CC BY
119
УДК 57.085.2:546.284.31:544.431.15
ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ НАНОРАЗМЕРНОГО ДИОКСИДА КРЕМНИЯ НА РАЗВИТИЕ ОКСИДАНТНОГО СТРЕССА И АНТИОКСИДАНТНУЮ АКТИВНОСТЬ IN VITRO
О.Г. СИТНИКОВА*, С.Б. НАЗАРОВ*, Ж.А. ДЮЖЕВ*, М.М. КЛЫЧЕВА*, И.Г. ПОПОВА*, О.В. АЛЕКСЕЕВА**,
А.В .АГАФОНОВ**
* ФГБОУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова», ул. Победы, 20, г. Иваново, Ивановская обл, Россия, 153045 ** Учреждение Российской академии наук Институт химии растворов им. Г. А. Крестова РАН, ул. Академическая, д. 1, г. Иваново, Ивановская обл, Россия, 153045
Аннотация. В работе было проведено исследование влияния суспензированного наноразмерного диоксида кремния, его гибрида с полиэтиленгликолем, тиольными группами на поверхности синтезированных золь-гель методом на развитие окси-дантного стресса и антиоксидантную активность сыворотки крови in vitro. В работе использовался метод хемилюминесцентно-го и спектрофотометрического анализа.
Установлено развитие оксидантного стресса в «сливной» сыворотке крови in vitro под влиянием суспензии различных модификаций наноразмерного диоксида кремния, при этом антиоксидантный эффект достигается при внесении в систему 100 мкл суспензии наноразмерного диоксида кремния или 25 мкл суспензии гибридного диоксида кремния с полиэтиленгликолем. С помощью спектрофотометрического анализа показан антиоксидантный эффект нанокомпозита диоксида кремния с тиольными группами на поверхности при внесении в систему 25 мкл суспензии.
Ключевые слова: сыворотка крови, свободнорадикальное окисление, антиоксидантная активность, оксидантный стресс, наноразмерный диоксид кремния, хемилюминесценция, малоновый диальдегид.
THE NANOPARTICLES OF SILICA DERIVATES AFFECT OXIDATIVE STRESS PROGRESSION AND ANTIOXIDANT ACTIVITY IN
VITRO
O.G. SITNIKOVA*, S.B. NAZAROV*, M.M. KLYCHEVA*, I.G. POPOVA*, O.V. ALEKSEEVA**, A.V. AGAFONOV**
* State Research Institute of Maternity and Childhood, 53045, Ivanovo region, Ivanovo g, Victory Street, 20 ** Institute of Solution Chemistry, Russian Academy of Sciences, 153045, Russia, Ivanovo, street Academic, 1
Abstract. The authors studied affects of silica nanoparticles and its polyethileneglycol hybrid suspension produced by zol-gel method on oxidative stress progression and antioxidant activity in vitro by chemiluminescence and spectrophotometry methods.
The oxidative stress developed in native blood serum in presence of silica derivates nanoparticles was revealed. Antioxidant effects were observed when adding 100 jaL of silica nanoparticles or 25 jaL of silica-polyethileneglycol hybrid. As spectrophotometry revealed, antioxidant effects were also produced by adding 25 jaL of silica nanoparticles with thiol groups.
Key words: blood serum, free radical oxidation, antioxidant activity, oxidative stress, silica nanoparticles, chemiluminescense, ma-lonic dialdehyde.
Одной из актуальных задач современной биологии и медицины является разработка теоретических основ создания новых материалов, используемых в качестве антиоксидантов.
