retinoic acid inducible gene 1 protein (RIG1)-like receptor pathway is required for efficient nuclear reprogramming. Stem Cells. 2017; 35 (5): 1197-207. DOI: https://doi.org/10.1002/stem.2607
22. Murugina N.E., Budikhina A.S., Maximchik P.V., Dagil Yu.A., Balyasova L.S., Murugin V.V., Chkadua G.Z., Pinegin B.V., Pashenkov M.V. Synergistic interactions of NOD1 and TLR4 receptors of innate immunity: transcriptional and metabolic aspects. Immunologiya. 2019; 40 (2): 9-16. DOI: https://doi.org/10.2411/0206-4952-2019-12002 (in Russian)
23. Motomura K., Hara M., Ito I., Morita H., Matsumoto K. Roles of human trophoblasts' pattern recognition receptors in host defense and pregnancy complications. J Reprod Immunol. 2023; 156: 103811. DOI: https://doi.org/10.1016/jjri.2023.103811
Сведения об авторах
Низяева Наталья Викторовна - д-р мед. наук, зав. лаб. патологии репродукции НИИМЧ им. акад. А.П. Авцына ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского» Минобр-науки России, Москва, Российская Федерация E-mail: niziaeva@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-5592-5690
Authors' information
Natalia V. Nizyaeva - MD, PhD, Head of the Reproduction Pathology Lab. of A.P. Avtsyn RIHM of B.V. Petrovsky NRCS of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: niziaeva@gmail.com https://orcid.org/0000-0001-5592-5690
Низяева Н.В., Амирасланов Э.Ю., Артемьева К.А., Степанова И.И., Шамаракова М.В. Изменение экспрессии рецепторов врожденного иммунитета NOD-1, TLR8, ZBP-1, RIG-1 в миометрии при преэклампсии
Амирасланов Эльрад Юсифович - канд. мед. наук, зав. акушерским отд., НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: eldis@mail.ru https://orcid.org/0000-0001-5601-1241
Артемьева Ксения Александровна - канд. мед. наук, ст. науч. сотр. лаб. патологии репродукции НИИМЧ им. акад. А.П. Авцына ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация
E-mail: sunset_whitch@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-1014-752X
Степанова Ирина Ильдаровна - науч. сотр. лаб. патологии репродукции НИИМЧ им. акад. А.П. Авцына ФГБНУ «РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского» Минобр-науки России, Москва, Российская Федерация E-mail: i-ste@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-5513-217X
Шамаракова Марина Викторовна - канд. мед. наук, врач-патологоанатом 1-го патолого-анатомического отделения НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: mshamarakova@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-0972-4350
Elrad Yu. Amiraslanov - PhD, Head of the Dept. of Obstetrics, VI. Kulakov NMRC for OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: eldis@mail.ru https://orcid.org/0000-0001-5601-1241
Ksenia A. Artem'eva - PhD, Senior Researcher of the Reproduction Pathology Lab. of A.P. Avtsyn RIHM of B.V Pet-rovsky NRCS of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: sunset_whitch@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-1014-752X
Irina I. Stepanova - Researcher of the Reproduction Pathology Lab. of A.P. Avtsyn RIHM of B.V. Petrovsky NRCS of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: i-ste@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-5513-217X
Marina V. Shamarakova - PhD, Pathologist, 1st Pathology Dept., V.I. Kulakov NMRC for OGP, MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: mshamarakova@yandex.ru https://orcid.org/0000-0002-0972-4350
