ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭКСТРАКТОВ МИКРОВОДОРОСЛЕЙ НА ГЕМОПОЭЗ И ИММУНИТЕТ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ БИОЛОГИЯ

Научная статья УДК 574.583+606

DOI: https://doi.org/10.21285/2227-2925-2022-12-1 -109-120

Исследование влияния экстрактов микроводорослей

на гемопоэз и иммунитет

Александр Петрович Лыков*****, Иван Павлович Уваров**, Руслан Георгиевич Геворгиз***, Светлана Николаевна Железнова***, Ольга Владимировна Повещенко*

*Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии - филиал Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск, Российская Федерация **Управление ветеринарии города Новосибирска, г. Новосибирск, Российская Федерация ***Институт биологии южных морей им. А. О. Ковалевского РАН, г. Севастополь, Российская Федерация

****Новосибирский научно-исследовательский институт туберкулеза Минздрава РФ, г. Новосибирск, Российская Федерация

Автор, ответственный за переписку: Лыков Александр Петрович, [email protected]

Аннотация. Микроводоросли представляют интерес как источник широкого спектра биологически активных веществ для разработки на их основе биологически активных добавок. Важным аспектом, определяющим возможность использования микроводорослей, является отсутствие неблагоприятного воздействия на органы и системы организма человека и животных. Учитывая критически важное значение системы гемопоэза и иммунитета для жизнедеятельности человека и животных, особое внимание на этапе разработки для биомедицинского применения микроводорослей необходимо уделять их безопасности с позиции отсутствия значимых негативных эффектов в отношении кроветворения и функционального статуса клеток иммунной системы. В связи с этим в данной работе было изучено влияние масляных экстрактов пяти видов микроводорослей на показатели гемо-поэза, количество и функциональную активность клеток селезенки и тимуса, а также на уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови лабораторных животных. Установлено, что экстракты Chlorella vulgaris (C. vulgaris) и Cylindrotheca closterium (C. closterium) способствуют уменьшению количества лейкоцитов в периферической крови, Coelastrella sp., C. closterium и Porphyridium purpureum (P. purpureum) способствовали увеличению доли нейтрофилов, P. purpureum инициировал увеличение доли эозинофилов, Arthrospira (Spirulina) platensis (A. platensis) и C. closterium способствовали уменьшению доли моноцитов, а C. closterium и P. purpureum уменьшали долю лимфоцитов в периферической крови мышей. Экстракты всех микроводорослей не влияли на эритропоэз и гемоглобин. Также установлено, что все экстракты микроводорослей снижали пролиферацию спленоцитов, а влияние на пролиферативный потенциал тимоцитов зависело от типа микроводорослей. Экстракт микроводоросли Coelastrella sp. повышал уровни IgG, P. purpureum снижал уровни IgM, C. vulgaris снижал уровни IgA в сыворотке крови мышей.

Ключевые слова: Chlorella vulgaris, Coelastrella sp., Arthrospira (Spirulina) platensis, Cylindrotheca closterium, Porphyridium purpureum, гемопоэз, иммуноциты, пролиферация, иммуноглобулины

Финансирование. Исследование проведено в рамках государственного задания НИИКЭЛ - филиал ИЦиГ СО РАН «Разработка методов молекулярного профилирования и инновационных технологий прогнозирования, ранней диагностики, лекарственной и клеточной терапии социально-значимых заболеваний человека аутоиммунной, воспалительной и дисметаболической природы» (№ 03242019-0046) АААА-А19-119031590016-0 и государственного задания ФИЦ «ИнБЮМ» по теме «Исследование механизмов управления продукционными процессами в биотехнологических комплексах с целью разработки научных основ получения биологически активных веществ и технических продуктов морского генезиса» (№ 121030300149-0).

Для цитирования: Лыков А. П., Уваров И. П., Геворгиз Р. Г., Железнова С. Н., Повещенко О. В. Исследование влияния экстрактов микроводорослей на гемопоэз и иммунитет // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2022. Т. 12. N 1. С. 109-120. https://doi.org/10.21285/2227-2925-2022-12-1-109-120.

© Лыков А. П., Уваров И. П., Геворгиз Р. Г., Железнова С. Н., Повещенко О. В., 2022 https://vuzbiochemi.elpub.ru/jour ^=

PHYSICOCHEMICAL BIOLOGY

Original article

Study of the haematopoietic and immune effect of microalgae extracts

Alexander P. Lykov*****, Ivan P. Uvarov**, Ruslan G. Gevorgiz***, Svetlana N. Zheleznova***, Olga V. Poveshchenko*

*Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology - Branch of Institute of Cytology and Genetics, SB RAS, Novosibirsk, Russian Federation

**Department of Veterinary Medicine of the city of Novosibirsk, Novosibirsk, Russian Federation ***Institute of Biology of the Southern Seas named after A. O. Kovalevsky RAS, Sevastopol, Russian Federation

****Novosibirsk Tuberculosis Research Institute, Novosibirsk, Russian Federation Corresponding author: Alexander P. Lykov, [email protected]

