CC BY
66
УДК 591.1:612.014.1
А.А. Венедиктова, О.В. Фаламеева, Н.Г. Колосова, М.А. Садовой,
Т.А. Короленко
ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ КАТЕИСИНОВ В, Ь И Б В ПЕЧЕНИ У КРЫС WISTAR И ПРЕЖДЕВРЕМЕННО СТАРЕЮЩИХ КРЫС ОХУ8 РАЗНОГО ВОЗРАСТА
ГУ НИИ физиологии СО РАМН, Новосибирск
ФГУ Росздрава Новосибирский НИИ травматологии и ортопедии
ГУ Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск
Исследована активность катепсннов В, Ь и Б в печени у крыс *^81аг и преждевременно стареющих крыс ОХУБ разного возраста. С возрастом у крыс *^81аг показано снижение активности катепсина В и повышение активности катепсина Ь в печени. У крыс *^81аг в 12 месяцев по сравнению с 3-месячными животными обнаружено повышение активности катепсина Б и снижение показателя к 18-у месяцу. У крыс линии ОХУБ активность катепсина В снижена с возрастом, как и у крыс *^81аг. Активность катепсина Б в печени у крыс ОХУБ к 12 месяцам достигала минимального значения, в отличие от крыс *^81аг, у которых на это время приходится максимум активности катепсина Б. К 18 месяцам у крыс ОХУБ отмечено увеличение активности катепсина Б в 2 раза по сравнению с 12-и месячными животными. У крыс ОХУБ в 3 месяца активность катепсина Ь в печени выше, чем у крыс *^81аг в 2 раза, активность катепсина Б — выше на 30%. В 12 месяцев активность катепсина Б в печени крыс ОХУБ ниже, чем у крыс *^81аг на 38%, а в 18 месяцев — выше более чем в 2 раза. Активность катепсинов В и Ь в печени у крыс *^81аг и ОХУБ в возрасте 12 и 18 месяцев не различалась. Таким образом, ускоренный процесс старения у крыс линии ОХУБ характеризовался более ранними изменениями активности изучаемых протеаз.
Ключевые слова: катепсин В, катепсин Ь, катепсин Б, старение, крысы ОХУБ.
Введение мости класса 2 в кортикальных клетках тимуса
Вклад лизосомального протеолиза в общий [4, 5, 6]. катаболизм белка в различных типах клеток со- Катепсин В участвует в апоптозе, проявляя
ставляет 70% [1]. Деградация белка в лизосо- свойства сигнальной молекулы [7]. У живот-
мах осуществляется кислыми гидролазами: ных, дефектных по катепсину В, наблюдается
широко представленными в различных тканях сниженная способность клеток печени к про-
катепсинами В, Ь, Б. До недавнего времени граммируемой смерти [2]. Как и катепсин Ь, но
считалось, что протеолитическая система лизо- в меньшей степени, катепсин В принимает уча-
сом является «избыточной», болезней накопле- стие в процессах ремоделирования [5].
ния с дефицитом этих катепсинов нет, однако Катепсин Б, являясь эндопептидазой, рас-
исследования последних лет выявили у протеаз щепляет преимущественно большие плотно
млекопитающих свои специфические функции. упакованные субстраты, облегчая, таким обра-
Так, наиболее высокая активность катепсина Ь зом, доступ к пептидным связям расщепляемо-
характерна для клеток быстро обновляющихся го белка цистеиновым протеазам. Обнаружено,
тканей печени, яичников и фагоцитирующих что катепсин Б обладает митогенными свойст-
клеток — стимулированных макрофагов, что вами, не связанными с его протеолитической
может указывать на него, как на протеазу, при- активностью [8].
нимающую участие в ремоделировании [2, 3]. Снабжение организма пластическим мате-
На нокаутированных по катепсину Ь мышах риалом и осуществление основополагающих
установлено, что он необходим для деградации биохимических превращений зависит от со-
инвариантной цепи комплекса гистосовмести- стояния гепатоцитов. Купферовские клетки пе-
3 месяца 12 месяцев 18 месяцев
Рис. 1. Активность катепсина Ь в печени у крыс ”^81аг и ОХУ8 разного возраста.
* р < 0,001 по сравнению с крысами '^Б1аг
того же возраста;
# р < 0,01 по сравнению с крысами Wistar
в 3 месяца.
