CC BY
40Исследование влияния релиз-активных препаратов на фиброзно-кистозную мастопатию
Васин Антон Сергеевич,
аспирант кафедры патофизиологии, ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова», anto-vasin@inbox.ru
Давыдов Виктор Викторович,
доктор медицинских наук, профессор кафедры патофизиологии, ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»
Свирина Жанна Александровна,
кандидат медицинских наук, ассистент кафедры патофизиологии, ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова»
Фиброзно-кистозная мастопатия у женщин является крайне распространённым заболеванием, которым страдает 29-70% женщин и которое часто приводит к образованию рака молочных желез. В целях поиска эффективных методов лечения мастопатии изучались релиз-активные препараты в сравнении с тамоксифеном. У крыс искусственно воспроизводилась ки-стозная мастопатия синестролом, затем выдавались различные релиз-активные препараты. Результат лечения сравнивался с тамоксифеном. Были получены данные, что Сотит с30, даже не содержащий молекул действующего вещества, вызывает статистически значимый регресс кист при мастопатии. Ключевые слова: фиброзно-кистозная мастопатия, релиз-активные препараты, тамоксифен
со
П
< е
N
сч
01
По определению ВОЗ кистозная мастопатия - это заболевание, характеризующееся широким спектром как пролиферативных, так и регрессивных изменений тканей молочной железы с резко искаженным соотношением эпителиального и соединительнотканного компонентов. Частота кистозной мастопатии в популяции, по данным различных авторов [1,2], имеет место в 29-70% случаев, а частота диффузной мастопатии колеблется в диапазоне 29,4-42,6%.
Наиболее репрезентативным критерием регресса кистозной мастопатии является регресс кист в молочных железах, что можно оценить с использованием морфометрии. Она позволяет достоверно оценить наличие или отсутствие эффекта релиз-активных препаратов на морфологическом уровне и практически исключить эффект плацебо.
Релиз-активные препараты - это препараты, в процессе производства которых используется технологическая обработка разведений исходного вещества, приводящая к высвобождению особой фармакологической активности, названной релиз-активностью. Данная активность, в частности, проявляется в способности релиз-активных препаратов оказывать непосредственное модифицирующее воздействие на структуру исходного вещества, вызывая в нем конформационные изменения, что в итоге сопровождается изменением базовых для того или иного вещества физико-химических и биологических свойств [3, 4, 5, 6].
Цель исследования: оценить влияние релиз-активных (не содержащих действующего вещества) препаратов на патоморфологию и патофизиологию молочных желез при кистозной мастопатии крыс.
Для реализации поставленной цели сформулированы следующие задачи:
1) Изучить влияние релиз-активных препаратов на кисты в молочных железах при фиброзно-кистозной мастопатии и на общее состояние животных.
2) Сравнить степень регресса кист при использовании релиз-активных препаратов и тамоксифе-на.
Материалы и методы
В работе исследовались препараты: релиз-активный «Сотит тасШаШт» с30 (Сотит) в гра-
нулах и препарат сравнения Тамоксифен в таблетках по 10 мг.
Работа проведена на 52 беспородных половозрелых крысах-самках от 250 до 350 граммов, условно разделенных на 5 серий:
Серия - Интактный контроль нормы (11 крыс).
Серия - Контроль кистозной мастопатии (19 крыс). Согласно [7,8] воспроизведена кистозная мастопатия внутримышечным введением 2% синестрола в течение 1,5 месяцев, затем крысы получали плацебо в течение 1 месяца.
Серия - Контроль регресса кистозной мастопатии без лечения (6 крыс). После воспроизведения кистозной мастопатии крысы были забиты.
Серия - после воспроизведения кистозной мастопатии выдавался Сопшт перорально, 3 раза в день в течение 1 месяца (13 крыс).
Серия - после воспроизведения кистозной мастопатии выдавался Тамоксифен 1 мг перорально 1 раз в день в течение 1 месяца (8 крыс).
Все морфологические препараты молочных желез были изучены под микроскопом под увеличением от 40 до 1600. Затем в полуавтоматическом режиме была проведена морфометрия по 23 показателям [9,10]:
ПГС в мм2 - площадь гистотопографического среза молочной железы.