Известно, что в процессе метаболизма в организме человека активная генерация активных форм кислорода (АФК), образование свободных радикалов, гидроперекисей липидов приводят к развитию окислительного стресса. При этом, избыточное количество высоко активных радикалов, способны уменьшать активность большинства ферментных систем, а при взаимодействии с белками ^Н-группами цистеина, ОН-группами тирозиновых остатков) и ненасыщенными жирными кислотами, входящими в состав мембран клеток и субклеточных структур, повреждать их [1-3], что может являться одним из патогенетических механизмов ряда патологических процессов, в том числе репродуктивной системы [4-7]. Регулятором уровня АФК, свободных радикалов в организме является антиоксидантная система, включающая эндогенные ферментативные и неферментативные антиоксиданты [8]. В этом случае роль антиоксидантов заключается в обезвреживании токсичных продуктов, образовавшихся при оксидантном стрессе в течение патологического процесса. Для нормализации свободнорадикальных процессов липидов используются не только природные, но и синтетические антиоксиданты, действие последних ограничено из-за их возможного побочного эффекта как любого лекарственного препарата. Это приводит к необходимости поиска альтернативных соединений раз-
личного назначения, обладающих высокой антиоксидант-ной активностью и безвредных для человека.
В настоящее время достаточно хорошо известно, что многие вещества обладают антиоксидантной активностью, в этой связи исследование биологической активности этих препаратов, например, наноразмерного диоксида кремния, представляет определенный интерес для биологии и медицины. Для понимания механизмов взаимодействия биообъектов с наноразмерным диоксидом кремния необходимо знать его структуру и свойства, а также природу реакционных центров его поверхности. Так, наноразмерный диоксид кремния обладает рядом уникальных свойств, а именно: высокая удельная поверхность и пористость, которые легко контролируются, механическая и термическая устойчивость, а также он хорошо пропускает УФ-излучение (~ 250 м) и не является фотодеградируемым. Он может быть получен в виде различных форм (например, тонких пленок, волокон, порошков). Поверхность наноразмерного диоксида кремния легко модифицируется химическими группами различной природы, например, золь-гель методом со-конденсацией синтезирован нанокомпозит диоксида кремния с ковалентно связанными тиольными группами на поверхности, причем лёгкость и доступность синтеза, которые осуществляются при комнатной температуре, позволяет проводить исследования с температурно-чувствительными биообъектами и биологическим материалом [9, 10]. Кроме наноразмерного диоксида кремния интересным соединением является широко используемый полимер - полиэтиленг-
ликоль (ПЭГ). ПЭГ - гибкий, гидрофильный, нетоксичный и биологически толерантный, что является немаловажным для применения его в комплексе с живыми клетками и объектами.
В современной литературе имеются некоторые сведения о наличии про- и антиоксидантного эффекта диоксида кремния. В.А. Стежка с соавт., исследовавшие влияние наночастиц аморфного высокодисперсного кремнезема в эксперименте на систему крови крыс-самцов, выявили, что при интратрахеальном введении этого вещества нарушается прооксидантно-антиоксидантное равновесие в легких, печени, эритроцитах и плазме крови [11,12].
Другие исследователи подтвердили развитие окси-дантного стресса под влиянием наноразмерного диоксида кремния в бронхиальных эпителиальных клетках человека. Некоторые авторы также выявили индукцию оксидантного стресса в эпителиальных клетках in vitro и in vivo, при этом констатировали, что наноразмерный диоксида кремния не стимулирует некоторые антиоксидантные ферменты, такие как глутатионпероксидаза и глутатионредуктаза [13,14].
По данным Huang X et al. в эксперименте на мышах установлено, что мезопористый диоксид кремния снижал уровень АФК, проявляя антиоксидантный эффект, подавлял апоптоз в организме мышей с человеческой меланомой и тем самым способствовал росту этой опухоли [15].
Цель работы - исследование влияния трех видов нано-размерного диоксида кремния на развитие оксидантного стресса и антиоксидантную активность сыворотки крови in vitro.
