CC BY
14УДК 616-006.04+615.849.1
Olga V. Shevchenko1'2'3, Vladimir I. Apanasevich4,
Pavel A. Lukyanov1
RESEARCH OF THE POSSIBILITY OF GENERATING ACTIVE FORMS OF OXYGEN IN COMPLEXES OF CHLORIN E6 WITH EUROPIUM UNDER GAMMA IRRADIATION FOR ONCOTHERAPY
1PIBOC FEB RAS; Ave. 100-let Vladivostok, 159, s. Vladivostok, 690022, Russia
2FEFU School of Natural Sciences, Sukhanova St, 8, s. Vladivostok, Russia
3Engineering and Technology Center of the Institute of Chemistry of FEB RAS, 100-let Vladivostok, 159, s. Vladivostok, 690022, Russia
4Institute of Surgery, PSMU, Ave Ostryakova, 2, s. Vladivostok, Russia. e-mail: tarakovaolga@gmail.com
The molecular binary complex of chlorin E6 with europium and its more stable analogues based on polyethyleneimine were synthesized for using in photodynamic therapy. The possibility of generating reactive oxygen species with those complexes under UV and gamma radiation was studied. The optimal radiation dose of 2 Gray was established. It was determined that the resulting molecular complexes are not toxic for T-47D breast cancer cells at the dose of 200 pg/ml and less.
Key words: photodynamic therapy, photosensitizer, chlorin E6, europium, reactive oxygen species, UV radiation, gamma radiation.
DOI 10.36807/1998-9849-2020-52-78-23-27
Шевченко О.В.1,2,3, Апанасевич В.И.4, Лукьянов П.А.1
ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ГЕНЕРАЦИИ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА В КОМПЛЕКСАХ ХЛОРИНА Е6 С ЕВРОПИЕМ ПРИ ГАММА-ОБЛУЧЕНИИ ДЛЯ ОНКОТЕРАПИИ
Тихоокеанский институт биоорганической химии Г.Б. Елякова ДВО РАН, пр-кт 100 лет Владивостоку, 159, Владивосток, 690022, Россия
Дальневосточный федеральный университет, ул. Суханова, 8, Владивосток, 690091, Россия 3Институт химии ДВО РАН, пр-кт 100 лет Владивостоку, 159, Владивосток 690022, Россия 4Тихоокеанский государственный медицинский университет, пр-кт Острякова, 2а, Владивосток, 690002, Россия. e-mail: tarakovaolga@gmail.com
Синтезированы молекулярный бинарный комплекс хлорина Е6 с европием, а также его более стабильные аналоги на основе полиэтиленимина для использования в фотодинамической терапии. Проведено исследование возможности генерации активных форм кислорода этими комплексами при УФ и гамма-облучении. Подобрана оптимальная доза облучения в 2 Грея. Определено, что полученные молекулярные комплексы не токсичны для клеток рака молочной железы линии T-47D в дозе 200 мкг/мл и менее.
Ключевые слова: фотодинамическая терапия, фотосенсибилизатор, хлорин E6, европий, активные формы кислорода, УФ-облучение, гамма-облучение..
Дата поступления 31 октября 2019 года
Введение
Проблема онкопатологии чрезвычайно актуальна в настоящее время. По данным Всемирной организации здравоохранения в 2018 году от злокачественных новообразований погибли 9,6 млн человек. На сегодняшний день насчитывается более 20 самых распространенных видов рака, в связи с чем активно развиваются методы его диагностики и терапии, а также совершенствуются ранее разработанные методы для усиления эффективности этих способов и снижения лекарственной нагрузки на организм пациента.
На основе имеющихся знаний о фотохимических реакциях и освоении лазерной техники в 1903 году немецкими учеными Hermann von Tappeiner и Albert Jesionek был проведен первый сеанс фотодинамической терапии (ФДТ) больного раком кожи с использованием эозина (рис. 1). И уже в 1905 году ими были описаны результаты лечения первых шести больных, и введен термин «фотодинамическое действие» [1].
Рис. 1. Первая задокументированная фотография 70-летнего пациента до и после проведения ФДТ в 1903 году с помощью эозина [1]
Классическое определение методу фотодинамической терапии дал доктор медицинских наук, профессор Евгений Филиппович Странадко: «ФДТ - это метод локальной активации накопившегося в опухоли фотосенсибилизатора видимым красным светом, что в присутствии кислорода тканей приводит к развитию
фотохимической реакции, разрушающей опухолевые клетки» [2].