К - в штуках - общее количество протоков в срезе.
КО в штуках - количество одиночных протоков в максимальном сечении молочной железы.
КПГ в штуках - количество групп протоков, то есть количество протоков, расположенных группами.
КГ - количество групп протоков, то есть сколько протоков расположено группами.
Р - в штуках на мм2 - плотность железистого поля = К/ПГС.
ПГ - плотность групп протоков =КГ/ПГС.
ВГ - средняя величина групп протоков = КПГ/КГ.
%О - процент одиночных протоков = К0/К*100%.
%Г - процент групповых протоков от всех протоков = 100-%0.
%ПЖ - процент площади железистого поля -процент площади протоков желез от ткани молочной железы.
%ПС - процент площади стромы = 100% -площадь протоков в %
ПЖ. Площадь паренхимы в мм2 =ПГС*%ПС.
ПС - площадь стромы в мм2 = ПГС-ПЖ
СВ - степени васкуляризации = количество сосудов/ПС.
РП - средний размер одного протока = ПЖ\К в мкм2.
КС - клеточность околопротоковой стромы. Подсчет видок клеток в строме (тысяч на 1 мкм околопротоковой стромы).
Методика: Определяем на снимке площадь околопротоковой стромы для 5 протоков. Затем подсчитываем количество клеток (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты, плазмоциты, тучные клетки, моноциты, фибробласты).
КС=число клеток*106/площадь околопротоковой стромы в выбранных протокоах.
%Г - процент клеток.
ВЭ в мкм2- высота эпителия - оценка высоты эпителия протоков (толщина вокруг протоков) в мкм. Расчет на снимках микропрепаратов (отношение размеров снимка к реальному размеру ткани известно).
ПЭП в тыс.мкм2- площадь эпителия протоков в среднем = 3.54^(РП)*ВЭ.
ППП в тыс.мкм2 - площадь просвета протока в среднем = РП-ПЭП.
ПЭ в тыс.мкм2- площадь эпителия протока в максимальном срезе=ПЭП*К
ППЖ в тыс.мкм2- площадь просвета желез = ПЖ-ПЭ.
Работа с животными проводилась в соответствии с европейскими и российскими законами [11,12,13]. Работа была одобрена этическим комитетом РязГМУ в 2016 году.
Полученные результаты и обсуждение
В норме молочные железы крыс состоят из спавшихся протоков с кубическим эпителием, которые расположены в жировой ткани, бедной сосудами и клетками (рис.1).
Рис. 1. Нормальная ткань молочной железы крыс. Протоки сужены, превалирует жировая ткань. Окраска гематоксилин-эозином, Увеличение х160
П т
Т
Рис. 2. Ткань молочных желез крыс из серии контроля качества кистозной мастопатии, выведенные из эксперимента сразу после воспроизведения мастопатии. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение х160
со
с
<
е
0
сч
еч
01
При кистозной мастопатии (рис. 2) - протоки резко расширены вплоть до образования кист. Через 4 недели от момента получения кистозной мастопатии в контрольной серии признаки мастопатии не исчезали (рис. 3), что согласуется с другими источниками [7,8,14]. Наблюдается регресс только слаборасширенных протоков.
Рис. 3. Ткань молочных желез крыс из серии контроля, после воспроизведения кистозной мастопатии получавшие плацебо 1 месяц. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение х160
Основными морфометрическими показателями, по которым оценивается степени регресса кист при мастопатии считаются средние площадь размера протока, площадь просвета протока и плотность протоков (количество на мм2). Чем они меньше, тем лучше [7,8,9,10].
Как мы видим на диаграмме (рис. 4) за 1 месяц лечения Сопшт с30 вызвал значительный регресс кист (р<0.05) по всем параметрам, а тамоксифен в средне терапевтической дозировке не вызвал выраженного регресса кист (р>0.05) ни по одному морфометрическому параметру (рис. 6).