Abstract. Microalgae, as a source of numerous biologically active substances, are promising candidates for the development of novel biologically active supplements. An important aspect determining the possibility of using microalgae involves the absence of adverse effects on the organs and systems of the human and animal body. At the development stage, special attention should be paid to the safety of microalgae for biomedical use in terms of the absence of significant negative effects on the haematopoiesis and the functional status of immune cells. In this regard, the present study investigates the effect of oil extracts obtained from five microalgae species on haematopoietic parameters, the number and functional activity of spleen and thymus cells, as well as on immunoglobulin levels in the blood serum of laboratory animals. According to the obtained results, Chlorella vulgaris (C. vulgaris) and Cylindrotheca closterium (C. closterium) extracts decrease the number of leukocytes in the peripheral blood. Coelastrella sp., C. closterium, and Porphyridium pur-pureum (P. purpureum) increase the proportion of neutrophils. P. purpureum was found to initiate an increase in the proportion of eosinophils. Arthrospira (Spirulina) platensis (A. platensis) and C. closterium produce a decrease in the proportion of monocytes. C. closterium and P. purpureum induce a reduction in the proportion of lymphocytes in the peripheral blood of laboratory mice. All microalgae extracts had no effect on erythropoiesis and haemoglobin. In addition, all microalgae extracts were found to reduce splenocyte proliferation, while their effect on thymocyte proliferation depended on the microalgae type. In the mice serum, Coelastrella sp. microalgae extract increases IgG levels, while P. purpureum and C. vulgaris decrease IgM and IgA levels, respectively.

Keywords: Chlorella vulgaris, Coelastrella sp., Arthrospira (Spirulina) platensis, Cylindrotheca closterium, Porphyridium purpureum, haematopoiesis, immunocytes, proliferation, immunoglobulins

Funding. The study was conducted within the framework of the state task of RICEL-filial of ICG RAS "Development of methods of molecular profiling and innovative technologies for forecasting, early diagnosis, drug and cell therapy of socially significant human diseases of autoimmune, inflammatory and dysmetabolic nature" (no. 0324-2019-0046) AAAA19-119031590016-0 and the state task of FRC "InBSS" on the topic "Research of mechanisms for controlling production processes in biotechnological complexes in order to develop scientific bases for obtaining biologically active substances and technical products of marine genesis" (no. 121030300149-0).

For citation: Lykov A. P., Uvarov I. P., Gevorgiz R. G., Zheleznova S. N., Poveshchenko O. V. Study of the haematopoietic and immune effect of microalgae extracts. Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Bio-tekhnologiya = Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2022;12(1):109-120. (In Russian). https://doi.org/10.21285/2227-2925-2022-12-1-109-120.

ВВЕДЕНИЕ

Микроводоросли представляют собой ценный источник биологически активных соединений, которые нашли свое применение в фармацевтике и медицине [1]. Микроводоросли являются источником пептидов и белков, жирных кислот и их производных, различных полисахаридов, способных инициировать противовоспалительные реакции в организме человека и животных [2-4]. Так, включение диетической добав-

ки на основе C. vulgaris мышам с циклофосфан-индуцированной иммуносупрессией способствовало восстановлению иммунитета, а именно увеличению пролиферативного потенциала лимфоцитов, активизации фагоцитоз макрофагов, стимулированию цитотоксической активности естественных киллерных клеток и усилению продукции интерлейкина (ИЛ)-2, 12, фактора некроза опухоли альфа- и гамма-интерферона [5]. A. platensis используется как биологически ак-

тивная добавка для человека и животных, способная к стимуляции противовирусной активности иммунной системы и увеличению эффективности роста за счет влияния на морфологию кишечника [6]. Показано, что водный экстракт C. vulgaris и A. platensis у мышей с глутамат-индуци-рованной дисфункцией яичников способствовал улучшению качества и скорости созревания оо-цитов [7]. Сравнительный анализ влияния приема с пищей микроводорослей C. vulgaris, Nanno-chloropsis oceanic и Phaeodactylum tricornutum мышами в течение 14 суток не выявил существенных различий в массе и длине кишечника, не выявлено токсического влияния микроводорослей [8]. Для формирования четкого представления о безопасности различных типов микроводорослей пресных водоемов и морей необходимо изучить их влияние при приеме их в пищу лабораторными животными и сопоставить с контролем. Целью данного исследования явилось сравнительное изучение приема стандартной пищи, пропитанной масляным экстрактом микроводорослей различных систематических групп, мышами-самками C57Bl6 и его влияние на показатели кроветворения и иммунитет. Выбор спектра микроводорослей обусловлен недостаточной изученностью токсичности данных микроорганизмов, позволяющих использовать их в качестве биологически активных добавок для человека и животных.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Объектами исследования стали микроводоросли различных систематических групп из коллекции культур Федерального исследовательского центра «Институт биологии южных морей им. А. О. Ковалевского РАН» (ФИЦ «ИнБЮМ», г. Севастополь), эритроциты и лейкоциты периферической крови, клетки селезенки (спленоци-ты) и тимуса (тимоциты) мышей-самок C57Bl6. В исследование включены зеленые микроводоросли ((Bory) Drewet Ross). Культуры микроводорослей адаптировали к условиям интенсивного культивирования. Для этого культуры выращивали в колбах на люминостате при 5 клк, используя накопительный метод культивирования. В работе использовали стандартные питательные среды, состав которых приведен ниже. По мере увеличения плотности культуры добавляли свежую питательную среду, таким образом поступали до тех пор, пока объем не достиг 1 л каждого вида микроводорослей. После адаптации весь объем каждой из культур использовали в качестве инокулята для выращивания в плоскопараллельном фотобиореакторе объемом 10 л. Для наращивания 10 л суспензии микроводорослей также использовали накопительный метод культивирования с активным перемешиванием посредством барботажа воздухом при искусственном освещении (15 клк) люминесцентными