Известно, что еще более 6000 лет назад в Древнем Египте применяли растения (пастернак, петрушка, зверобой), компоненты которых вызывают фотореакцию в тканях. После аппликации порошка из этих растений на пораженные участки кожи и последующего воздействия прямым солнечным светом на них появлялась пигментация по типу солнечного загара [2]. В 1550 году до н.э. фотомедицинские процедуры уже были описаны в Эберском папирусе и священной индийской книге «Atharva Veda» [3]. Согласно источнику для лечения витилиго применялись черные семена растения «Бейвечи» или «Вейсучайка» при экспозиции под прямым солнечным светом. Позже растение было идентифицировано как Psoralens corylifoiia. Оно же упоминается в буддийской литературе примерно с 200 года н.э. и в китайских документах периода Сунь 10-го столетия [4].
Переходя ближе к нашему времени, кислород-зависимая фотодинамическая реакция была открыта в 1897 году студентом Мюнхенского университета Oscar Raab и его наставником профессором Hermann von Tappeiner при изучении эффектов света и красителей на парамеции (Paramecium) [2]. Было показано, что при освещении солнечным светом в присутствии акридинового и некоторых других красителей парамеции погибают, в то время как при освещении светом в отсутствии красителя либо с красителем в темноте парамеции выживают.
Применение фотодинамического эффекта в онкологии берет свое начало с работы A. Policard, в которой демонстрируется флуоресценция некоторых злокачественных опухолей в оранжево-красной области спектра при облучении ультрафиолетом [5]. Объяснение этому - наличие эндогенных порфиринов в опухоли. Позже это было подтверждено на экспериментальных опухолях, которые начинают флуоресцировать в красной области спектра, если животным предварительно ввести гематопорфирин [6]. Важной вехой в развитии ФДТ явилось получение фотосенсибилизатора (производного гематопорфирина) с улучшенными свойствами, известного как HpD [7].
В 1984 году работы T.J. Dougherty привели к появлению коммерческого препарата на основе ге-матопорфирина - «Фотофрин». В 1993 году он был разрешен для клинического применения при лечении рака мочевого пузыря в Канаде [6]. Отечественным аналогом этого препарата является «Фотогем», разработанный в Российском химико-технологическом университете имени Д.И. Менделеева. Клинические испытания, начатые в 1992 году, показали его высокую эффективность [6]. Оба эти препарата, а также «Фото-сан», разработанный в Германии, относятся к фотосенсибилизаторам первого поколения, являются производными гематопорфирина и имеют максимум поглощения в диапазоне 628-632 нм, глубина некрозов при ФДТ составляет не более 1 см. Важным недостатком применения препаратов этого ряда является сильная фототоксичность: по результатам терапии у пациентов кожная реакция сохранялась от 1 до 6 месяцев [6]. Кроме того, было установлено, что помимо ткани опухолей и кожи в высоких концентрациях препараты задерживаются в клетках ретикулоэндотелиальной системы, печени, почках, селезенке и воспалительных тканях [6].
Со временем были синтезированы и клинически одобрены препараты второго поколения на основе хлоринов, бактериохлоринов, фталоцианинов и других соединений [6]. Некоторыми препаратами этого поколения являются: «Пурлитин» (Сша), «Лютекс» (США), «Фоскан» (Германия), «Фотосенс» (Россия), Фотодита-зин и Радохлорин (Россия). Стоит отметить, что не все перечисленные препараты отвечают требованиям идеального фотосенсибилизатора, среди них выделяется отечественный «Фотодитазин» (хлорин Е6). Сырьем для его производства является сине-зеленая водоросль Spirulina piatensis. При введении препарата в организм максимум накопления в опухоли наступает через 1,5-2 ч при практически полном выведении из организма в течение 28 ч.
Следует отметить, что в одной из важнейших ранних работ по ФДТ T. J. Dougherty и соавторы в 1978 году описали случаи частичного или полного некроза кожных или подкожных очагов злокачественных опухолей человека. И, если для проведения ФДТ в данной работе был использован ламповый источник света с системой фильтров, то уже в 1980 году впервые было применено воздействие лазерным излучением длиной волны 630 нм [2].