чени обеспечивают захват поврежденных белков из крови и последующее их расщепление протеолитическими ферментами [1, 9]. Возрастные изменения вносят в эти процессы свои коррективы. Основными характеристиками стареющего организма являются общее замедление синтеза, усиление катаболизма и активация свободнорадикальных процессов.
Установлено, что лизосомы являются одной из главных протеолитических систем, подвергающихся изменению с возрастом [10]. В то же время в работах, посвященных изучению катаболизма белка в печени млекопитающих при старении, основное внимание уделено изменениям морфологических параметров лизосом, в то время как активность (а значит, способность выполнять свою функцию) отдельных лизосомальных протеаз изучена недостаточно.
Как показали исследования последних лет, перспективной моделью для исследования механизмов старения может служить линия преждевременно стареющих крыс ОХУ8 (ИЦиГ СО РАН). Этих животных отличают раннее развитие катаракты, дистрофии сетчатки, остеопоро-за, гипертонии, а также изменений в эмоциональной и когнитивной сферах [11, 12, 13, 14, 15]. Примечательно, что все эти характерные для стареющих людей и животных изменения начинают развиваться раньше, чем в тканях крыс ОХУ8 регистрируется повышенный уровень окислительных повреждений макромолекул, в том числе — белков [15, 16]. Элиминация поврежденных белков осуществляется
во многом благодаря лизосомальному протео-лизу. Цель настоящего исследования — сравнительный анализ возрастных изменений активности лизосомальных цистеиновых протеаз катепсинов В и L и аспартильной протеазы катепсина D в печени у крыс OXYS и Wistar.
Материалы и методы
Использовали самцов крыс Wistar и преждевременно стареющих крыс линии OXYS (Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск) в возрасте 3, 12 и 18 месяцев. Животные получали стандартный корм и воду ad libitum. Количество животных в группах составляло от 4 до 10. Забой животных осуществляли под эфирным наркозом.
Печень гомогенизировали при помощи тефлонового гомогенизатора в растворе 0,25 М сахарозы, pH 7.3, все процедуры проводили при +4°С. Для разрушения клеточных мембран пробы обрабатывали в течение 30 минут 0,1% тритоном Х-100 при +4°С. Гомогенаты хранили до определения активности ферментов в морозильной камере при -20°С.
Активность катепсина В определяли флуоресцентным методом [17] в фосфатном буфере, при pH 6.0. В качестве флуоресцентного субстрата использовался Z-Arg-Arg-MCA (НПО «Вектор») в конечной концентрации 10 мкМ. Реакцию останавливали 2 мл стоппера, содержащего 0,1 н монохлоруксусную кислоту, 1 н NaOH, 1 н уксусную кислоту.
Активность катепсина L определяли по методу Barrett, Kirschke, 1981 [17] в ацетатном буфере при pH 5.5. В качестве флуоресцентного субстрата использовался Z-Phe-Arg-MCA (НПО «Вектор») в конечной концентрации 10 мкМ. Перекрестная реакция субстрата с ка-тепсином В ингибировалась его специфическим ингибитором СА-74 в конечной концентрации 10 мкМ. Реакция останавливалась 2 мл того же стоппера, что и для катепсина В. Измерения флуоресценции в обоих случаях проводили на спектрофлуориметре Perk in-Elmer 650-10 S (Япония) при длинах волн экстинции и эмиссии 355 и 460 нм соответственно. Результаты выражали в мкмоль MCA (метилку-мариламида)/мг белка в час.
Активность катепсина D определяли по методу Wiederanders, Oelke 1982 [18] в ацетатном буфере pH 5.0. В качестве субстрата использовался 2% азо-казеин (Fluka, США) в 6 М мочевине с использованием специфического ингибитора катепсина D пепстатит А 10 мкМ. Реакцию останавливали 10% ТХУ. Измерение оп-
тической плотности проводилось на спектрофотометре 8реко1 20 (Германия) при длине волны 366 нм. Активность катепсина Б выражали в условных лабораторных единицах (Е366) в расчете на мг белка в час.
Количество белка в пробах определяли по методу Лоури.
Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью программного продукта 8ТАТ18Т1СА 6.0. Для определения достоверности различий выбран непараметрический критерий Манна-Уитни и угловое преобразование Фишера. Для выявления корреляционных отношений применен критерий Спирмена. Результаты считали статистически достоверными при р < 0.05. Данные представлены как М±ш.