лампами. По достижении стационарной фазы роста весь объем (10 л) использовали в качестве инокулята для культивирования в промышленных фотобиореакторах при естественном освещении. Интенсивное культивирование микроводорослей в масштабах промышленного производства проводили в фотобиореакторах открытого типа (бассейнах) из полипропилена, установленных в тепличном комплексе, который расположен на территории лабораторного корпуса ФИЦ «ИнБЮМ» (г. Севастополь). Рабочий объем суспензии в каждом фотобиореакторе составлял 254 л. Этот объем на протяжении всего эксперимента поддерживали, доливая водопроводную воду до отметки 254 л. Рабочий слой (глубина) суспензии составлял 10 см. Рабочая (освещаемая) поверхность - 2,54 м2. Суспензия микроводорослей в фотобиореакторах перемешивалась посредством механической мешалки, скорость вращения которой была неизменной в течение всего времени суток и составляла 20 об/мин. Для поддержания оптимальной температуры суспензии использовали систему термостабилизации, при этом на протяжении всего времени культивирования отклонение от оптимальной температуры составляло не более 3 °С. Изменение плотности культуры в фотобиореакторе измеряли двумя методами: измерением оптической плотности суспензии в кювете 0,5 см на длине волны 750 нм и взвешиванием сырого остатка (биомассы водорослей) на аналитических весах после центрифугирования суспензии в полипропиленовых пробирках при 1600 д в течение 15 мин. Зеленые микроводоросли и цианобактерии выращивали в летний период. Красные и диатомовые водоросли - в осенне-зимний период. На первом этапе интенсивного культивирования микроводорослей в промышленных фотобиореакторах культуры в течение 2-х суток адаптировали к условиям естественного освещения. Для этой цели инокулят, полученный в лаборатории, разбавляли свежей питательной средой в соотношении 1:3 и помещали в промышленный культиватор. Чтобы увеличить рабочий слой суспензии (глубину) и уменьшить освещаемую поверхность на время адаптации, один край культиватора приподнимали на 5 см таким образом, чтобы вся суспензия стекала к противоположному краю культиватора. Для исключения гибели неадаптированной культуры от высокого освещения суспензию затенили тканью таким образом, чтобы освещенность рабочей поверхности составляла 10-15 клк. После адаптации культуры выращивали в интенсивном режиме без затенения рабочей поверхности фотобиореактора. По мере нарастания плотности культуры добавляли питательную среду. Полученную таким образом суспензию использовали в качестве инокулята для интенсивного культивирования в промышленном фотобиореакторе при естественном освещении.

Для культивирования пресноводных видов C. vulgaris, Coelastrella sp., A. platensis использовали стандартные питательные среды Тамия и Заррук, приготовленные на фильтрованной водопроводной воде. Среда Заррук состоит из 16,8 г/л NaHCO3, 0,5 г/л K2HPO4, 2,5 г/л NaNO3, 1,0 г/л K2SO4, 1,0 г/л NaCl, 0,08 г/л Na2EDTA, 0,01 г/л FeSO4 * 7 H2O, 0,04 г/л CaCl2 * 2 H2O, 0,2 г/л MgSO4 * 7 H2O и 1 мл/л смеси микроэлементов (2,86 г/л H3BO3, 1,81 г/л MnCl2 *

* 4 H2O, 0,222 г/л ZnSO4 * 7 H2O, 0,079 г/л CuSO4 *

* 5 H2O, 0,015 г/л M0O3, 0,02296 г/л NH4VO3, 0,04398 г/л Co(NO3)2 * 6 H2O, 0,096 г/л K2Cr2(SO4)4 *

* 24 H2O, 0,04785 г/л NiSO4 * 7 H2O, 0,01794 г/л Na2WO4 * 2 H2O, 0,04 г/л Ti2(SO4)3). В питательную среду Тамия входили 5,0 г/л KNO3, 2,25 г/л MgSO4 *

* 7 H2O, 1,25 г/л KH2PO4, 0,003 г/л FeSO4 * 7 H2O, 0,0037 г/л Na2EDTA и 1 мл/л смеси микроэлементов (2,86 г/л H3BO3, 1,81 г/л MnCl2 * 4 H2O, 0,222 г/л ZnSO4 * 7 H2O, 0,01764 г/л M0O3, 0,02296 г/л NH4VO3). Для культивирования морских видов микроводорослей C. closterium и P. purpureum использовали питательные среды RS и Трен-кеншу, приготовленные на стерильной черноморской воде. В состав питательной среды RS входили 0,75 г/л NaNO3, 0,0641 г/л NaH2PO4 * 2 H2O, 0,386 г/л Na2SiO3 * 9 H2O, 0,0872 г/л Na2EDTA, 0,05 г/л FeSO4 * 7 H2O, 0,0002 CuSO4 * 5 H2O, 0,00044 г/л ZnSO4 * 7 H2O, 0,0002 г/л CoCl2 * 6 H2O, 0,00036 г/л MnCl2 * 4 H2O, 0,00012 г/л NaMoO4 * H2O. В состав питательной среды Тренкеншу входили 1,8 г/л NaNO3, 0,3 г/л Na№PO4 * 2 H2O, 0,37 г/л Na2EDTA, 0,042 г/л FeC6HaOy * 3 H2O, 0,008 г/л MnCb *

* 4 H2O, 0,00625 г/л Co(NO3)2 * 6 H2O, 0,00183 г/л (NH4)6MoyO24 * 4 H2O, 0,00238 г/л K2Cr2SO4 * 24 H2O, 0,00058 г/л TiO2. После достижения стационарной фазы роста суспензию микроводорослей из промышленного фотобиореактора центрифугировали при 1600 g в течение 15 мин. Надосадочную жидкость удаляли, а сырую массу водорослей промывали пресной водой для удаления остатков солей и экзометаболитов. Суспензию спиру-лины фильтровали через газовую ткань с порами 45 мкм. Затем также промывали пресной водой. Для получения сухой массы водорослей сырую биомассу наносили тонким слоем (3-5 мм) на полиэтилен, уложенный на ровную поверхность, и высушивали в токе теплого воздуха (38 °С) до остаточной влажности 9-10%. Сухую массу водорослей хранили в плотно закупоренной емкости при температуре -18 °С. Масляный экстракт из микроводорослей (5 г на 100 мл подсолнечного масла) получали пассивной диффузией биологически активных веществ в термостате ТС-80 (ОАО «Смоленское СКТБ СПУ», Россия) в течение 72 ч при 37 °С, далее ими пропитывали стандартную гранулированную пищу для грызунов (300 г). Все процедуры, выполненные в исследованиях с участием животных, соответствовали этическим стандартам, утвержденным правовыми актами Российской Федерации, принци-

