CC BY
74
КОРОТКІ ПОВІДОМЛЕННЯ
УДК 573.6:618.1:616-089.843
A.M. Феськов, И.А. Феськова, Е.С. Жилкова, А.Н. Зозулина
ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ВНУТРИМАТОЧНОГО ВВЕДЕНИЯ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ НА ЧАСТОТУ ИМПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНА У ПАЦИЕНТОК ПРИ ЛЕЧЕНИИ БЕСПЛОДИЯ МЕТОДОМ ЭКО
Центр репродукции и планирования семьи «Клиника профессора Феськова А.М.»
Вступление. Проблема ненаступления или невынашивания беременности при переносе эмбрионов высокого качества пациентам при лечении бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) является актуальной в современном акушерстве. Частота данной патологии в группе беременных после экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов достигает 30% [1]. Как известно, для успешной имплантации эмбриона необходимо согласование во времени готовности эндометрия к имплантации с развитием эмбриона (так называемое имплантационное окно). Принципиальную роль в подготовке слизистой оболочки матки к имплантации играет прогестерон. Установлено, что для циклов индуцируемой овуляции достаточно часто характерно асинхронное по отношению к овуляции созревание эндометриальных желез и стромы [2]. Своевременное созревание эндометрия при контролируемой стимуляции овуляции в рамках программы ЭКО и переноса эмбриона(ов) (ПЭ) было обнаружено менее, чем у 50% пациенток [3]. В ходе ряда исследований установлено, что в лимфоцитах периферической крови в норме присутствуют рецепторы прогестерона. При отсутствии беременности количество лимфоцитов, содержащих рецепторы прогестерона, сравнительно низкое. Однако количество таких клеток увеличивается при наступлении беременности. Содержание данных клеток возрастает пропорционально сроку беременности. Вероятно, такое увеличение числа рецепторов прогестерона может быть вызвано эмбрионом, который выступает в роли аллоантигена, стимулирующего лимфоциты крови [4]. При спонтанном аборте количество клеток, содержащих рецепторы прогестерона, резко уменьшается
и практически не отличается от показателей вне беременности. Появляется все большее количество данных в пользу того, что иммуномодулирующее действие гормонов имеет важное значение для поддержания нормальной функции эндометрия.
Целью данной работы явилось исследование влияния внутриматочного введения мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) на частоту имплантации эмбрионов пациенткам старше 35 лет в программе лечения бесплодия ЭКО и ПЭ. При этом в анамнезе у пациентов было 2 или более попыток ЭКО с отрицательным результатом.
Объект и методы исследования.
ЭКО протокол. В течение одного года в ходе данной работы было отобрано 100 семейных пар, имеющих в анамнезе не менее двух неудачных попыток ЭКО. Пациенты были разделены на 2 группы - по 50 семейных пар в каждой группе. В состав первой группы вошли 50 пациенток, средний возраст которых на момент обращения в клинику составил 37,3±2,4 лет. Для контролируемой стимуляции овуляции (КСО) пациенток первой группы применяли длинный протокол с а-ГнРГ. Внутриматочное введение мононуклеарных клеток периферической крови до переноса эмбриона у пациенток первой группы не применялось. Вторую группу вошли 50 пациенток, средний возраст которых составил 39,5±4,3 лет. При этом для пациенток второй группы было применено внутриматочное введение мононуклеарных клеток периферической крови до ПЭ. Для КСО пациенток второй группы использовали также протокол с а-ГнРГ. КСО для пациенток обеих групп заняла по времени не менее десяти дней. На момент трансвагинальной пункции размер фолликулов в среднем до-
стигал 18 мм. Для поддержки лютеиновой фазы для пациенток двух групп применяли препараты прогестеронового ряда.
Полученные после трансвагинальной пункции ооциты и зиготы в течение двух дней культивировались в средах Universal IVF Medium (Medicult). Эмбрионы, начиная с третьего дня развития и до стадии бластоцисты, культивировались в среде BlastAssist (Medicult). Ооциты и полученные после оплодотворения эмбрионы культивировались при температуре 36,8°С - 37,0°С; при содержании СО2 5,5 %. У всех пациенток групп 1 и 2 часть эмбрионов была получена методом ИКСИ. ПЭ проходил на третьи или на пятые сутки развития эмбрионов в среде UTM (Medicult). Пациенткам двух групп переносили не более двух эмбрионов. Для каждого переноса были выбраны эмбрионы лучшего качества.
Выделение и культивирование МКПК. Для выделения МКПК и их последующего культивирования кровь у пациенток второй группы брали непосредственно в день трансвагинальной пункции. Мононуклеарные клетки крови выделяли с помощью центрифугирования Ficoll-Hypaque. После центрифугирования МКПК отмывались в среде Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMl 1640), а после отмывки переносились в среду для культивирования. Составляющими для среды культивирования мононуклеарных клеток крови стали: RPMI 1640, чХГ (в концентрации не менее 5 МЕ/мл), Serum Substitute Supplement (SSS, Irvine Scientific, USA). Выделенные МКПК культивировались в течение 48 часов при температуре 37,0°С и содержании СО2 5,0 % [5]. После 48 часов культивирования МКПК (т.е. на вторые сутки развития эмбрионов) у пациенток группы 2 повторно брали кровь. Свежевыделенные МКПК после определенной обработки смешивали с выращенными мононуклеарными клетками крови. Полученную смесь клеток переносили в полость матки пациентки, используя катетер для ИСМ. Объем переносимой клеточной культуры не превышал 0,2 мл.