Материалы и методы исследования. Синтез нано-размерного диоксида кремния и его гибрида с полиэтиленг-ликолем осуществлялся золь-гель методом в Ивановском институте химии растворов им. Г.А. Крестова РАН [16,17]. Содержание частиц в полученной суспензии рассчитывалась путем математических преобразований по результатам динамического рассеяния и составило 2*1010 частиц/мл для наноразмерного диоксида кремния и его модификации ти-ольными группами на поверхности, 18*1010 частиц/мл для его гибрида с ПЭГ. Во избежание агрегации синтезированных частиц в работе использовалась суспензия.
Исследования проводились на «сливной» сыворотки крови, взятой от 10 пациенток, поступивших в акушерскую или гинекологическую клиники ФГБУ «Ив. НИИ МиД им. В.Н. Городкова» Минздрава России. К 1 мл «сливной» сыворотки крови добавляли суспензии 3-х видов: а) наноразмерного диоксида кремния, б) наноразмерного диоксида кремния и его гибрида с полиэтиленгликолем; в) нанокомпозит диоксида кремния с ковалентно связанными ти-ольными группами на поверхности в количестве 25, 50 и 100 мкл. Контролем служила «сливная» сыворотка без добавления нанопрепарата. Все образцы, включая и контрольный опыт, инкубировали в течение одного часа при температуре 400С с целью ограничения влияния микробиологических факторов. Определение интенсивности свободнорадикального (перекисного) окисления липидов (ПОЛ) проводили методом индуцированной хемилюминесценции ^Л). В качестве индукторов XЛ использовали перекись водорода (Н2О2) с сульфатом железа II (FeSO4). Метод основан на том, что в системе происходит каталитическое разложение перекиси водорода ионами двухвалентного железа по реакции Фентона. Образующиеся при этом свободные радикалы вступают в процесс инициации СРО в исследуемом биологическом субстрате. На последней стадии СРО при рекомбинации свободных радикалов происходит образова-
ние неустойчивого тетроксида (R-O-O-O-O-R), распадающегося с выделением квантов света, которые регистрируется в течение 40 секунд - это время наибольшей информации об его интенсивности. Для регистрации ХЛ в измерительную кювету вносили 0,1 мл сыворотки крови, 0,4 мл фосфатного буфера рН 7,5, 0,4 мл раствора сульфата железа (0,01 мМ),
0,2 мл 2% раствора пергидроля, помещали в измерительную камеру прибора и регистрировали ХЛ. Исследование проводили на биохемилюминометре «БХЛ-07». Для оценки ХЛ регистрировали значение максимальной интенсивности свечения за все время опыта (^ах), размерность выражалась в мВ; светосумму свечения, то есть площадь под кривой после достижения максимума (S), размерность - мВ х сек; безразмерный параметр, характеризующий полную относительную интенсивность излучения за время измерения (а); нормированную светосумму за время измерения (Z), размерность - сек; тангенс угла наклона кривой ХЛ (tga), характеризующий максимальную крутизну спада кривой, размерность - мВ/сек. Представленные параметры являются наиболее информативными для оценки ХЛ. Так, показатели ^ах и S дают представление о потенциальной способности биологического объекта к свободнорадикальному окислению липидов, антиоксидантный потенциал коррелирует с параметрами - а, Z, tga, так снижение величин а и Z и повышение tga свидетельствует о повышении антиоксидантной активности. Содержание малонового диальдегида (МДА), конечного продукта ПОЛ, проводилось по методу, основанному на образовании триметинового комплекса МДА с 2-тиобарбитуровой кислотой. Определение показателя суммарной антиоксидантной активности (АОА) определяли по методу [18,19]. Статистическую обработку данных проводили с помощью стандартного пакета статистических программ SDS и Microsoft Excel. Учитывая характер распределения, отличный от нормального, описание представлено в виде медианы - середины распределения изучаемого признака и интерквартильного интервала (ME[Q25; Q75]) Сравнение средних величин в группах проводили с использованием критерия Wilcoxona. Статистически значимыми считали различия при р<0,05 [18 20].
