CC BY
12Ветеринарный врач. 2022 № 3 С.53-56. The veterinarian. 2022; (3): 53-56.
Научная статья
УДК 636.087.7.085.19
DOI 10.33632/1998-698Х.2021_53_57
Исследования острой токсичности кормовой добавки «Protigen» на лабораторных животных
Лилия Ильгизовна Сабирзянова1, Александр Михайлович Лунегов1, Гелла Владимировна Коновалова2, Варвара Вениаминовна Токарь2
1 Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины, кафедра фармакологии и токсикологии, Санкт-Петербург, Россия, l-sabirzyanova@list.ru
2 Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, Москва, Россия g.konovalova@vgnki.ru
Автор ответственный за переписку: Сабирзянова Лилия Ильгизовна l-sabirzyanova@list.ru
Аннотация. Кормовая добавка «Protigen» - инновационный ингредиент, обеспечивающий медленное высвобождение небелкового азота (NPN) в рубце. Это гарантирует, что бактерии рубца имеют постоянный доступ к этому важному источнику питания, что приводит к увеличению количества микробного протеина, перевариванию клетчатки и появлению доступной энергии для синтеза молока и производства мяса. Целью нашей работы было проведение доклинических исследований кормовой добавки «Protigen» для ветеринарного применения, в частности острой токсичности, на лабораторных животных и установление класса острой опасности. Исследования острой токсичности были проведены на аутбредных крысах весом 190-210 грамм в марте 2022 года в Санкт-Петербургском государственном университете ветеринарной медицины. При изучении острой токсичности при внутрижелудочном введении, «Protigen» вводили в дозе 5000 мг/кг массы животного. Добавку вводили сначала одному животному, наблюдение продолжали в течение 3 суток. Гибели животного и признаков интоксикации не наблюдали. После истечения трех суток, мы ввели кормовую добавку в той же дозе и теми же путями введения четырем другим животным. Гибели животных не было выявлено, прочие нарушения общего состояния и какие-либо признаки, свидетельствующие о токсическом действии изучаемой кормовой добавки «Protigen», отсутствовали. В результате проведения исследований острой токсичности на лабораторных животных кормовой добавки «Protigen» для ветеринарного применения при внутрижелудочном введении установлено, что доза 5000 мг/кг не вызвала гибели подопытных животных. Согласно классификации СГС, исследуемую кормовую добавку, можно отнести к 5 классу опасности - малотоксичным соединениям.
Ключевые слова: острая токсичность, доклинические исследования, лабораторные животные, кормовая добавка, protigen, класс опасности.
Studies of acute toxicity of protigen feed additive on laboratory animals
Liliia I. Sabirzyanova 1 Alexander M. Lunegov1, Gella V. Konovalova 2, Varvara V. Tokar2
1 St. Petersburg State University of Veterinary Medicine, St. Petersburg, Russia
2 All-Russian State Center for Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed, Moscow, Russia
Corresponding author: Lilia Ilgizovna Sabirzyanova, l-sabirzyanova@list.ru
Abstract. «Protigen» feed additive is an innovative ingredient that provides a slow release of nonprotein nitrogen (NPN) in the rumen. This ensures that rumen bacteria have constant access to this important food source, resulting in increased microbial protein, fiber digestion, and available energy for milk synthesis and meat production. The purpose of our work was to conduct preclinical studies of the feed additive «Protigen» for veterinary use, in particular acute toxicity, on laboratory animals and to establish the class of acute toxicity. Acute toxicity studies were carried out on outbred rats 190-210 gramm in March 2022 in the St. Petersburg State University of Veterinary Medicine. When studying acute toxicity with intragastric administration, «Protigen» was administered at a dose of 5000 mg/kg of animal weight. The additive was first administered to one animal, the observation continued for 3 days. The death of the animal and signs of
poisoning were not observed. After the expiration of three days, we introduced the feed additive at the same dose and by the same routes of administration to four other animals. The death of animals was not detected, other violations of the general condition and any signs indicating the toxic effect of the studied feed additive "Protigen" were absent. As a result of acute toxicity studies on laboratory animals of the Protigen feed additive for veterinary use when administered intragastrically, it was found that a dose of 5000 mg/kg did not cause the death of experimental animals. According to the HGS classification, the studied feed additive can be attributed to the 5th hazard class - low-toxic compounds.