Результаты исследований и их обсуждение. В день переноса эмбрионов у пациентов обеих групп толщина эндометрия составляла 9-11мм. С момента переноса эмбрионов до выяснения результата программы ЭКО пациентам групп 1 и 2 проводилась стандартная поддержка эндометрия препаратами прогес-теронового ряда. Наличие клинической беременности подтверждалось с помощью ультразвукового исследования через три недели после ЭТ.
После проведения программы ЭКО и ПЭ у пациенток первой группы клиническая беременность была диагностирована в 20% случаев (10 пациенток). 60 % этих беременностей (6 случаев) были получены после переносов эмбрионов на пятые сутки развития. 40 % клинических беременностей (4 пациентки) было получено после переноса эмбрионов на третий сутки развития.
Среди пациенток второй группы, для которых был применен перенос МКПК в полость матки, клиническая беременность была получена в 38 % случаев (19 клинических беременностей). При этом 12 из этих беременностей (63.1 %) были получены после переносов эмбрионов на пятые сутки развития. 7 клинических беременностей (36.9 %) были получены после переносов эмбрионов на третьи сутки развития. В данный момент из 19, полученных во второй группе, беременностей две беременности закончились срочными родами живым плодом. В трех случаях произошло замирание беременности в малом сроке (до 8 недель). 14 клинических беременностей продолжают развиваться.
Выводы. На основании проделанной работы можно сделать вывод о том, что применение внутриматочного введения МКПК перед переносом эмбрионов пациентам, повторно проходящим курс лечения бесплодия методом ЭКО, значительно (р <0,05) повышает возможность имплантации эмбриона и наступления клинической беременности. Учитывая, что мононуклеарные клетки периферической крови в момент имплантации обладают способностью усиливать инвазию эмбриона, можно использовать данный метод для повышения шансов получения беременности у пациентов с неудачными попытками ЭКО в прошлом.
Перспективы дальнейших исследований. Учитывая тот факт, что в последнее время все больше изучается влияние иммунной системы на процесс имплантации эмбриона, перспективным является более углубленное изучение механизмов влияния внутриматоч-ного введения МКПК на процесс подготовки эндометрия (подготовки «имплантационного окна»). Интересна возможность применения данного метода для пациентов, проходящих курс лечения методом ЭКО, беременность у которых не наступает при переносе эмбрионов высокого качества.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Айламазян Э.К. Материалы XXV научной сессии НИИ акушерства и гинекологии.- М. : Под редакцией Э.К.Айламазяна, 1996-1997. - С.17 - 19
2. Применение препарата «Дюфастон» в период после переноса эмбрионов в программе экстракорпорального
оплодотворения / Киндарова Л.Б., Кузьмичев Л.Н. // Гинекология. - 2005. - Т. 7, № 2 - С. 24-26
3. Intrauterine administration of autologous peripheral blood mononuclear cells promotes implantation rates in patients with repeated failure of IVF-embryo transfer / S.Yoshioka, H. Fujiwara, T. Nakayama, K. Kosaka, T. Mori, S. Fujii. // Human Reproduction. - 2006. - V. 21, № 12. - Р. 3290-3294.
4. Progesteron supplementation increases luteal phase endometrial thickness and estradiol levels in-vitro fertilization / Segal S, Casper RF. // Hum Reprod. - 1992. - № 7. - P. 1210-1213.
5. Therapeutic maturation of endometrium in vitro fertilisation and embrio transfer / Ben Nun L., Jaffe R., Fejgin MD et al. // Fertil Steril. - 1992. - №57. - P. 953-962.
УДК 573.6:618.1:616-089.843
ВИВЧЕННЯ ВПЛИВУ ВНУТРІШНЬОМАТКОВОГО ВВЕДЕННЯ МОНОНУКЛЕАРНЬІХ КЛІТИН ПЕРИФЕРИЧНОЇ КРОВІ НА ЧАСТОТУ ІМПЛАНТАЦІЇ ЕМБРІОНА У ПАЦІЄНТКО ПРИ ЛІКУВАННІ БЕЗПЛІДДЯ МЕТОДОМ ЕКЗ
Феськов О.М., Феськова І.А., Жилкова Є.С., Зозуліна О.М.
Резюме. Досліджено вплив внутрішньоматкового введення мононуклеарньїх клітин периферичної крові (МКПК) на частоту імплантації ембріонів у пацієнток старше 35 років при лікування безпліддя методом ЕКЗ. З’ясовано, що застосування МКПК перед переносом ембріонів значно (майже в 1,9 рази) збільшує можливість імплантації ембріона й отримання клінічної вагітності. Клінічна вагітність в експериментальній групі пацієнтів отримана у 38 % випадків. Частота імплантації у групі пацієнтів без використання внутрішньоматкового введення мононуклеарньїх клітин периферичної крові становить 20 %.
Ключові слова: мононуклеарні клітини крові, імплантація, ЕКЗ.
UDC 573.6:618.1:616-089.843
INVESTIGATION of INFLUENCE of INTRAUTERUS PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS APPLICATION on EMBRYO IMPLANTATION RATES for PATIENTS during INFERTILITY CURING by IVF METHOD Feskov O., Feskova I., Zhylkova I., Zozulina O.
Summary. The influence of intrauterus application of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) on the embryo implantation rate for patients with age elder then 35 years in IVF programs was investigated. Application of PBMCs increases possibility of embryo implantation and pregnancy rate almost in 1,9 times. Pregnancy rate in the experimental group is 38 %. Pregnancy rate in the group of patients without PBMC using was 20 %.
Key words: blood mononuclear cells, implantation, IVF.
Стаття надійшла 26.02.2010 р.