Результаты и их обсуждение. Для оценки влияния исследуемых суспензий на развитие оксидантного стресса и оценки антиоксидантной активности сыворотки крови in vitro был выбран хемилюминесцентный анализ. Использование индуцированной хемилюминесценции в качестве метода исследования активности процессов ПОЛ и антиоксидантного потенциала обусловлено тем, что ХЛ относится к прямым методам изучения реакций свободных радикалов. Развитие хемилюминесценции при железоиндуцированной ХЛ определяется реакциями активных форм кислорода и свободных радикалов.
Результаты исследований, представленные в таблице 1 показали, что при добавлении суспензии наноразмерного диоксида кремния в количестве 25 мкл к экспериментальной системе достоверных изменений в показателях кривой ХЛ, отражающих интенсивность процессов свободнорадикального (перекисного) окисления липидов и антиоксидантную активность не выявлено. В то же время отмечено, что при внесении в систему 50 и 100 мкл суспензии диоксида кремния происходило увеличение показателей быстрой вспышки Imax и светосуммы свечения S, соответственно на 11 и 12%, р=0,0050 по сравнению с контролем, что указывало на высокую концентрацию образующихся АФК и свободных радикалов (R-, OH-, RO-, RO2-, O2-) в исследуемых образцах. Интересно отметить, что в образцах с суспензией
наноразмерного диоксида кремния в количестве 100 мкл, повышались все параметры кинетической кривой ХЛ, в том числе и показатели, отражающие антиоксидантную активность, о чем свидетельствовало повышение угла спада кинетической кривой (tg) на 18 %, р= 0,0077 и снижение a и Z (соответственно 4%, р=0,0415 и 3%, р=0,0468) по сравнению со «сливной» сывороткой.
Исследование гибридного диоксида кремния с поли-этиленгликолем показало достоверное изменение всех параметров кинетической кривой ХЛ - Imax, S, a, Z, tg, при добавлении суспензии порошка в исследуемых количествах (25, 50,100), что отражало не только активацию свободнорадикальных процессов, но и повышение антиоксидантной активности в исследуемых образцах (табл. 2).
По-нашему мнению, выявленный оксидантный эффект наноразмерного диоксида кремния и его гибрида с ПЭГ можно объяснить размером и природой частиц в суспензиях. Согласно литературным данным, выявлен цито-токсический эффект аморфного диоксида кремния на примере человеческих гепатом, который зависел от размера частиц и повышался с уменьшением их диаметра [19].
Таблица 1
Показатели индуцированной хемилюминесценции «сливной» сыворотки крови под действием суспензии наноразмерного диоксида кремния
Суспензия (SiO2)n Показатели хемилюминесценции Медиана [25; 75 перцентели]
Исследуемые пробы I max, мВ S, мВ х сек a Z, сек tga< мВ/сек
Контроль n=10 132,5 [115; 147] 1922,7 [1826; 2195] 0,374 [0,356; 0,382] 14,92 [14,21; 15,23] 21,75 [17,25; 25,50]
(SiO2)n, 25 мкл, n=10 151,5 [128; 179] 2331 [1913; 2511] 0,371 [0,357; 0,379] 14,58 [14,27; 15,01] 24 [20,62; 28,50]
(SiO2)n, 5Q мкл, n=10 147,0* [139; 181] 2148,5* [2Q29; 253Q] 0,359 [0,353; 0,373] 14,34 [14,12; 14,89] 23,25 [21; 28,50]
(SiO2)n, 1QQ мкл, n=10 157,0* [137; 183] 2274,5* [1981; 2493] 0,362* [0,347; 0,365] 14,58* [14,27; 15,01] 25,50* [25,50; 30]
ния с тиольными группами на поверхности показало увеличение параметров кинетической кривой XЛ - I max, S и SI max при добавлении 100 мкл суспензии (р<0,05), что свидетельствует о прооксидантном эффекте. Внесение в систему 25 и 50 мкл суспензии данного эффекта не вызывало. Изменение параметров кинетической кривой XЛ, отражающих ан-тиоксидантный потенциал проб (а, Z, tga), под влиянием всех исследуемых концентраций не отмечен (табл. 3).