Keywords: acute toxicity, preclinical studies, laboratory animals, feed additive, protigen, hazard
class.
Введение. В системах производства жвачных животных 75-95% пищевого азота, потребляемого в виде кормового белка, выводится из организма. Этот азот тратится впустую, потому что жвачные животные, как правило, не могут эффективно использовать азот, и это оказывает серьезное влияние на производительность животных, прибыльность и окружающую среду [5].
Контролируемая и постоянная поставка аммиака для рубца, обеспечиваемая кормовой добавкой «Protigen», служит для удовлетворения потребностей микробов рубца в азоте более эффективно, чем другие источники, такие как прямая кормовая мочевина. Это приводит к более эффективному использованию пищевого азота, увеличению микро-бного белка, поставляемого животному, и снижению экскреции азота.
Кормовая добавка «Protigen» - обеспечит медленное высвобождение небелкового азота в рубце. Это гарантирует, что бак-
терии рубца будут иметь постоянный доступ к этому важному источнику питания, что приведет к увеличению количества микробного протеина, перевариванию клетчатки и появлению доступной энергии для синтеза молока и производства мяса.
Кормовая добавка «Protigen» содержит в своём составе мочевину, пальмовый стеарин, экстракт куркумы и вспомогательные вещества. За счет мочевины, которая содержит две молекулы азота, микрофлора рубца в два раза больше синтезирует микробный протеин, тем самым обеспечивает потребности организма в белке. Пальмовый стеарин используется для добавления упругости, улучшения и стабилизации консистенции, в том числе он в своем составе содержит около 40% олеиновых жирных кислот, которые способствуют снижению количества холестерина и повышают тонус сосудов. Экстракт куркумы часто применяется в качестве мощного протиивовос-палительного средства и иммуностимулятора, способствует нормализации обменных процессов в организме. Данная кормовая добавка
предназначена в качестве источника азота в кормах для жвачных животных.
В связи с тем, что для регистрации кормовых добавок для животных необходимо провести ряд доклинических исследований, в том числе токсикологических, нашей целью исследований стало изучение острой токсичности кормовой добавки «Protigen» на лабораторных животных.
Материалы и методы. Работа с лабораторными животными проводилась в соответствии с требованиями Директивы 2010/ 63/^ ЕВРОПЕЙСКОГО ПАРЛАМЕН-ТА И СОВЕТА ЕВРОПЕЙСКОГО СОЮЗА от 22.09.2010 по охране животных, используемых в научных целях.
Планирование эксперимента предполагало использование минимального количества животных, необходимого для получения статистически достоверных результатов. Подготовку к опыту лабораторных грызунов проводили в соответствии с ГОСТ 32296-2013 [1].
Исследования острой токсичности были проведены на аутбредных крысах в марте 2022 года в Санкт-Петербургском государственном университете ветеринарной медицины. В исследовании участвовали самки весом 190210 грамм, закупленные в Федеральном государственном унитарном предприятии «Питомник лабораторных животных «РАППОЛОВО». Для проведения исследования острой токсичности, было использовано 5 животных.
Перед исследованием все животные были подвергнуты профилактическому каран-тинированию. В течение карантина проводили ежедневный осмотр каждого животного (поведение и общее состояние), дважды в день животных наблюдали в клетках, оценивали такие критерии, как состояние шерстного покрова, поедаемость корма, потребление воды. Перед началом исследования животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, были распределены в группы методом по принципу аналогов [2, 3, 4].