Однако, красный свет не способен проникать глубоко в биологические ткани, а ранее разработанные и применяемые в клинической практике препараты, имеют максимумы поглощения в области 630-690 нм, с проницаемостью тканей в этом диапазоне не более 2 мм. В связи с этим ФДТ используется в основном для поверхностно локализованных новообразований и кожных инфекций.
Следовательно, актуальным является разработка препарата для ФДТ глубинных опухолей. Для этого мы предлагаем использовать ионы европия, способные люминесцировать при гамма-облучении с целью активации комплекса «фотосенсебилиза-тор/европий».
Экспериментальная часть
Бинарный комплекс (E6/Eu) получали при рН 6,5 смешением раствора фотодитазина (хлорина Еб) (ООО «Вета-Гранд», Россия) (5 мг/мл) и EuCl3 (100 мг/мл) в мольном соотношении 4/1. Полученный раствор диализовали против дистиллированной воды и лиофильно высушивали.
Мультимодальный комплекс на основе поли-этиленимина(РЕ1) (Sigma-Aldrich, США) с молекулярной массой 25000 дальтон получали поэтапным связыванием компонентов с аминогруппами. Для активации карбоксильных групп E6, диэтилентриаминпентауксусной (DTPA, Acros, USA) и фолиевой кислотами (FA, Bio-Chemica, Spanish) использовали 1,2 моль водорастворимого карбодиимида (Sigma-Aldrich, США), 1,2 моль N-оксисукцинимида (Sigma-Aldrich, США) и 0,12 моль 4-диметиламинопиридина (DMAP, Sigma-Aldrich, США) в каждом случае. Полученные комплексы насыщали раствором EuCl3 при рН 6,5. Препараты диализовали против дистиллированной воды и лиофильно высушивали.
Оптическую плотность растворов и спектры снимали на планшетном спектрофотометре ц-Quant (BioTec, USA), ультрафиолетовое облучение растворов при 254 нм проводили в микропланшете с помощью лампы NU-6KL (Kondrad Benda, Germany) мощностью 12 Вт и на расстоянии 2 см, гамма-облучение - с по-
мощью линейного ускорителя TrueBeam STX (Varian, USA). Генерацию активных форм (АФК) кислорода определяли на планшетном флуориметре FL-600 (Bio-Tec, USA) с помощью флуоресцентного зонда 2',7'-дихлордигидрофлуоресцеина (DСF) (Sigma-Aldrich, США) по возрастанию флуоресценции при 530 нм и возбуждении при 485 нм.
Другим способом генерацию АФК фиксировали по уровню малонового диальдегида. Вводили в реакцию синтезированный препарат с концентрацией от 0,5 мг/мл и менее, 0,01 мг/мл моноолеата полиэти-ленгликоля (Tween 80) (Merck, Germany) с последующим УФ-воздействием в течение 30 мин. Далее отбирали 100 мкл полученных растворов, добавляли 50 мкл 60 мг/мл уксусной кислоты (Вектон, Россия), 50 мкл 8 мг/мл тиабарбитуровой кислоты (ТБК) (ЛенРеактив, Россия) c последующим нагревом в течение 20 мин при 100 °С. Оптическую плотность после охлаждения измеряли при 530 нм.
Токсичность препаратов изучали на клетках карциномы молочной железы линии T-47D (из коллекции ТИБОХ ДВО РАН) после инкубации с препаратами при различных концентрациях в течение 48 ч. Жизнеспособность клеток определяли с помощью тест-системы Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (Promega, USA).
Результаты и их обсуждение
На первом этапе исследовались бинарные комплексы хлорина Е6 (5 мг/мл) с EuCl3 (100 мг/мл) рН 6,5 в различном соотношении. Согласно графику насыщения образования комплекса E6/Eu определена его стехиометрия: 4 молекулы хлорина Е6 на 1 ион европия (рис. 2). По методу Чипмана [8] рассчитана константа связывания, равная 4,4х104 M-1. Это характерно для низкоаффинных, легко диссоциирующих комплексов.
s 1 4
о. 1 "
I=
¡а 1,2
0
° 1,0
5 1
^ 10
СС гп
1 0,6
о
ф
з- 0,4
| 0 2 4 6 8 10
О
Соотношение E6/Eu, в молях
Рис. 2. Оптическая плотность хлорина Е6 при 655 нм в присутствии различных концентраций EuCl3
Для получения более стабильного комплекса в качестве основы использовали высокомолекулярный полиэтиленимин, ковалентно привязывая к нему хлорин Е6 карбодиимидным способом. Присутствие хлорина Е6 в комплексах подтверждается наличием в их спектрах специфических полос поглощения в области 400, 500 и 655 нм, что хорошо согласуется с литературными данными [9] (рис. 3).