пам Базельской декларации и рекомендациям этического комитета Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии - филиала Института цитологии и генетики СО РАН. Опытные группы были сформированы в соответствии с исследуемыми экстрактами микроводорослей: C. vulgaris, Coelastrella sp., A. platensis, C. closterium, P. purpureum и контроль (пропитка пищи чистым подсолнечным маслом). Объем выборки в опытных группах составил 5 особей и 6 особей в контрольной группе. Животные получали пищу, обработанную масляными экстрактами микроводорослей или же только подсолнечным маслом, в течение 12 суток. Количество эритроцитов (1012/л), лейкоцитов (109/л) в периферической крови, взятой после обрезания кончика хвоста, определяли стандартным подсчетом в камере Горяева. Уровни гемоглобина (г/л) определяли спектрофотометрически с использованием набора «Гемоглобин-Ново» («Век-тор-БЕСТ», Россия). Лейкоцитарную формулу (%) подсчитывали на микроскопе по общепринятой методике после окрашивания мазка крови фиксатором Май-Грюнвальд («Абрис+», Россия) и последующим окрашиванием по Романовско-му-Гимзе («Абрис+», Россия). Количество клеток в селезенке (спленоциты) и тимусе (тимоциты) оценивали после измельчения тканей глазными ножницами и разбиванием мелких кусочков шприцом с использованием иглы от большого до малого диаметра, далее полученную суспензию клеток пропускали через ситечки с диаметром 80 мкм для удаления дебриса. Подсчет количества выделенных иммуноцитов (106/мл) осуществляли в камере Горяева. Пролиферативный потенциал спленоцитов и тимоцитов (106/мл) в питательной среде RPMI 1640 («Биолот», Россия) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Hy-clone, США), 2 мМL-глутамина (Merck, США), 5 мМHepes-буфера (Sigma, США) и 80 мкг/мл ген-тамицина сульфата («Дальхимфарм», Россия) в 24-луночных плоскодонных культуральных планшетах (ТРР, Швейцария) оценивали инкубацией при температуре 37 °С и атмосфере 5% СО2/95% воздуха в присутствии 0 и 10 мкг/мл Конканавали-на А (Кон А; Sigma, США) в течение 72 ч. За 4 ч до окончания эксперимента клетки осаждали центрифугированием при 1500 об/мин в течение 5 мин, удаляли надосадочную жидкость, вносили по 100 мкл RPMI 1640 без остальных реагентов и по 10 мкл 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолиум бромида (МТТ, Merck, США) и инкубировали 4 ч при температуре 37 °С и атмосфере 5% СО2/95% воздуха. Далее вносили по 100 мкл диметил-сульфоксида (Merck, США) в лунки для разрушения клеточной мембраны, оптическую плотность продукта реакции в лунке оценивали спектрофотометрически при длине волны 492 нм (StatFax 2100, США). Уровни иммуноглобулинов (Ig) класса G, M, A исследовали в сыворотке крови спектро-

фотометрически с использованием набора «Имму-носкрин-G,M,A-ИФА-БЕСТ» («Вектор-БЕСТ», Россия) согласно инструкции производителя. Статистическую обработку данных проводили с использованием программы Statistica 10.0 для Windows. Нормальность распределения полученных данных оценивали с применением w-критерия Шапиро-Уилкса, в таблицах данные представлены в виде среднего и стандартного отклонений (M±SD), статистическую значимость различий между образцами оценивали однофакторным дисперсионным анализом (ANOVA) с поправкой по Бонферрони (Bonferroni post hoc test) и принимали при p<0,05.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Прием пищи, обогащенной масляным экс-

трактом микроводорослей, спустя 12 суток способствовал значимому снижению количества лейкоцитов в периферической крови у мышей в группе C. vulgaris и C. closterium по сравнению с остальными группами, за исключением группы P. purpureum (рис. 1, а, p<0,05). Существенных различий по количеству эритроцитов в периферической крови у мышей, принимавших пищу, обогащенную экстрактом микроводорослей или только растительным маслом, не выявлено (рис. 1, b, p>0,05). В то же время прием пищи, обогащенной экстрактом P. purpureum, значимо способствовал снижению уровня гемоглобина в эритроцитах по сравнению с другими группами животных (рис. 1, c, p<0,05).

Рис. 1. Влияние масляных экстрактов микроводорослей на количество лейкоцитов (a), эритроцитов (b) и уровень гемоглобина (c) у мышей-самок C57Bl6. Примечание: p<0,05*с контролем; | с C. vulgaris; t с Coelastrella sp.; ◊ с A. platensis; ♦ с C. closterium

Fig. 1. Effect of oil extracts of microalgae on white blood cell count (a), red blood cell count (b), and hemoglobin level (c) in female C57Bl6 mice. Note: p<0.05* with control; | with C. vulgaris; t with Coelastrella sp.; ◊ with A. platensis; ♦ with C. closterium

b

a

c

Отмечено значимое увеличение относительного количества нейтрофилов в периферической крови в группах Coelastrella sp., C. closterium и P. purpureum по сравнению с другими группами животных (рис. 2, a, p<0,05). Прием в пищу экстракта P. purpureum значимо увеличивал относительное количество эозинофилов в периферической крови (рис. 2, b, p<0,05). Кроме этого, экстракты микроводорослей, за исключением A. platensis, значимо снижали относительное количество моноцитов в периферической крови животных по сравнению с контролем (рис. 2, c, p<0,05). Более того, в группе C. closterium отмечено наибольшее снижение относительного количества моноцитов по сравнению с остальными группами животных (см. рис. 2, c, p<0,05). Касательно относительного количества лимфоцитов

в периферической крови у животных показано, что экстракт C. closterium и P. purpureum значимо снижал их по сравнению с другими группами (рис. 2, d, p<0,05).