Также при введении синестрола крысы становились вялыми, и значительно теряли массу тела. Спустя месяц крысы частично восстанавливали массу, что можно объективно оценить по динамике восстановления массы (отношение восстановленной массы тела к базовой массе в среднем). Как видно на диаграмме (рис. 7), крысы, получавшие сопшт набрали вес быстрее (р<0.05), чем крысы из группы контроля или получавшие тамоксифен, что косвенно свидетельствует об улучшении их состояния. Это также было заметно по их поведению - крысы, получавшие сопшт, вернулись к исходной активности уже спустя 1 неделю после приема, тогда как крысы из группы контроля и принимавшие та-моксифен - только через 3-4 недели.
1000 800 600 400 200
814
797
229
10
101
156
Интактный Контроль Тамоксифен Сопшт
контроль мастопатии
■ 1. Размер протока (мкм
■ 2, Просвет протока (мкм г) 3. Плотность протоков
Рис. 4. Морфометрическая динамика за 1 месяц лечения
Рис. 5. Ткань молочных желез крыс с воспроизведенной кистозной мастопатией, получавших Сопшт с30 в течении 1 месяца. Окраска гематоксилин-эозином, Увеличение х160
У „
•V -
таг- - ■ **
Рис. 6. Ткань молочных желез крыс с воспрозведенной кистозной мастопатией, получавших тамоксифен в течение 1 месяца. Окраска гематоксилин-эозином, Увеличение х160
Динамика восстановления массы тела Рис. 7. Динамика восстановления массы тела
Выводы
Проведенное исследование показало, что релиз-активные препараты (в частности Сопшт) могут оказывать выраженное действие на ткань молочной железы, даже если в базовом препарате практически не содержится молекул базового действующего вещества.
Релиз-активный препарат «Сопшт тасШаШт» с30 является перспективным средством для его
дальнейшего исследования при лечении кистознои мастопатии.
Литература
1. Мастопатия, новые аспекты в лечении. // Л.С. Сотникова и другие - Томск 2011, 148 с.
2. Дисгормональные болезни молочной железы. // Мустафин Ч.Н., Кузнецова С.В. -Москва, 2009, С.127
3. Феномен релиз-активности и гипотеза «пространственного» гомеостаза // О.И. Эпштейн; Успехи физиологических наук. - 2013 - Т. 44, № 3.
— С. 54-76.
4. Релиз-активные лекарственные препараты
— новое направление в лечении острых респираторных вирусных инфекций (обзор литературы) // А.Н. Дмитриев; Практическая медицина. - октябрь, 2014 - № 7 (83). - С. 137-143;
5. Релиз-активность - от феномена до создания новых лекарственных средств. /Эпштейн О.И.; Бюлл. Эксперим. Биол. и медицины. 2012 № 7. С. 62-67.
6. Клинико-фармакологическое обоснование и опыт применения инновационного релиз-активного препарата в лечении острых респираторных вирусных инфекций // Ю.С.Шаповалова; Справочник поликлинического врача. - 2015 - № 02. - С. 38-41.
7. Научное доказательство существования закона подобия в гомеопатии (экспериментальное исследование) // Свирина Ж.А, Витулкас Дж, Чу-маченко П.А.; издательство "Академия Естествознания", Москва 2010.
8. Экспериментально-морфологическое обоснование применения тамоксифена при кистозной мастопатии // Донсков К.А. кандидатская диссертация. Ульяновск-2010. 150 с.
9. Молочная железа: морфометрический анализ // П.А. Чумаченко, И.П.Шлыков. — Воро-неж,1991. 155 с.
10. Медицинская морфометрия. Руководство.
— М.: Медицина, 1990. 384 с.
11. Европейская Конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях // Страсбург, 18.03.1986 г.
12. Приказ Минздарва России об утверждении правил лабораторной практики от 23.08.2010 N 708н
13. Приказ Минздарва СССР от 12.08.1977 N755 о мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных
14. Влияние гомеопатического верошпирона на молочные железы при кистозной мастопатии в эксперименте // Свирина Ж.А, Чумаченко П.А.; Фундаментальные исследования. 2008 №8. С. 130-131.