Рис. 3. Спектр поглощения 0,5 мг/мл хлорина Е6 в 0,15 М NaC, 0,01 M Na-фосфат, pH 7,4
Как упоминалось ранее, в результате лазерного воздействия на фотосенсибилизатор образуются АФК, токсичные для клеток. Однако значительную сложность составляет регистрация АФК в связи с их чрезвычайно высокой реакционной способностью и, соответственно, непродолжительным временем существования. К настоящему времени разработано большое количество методик определения АФК [10]. Один из самых широко применяемых методов - использование флуоресцентных зондов.
2',7'-дихлордигидрофлуоресцеин является широко распространенным флуоресцентным зондом, который традиционно используется для определения АФК. В присутствии АФК 2',7'-дихлордигид-рофлуоресцеин окисляется с образованием флуоресцирующего 2',7'-дихлорфлуоресцеина. К ряду широко известных флуоресцентных зондов относят: дигидро-родамин-123, дигидроэтидиум, 10-ацетил-3,7,-дигид-роксифеноксазин (коммерческое название Amplex Red), а также диацетат 2',7'-дихлордигидрофлуорес-цеина, который используется для определения внутриклеточных АФК [11]. Необходимым требованием к флуоресцентным зондам является высокий уровень селективности. К зондам, чувствительным к H2O2 относятся: пентафторбензесульфонил флуоресцеин, флуоресцентный краситель Peroxyfluour-1; боронатные красители: красный Peroxyresorufin-1 (PR-1), зеленый PF1 и голубой Peroxyxanthone-1 (PX-1) и многие другие [11].
Под действием АФК провоцируется перекисное окисление липидов, в результате которого образуется малоновый диальдегид (МДА) [10]. В результате цветной реакции МДА с тиабарбитуровой кислотой в кислой среде образуется окрашенный триметиновый комплекс с максимумом поглощения при 532 нм.
Мы исследовали возможность генерации АФК с помощью 2',7'-дихлордигидрофлуоресцеина в прямом бинарном комплексе E6/Eu и конъюгате с PEI (схема 1).
2',7'-дихлордигидрофлуоресцеин 2,7-дихлорфлуоресцеин
Схема 1. Образование 2,7-дихлорфлуоресцеина из 2',7'-дихпордигидрофлуоресцеина при взаимодействии с активными формами кислорода
Эксперимент проводился при УФ-обпучении для возбуждения хлорина Е6 в течение получаса. Определено, что при концентрации комплексов 5
мкг/мл отсутствует эффект внутреннего фильтра. В стабильном комплексе Е6 с РЕ1 отмечается более интенсивное увеличение флуоресценции, что, вероятно, связано с локализацией Е6 на поверхности глобулярной структуры полиэтиленимина (рис. 4).
к
S J
I
ф
о ®
ф >.
о >
е
2000 1600 1200 800 400 0
Eu-E6 PEI-E6
2,5
1,25
Концентрация, мкг/мл
Рис. 4. Нарастание флуоресценции в комплексах Еи/Е6 и РЕ1/Е6 под действием УФ в течение 30 мин в зависимости от концентрации
Были проведены исследования по влиянию полученных комплексов на образование МДА из Tween 80 под действием генерируемых АФК (схема 2). Согласно полученным данным высокий уровень образования МДА в этой тест системе отмечается при 29 мкг/мл и выше (рис. 5).
ев+н2о
ф
IT ч
о <и
Ср
о
с; ©
2500 2000 1500 1000 500
I
PEI-E6 Eu-E6
1,25 2,5 5
Концентрация, мкг/мл
малоновый тиобарбитуропая диальдегид кислота
Рис. 6. Нарастание флуоресценции в комплексах Eu/E6 и PEI/E6 после гамма-облучения дозой 2 Гр в течение 30 мин в зависимости от концентрации
Исследование токсичности препаратов для клеток рака молочной железы показало отсутствие токсичности в дозе 200 мкг/мл и ниже, что предполагает возможность их применения в биомедицинских приложениях.
Заключение
Показана принципиальная возможность использования гамма-облучения для генерации АФК в препаратах на основе европия и хлорина Е6.
