CC BY
58
УДК 618.39-079.7:618.396
ИЗМЕНЕНИЕ АДРЕНОРЕАКТИВНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ МИЛДРОНАТА
И.С. Николаева, Б.И. Медведев, И.Н. Помаскин
Челябинская государственная медицинская академия, г. Челябинск
Способность милдроната усиливать действие 02-адреномиметиков доказана in vitro методом адренозависимой осморезистентности эритроцитов (А-ОРЭ). Угроза преждевременных родов протекает на фоне нормальной 0-адренореак-тивности.
Ключевые слова: угрожающие преждевременные роды, осморезистентность, адренореактивность, адренорецептор, в2-адреносенсибилизатор.
Установлено, что УПР протекает на фоне нарушения адренергического механизма [2, 3, 5, 7]. С момента открытия эндогенного сенсибилизатора Р-адренорецепторов (ЭСБАР) [1, 2, 4-6] выдвигалось предположение о возможности клинического применения его аналогов для лечения состояний, связанных с низкой эффективностью данного механизма. Таким аналогом является блокатор окисления жирных кислот - милдронат, или 3-(2,2,2-три-метилгидрозиний) пропионата дигидротат. В экспериментах с гладкомышечными объектами в 2002 г. было показано, что милдронат повышает способность адреналина оказывать релаксирующий эффект, реализуемый за счет активации Р2-АР [6]. Направленность сенсибилизирующего действия подтверждается наличием данного эффекта в случаях с гладкими мышцами тех органов, где представлены Р2-АР (трахея, миометрий, коронарные артерии) и отсутствием эффекта - в опытах с миокардом Р1-АР. С учетом данных о наличии в организме человека и животных ЭСБАР прямого действия, наиболее вероятными компонентами которого являются гистидин, триптофан и тирозин, полученные результаты исследования (по аналогии) позволили рассматривать милдронат как экзогенный р-адреносенсибилизатор прямого действия. Основу р-сенсибилизирующего эффекта милдро-ната, вероятнее всего, составляет его способность повышать эффективность взаимодействия адреналина (и норадреналина) с Р-АР. С учетом современных представлений о физиологии Р-АР можно предположить, что эта способность реализуется за счет одного из трех возможных процессов: 1) алло-стерического изменения конформационного состояния Р-АР, в результате которого возрастает сродство рецептора к агонисту; 2) ингибирования активности ряда ферментов, участвующих в фосфо-рилировании Р-АР (киназы Р-АР, протеинкиназы а- и р-аррестина), благодаря которому рецепторы утрачивают сродство к агонисту; 3) за счет повышения активности фосфатазы, участвующей в де-фосфорилировании Р-АР и тем самым восстанавливающей их сродство к агонисту.
На основании вышеизложенного мы предположили, что использование милдроната (экзогенного Р-адреносенсибилизатора) позволит усилить действие р-адреномиметиков и тем самым снизить дозу используемого препарата и в конечном результате уменьшить количество побочных эффектов.
Целью нашей работы явилось изучение Р2-сенсибилизирующего действия милдроната in vitro методом адренозависимой осморезистентности эритроцитов (А-ОРЭ) у небеременных женщин и беременных при физиологически протекающей беременности и при УПР.
Материалы и методы исследования. В данном исследовании использовали венозную кровь 53 небеременных и беременных женщин с физиологическим течением беременности и с признаками УПР.
Первую группу составили образцы крови 13 небеременных женщин репродуктивного возраста (средний возраст - 29,6 ± 6,3). Вторую группу составили образцы крови 20 беременных женщин на сроке беременности 24-36 недель без признаков угрозы прерывания. Средний возраст женщин этой группы составил 26,2 і 3,5 года. Комплексные критерии включения женщин во 2-ю группу - отсутствие острых или обострения хронических воспалительных заболеваний генитальной и экстрагени-тальной сферы, отсутствие признаков угрозы прерывания беременности (по отсутствию жалоб, по состоянию родовых путей, по данным наружной гистерографии, колостроцитограммы). В 3-ю группу были включены образцы венозной крови 20 беременных женщин на сроке беременности 24-36 недель с признаков угрозы прерывания беременности. Средний возраст - 25,5 і 3,4 лет. Комплексные критерии включения женщин в эту группу: наличие признаков угрозы прерывания беременности (жалобы, состояния родовых путей, данные наружной гистерографии, колостроцитограммы), отсутствие острых или обострение хронических воспалительных заболеваний генитальной и экст-рагенитальной сферы.