15. Котова Т.Г., Гурин А.В. Новейшие исследования в области криохирургии новообразований
лёгких // Современная наука: актуальные проблемы теории и практики. Серия: Естественные и технические науки. 2015. № 12. С. 145-147.
16. Котова Т.Г., Коченов В.И., Цыбусов С.Н., Гурин А.В. Расчет эффективного времени замораживания при криохирургии рака легкого // Современная наука: актуальные проблемы теории и практики. Серия: Естественные и технические науки. 2016. № 4. С. 77-80
Study of the effect of release-active drugs on fibrocystic breast disease
Vasin A.S., Davidov V.V., Svirina J.A.
Ryazan State Medical University
Fibrocystic Breasts in women is a very common disease that affects 2970% of women and which often leads to the formation of breast cancer. In order to find effective methods of treatment of mastitis was studied in a release-active drugs in comparison with tamoxifen. In rats artificially reproduced cystic breast by synoestrol, then issued a different release of the active drugs. The result of treatment compared with tamoxifen. Data were obtained that Conium c30, not even containing molecules of the active substance causes a statistically significant regression of cysts mastitis. Keywords: fibrocystic mastopathy, release-active drugs, tamoxifen References
1. A mastopathy, new aspects in treatment.//L.S. Sotnikova and
others - Tomsk 2011, 148 pages.
2. Dishormonal illnesses of a mammary gland.//Mustafin Ch.N., Kuznetsov S.V. - Moscow, 2009, S. 127
3. Phenomenon release activity and hypothesis of a "spatial" home-
ostasis//O.I. Epstein; Achievements of physiological sciences. -2013 - T. 44, No. 3. - Page 54-76.
4. Release-active medicinal preparations — the new direction in treatment of acute respiratory viral infections (the review of lit-erature)//A.N. Dmitriyev; Applied medicine. - October, 2014 -No. 7 (83). - Page 137-143;
5. Release activity - from a phenomenon before creation of new
medicines. / Epstein O.I.; Bulletin Eksperim. Biol. and medicine. - 2012 - No. 7. - Page 62-67.
6. Kliniko-pharmakologichesky justification and experience of use
innovative release - active drug in treatment of acute respiratory viral infections//Yu.S. Shapovalova; Reference book by the polyclinic doctor. - 2015 - No. 02. - Page 38-41.
7. The scientific proof of existence of the law of similarity in home-
opathies (pilot study)//Svirina Zh. And, Vitulkas of J, Chu-machenko P.A.; Academy of Natural Sciences publishing house, Moscow 2010.
8. Experimental and morphological justification of use of Tamoxi-
fenum at a cystic mastopathy//Donskov K.A. master's thesis. Ulyanovsk-2010. 150 pages.
9. Mammary gland: morphometric analysis//P.A. Chumachenko, I.P.
Shlykov. — Voronezh, 1991. 155 pages.
10. Medical morphometry. Management. — M.: Medicine, 1990. 384 p.
11. The European Convention on protection of the vertebrate animals used for experiments or in other scientific purpos-es//Strasbourg, 18.03.1986.
12. Order Minzdarva of Russia on the approval of rules of laboratory practice of 23.08.2010 of N 708 N
13. Order Minzdarva of the USSR of 12.08.1977 of N755 on measures for further improvement of organizational forms of work with use of experimental animals
14. Influence of a homeopathic veroshpiron on mammary glands at a cystic mastopathy in an experiment//Svirina Zh. And, Chumachenko P.A.; Basic researches. - 2008 - No. 8. - P.130-131.
15. Kotova T.G., Gurin A.V. The latest research in the field of cryosurgery of lung tumors // Modern Science: Actual Problems of Theory and Practice. Series: Natural and Technical Sciences. 2015. No. 12. P. 145-147.
16. Kotova T.G., Kochenov V.I., Tsybusov S.N., Gurin A.V. Calculation of the effective freezing time for cryosurgery of lung cancer // Modern Science: Actual Problems of Theory and Practice. Series: Natural and Technical Sciences. 2016. No 4. S. 77-80