Во всех опытных группах животных экстракт микроводорослей значимо снижал абсолютное количество спленоцитов по сравнению с контролем (рис. 3, a, p<0,05). Необходимо отметить тот факт, что экстракт C. vulgaris и Coelastrella sp. в большей степени способствовал снижению абсолютного количества спленоцитов по сравнению с другими экстрактами микроводорослей (см. рис. 3, a, p<0,05). В то же время экстракты микроводорослей, за исключением C. closterium, существенно увеличивали абсолютное количество тимоци-тов по сравнению с контролем (рис. 3, b, p<0,05).

c d

Рис. 2. Влияние масляных экстрактов микроводорослей на субпопуляционный состав лейкоцитов мышей-самок C57Bl6. Примечание: p<0,05*с контролем; | с C. vulgaris; t с Coelastrella sp.; ◊ с A. platensis; ♦ с C. closterium

Fig. 2. Effect of oil extracts of microalgae on the subpopulation composition of white blood cells in C57Bl6 female mice. Note: p<0.05* with control; | with C. vulgaris; t with Coelastrella sp.; ◊ with A. platensis; ♦ with C. closterium

a b

Рис. 3. Влияние масляных экстрактов микроводорослей на количество иммуноцитов селезенки

и тимуса у мышей-самок C57Bl6. Примечание: p^Oö^ контролем; t с C. vulgaris; t с Coelastrella sp.; ◊ с A. platensis; ♦ с C. closterium

Fig. 3. Effect of oil extracts of microalgae on the number of spleen and thymus immunocytes in female C57Bl6 mice. Note: p<0.05* with control; t with C. vulgaris; t with Coelastrella sp.; ◊ with A. platensis; ♦ with C. closterium

Следующим этапом сравнительного анализа действия экстрактов микроводорослей стал анализ функционального потенциала спленоци-тов (зрелые иммуноциты) и тимоцитов (незрелые иммуноциты).

Как видно из табл. 1, экстракт микроводорослей способствовал подавлению спонтанного пролиферативного потенциала по сравнению с контролем (p<0,05)). В отношении влияния экстрактов микроводорослей на митоген-стимулированную пролиферативную активность необходимо отметить, что экстракт C. vulgaris, Coelastrella sp., A. platensis значимо снижал от-

вет спленоцитов на митогенный стимул, а экстракт C. closterium и P. purpureum увеличивал митоген-стимулированную пролиферацию по сравнению с контролем.

Экстракт C. vulgaris, Coelastrella sp., A. platensis значимо снижал спонтанную пролиферацию тимоцитов, а экстракт C. closterium и P. purpureum увеличивал спонтанный пролифе-ративный потенциал тимоцитов по сравнению с контролем (см. табл. 1, p<0,05). Необходимо отметить, что большинство экстрактов микроводорослей стимулировали ответ тимоцитов на мито-ген по сравнению с контролем (p<0,05).

Таблица 1. Влияние масляных экстрактов микроводорослей на пролиферативный потенциал спленоцитов и тимоцитов у мышей-самок C57Bl6

Table 1. Effect of oil extracts of microalgae on the proliferative potential of splenocytes and thymocytes in female C57Bl6 mice

Пролиферативный потенциал, единицы оптической плотности

Базальный Кон А-стимулированный

Спленоциты

C. vulgaris 0,49±0,001* 0,51±0,01*

Coelastrella sp. 0,56±0,001*t 0,59±0,001*t

A. platensis 0,57±0,001*tt 0,6±0,01*t

C. closterium 0,74±0,01*tt0 0,82±0,01*tt0

P. purpureum 0,74±0,001*tt0 0,85±0,01*tt04

Control 0,77±0,01 0,76±0,01

Тимоциты

C. vulgaris 0,48±0,001* 0,46±0,001*

Coelastrella sp. 0,48±0,01* 0,47±0,01t

A. platensis 0,5±0,01tt 0,54±0,001*tt

C. closterium 0,55±0,01*tt0 0,52±0,01*tt0

P. purpureum 0,56±0,01*tt0 0,56±0,01*tt04

Control 0,51±0,001 0,47±0,001

Примечание. p<0,05* с контролем, f с C. vulgaris, f с Coelastrella sp., О с A. platensis, ♦ с C. closterium. https://vuzbiochemi.elpub.ru/jour ^= 115

Таблица 2. Влияние масляных экстрактов микроводорослей на уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови мышей-самок C57Bl6

Table 2. Effect of microalgae oil extracts on serum immunoglobulin levels in female C57Bl6 mice

Параметры Иммуноглобулины, г/л

IgG IgM IgA

C. vulgaris 6,04±0,32 0,86±0,02 1,21±0,02*

Coelastrella sp. 10,36±0,28*t 0,98±0,16t 1,22±0,02

A. platensis 5,49±0,08t 0,92±0,05t 1,24±0,02t

C. closterium 5,54±0,02t 0,95±0,06t 1,25±0,03

P. purpureum 5,54±0,09t 0,81±0,02*tt0* 1,26±0,01tt

Control 5,68±0,17 0,87±0,01 1,24±0,02

Примечание. p<0,05*c контролем, f с C. vulgaris, f с Coelastrella sp., О с A. platensis, ♦ с C. closterium.