Проблемы здравоохранения
Методика определение А-ОРЭ. Кровь в объеме 8 мл получали из локтевой вены с 8-10 ч утра; к ней добавляли 2 мл антикоагулянта (5 % раствор цитрата натрия). ОРЭ оценивали по методу Идель-сона Л.И., используя в качестве гипотонического раствора 0,42 % раствор №С1. Кровь в объеме
0,1 мл добавляли в 2 пробирки с холостыми пробами (одна с 5 мл дистиллированной водой, вторая -с 5 мл 0,9 % раствором №С1), а также в контрольную пробирку и 4 ряда опытных пробирок (по 6 в каждую). В пробирки с холостыми пробами и в контрольную пробирку добавляли 0,02 мл 0,9 % раствора №С1. В 1-4-й ряды опытных пробирок добавляли по 0,02 мл адреналина (1-й и 3-й ряды) и гинипрала (2-й и 4-й ряды) в возрастающей концентрации соответственно 10-1010-910-8 10-7 10-610-5, а в 3-й и 4-й ряды добавляли 0,02 милдроната в концентрации 10-5 г/мл. Затем все пробирки инкубировали в термостате типа ТС-80М-2 в течение 10 мин при температуре 37 °С, после чего во все пробирки (кроме холостых проб) добавляли по 5 мл 0,40 % раствора №С1 и повторно инкубировали в течение 30 мин при температуре 37 °С, подвергая в дальнейшем 5-минутному центрифугированию на центрифуге типа ОПн-8УХЛ4 при 2000 об/мин. Для каждой пробирки измеряли оптическую плотность надосадочной жидкости (против надосадочной жидкости, содержавшейся в холостой пробе с 1 % раствором №С1) на фотоэлектроколориметре типа КФК-2 с зеленым светофильтром при длине волны 540 нм в кювете с толщиной
поглощающего слоя 10 мм. Величина оптической плотности надосадочной жидкости опытной пробы выражали в процентах к оптической плотности надосадочной жидкости пробы с дистиллированной водой.
Результаты исследования Небеременные
В образцах крови небеременных женщин имеются достоверные отличия в абсолютных значениях ОРЭ между различными концентрациями адреналина и ганипрала, причём в среде ганипра-ла эти значения меньше значений ОРЭ в среде с адреналином различной концентрации. Так, при концентрации адреналина 10-5 г/мл ОРЭ составляет 315,4 ± 33,00, при концентрации гинипрала 10-5 г/мл - 275,5 ± 35,2. Достоверные отличия во всех концентрациях. Дозозависимости нет в обоих случаях (табл. 1).
Милдронат в концентрации 10-5 г/мл, добавленный к среде адреналина разной концентрации, практически никак не влияет на значения ОРЭ. Достоверные отличия только в среде адреналина 10-7 г/мл: так при концентрации адреналина 10-5 г/мл ОРЭ составила 315,4 ± 33,00, при добавлении в эту среду милдроната 10-5 г/мл абсолютное значение ОРЭ составило 318,1 ± 25,5. В % от Е0 в этой же концентрации адреномиметика значение ОРЭ составило 32,43 ± 2,3, при добавлении в эту среду милдроната в концентрации 10-5 г/мл значение в % от Е0 составило 32,70 ± 2,5. Отличия недостоверны во всех концентрациях адреномиметика, кроме 10-7 г/мл.
Таблица 1
Осморезистентность эритроцитов (абсолютные значения и в % от Е0) (М ± т)
Концентрация, г/мл Е0 Ек 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10
Адреналин 972,6 323,5 315,4* 323,2* 310,3*1 313,5* 314,6* 302,1*
± 35,3 ± 33,6 ± 33,0 ± 30,6 ± 33,42 ± 34,32 ± 31,9 ± 33,13
В % к Е0 32,43** 33,23** 319**2 32,23** 32,35** 31,06**
± 2,3 ± 2,82 ± 2,6 ± 3,0 ± 2,93 ± 2,5
Адреналин + 318,1 350,3 348,12 315,3 319,4 310,5
милдронат 10-5 г/мл ± 25,5 ± 24,2 ± 26,5 ± 25,2 ± 23,5 ± 22,1
В % к Е0 32,70 35,6 35,8 32,4 32,8 31,57
± 2,5 ± 2,2 ± 2,1 ± 2,5 ± 1,8 ± 2,1
Гинипрал 275,53 268,23 270,33 280,223 277,63 276,4
± 35,2 ± 32,3 ± 32,5 ± 33,6 ± 34,3 ± 31,2
В % к Е0 28,33 27,6 27,8 28,8 28,54 28,4
± 2,2 ± 3,1 ± 3,2 ± 3,8 ± 2,8 ± 2,85
Гинипрал + 356,2 322,3 379,4 367,3 389,6 355,12
милдронат 10-5 г/мл ± 35,2 ± 35,8 ± 33,3 ± 34,2 ± 35,1 ± 35,8
В % к Е0 36,60 33,11 38,97 37,73 40,00 36,50
± 3,2 ± 3,1 ± 2,7 ± 3,5 ± 2,8 ± 3,6
Примечание. * - достоверные отличия показателей абсолютных показателей ОРЭ в среде адреналина и гинипрала (р < 0,05); ** - достоверные отличия показателей ОРЭ в % к Е0 в среде адреналина и гинипрала (р < 0,05); 1 - достоверные отличия показателей абсолютных показателей ОРЭ в среде адреналин и адреналин + милдронат 10-5 г/мл (р < 0,05); 2 - достоверные отличия показателей ОРЭ в % к Е0 в среде адреналина и адреналин + милдронат 10-5 г/мл (р < 0,05); 3 - достоверные отличия показателей абсолютных показателей ОРЭ в среде гинипрал и гинипрал + милдронат 10-5 г/мл (р < 0,05); ° - достоверные отличия показателей ОРЭ в % к Е0 в среде гинипрал и гинипрал + милдронат 10-5 г/мл (р < 0,05). То же в табл. 2, 3.