Результаты
При исследовании активности катепсинов В, Ь, Б в печени у крыс Wistar и ОХУ8 соответствующих возрастов выявлены значимые как возрастные внутрилинейные, так и межлинейные различия.
Возрастные изменения печени у крыс Wistar. У крыс Wistar активность катепсина Ь печени, основной цистеиновой протеазы гепатоцитов, в возрасте 12 месяцев была в два раза выше, чем в 3 месяца. Значимых различий между 12-и 18-месячными животными не выявлено (Рис. 1). Активность катепсина В печени с возрастом снижалась ив 12 месяцев была практически вдвое меньше, чем в 3 месяца. В возрасте 18 месяцев активность фермента оставалась на том же уровне, что и у 12-месячных крыс Wistar (Рис. 2). Активность катепсина Б в печени с 3 месяцев увеличивалась, достигая пика к 12 месяцам. К возрасту 18 месяцев наблюдали ее снижение до уровня, выявленного у 3месячных животных (Рис. 3).
Корреляционный анализ выявил отрицательную связь между активностью катепсина В и содержанием белка в печени (Я = 0,90, р < 0,01) 3-месячных крыс Wistar. В то же время в этом возрасте у животных существует тесная положительная связь между активностью катепсинов В и Ь (Я = 0,88, р < 0 ,001) и катепсина В и катепсина Б (Я = 0,88, р < 0,01).
Положительная связь между активностью катепсинов В и Б (Я = 0,80, р < 0,05) выявлена и в печени 18-месячных крыс Wistar. Вероятно, катепсин В и катепсин Б взаимозависимы, кооперативное действие этих ферментов необходимо для протеолиза, однако, для 12 месячных крыс такой зависимости нами не выявлено.
П ОХУЭ Н \Vistar
3 месяца 12 месяцев 18 месяцев
Рис. 2. Активность катепсина В в печени у крыс ”^81аг и ОХУ8 с разного возраста.
# р < 0,01 по сравнению с крысами Wistar в 3 месяца; л р < 0,05 по сравнению с крысами ОХУБ в 3 месяца.
Рис. 3. Активность катепсина Б в печени у крыс ”^81аг
и ОХУ8 разного возраста.
* р < 0,05 по сравнению с крысами Wistar того же возраста; # р < 0,01 по сравнению с Wistar 12 месяцев;
” р < 0,05 по сравнению с ОХУБ 12 месяцев; л р < 0,05 по сравнению с ОХУБ 18 месяцев.
Обнаруженная связь между активностью катепсина В и катепсина Ь указывает на то, что протеазы локализованы внутри одного компар-тмента (лизосом). Выявленные изменения активности катепсина Б касаются, очевидно, прежде всего, лизосом, но также
и эндосом, в которых обнаружена активность катепсина Б.
Возрастные изменения печени у крыс линии ОХУБ. С возрастом активность катепсина В в печени у крыс ОХУ8 изменялась так же, как и у крыс Wistar: наибольшую активность фермента наблюдали в 3 месяца, затем к 12-и месяцам происходило ее снижение на 28%, в 18 месяцев она оставалась на достигнутом уровне (Рис. 2). Активность катепсина Б в печени у крыс ОХУ8 с 3 до 12 месяцев снижалась на 15%, а в возрасте 18 месяцев была на 48% выше, чем у 12-и месячных животных. Таким образом, в 12 месяцев
у крыс OXYS зарегистрирована минимальная активность катепсина D в печени, в то время как у крыс Wistar этого возраста она была максимальной.
Сравнение активности катепсинов В, L, D в печени крыс Wistar и OXYS в соответствующие возрастные периоды выявило ярко выраженные отличия. У крыс OXYS в 3 месяца активность катепсина L в печени выше, чем у крыс Wistar того же возраста в 2 раза и соответствовала показателю 12-месячных крыс Wistar (Рис. 1). У крыс OXYS 3, 12, 18 месяцев активность катепсина L не изменялась, в то же время у крыс Wistar наблюдали увеличение активности этого фермента в 12 с сохранением достигнутого уровня в 18 месяцев (Рис. 1). Активность катепсина D у крыс OXYS в 3 месяца выше, чем у крыс Wistar соответствующего возраста на 30% (Рис. 3). В 12 месяцев активность катепсина D в печени у крыс OXYS ниже, чем у крыс Wistar на 38%, а в 18 месяцев — выше более чем в 2 раза (Рис. 3).