Полученные бинарный комплекс Е6 с Eu и его конъюгат на основе полиэтиленимина способны генерировать активные формы кислорода, патологичные для клеток опухоли. Кроме того, эти препараты не токсичны в концентрации 200 мкг/мл и ниже, что открывает перспективы по их использованию для фотодинамической терапии глубоко локализованных опухолей.
Работа выполнена при поддержке Президиума ДВО РАН (грант 18-3-042).
rJ,
s N ОН
ь Н - н -
тримегиновый окрашенный комплекс
Схема 2. Образование малонового диальдегида из моноолеата полиэтиленгликоля (Tween 80) под действием активных форм кислорода
0 ^
ш ч
1
4,0 3,0 2,0 1,0 0,0
III
0,0 9,7 19,3 38,7 77,3 Концентрация Е6/Еи, мкг/мл
Рис. 5. Генерация АФК при УФ-облучении (254 нм) в течение 10 минут бинарным комплексом в присутствии Tween 80 по данным ТБК-теста
Полученные комплекс E6/Eu и конъюгат Е6 с PEI исследованы на возможность генерировать АФК при гамма-облучении. В качестве оптимальной дозы среди 2, 4 и 6 Грей выбрано минимальное значение. Вероятно, при более высоких дозах, происходит разрушение молекул хлорина Е6 и выгорание DCF (рис. 6).
Литература
1 Каплан М.А., Капинус В.Н., Попучиев В. В., Романко Ю.С, Ярославцева-Исаева Е.ВВ, Спиченкова И.С, Горанская Е.В. Фотодинамическая терапия: результаты и перспективы // Радиация и риск (Бюллетень Национального радиационно-эпидемиологического регистра). 2013. Т. 22. №. 3. С.115-123.
2. Слесаревская М.Н, Соколов А.В. Фотодинамическая терапия: основные принципы и механизмы действия // Урологические ведомости. 2012. Т. 2. №. 3. С. 24-28.
3. Власенко А.Б., Дорохина А.М, Бахметьев В.В. Фотохимические технологии в биомедицине // Тезисы докладов VI Международной научно-технической конференции «Наукоемкие технологии функциональных материалов». Санкт-Петербург, 9-11 октября 2019. СПб.: СПбГИКиТ, 2019. С. 54-55.
4. Хачатурян А.Р, Ярмолинская М.И. Опыт применения флуоресцентной диагностики и фотодинамической терапии наружного генитального эндометри-оза // Журнал акушерства и женских болезней. 2016. Т. 65. №. 3. С. 64-74.
5. Жарков В. В, Приступа Д. В, Малькевич В. Т. Фотодинамическая терапия в онкологии. Фотодинамическая терапия рака легкого // Онкологический журнал. 2015. Т. 9. №. 1. С. 84-93.
6. Гейниц А.В, Сорокатый А.Е, Ягудаев Д.М, Трухманов Р.С. Фотодинамическая терапия. История создания метода и ее механизмы // Лазерная медицина. 2007. Т. 11. №. 3. С. 42-46.
0
5
7. Шляхтин С.В., Трухачева Т.В. Возможности и перспективы использования производных хлорофилла для создания эффективных и безопасных фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии. Обзор литературы // Вестник фармации. 2010. № 2. С. 87106.
8. Shoshan V, Shavit N, Chipman D.M. Kinetics of nucleotide binding to chloroplast coupling factor (CF1) // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics. 1978. Т. 504. №. 1. Р. 108-122.
9. Чан Тхи Хай Иен, Раменская Г. В., Оборотова
H.А. Фотосенсибилизаторы хлоринового ряда в ФДТ опухолей // Российский биотерапевтический журнал. 2009. Т. 8. №. 4. С. 99-104.
10. Андреева Л.И,, Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей ли-пидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лабораторное дело. 1988. Т. 11. №. 41. С. 3.
11. Zhou M, Diwu Z, Panchuk-Voloshina N., Haugland R.P. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases // Analytical Biochemistry. 1997. №. 253. P. 162-168.
References
1 Kaplan M.A, Kapinus V.N, Popuchiev V.V., Romanko YU.S, YAroslavceva-Isaeva E.V., Spichenkova
I.S, Goranskaya E.V. Fotodinamicheskaya terapiya: rezu-l'taty i perspektivy // Radiaciya i risk (Byulleten' Nacion-al'nogo radiacionno-epidemiologicheskogo registra). 2013. T. 22. №. 3. S. 115-123.