Николаева И.С., Медведев Б.И., Помаскин И.Н. Изменение адренореактивности эритроцитов
под действием милдроната
ливал их действие. В среде с адреналином 10-6 г/мл (без милдроната ) % к Е0 составил 68,5 ± 3,6, при добавлении милдроната 10-5 г/мл % к Е0 составил 80,86 ± 3,2. Милдронат сильнее усиливает действие гинипрала. Так в среде с гинипралом 10-6 г/мл (без милдроната ) % к Е0 составил 63,2 ± 3,2, при добавлении милдроната 10-5 г/мл % к Е0 составил 94,2 ± 3,28 (табл. 2).
Беременные с УПР В группе с УПР абсолютные значения в среде адреналина и гинипрала достоверно отличимы при всех концентрациях адреномиметиков, кроме крайних - 10-5 и 10-10 г/мл (табл. 3).
В % к Е0 в среде адреналина и гинипрала достоверные отличия показателей ОРЭ только в концентрации 10-6, 10-7, 10-8 г/мл. Милдронат усиливает действие и адреналина и гинипрала - отличия
Таблица 2
Осморезистентность эритроцитов (абсолютные значения и в % от Е0) (М± т)
Концентрация, г/мл Е0 Ек 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10
Адреналин 920,3 ± 22,2 489,5 ± 24,22 633,5*' ± 23,3 630,5*' ± 25,3 638,2*' ± 24,3 640,00*' ± 24,4 623,3*' ± 24,3 625,4*' ± 24,8
В % к Е0 68,8**2 ± 3,3 68,5**2 ± 3,6 69,3**2 ± 3,08 69,54**2 ± 3,7 67,73**2 ± 3,0 68,0**2 ± 3,2
Адреналин + милдронат 10-5 г/мл 734,32 ± 25,5 740,2 ± 25,3 722,3 ± 23,3 712,5 ± 26,4 689,4 ± 22,2 700,2 ± 22,3
В % к Е0 79,7 ± 3,2 80,86 ± 3,2 78,37 ± 3,08 77,37 ± 3,8 74,8 ± 3,2 76,3 ± 3,5
Гинипрал 592,23 ± 22,2 586,33 ± 22,9 575,23 ± 24,2 598,203 ± 23,2 569,23 ± 23,2 567,003 ± 24,2
В% к Е0 64,35 ° ± 3,2 63,2 ° ± 3,2 62,6 ° ± 3,6 65,00 ° ± 3,27 60,85 ° ± 3,56 61,60 ° ± 3,7
Гинипрал + милдронат 10-5 г/мл 844,3 ± 24,1 867,3 ± 24,3 880,1 ± 22,7 845,3 ± 25,3 850,5 ± 22,5 860,0 ± 26,2
В % к Е0 91,74 ± 3,2 94,2 ± 3,28 95,63 ± 3,2 91,85 ± 3,2 92,42 ± 3,2 93,45 ± 3,2
Таблица 3
Осморезистентность эритроцитов (абсолютные значения и в % от Е0) (М ± т)
Концентрация, г/мл Е0 Ек 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10
Адреналин 900,6 ± 35,01 548,2 ± 34,2 510,5' ± 33,5 498,8*' ± 33,6 478,4*' ± 33,6 482,4*' ± 32,3 493,4*' ± 33,5 472,3' ± 32,2
В % к Е0 56,682 ± 3,6 55,34**2 ± 3,3 531**2 ± 3,10 53,56**2 ± 3,41 54,82 ± 3,26 52,452 ± 3,4
Адреналин + милдронат 10-5 г/мл 708 ± 25,3 757 ± 25,2 760 ± 23,3 735 ± 28,2 700 ± 26,32 700 ± 27,2
В % к Е0 78,61 ± 3,12 84,06 ± 3,4 84,39 ± 3,3 81,61 ± 3,8 77,73 ± 3,7 77,73 ± 3,1
Гинипрал 515,003 ± 34,3 534,43 ± 34,3 534,53 ± 31,2 522,73 ± 33,4 505,93 ± 31,2 499,53 ± 32,8
В % к Е0 57,18 ° ± 2,9 59,34 ° ± 2,4 59,35 ° ± 2,3 58,04 ° ± 2,4 56,18 ° ± 3,6 55,46 ° ± 2,7
Гинипрал + милдронат 10-5 г/мл 818 ± 36,3 825 ± 35,3 823 ± 36,1 840 ± 32,3 722 ± 38,5 730 ± 31,5
В% к Е0 90,83 ± 4,9 91,61 ± 3,93 91,38 ± 4,3 93,27 ± 4,6 80,17 ± 3,92 81,06 ± 4,32