Обсуждение
Cuervo [19] показано, что у старых, 24месячных крыс Wistar активность катепсинов В и А в печени выше, чем у молодых неполовозрелых животных в возрасте двух месяца. Возможно, к 18 месяцам ни у крыс Wistar, ни у крыс OXYS еще не возникает предпосылок для увеличения активности катепсина В.
Мы показали, что для молодых крыс OXYS характерна повышенная по сравнению с крысами Wistar активность протеаз, отвечающих за ускоренное расщепление деградируемых белков — катепсинов L и D. Их активация могла быть компенсаторной реакцией на повышенную интенсивность окислительных повреждений белков у этих животных, отличающихся повышенной чувствительностью к окислительному стрессу [20]. Отсутствие в клетках печени 3-месячных крыс OXYS непереваренного материала свидетельствует об успешной адаптации молодых крыс OXYS к этой ситуации.
Снижение активности катепсина D в 18 месяцев у крыс Wistar в результате возрастных изменений совпадают с данными Wiederanders [18]. В исследованиях на внутренних органах крыс им показано, что на фоне снижения активности фермента выявляется повышенная концентрация его неактивной формы, определяемая иммуноферментным методом. Вероятно, в результате процессов, происходящих в стареющем организме, активность катепсина D снижается, при этом наблюдается удиви-
тельная универсальность этих изменений во всех внутренних органах крыс, в то время как в мышцах, напротив, активность катепсина D растет [21]. У крыс OXYS снижение активности катепсина D с возрастом происходит гораздо раньше, чем у крыс Wistar — уже в 12 месяцев. Это может свидетельствовать о более интенсивном протекании процессов старения и объясняться накоплением непереваренного материала, способного подавлять активность катепсинов [19], в том числе и катепсина D. Повышение активности катепсина D на поздних этапах жизни крыс OXYS может быть как следствием адаптации к снижению сродства протеаз к субстратам из-за большей повреж-денности ферментов [22] и/или пoдлeжaщиx деградации белков [19], так и ответом на нарушение транспорта белков в лизосомы. Кроме того, развитие с возрастом характерного для крыс OXYS дефицита энергии [16] может сказываться на активности лизосомальной АТР-азы, поддерживающей оптимальный для гидро-лаз pH. Снижение количества рецепторов LAMP (специфичных для мембран лизосом) и высокая степень повреждения белков могут способствовать тому, что система клеточного протеолиза отреагирует повышением активности катепсина D, тем более, что у катепсина D, в отличие от катепсинов В и L, нет своего эндогенного ингибитора. Возможно, повышение активности катепсина D в печени крыс OXYS связано с притоком фагоцитирующих клеток, обогащенных протеазами. В пользу этого свидетельствует то, что с возрастом у крыс OXYS в печени развиваются фиброзные процессы, печень инфильтрирована лимфоцитами [23], про-теазы которых также могут вносить вклад в усиление протеолитической активности. Сходные изменения наблюдались и у крыс Wistar, но они были существенно менее выражены и регистрировались позднее [23]. При старении снижается синтез многих белков, в том числе ингибитора а2-макроглобулина [24], относящегося к семейству ингибиторов широкого спектра протеаз, что также может вносить вклад в усиление активности катепсина D.
Вероятно, отсутствие активации катепсина L для расщепления нарастающего с возрастом количества поврежденных белков у крыс OXYS компенсируется повышенной экспрессией катепсина D. Нарушения функциональной активности лизосом типичны для стареющего организма, одной из причин которого становится изменение гормонального фона [25]. Снижение
реактивности лизосом проявляется и на клеточном уровне. Так, в экспериментах на фиб-робластах человека [22] выявлено нарушение ответа лизосом при старении - их неспособность отвечать повышением активности цис-теиновых протеаз на гипероксию [26].
Таким образом, наши исследования показали, что характерные для старения изменения активности лизосомальных протеаз развиваются у крыс OXYS существенно раньше, чем у крыс Wistar.
Работа выполнена при поддержке РФФИ, грант 05-04-48483.