В заключение мы исследовали влияние экстрактов микроводорослей на уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови животных (см. табл. 2). Употребление в пищу экстракта Coelastrella sp. способствовало увеличению уровня IgG, экстракт P. purpureum значимо снижал уровни IgM, экстракт C. vulgaris существенно снижал уровни IgA в сыворотке крови по сравнению с контролем (p<0,05).

Наличие в составе микроводорослей белков, аминокислот, витаминов, каротиноидов, минералов, незаменимых жирных кислот и полисахаридов может быть использовано в качестве биологически активных добавок [3, 9]. Показано, что A. platensis проявляет иммуностимулирующее действие, влияет на кроветворение, активирует синтез иммуноглобулинов и цитокинов, способствует активации макрофагов, Т- и В-лимфоцитов [9].

С учетом наличия в составе микроводорослей широкого спектра биологически активных веществ, способных воздействовать на метаболизм в организме человека и животных, в данной работе исследовано влияние приема пищи, обогащенной масляным экстрактом микроводорослей, на показатели гемопоэза и иммунной системы у лабораторных животных. Показано, что экстракт C. vulgaris и C. closterium проявляет ин-гибирующее влияние на процесс миелопоэза, в частности снижает уровни лейкоцитов в периферической крови и не воздействует на эритропоэз и накопление железа в эритроцитах. По литературным данным, прием в пищу C. vulgaris кроликами в дозировке от 0,5 г/кг увеличивал накопление железа в эритроцитах [10]. Показано, что C. vulgaris у мышей со свинцовым отравлением (50 мг/кг) способствует миелопоэзу [11]. На мышах, пролеченных C. vulgaris, исследовали влияние стресса (однократного и многократного) на гемопоэз [12]. Отмечено уменьшение количества гемопоэтических стволовых клеток при обоих типах стресса, но при однократном стрессе выявлено более выраженное угнетение гемопоэза, однако прием C. vulgaris отменял ингибирующее влияние стресса на гемопоэз. У животных (мыши, собаки) с индуцированным циклофосфаном или же гамма-облучением, нарушением кроветворения оценивали влияние per os введения

A. platensis [13]. Так, A. platensis в дозировке 30 и 60 мг/кг увеличивало количество лейкоцитов в периферической крови, но не влияло на количество эритроцитов и уровень гемоглобина. Кормление коралловой форели Plectropomus leopar-dus микроводорослью A. platensis значимо увеличивает прирост массы, количество эритроцитов, лейкоцитов и уровень гемоглобина [14]. Показан цитотоксический эффект спиртового экстракта A. platensis на опухолевые клетки человека [15]. Полисахарид из A. platensis увеличивал селезеночный и тимоцитарный индексы, количество лейкоцитов и лимфоцитов, а также снижал уровни в сыворотке крови TNF-a, IL-10, IFN-y in vivo, а in vitro стимулировал пролиферацию и продукцию NO, TNF-a, IL-6 макрофагальной линей RAW 264.7 [16].

По нашим данным, экстракты микроводорослей влияли на популяционный состав лейкоцитов, в частности Coelastrella sp., C. closterium и P. purpureum способствовали увеличению доли нейтрофилов, P. purpureum инициировал увеличение доли эозинофилов, A. platensis и C. closte-rium способствовали уменьшению доли моноцитов, а C. closterium и P. purpureum уменьшали долю лимфоцитов в периферической крови мышей. У больных с ВИЧ-инфекцией в результате приема A. platensis отмечен прирост количества CD4+ лимфоцитов в периферической крови [17]. Водный экстракт C. vulgaris 1000 мг/кг внутри-брюшинно вводили крысам F344/DuCrj в течение 14 суток до и после индукции иммуносупрессии циклофосфаном 50 мг/кг и оценивали количество ядросодержащих клеток костного мозга, спленоцитов и лейкоцитов в периферической крови [18]. Отмечено увеличение количества клеток в костном мозге на 7-е сутки после иммуносупрессии, спленоцитов - на 11-е сутки и лейкоцитов - на 7-е сутки в группе, получавшей лечение микроводорослью. P. purpureum снижают формирование пенистых клеток и секрецию TNF-a, IL-6 макрофагальной линей RAW 264.7 [19]. C. closterium снижает продукцию TNF-a моноцитарной линией THP-1 [19].

В большинстве случаев нами отмечено негативное воздействие экстрактов микроводорослей на пролиферативный потенциал спленоцитов, а

в отношении тимоцитов выявлено разнонаправленное влияние экстрактов микроводорослей на функциональную активность. По большей части экстракты микроводорослей существенно не влияли на уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови животных. В доступной литературе нами не найдено исследований по влиянию микроводорослей на пролиферативный потенциал спленоцитов и тимоцитов. В работе [10] показано, что C. vulgaris увеличивал уровни IgG и IgM у кроликов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, экстракты микроводорослей способны вызывать развитие лейкопении с одновременным увеличением доли гранулоцитов и снижением доли моноцитов и лимфоцитов, снижение уровня гемоглобина, а также подавление клеточного иммунитета, что следует учитывать при выборе микроводорослей в качестве компонентов при производстве кормов для животных.

СПИСОК И

1. Tabarzad M., Atabaki V., Hosseinabadi T. Antiinflammatory activity of bioactive compounds from microalgae and cyanobacteria by focusing on the mechanisms of action // Molecular Biology Reports. 2020. Vol. 47, no. 8. P. 6193-6205. https://doi.org/1 0.1007/s11033-020-05562-9.