В ходе исследования были использо-
ваны клетки для содержания лабораторных мышей и крыс М-5 (475x350x200 мм) 3W со съемным поддоном. Для кормления животных использовался комбикорм полнорационный для лабораторных животных ЛБК-120 (Тос-ненский комбикормовый завод), соответствующий ГОСТ 34566-2019. Профильтрованная водопроводная вода давалась в стандартных автоклавированных поилках. Согласно ГОСТ 32296-2013, за 12 часов до начала опыта животных ограничили в кормлении, вода без ограничений [1]. Перед введением каждую крысу взвешивали и рассчитывали индииви-дуальную дозу кормовой добавки. При перо-ральном введении кормовой добавки применяли атравматичные оральные дозировочные иглы 16G * 75 мм, искривленные, которые погружали до желудка. После введения кормовой добавки корм и вода были в свободном доступе.
Для оценки острой токсичности начальная доза соответствовала 5000 мг/кг (рекомендации ГОСТ 32296-2013 «Основные требования к проведению испытаний по оценке острой токсичности при внутрижелудочном
Таблица 1 «Protigen»,
Данные таблицы свидетельствуют о том, что при внутрижелудочном введении кормовой добавки в дозе 5000 мг/кг летальных эффектов не зарегистрировано. Также не отмечалось значимых нарушений общего состояния и поведения животных. Общее состояние и поведение животных носили нормальный характер. Масса экспериментальных животных в ходе проведения исследований не имела статистически значимых изменений.
Вскрытие показало, что кормовая добавка не вызывает у животных видимых патологических изменений внутренних органов, введение кормовой добавки не сопровождалось местно-раздражающим действием.
При патологоанатомическом вскрытии видимых патологических изменений во внутренних органах не обнаружено. Кожа и под-
поступлении методом фиксированной дозы»), как максимально переносимая доза при таком пути введения.
Результаты исследований. Кормовую добавку перед введением заранее измельчали и разбавляли 2 мл водой для инъекций. После внутрижелудочного введения кормовой добавки «Protigen» одному животному, мы не наблюдали каких-либо побочных реакции. В течение трех суток наблюдений гибели животного не было выявлено. После истечения трех суток, мы ввели кормовую добавку в той же дозе четырем другим животным. В связи с возможными отдаленными последствиями мы вели наблюдение за животными в течение четырнадцати дней. Гибели животных не было выявлено, прочие нарушения общего состояния и какие-либо признаки, свидетельствующие о токсическом действии изучаемой кормовой добавки, отсутствовали.
На протяжении 14 дней исследования была изучена динамика увеличения средней массы тела крыс при внутрижелудочном введении кормовой добавки в дозе 5000 мг/кг, которые представлены в таблице 1.
кожная клетчатка без видимых патологических изменений Расположение внутренних органов в грудной и брюшной полости не отмечалось. Сердце без видимых патологических изменений. Легкие имели бледно-розовую окраску, без кровоизлияний. Желудок имел правильную форму, слизистая оболочка желудка была однородно окрашена, без кровоизлияний, бледно-розового цвета. Слизистая тонкого и толстого была однородно окрашена, без кровоизлияний, бледно-розового цвета. Величина печени и форма имели правильные параметры, без патологических изменений. Величина и форма почек соответствовали нормам для данного вида животных, без кровоизлияний, коричневато-сероватой окраски. Селезенка имела правильную для данного вида животных форму и размер, равномерную ок-
- Динамика массы тела крыс после внутрижелудочного введения кормовой добавки _(г, п=5)
Показатели Масса тела крыс, г
Количество животных 1 4
Масса животных до начала эксперимента 204 207±0,4
Масса животных 3 -й день эксперимента 211 214±0,8
Масса животных на 7-й день эксперимента 225 229±0,8
Масса животных на 11-й день эксперимента 231 234±0,8
Масса животных на 14-й день эксперимента 236 239±0,8
раску без кровоизлияний, темно-вишневый цвет, гладкую поверхность и плотноватую консистенцию.