CYSTEINE PROTEASES CATHEPSINS B AND L AND ASPARTIC PROTEASE CATHEPSIN D IN LIVER OF WISTAR RATS AND OXYS LINE AGEING RATS A.A. Venediktova, O.V. Falameeva,
N.G. Kolosova, M.A. Sadovoj, T.A. Korolenko Cathepsins B, L, and D have been shown in many types of cells, predominantly in lysosomes and endosomes of macrophages and hepatocytes. These enzymes play the important biological role in protein degradation, cell proliferation, activation of lysosomal proteases. Ageing process in liver cells was not studied enough, especially in models of ageing animals. OXYS rat line (Institute of Cytology and Genetics RAS, Novosibirsk) is characterized by accelerated ageing process without significant changes of protein synthesis in liver cells until 12 months. Cysteine proteases — cathepsin B and L were determined by fluoromet-ric method against Z-Phe-Arg-MCA and Z-Arg-Arg-MCA with specific inhibitor for cathepsin B — CA 074 (Barrett and Kirschke, 1981), cathepsin D — by spectrophotometric method against azoca-sein as a substrate (Wiederanders, Oelke, 1982). Cathepsin B activity in liver Wistar rats was steadily decreased with age (3, 12 and 18 months), while cathepsin L activity was increased in the same animals. Cathepsin D activity of liver in Wistar rats was increased in 12 and decreased up to the lower level of 3 months old rats at 18th month old. Decreasing activity of cathepsin B activity was revealed in OXYS rats (3 > 12,18 months), without changes of cathepsin L activity. Cathepsin D activity was decreased at 12th months and increased at 18th months (as compare to 3 months old animals). In Wistar rats at 3 month old negative correlation was shown between total liver
protein concentration and cathepsin B activity, indicating on the role of this enzyme in protein degradation in this period. Positive correlation between cathepsin B and L and between cathepsin B and cathepsin D in Wistar rats of 3 months old was revealed and at 18 months - positive correlation between cathepsin B and cathepsin D. Ageing process was characterized by more early changes of cysteine and aspartic proteases in OXYS as compare to Wistar rats.
Литература
1. Короленко T.A. Катаболизм белка в лизосомах. / Т.А. Короленко. Новосибирск, 1990. - 192 c.
2. Dickinson P.D. Cysteine peptidase of mammals: their biological roles and potential effects in the oral cavity and other tissues in health and disease / P.D. Dickinson // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. - 2002. - Vol. 13. - № 3. - P. 238-275.
3. Functions of Propeptide Parts in Cysteine Proteases / B. Wiederanders, G. Kaulmann, K. Schilling, et al. // Current Protein and Peptide Science. - 2003. - Vol. 4. - P. 309-326.
4. Lysosomal cysteine proteases in the lung: role in protein processing and immunoregulation / F. Buhling, N. Waldburg, A. Reisenauer, et al. // Eur. Respir. J. - 2004. -Vol. 23. - P. 620-628.
5. Thyroid function of mouse cathepsins B, L and K /
B. Fridrichs, C. Tepel, T. Reinhesckel, et al. // J. Clin. Invest.
- 2003. - 111. - P. 1733-1745.
6. Crystal structure of MHC class Il-associated p41 Ii
fragment bound to cathepsin L reveals the structural basis for differentiation between cathepsins L and S / G. Guncar,
G. Pungercic, I. Klemencic, et al. // EMBO J. - 1999. -
Vol. 18. - P. 793-803.
7. Tummor necrosis factor-a-associated lysomal per-meabilisation is cathepsin В dependent / N.W. Werneburg, M.E. Guicciardy, S.F. Bronk, G.J. Gores, et al. // Am. J. Gastrointest. Liver Physiol. - 2002 - Vol. 283. - P. 947-956.
8. Fusek M. Dual role of cathepsin D: ligand and protease / M. Fusek, V. Vetvicka // Biomed. Papers. - 2005. -
Vol. 149. - №1. - P. 43-50.
9. Regulation of cathepsins B, L, and D in murine lymphosarcoma model at a combined treatment with cyclophosphamide and yeast polysaccharide / T.A. Khalikova, S.Ya. Zhanaeva, T.A. Korolenko, et al. // Cancer Letters. -2004. - Vol. 20. - P.1-7.