Таблица З
Показатели хемилюминесценции «сливной» сыворотки крови в присутствии суспензии наноразмерного диоксида кремния с тиольными группами на поверхности
Суспен- зия (SiO2)n Показатели БXЛ, % Медиана [25; 75 процентели]
Imax (мВ) S (мВхсек) а Z (сек) tg a (мВ/сек)
Контроль n=10 101 [78;121 ] 1501,5 [1232;1823 ] 0,378 [0,365;0,388 ] 15,069 [14,574;15,481 ] 16,75 [14,5;19,5 ]
(SiO2)n, 25 мкл, n=10 106 [83;121 ] 1492 [1340;1869 ] 0,385 [0,370;0,393 ] 15,351 [14,775;15,711 ] 17,75 [14,0;19,5 ]
(SiO2)n, 50 мкл, n=10 97,5 [74;102 ] 1394,5 [1065;1545 ] 0,376 [0,361;0,380 ] 14,998 [14,430;15,200 ] 17,00 [15,0;19,0 ]
(SiO2)n, 100 мкл, n=10 102,5* [79;135 ] 1580* [1221;1920 ] 0,366 [0,350;0,384 ] 15,102 [13,976;15,545 ] 16,75 [15,0;22,0 ]
Таблица 4
Показатели перекисного окисления липидов (МДА, АОА) «сливной» сыворотки крови в присутствии суспензии наноразмерного диоксида кремния с тиольными группами на поверхности
Суспензия (SiO2)n Показатели ПОЛ, % Медиана [25; 75 процентели]
МДА (нмоль/мл) АОА (%)
Контроль n=10 6,2 [5,6; 7,6] 64 [61; 65]
(SiO2)n, 25 мкл, n=10 5,92 [5,5; 7,3] 65* [63; 68]
(SiO2)n,50 мкл< n=10 5,93* [5,6; 6,12] 64,5 [61; 67]
(SiO2)n< 100 мкл< n=10 5,88* [5,4; 6,12] 62,5* [57; 61]
Примечание (здесь и далее): * - отмечены достоверные отличия по отношению к контролю, таким образом: * - р<0,05, ** - р<0,01
Таблица 2
Показатели индуцированной хемилюминесценции «сливной» сыворотки крови под действием гибрида наноразмерного диоксида кремния с ПЭГ
Суспензия (SiO2)n- ПЭГ Показатели хемилюминесценции Медиана [25; 75 перцентели]
Количество суспензии I max (мВ) S (мВхсек) a Z tga
Контроль n=10 140 [127;162] 2190.5 [1939;2310] 0,374 [0,354;0,377] 14,72 [14,24;15,07] 24,25 [22,5;28]
(SiO2)n-ПЭГ 25 мкл n=10 180 ** [168;187] 2495 ** [2417;2617] 0,349** [0,346;0,369] 13,93* [13,84;14,74] 30 ** [25,5;32]
(SiO2)n-ПЭГ 50 мкл n=10 169,5 ** [162;189] 2334,5 * [2251;2482] 0,349** [0,344;0,355] 13,93** [13,74;14,43] 28,5* [26;30]
(SiO2)n-ПЭГ 100 мкл n=10 176 ** [168;184] 2417,5 * [2388;2623] 0,346** [0,340;0,368] 13,83 ** [13,58;14,71] 28,5* [26;30]
В настоящее время установлено, что тиоловые аминокислоты (цистеин), тиоловые трипептиды (глутатион), являются одними из основных компонентов антиокислительной системы организма человека. Исследование диоксида крем-
Для уточнения про- и антиоксидантной активности нанокомпозита диоксида кремния с тиольными группами было проведено в экспериментальных системах определение малонового диальдегида и показателя суммарной антиокси-дантной активности методом спектрофотометрии (табл. 4).