Заключение. Проведенные экспериментальные исследования показали, что кормовая добавка «Protigen» при однократном внутрижелудочном введении в дозе 5000 мг/кг не вызывает выраженных токсических эффек-
тов, падежа животных не отмечено. Таким образом, результаты токсикометрии, данные наблююдений за экспериментальными животными в период опыта позволяют отнести кормовую добавку при внутрижелудочном введении к 5 классу - нетоксичным веществам (согласно Системе классификации опасности и маркировки химической продукции (СГС)).
Список источников
1. ГОСТ 32296-2013. Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Основные требования к проведению испытаний по оценке острой токсичности при внутрижелудочном поступлении методом фиксированной дозы: межгос. стандарт: изд. офиц.: дата введения 2014-08-01. - Москва: Стандартинформ, 2019 . - 13 с.
2. ГОСТ 33215-2014 Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур (Переиздание): межгос. стандарт: изд. офиц. : дата введения 2016-07-01. - Москва: Стандартинформ, 2019 . - 13 с.
3. Приказ МСХ РФ от 06.03.2018 г. № 101 «Об утверждении правил проведения доклинического исследования лекарственного средства для ветеринарного применения, клинического исследования лекарственного препарата для ветеринарного применения, исследования биоэквивалентности лекарственного препарата для ветеринарного применения.
4. Хабриев Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических лекарственных средств / Р. У. Хабриев - 2-изд., перераб. и доп. - Москва: ОАО "Издательство "Медицина", 2005. - 832 с.
5. Эдектронный журнал «Copyright». [Электронный ресурс]. URL: http://www.alltech.com/ru-ru/optigenr режим доступа: своюодный (последний визит 14.04.22)
References
1. GOST 32296-2013. Test methods for the effects of chemical products on the human body. The main requirements for conducting tests to assess acute toxicity with intragastric intake by the fixed dose method : intergos. standard : ed. ofits. : date of introduction 2014-08-01. - Moscow: Standartinform, 2019 . -13 p .
2. GOST 32644-2014. Testing methods for the effects of chemical products on the human body. Acute oral toxicity - a method for determining the acute toxicity class (Reissue): mezhgos. standard: ed. ofits. : date of introduction 2015-06-01. - Moscow : Standartinform, 2019 . - 13 p .
3. GOST 33215-2014 Guidelines for the maintenance and care of laboratory animals. Rules of equipment of premises and organization of procedures (Reissue) : mezhgos. standard : ed. ofits.: date of introduction 2016-07-01. - Moscow : Standartinform, 2019 . - 13 p .
4. Khabriev R. U. Guidelines for experimental (preclinical) study of new pharmacological drugs / R. U. Khabriev - 2nd ed., reprint. and additional - Moscow : JSC "Publishing House "Medicine", 2005. -832 p.
5. Edektronny magazine "Copyright". [Electronic resource] URL: http:// www.alltech.com/ru-ru/optigenr access mode: svoyuodny (last visit 14.04.22)
Вклад авторов:
Сабирзянова Л. И. - главный исполнитель исследования, написание исходного текста.
Лунегов А. М. - научное руководство, исполнитель исследования, доработка текста, итоговые
выводы.
Коновалова Г. В. - научное руководство; концепция исследования; развитие методологии Токарь В. В. - научное руководство; концепция исследования; развитие методологии Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Contribution of the authors:
Liliia I. Sabirzyanova is the main performer of the research, writing the source text.
Alexander M. Lunegov - scientific guidance, research executor, revision of the text, final conclusions.
Gella V. Konovalova - scientific guidance; research concept; development of methodology Varvara V. Tokar - scientific guidance; research concept; development of methodology.
Статья поступила в редакцию 14.04.2022г.; одобрена после рецензирования 20.05.2022г.; принята к публикации 08.06.2022 г.
The article was submitted 14.04.2022г.; approved after reviewing 20.05.2022г.; accepted for publication 08.06.2022 г.
© Сабирзянова Л.И., Лунегов А.М., Коновалова Г.В., Токарь В.В. 2022