10. Cuervo A.M. How do intracellular proteolytic systems change with age? / A.M. Cuervo, J.F. Dice // Frontiers in Bioscince - 1998. - Vol. 3. - P. 25-43.
11. Преждевременно стареющие крысы OXYS как модель сенильной катаракты человека / Н.Г. Колосова, П.А. Лебедев, А.Ж. Фурсова и др. // Успехи геронтологии.
- 2003. - Вып. 12. - С. 143-148.
12. Структурно-функциональные изменения костной
ткани позвоночника и конечностей у крыс OXYS /
О.В. Фаламеева, М.А. Садовой, Ю.В. Храпова,
H.Г. Колосова // Хирургия позвоночника. - 2006. - № 1. -
C. 88-94.
13. F NMR measurements of NO production in hypertensive ISIAH and OXYS rats / A.A. Bobko, S.V. Sergeeva, E.G. Bagryanskaya, et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.
- 2005. - Vol. 330. - P. 367-370.
14. Orlovskaya I.A. The Interaction of Hemopoiesis and Immunogenesis in Immunopathology Development /
I.A. Orlovskaya, V.A. Kozlov // Russ. J. Immunol. - 2001. -Vol. 6. - № 2. - P. 168-176.
15. Development of behavioural dysfunctions in acceler-ated-senescence OXYS rats is associated with early postnatal alterations in brain phosphate metabolism / S. Sergeeva, E. Bagryanskaya, E. Korbolina, N. Kolosova // Exp. Gerontol.
- 2006. - Vol. 41. - № 2. - P. 141-150.
16. Age-associated change in oxidative damage and the activity of antioxidant enzymes in rats with overgeneration of free radicals / O. Sinitsina, Z. Krysanova, A. Ishenko, et al. // J. Cell. Mol. Med. - 2006. - Vol. 10. - № 1. - P. 206-215.
17. Barrett A. J. Cathepsin B, cathepsin H and cathepsin L / A.J. Barrett, H. Kirschke // Methods Enzymol. - 1981. -Vol. 80. - P. 535-561.
18. Wiederanders B. Accumulation of inactive cathepsin D in old rats / B. Wiederanders, B. Oelke. // Mech. Ageing Dev. - 1982. - Vol. 24. - № 3. - P. 265-271.
19. Cuervo A.M. Age-related decline in chaperon-mediated autophagy / A.M. Cuervo, J.F. Dice // J. Biol. Chem.
- 2000. - Vol. 275. - № 40. - P. 31505-31515.
20. Long-term antioxidant supplementation attenuates oxidative stress markers and cognitive deficits in senescent-accelerated OXYS rats / N. Kolosova, T. Shcheglova,
S. Sergeeva, L. Loskutova // Neurobiol. Aging. - 2006. -Vol. 27. - № 9. - P. 1289-1297.
21. Salminen A. Lysosomal changes related to ageing and physical exercise in mouse cardiac and skeletal muscles / A. Salminen, K. Kainulainen, V. Vihko // Experientia. - 1982.
- Vol. 38. - P. 781-782.
22. Protein oxidation and degradation during cellular senescence of human BJ fibroblasts: part II - aging of nondividing cells / N. Sitte, K. Merker, T.V. Zglinicki, et al. // FASEB Journal. - 2000. - 14. - P. 2503-2510.
23. Динамика структурно-функциональных изменений митохондрий гепатоцитов преждевременно стареющих крыс линии OXYS / Н.Г. Колосова, С.В. Айдагулова, Г.И. Непомнящих и др. // Бюл. экспер. биол. - 2001. - 132.
- № 8. - С. 235-240.
24. Differential cloning of growth hormone-regulated hepatic transcripts in aged rat / P. Tollet-Egnell, A. Flores-Moralis, J. Odeberg, et al. // Endocrinology. - 2000. -Vol. 141. - № 3. - P. 910-921.
25. Громакова ИА. Лизосомальный протеолиз:
влияние старения и инсулина / И.А. Громакова,
O.A. Коноваленко // Биохимия. - 2003. - Т. 68. - № 7. -
С. 772-775.
26. Proteolysis in cultured liver epithelial cells during oxidative stress / T. Grune, T. Reinheckel, M. Joshi et al. // J. Biol. Chem. - 1995. - Vol. 270. - № 5. - P. 2344-2351.