Показано, что введение в систему суспензии модифицированного диоксида кремния тиольными группами в концентрации 25 мкл на 1 мл «сливной» сыворотки крови приводило к повышению показателя суммарной АОА, а присутствие 100 мкл суспензии вызывала снижение параметра АОА. Уровень МДА (р<0,05) понижался в образцах в присутствии 50 и 100 мкл суспензии.
По-нашему мнению, введение в систему определенных количеств суспензии наноразмерного диоксида кремния с тиольными группами на поверхности приводит к увеличению числа активных центров, способных эффективно захватывать и инактивировать свободные радикалы, что приводит к повышению антиоксидантной активности и снижению концентрации малонового диальдегида.
Выводы. Установлено, что наноразмерный диоксид кремния и его гибрид с ПЭГ, композит с тиольными группами, в определенных концентрациях, оказывают влияние на развитие оксидантного стресса. Антиоксидантный эффект при этом достигается при внесении в систему 100 мкл наноразмерного диоксида кремния или 25 мкл гибридного
диоксида кремния с ПЭГ. С помощью спектрофотометрического анализа показан антиоксидантный эффект нанокомпозита диоксида кремния с тиольными группами на поверхности при внесении в систему 25 мкл суспензии.
Работа поддержана грантом РФФИ № 12-03-97528-р-центр-а.
Литература
1. Промыслов, М.Ш. Модификация метода определения антиоксидантной активности сыворотки крови / М.Ш. Промыслов, М.Л. Демчук // Вопросы медицинской химии.- 1990.- № 4.- С. 90-92.
2. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва.- М.: МедиаСфера, 2002.- 312 с.
3. Стежка, В.А. Влияние наночастиц аморфного кремнезема на систему крови и прооксидантно-антиоксидантное равновесие тканей крыс / В.А. Стежка, О.Б. Леоненко,
В.Н. Зинченко, А.Ю. Матвеева, В. А. Мовчан // Биотехнология.- 2009.- Т. 2.- №2.- С.86-97.
4. Терехина, Н.А Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная система / Н.А.Терехина, Ю.А. Петрович.-Пермь; 2005.- 69 с.
5. Akhtar, M.J. Nanotoxicity of pure silica mediated through oxidant generation rather than glutathione depletion in human lung epithelial cells / M.J. Akhtar, M. Ahamed, S. Kumar, H. Siddiqui, G. Patil, M. Ashquin, I. Ahmad // Toxicology.- 2010.- №2.- 95-102.
6. Baker, P.R. Fatty acid transduction of nitric oxide signaling: multiple nitrated unsaturated fatty acid derivatives exist in human blood and urine and serve as endogenous peroxisome proliferator-activated receptor ligands / P.R. Baker, Y. Lin, F.J. Schopfer, S.R. Woodcock, A.L. Groeger, C. Batthya-ny, S. Sweeney, M.H. Long, K.E. Iles, L.M. Baker, B.P. Bran-chaud, Y.E. Chen, B.A.Freeman // J. Biol. Chem.- 2005.- №51.-P. 42464-42475.
7. Batthyany, C. Reversible post translational modification of proteins by nitrated fatty acids in vivo / F.J. Schopfer, P.R. Baker, R. Duran, L. M. Bake, Y. Huang, C. Cervenansky, B. Branchaud // J. Biol. Chem.- 2006.- V. 281.- № 29.- P. 20450-20463.
8 Dorcheh, A.S. Silica aerogel; synthesis, properties and characterization. / A.S. Dorcheh, M.H. Abbasi // J. Mater. Proc. Technol.- 2008.- №1.- 10-26.
9. Eom, H.J. Oxidative stress of silica nanoparticles in human bronchial epithelial cell, Beas-2B / H.J. Eom, J. Choi //Toxicol In Vitro.- 2009.- №7.- Р. 1326-1332.