2. Lauritano C., Helland K., Riccio G., Andersen J. H., Ianora A., Hansen E. H. Lysophosphatidylcholines and chlorophyll-derived molecules from the diatom Cylindrotheca closterium with anti-inflammatory activity // Marine Drugs. 2020. Vol. 18, no. 3. P. 166. https://doi.org/10.3390/md18030166.

3. Frumento D., Aliakbarian B., Casazza A. A., Converti A., Al Arni S., da Silva M. F. Chlorella vul-garis as a lipid source: cultivation on air and sea-water-simulating medium in a helicoidal photobiore-actor // Biotechnology Progress. 2016. Vol. 32, no. 2. P. 279-284. https://doi.org/10.1002/btpr.2218.

4. Lupatini A. L., Colla L. M., Canan C., Colla E. Potential application of microalga Spirulina platensis as a protein source // Journal of the Science of Food and Agriculture. 2017. Vol. 97, no. 3. P. 724-732. https://doi.org/10.1002/jsfa.7987.

5. Cheng D., Wan Z., Zhang X., Li J., Li H., Wang C. Dietary Chlorella vulgaris ameliorates altered immuno-modulatory functions in cyclophosphamide-induced immunosuppressive mice // Nutrients. 2017. Vol. 9, no. 7. P. 708. https://doi.org/10.3390/nu9070708.

6. Khan S., Mobashar M., Mahsood F. K., Ja-vaid S., Abdel-Wareth A. A., Ammanullah H., et al. Spirulina inclusion levels in a broiler ration: evaluation of growth performance, gut integrity, and immunity // Tropical Animal Health and Production. 2020. Vol. 52, no. 6. P. 3233-3240. https://doi. org/10.1007/s11250-020-02349-9.

7. Abdel-Aziem S. H., Abd El-Kader H. A. M., Ibrahim F. M., Sharaf H. A., El Makawy A. I. Evaluation of the alleviative role of Chlorella vulgaris and Spirulina platensis extract against ovarian dysfunctions induced by monosodium glutamate in mice // Journal of Genetic Engineering and Biotechnology. 2018. Vol. 16, no. 2. P. 653-660. https://doi.org/ 10.1016/j.jgeb.2018.05.001.

8. Neumann U., Derwenskus F., Gille A., Louis S., Schmid-Staiger U., Briviba K., et al. Bioavailability and safety of nutrients from the microalgae Chlorella vulgaris, Nannochloropsis oceanica and Phaeodac-tylum tricornutum in C57BL/6 mice // Nutrients.

2018. Vol. 10, no. 8. P. 965. https://doi.org/10.33 90/nu10080965.

9. Blinkova L. P., Gorobets O. B., Baturo A. P. Biological activity of spirulina // Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2001. Vol. 2. P. 114-118.

10. Abdelnour S. A., Sheiha A. M., Taha A. E., Swelum A. A., Alarifi S., Alkahtani S., et al. Impacts of enriching growing rabbit diets with Chlorella vulgaris microalgae on growth, blood variables, carcass traits, immunological and antioxidant indices // Animals (Basel). 2019. Vol. 9, no. 10. P. 788. https:// doi.org/10.3390/ani9100788.

11. Queiroz M. L. S., da Rocha M. C., Torello C. O., de Souza Queiroz J., Bincoletto C., Morgano M. A., et al. Chlorella vulgaris restores bone marrow cellularity and cytokine production in lead-exposed mice // Food and Chemical Toxicology. 2011. Vol. 49, no. 11. P. 2934-2941. https://doi.org/10.1016/j.fct.2011.06.056.

12. Souza Queiroz J., Barbosa C. M. V., da Rocha M. C., Bincoletto C., Paredes-Gamero E. J., de Souza Queiroz M. L., et al. Chlorella vulgaris treatment ameliorates the suppressive effects of single and repeated stressors on hematopoiesis // Brain, Behavior, and Immunity. 2013. Vol. 29. P. 39-50. https://doi.org/10.1016Zj.bbi.2012.12.001.

13. Zhang H. Q., Lin A. P., Sun Y., Deng Y. M. Chemo- and radio-protective effects of polysaccha-ride of Spirulina platensis on hemopoietic system of mice and dogs // Acta Pharmacologica Sinica. 2001. Vol. 22, no. 12. P. 1121-1124.

14. Yu W., Wen G., Lin H., Yang Y., Huang X., Zhou C., et al. Effects of dietary Spirulina platensis on growth performance, hematological and serum biochemical parameters, hepatic antioxidant status, immune responses and disease resistance of Coral trout Plectropomus leopardus (Lacepede, 1802) // Fish & Shellfish Immunology. 2018. Vol. 74. P. 649655. https://doi.org/10.10167j.fsi.2018.01.024.

15. Bechelli J., Coppage M., Rosell K., Liesveld J. Cytotoxicity of algae extracts on normal and malignant cells // Leukemia Research and Treatment. 2011. https://doi.org/10.4061/2011/373519.

16. Wu X., Liu Z., Liu Y., Yang Y., Shi F., Cheong K. L., et al. Immunostimulatory effects of polysaccharides from Spirulina platensis in vivo and vitro and their activation mechanism on RAW246.7 macrophages // Marine Drugs. 2020. Vol. 18, no. 11.

P. 538. https://doi.org/10.3390/md18110538.

17. Ngo-Matip M.-E., Pieme C. A., Azabji-Kenfack M., Moukette B. M., Korosky E., Stefanini P., et al. Impact of daily supplementation of Spirulina platensis on the immune system of naïve HIV-1 patients in Cameroon: a 12-months single blind, randomized, multicenter trial // Nutrition Journal. 2015. Vol. 14. Article number 70. https://doi.org/1 0.1186/s12937-015-0058-4.