Напротив, в среде гинипрала милдронат в концентрации 10-5 г/мл повышает как абсолютные значения ОРЭ, так и в % от Е0. Так при концентрации гинипрала 10-5 г/мл ОРЭ составила 275,5 ± 35,2, при добавлении в эту среду милдроната 10-5 г/мл абсолютное значение ОРЭ составило 356,2 ± 35,2, в % от Е0 без милдроната значение составило 28,33 ± 2,2, а при добавлении милдроната 10-5 г/мл -36,6 ± 3,2.
Таким образом, милдронат у небеременных усиливает действие гинипрала - селективного Р2-адреномиметика, а на действие адреналина влияния не оказывает.
Беременные с физиологическим течением Милдронат 10-5 г/мл как в среде с адреналином, так и в среде с гинипралом достоверно уси-
Проблемы здравоохранения
статистически достоверны во всех концентрациях. Но так же как и в группе беременных с физиологическим течением беременности, милдронат достоверно сильнее усиливает действие гинипрала.
Полученные данные доказывают свойство милдроната усиливать действие Р-адреномиме-тиков, в частности реализуемых за счет активации Р2-АР. Так как действие милдроната в группах беременных с физиологическим течением и с признаками УПР - однонаправленное (усиливает действие как адреналина, так и гинипрала, причём второго значительнее), всё вышеизложенное подтверждает гипотезу о том, что УПР протекает на фоне нормальной р-адренореактивности.
Литература
1. Абрамченко, В.В. Пролонгирование эффекта в-адреномиметиков (гинипрала) в сочетании с комплексом унитиол-аскорбиновая кислота / В.В. Абрамченко, Е.В. Костюшов, Н.Р. Данилова // Проблемы репродукции. - 2001. - Т. 7, № 4. - С. 51-52.
2. Гусева, Е.В. в-адренореактивность эритроцитов женщин при нормальных и осложненных родах / Е.В. Гусева, С.А. Дворянский, В.И. Цир-кин // Акушерство и гинекология. - 1998. - № 4. -С. 17-22.
3. Калвиныш, И.Я. Милдронат и механизмы оптимизации клеточного производства энергии в условиях кислородного голодания / И.Я. Калвиныш // Материалы III Междунар. симпозиума «Цереброкардиальная патология - новое в диагностике и лечении». - Судак, Украина, 2001. -С. 3-17.
4. Метод оценки адренореактивности организма (fj-арм) у беременных для прогнозирования течения родов / Л.В. Адамян, Т.Ю. Смольнова, И.Г. Длусская и др. // Проблемы репродукции. -2006. - № 1. - С. 91-98.
5. Осокина, А.А. Клинико-лабораторная характеристика ^-адренергического механизма при угрозе преждевременных родов: автореф. дис. ... канд. мед. наук / А.А. Осокина. - Киров, 1998. -22 с.
6. Подтетенев, А. Д. Прогнозирование, профилактика и лечение слабости и дискоординации родовой деятельности: автореф. дис. ... д-ра мед. наук /А.Д. Подтетенев. - СПб., 2003. - 32 с.
7. Horga, J.F. A beta-2-adrenergic receptor activates adenilate-cyclase in human erythrocyte membranes at physiological calcium plasma concentration / J.F. Horga, J. Gisbert, De J.C. Agustin et al. // Blood Сell Мol Dis. - 2000. - V. 3. - Р. 223-228.
Поступила в редакцию 17 июня 2011 г.