10. Fujii, J. Cooperative function of antioxidant and redox systems against oxidative stress in male reproductive tissues. / J.Fujii, Y.Iuchi, S. Matsuki, T.Ishii //Asian J Androl.- 2003.-№5.- Р. 231-242
11. Fujii, J. Fundamental roles of reactive oxygen species and protective mechanisms in the female reproductive system / J.Fujii, Y.Iuchi, and Okada Futoshi // Reprod Biol Endocrinol.-2005.- №3.- Р. 43.
12. Huang, X. The promotion of human malignant melanoma growth by mesoporous silica nanoparticles through decreased reactive oxygen species / X. Huang, J. Zhuang, X. Teng, L. Li, D. Chen, X. Yan, F. Tang // Biomaterials.- 2010.-№24.-Р. 6142-53.
13. Imai, H. Failure of the expression of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase in the spermatozoa of human infertile males /H. Imai, K. Suzuki, K. Ishizaka, S. Ichinose,
H. Oshima, I. Okayasu, K. Emoto, M. Umeda, Y. Nakagawa // Biol Reprod.- 2001.- №2.- Р.674-683.
14. Ishihara, M. Studies on lipoperoxide of normal pregnant women and patient toxemia of pregnancy / M. Ishihara // Clin. Chim. Acta.- 1978.- Vol. 84.- P. 1-9.
15. Li, Y. Size-dependent cytotoxicity of amorphous silica nanoparticles in human hepatoma HepG2 cells / Y. Li, L. Sun, M. Jin, Z.Du, X Liu, C. Guo, Y. Li, P. Huang, Z. Sun // Toxicol In Vitro.- 2011.- №7.- P. 1343-52.
16. Maiorino, M. Genetic variations of gpx-4 and male infertility in humans / M. Maiorino, V. Bosello, F. Ursini, C. Fores-ta, A. Garolla, M. Scapin, H. Sztajer, L. Flohe // Biol Reprod.-2003.- № 4.- P.1134.
17. Ohta, K.M Development of a simple method for the preparation of a silica gel based controlled delivery system with a high drug content / K.M. Ohta, M. Fuji, T. Takei, M. Chikaza-na // Eur J Pharm Sci.- 2005.- №26.- P. 87-91.
18. Rao, A.V. Effect of Sol-Gel Processing Parameters on Optical Propertiesof TMOS Silica Aerogels / A.V. Rao, G.M. Pajonk, D. Haranath, P.B. Wagh // J. Mater. Synth. Proc.-1998.- T. 6.- №1. P. 37^8.
19. Rosenholm, J.M. Towards establishing structure-activity relationship for mesoporous silica in drug delivery applications / J.M. Rosenholm, M. Linden // J. Control Release-2008.- vol. 128.- P. 157-164.
20. Szczepanska, M. Oxidative stress may be a piece in the endometriosis puzzle / M. Szczepanska, J. Kozlik, J. Skrzypczak, M. Mikolajczyk // Fertil. Sterirl.- 2003.- P. 1288-1293.
References
1. Promyslov MSh, Demchuk ML Modifikatsiya metoda opredeleniya antioksidantnoy aktivnosti syvorotki krovi. Vo-prosy meditsinskoy khimii.1990;.4:90-2.Russian.
2. Rebrova OYu Statisticheskiy analiz meditsinskikh dan-nykh. Primenenie paketa prikladnykh programm STATISTICA.Moscow.:MediaSfera;2002. Russian.
3. Stezhka VA, Leonenko OB, Zinchenko VN, Matveeva AYu, Movchan VA Vliyanie nanochastits amorfnogo kremne-zema na sistemu krovi i prooksidantno-antioksidantnoe ravno-vesie tkaney krys. Biotekhnologiya.2009;2(2):86-97.Russian.