2. Slesarevskaya M.N, Sokolov A.V. Fotodinamicheskaya terapiya: osnovnye principy i mekhanizmy dejstviya // Urologicheskie vedomosti. 2012. T. 2. №. 3. S. 24-28.
3. Vlasenko A.BB, Dorohina A.M., Bahmet'ev V.V. Fotohimicheskie tekhnologii v biomedicine // Tezisy dokla-dov VI Mezhdunarodnoj nauchno-tekhnicheskoj konfer-
encii «Naukoemkie tekhnologii funkcional'nyh materialov». Sankt-Peterburg, 9-11 oktyabrya 2019. SPb.: SPbGIKiT, 2019. S. 54-55.
4. Hachaturyan A.R, YArmolinskaya M.I. Opyt primeneniya fluorescentnoj diagnostiki i fotodinamicheskoj terapii naruzhnogo genital'nogo endometrioza // ZHurnal akusherstva i zhenskih boleznej. 2016. T. 65. №. 3. S. 6474.
5. ZHarkov V.V, Pristupa D.V, Mal'kevich V.T. Fotodinamicheskaya terapiya v onkologii. Fotodinamicheskaya terapiya raka legkogo // Onkologicheskij zhurnal. 2015. T. 9. №. 1. S. 84-93.
6. Gejnic A. V, Sorokatyj A.E, YAgudaev D.M., Truhmanov R.S. Fotodinamicheskaya terapiya. Istoriya sozdaniya metoda i ee mekhanizmy // Lazernaya medicina. 2007. T. 11. №. 3. S. 42-46.
7. SHtyahtin S. V, Truhacheva T V. Vozmozhnosti i perspektivy ispol'zovaniya proizvodnyh hlorofilla dlya sozdaniya effektivnyh i bezopasnyh fotosensibilizatorov dlya fotodinamicheskoj terapii. Obzor literatury // Vestnik farmacii. 2010. № 2. S. 87-106.
8. Shoshan V, Shavtt N, Chipman D.M. Kinetics of nucleotide binding to chloroplast coupling factor (CF1) // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics. 1978. T. 504. №. 1. P. 108-122.
9. CHan Thi Haj Ien, Ramenskaya G.V., Oboroto-va N.A. Fotosensibilizatory hlorinovogo ryada v FDT opuholej // Rossijskij bioterapevticheskij zhurnal. 2009. T. 8. №. 4. S. 99-104.
10. Andreeva L.I., Kozhemyakin L.A., Kishkun A.A. Modifikaciya metoda opredeleniya perekisej lipidov v teste s tiobarbiturovoj kislotoj // Laboratornoe delo. 1988. T. 11. №. 41. S. 3.
11. Zhou M, Diwu Z, Panchuk-Voloshina N, Haugland R.P. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases // Analytical Biochemistry. 1997. №. 253. P. 162-168.
Сведения об авторах:
Шевченко Ольга Вячеславовна, аспирант 2 года обучения Школы естественных наук ДВФУ, ведущий инженер Инженерно-технологического центра ИХДВО РАН, мл..науч. сотр. лаборатории молекулярной фармакологии и биомедицины ТИБОХ ДВО РАН; Владивосток, Россия^О^з V. Shevchenko, 2 year graduate student of the FEFU School of Natural Sciences, leading engineer of the Engineering and Technology Center of the Institute of Chemistry of FEB RAS, Ph.D. Laboratory of Molecular Pharmacology and Biomedicine PIBOC FEB RAS; Vladivostok, Russia; e-mail: tarakovaolga@gmail.com.
Апанасевич Владимир Иосифович, д-р мед. наук, профессор Института Хирургии ТГМУ; Владивосток, Россия; Vladimir I. Apanasevich, Dr Sci. (Med.), Professor of the Institute of Surgery, PSMU; Vladivostok, Russia; e-mail: oncolog222@gmail.com.
Лукьянов Павел Александрович, д-р хим. наук, профессор, зав. отделом молекулярной иммунологии, ТИБОХ ДВО РАН; Владивосток, Россия; Pavel A. Lukyanov, Dr Sci. (Chem), Professor, Head of the Department of Molecular Immunology, PIBOC FEB RAS; Vladivostok, Russia; e-mail: paluk@mail.ru.