4. Terekhina NA, Petrovich YuA Svobodnoradikal'-noe okislenie i antioksidantnaya sistema.Perm'; 2005. Russian.
5. Akhtar MJ, Ahamed M, Kumar S, Siddiqui H, Patil G, Ashquin M, Ahmad I. Nanotoxicity of pure silica mediated through oxidant generation rather than glutathione depletion in human lung epithelial cells. Toxicology.2010; 276(2):95-102.
6. Baker PR, Lin Y, Schopfer FJ, Woodcock SR, Groeger AL, Batthyany C, Sweeney S, Long MH, Iles KE, Baker LM, Branchaud BP, Chen YE, Freeman BA. Fatty acid transduction of nitric oxide signaling: multiple nitrated unsaturated fatty acid derivatives exist in human blood and urine and serve as endogenous peroxisome proliferator-activated receptor ligands. J. Biol. Chem. 2005;280(51): 42464-75.
7. Schopfer FJ, Baker PR, Duran R, Bake LM, Huang Y, Cervenansky C, Branchaud B. Reversible post translational modification of proteins by nitrated fatty acids in vivo. J. Biol. Chem. 2006;281(29): 20450-63.
8. Dorcheh AS, Abbasi MH. Silica aerogel; synthesis, properties and characterization. J. Mater. Proc. Technol.2008;199(1):10-26.
9. Eom HJ, Choi J. Oxidative stress of silica nanoparticles in human bronchial epithelial cell, Beas-2B. Toxicol In Vi-tro.2009;7:1326-32.
10. Fujii J, Iuchi Y, Matsuki S, Ishii T. Cooperative function of antioxidant and redox systems against oxidative stress in male reproductive tissues. Asian J Androl.2003;5:231-42
11. Fujii J, Iuchi Y, Okada Futoshi Fundamental roles of reactive oxygen species and protective mechanisms in the female reproductive system. Reprod Biol Endocrinol.2005; 3: 43.
12. Huang X, Zhuang J, Teng X, Li L, Chen D, Yan X, Tang F The promotion of human malignant melanoma growth by mesoporous silica nanoparticles through decreased reactive oxygen species. Biomaterials.2010;31(24):6142-53.
13. Imai H, Suzuki K, Ishizaka K, Ichinose S, Oshima H, Okayasu I, Emoto K, Umeda M, Nakagawa Y. Failure of the expression of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase in the spermatozoa of human infertile males. Biol Re-prod.2001;64(2): 674-83.
14. Ishihara M. Studies on lipoperoxide of normal pregnant women and patient toxemia of pregnancy. Clin. Chim. Acta. 1978; 84:1-9.
15. Li Y, Sun Y, Jin M, Du Z, Liu X, Guo C, Li Y, Huang P, Sun Z. Size-dependent cytotoxicity of amorphous silica nano-
particles in human hepatoma HepG2 cells. Toxicol In Vi-tro.2011;7:1343-52.
16. Maiorino M, Bosello V, Ursini F, Foresta C, Garolla A, Scapin M, Sztajer H, Flohe L Genetic variations of gpx-4 and male infertility in humans. Biol Reprod.2003;68(4):1134.
17. Ohta KM, Fuji M, Takei T, Chikazana M Development of a simple method for the preparation of a silica gel based controlled delivery system with a high drug content. Eur J Pharm Sci.2005;26:87-91.
18. Rao AV, Pajonk GM, Haranath D, Wagh PB Effect of Sol-Gel Processing Parameters on Optical Propertiesof TMOS Silica Aerogels. J. Mater. Synth. Proc.1998;6(1):37-48.
19. Rosenholm JM, Linden M Towards establishing struc-ture-activity relationship for mesoporous silica in drug delivery applications. J. Control Release.2008;128:157-64.
20. Szczepanska M., Kozlik J., Skrzypczak J., Mikolajczyk M. Oxidative stress may be a piece in the endometriosis puzzle. Fertil. Sterirl.2003;1288-93.