18. Hasegawa T., Yoshikai Y., Okuda M., Nomoto K. Accelerated restoration of the leukocyte number and augmented resistance against Escherichia coli in cyclophosphamide-treated rats orally administered with a hot water extract of Chlorella vulgaris // International Journal of Immunopharma-

cology. 1990. Vol. 12, no. 8. P. 883-891. https://doi. org/10.1016/0192-0561(90)90007-a.

19. Kavitha M. D., Gouda K. G. M., Aditya Rao S. J., Shilpa T. S., Shetty N. P., Sarada R. Atheroprotec-tive effect of novel peptides from Porphyridium purpureum in RAW 264.7 macrophage cell line and its molecular docking study // Biotechnology Letters. 2019. Vol. 41, no. 1. P. 91-106. https://doi.org/10. 1007/s10529-018-2621-5.

20. Lauritano C., Helland K., Riccio G., Andersen J. H., Ianora A., Hansen E. H. Lysophosphati-dylcholines and chlorophyll-derived molecules from the Diatom Cylindrotheca closterium with antiinflammatory activity // Marine Drugs. 2020. Vol. 18, no. 3. P. 166. https://doi.org/10.3390/md18030166.

REFERENCES

1. Tabarzad M., Atabaki V., Hosseinabadi T. Antiinflammatory activity of bioactive compounds from microalgae and cyanobacteria by focusing on the mechanisms of action. Molecular Biology Reports. 2020;47(8):6193-6205. https://doi.org/10.1007/s110 33-020-05562-9.

2. Lauritano C., Helland K., Riccio G., Andersen J. H., Ianora A., Hansen E. H. Lysophosphati-dylcholines and chlorophyll-derived molecules from the diatom Cylindrotheca closterium with antiinflammatory activity. Marine Drugs. 2020;18(3): 166. https://doi.org/10.3390/md18030166.

3. Frumento D., Aliakbarian B., Casazza A. A., Converti A., Al Arni S., da Silva M. F. Chlorella vul-garis as a lipid source: cultivation on air and sea-water-simulating medium in a helicoidal photobiore-actor. Biotechnology Progress. 2016;32(2):279-284. https://doi.org/10.1002/btpr.2218.

4. Lupatini A. L., Colla L. M., Canan C., Colla E. Potential application of microalga Spirulina platensis as a protein source. Journal of the Science of Food and Agriculture. 2017;97(3):724-732. https://doi.org/ 10.1002/jsfa.7987.

5. Cheng D., Wan Z., Zhang X., Li J., Li H., Wang C. Dietary Chlorella vulgaris ameliorates altered immunomodulatory functions in cyclophosphamide-induced immunosuppressive mice. Nutrients. 2017; 9(7):708. https://doi.org/10.3390/nu9070708.

6. Khan S., Mobashar M., Mahsood F. K., Ja-vaid S., Abdel-Wareth A. A., Ammanullah H., et al. Spirulina inclusion levels in a broiler ration: evaluation of growth performance, gut integrity, and immunity. Tropical Animal Health and Production. 2020;52(6): 3233-3240. https://doi.org/10.1007/s11250-020-02349-9.

7. Abdel-Aziem S. H., Abd El-Kader H. A. M., Ibrahim F. M., Sharaf H. A., El Makawy A. I. Evaluation of the alleviative role of Chlorella vulgaris and Spirulina platensis extract against ovarian dysfunctions induced by monosodium glutamate in mice. Journal of Genetic Engineering and Biotechnology. 2018;16(2): 653-660. https://doi.org/10.1016/jJgeb.2018.05.001.

8. Neumann U., Derwenskus F., Gille A., Louis S., Schmid-Staiger U., Briviba K., et al. Bioavailability

and safety of nutrients from the microalgae Chlorella vulgaris, Nannochloropsis oceanica and Phaeodac-tylum tricornutum in C57BL/6 mice. Nutrients. 2018; 10(8):965. https://doi.org/10.3390/nu10080965.

9. Blinkova L. P., Gorobets O. B., Baturo A. P. Biological activity of spirulina. Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2001 ;2:114-118.

10. Abdelnour S. A., Sheiha A. M., Taha A. E., Swelum A. A., Alarifi S., Alkahtani S., et al. Impacts of enriching growing rabbit diets with Chlorella vul-garis microalgae on growth, blood variables, carcass traits, immunological and antioxidant indices. Animals (Basel). 2019;9(10):788. https://doi.org/10. 3390/ani9100788.

11. Queiroz M. L. S., da Rocha M. C., Torello C. O., de Souza Queiroz J., Bincoletto C., Morgano M. A., et al. Chlorella vulgaris restores bone marrow cellu-larity and cytokine production in lead-exposed mice. Food and Chemical Toxicology. 2011;49(11):2934-2941. https://doi.org/10.1016/j.fct.2011.06.056.

12. Souza Queiroz J., Barbosa C. M. V., da Rocha M. C., Bincoletto C., Paredes-Gamero E. J., de Souza Queiroz M. L., et al. Chlorella vulgaris treatment ameliorates the suppressive effects of single and repeated stressors on hematopoiesis. Brain, Behavior, and Immunity. 2013;29:39-50. https://doi. org/10.1016/j.bbi.2012.12.001.

13. Zhang H. Q., Lin A. P., Sun Y., Deng Y. M. Chemo- and radio-protective effects of polysaccha-ride of Spirulina platensis on hemopoietic system of mice and dogs. Acta Pharmacologica Sinica. 2001 ;22(12):1121-1124.

14. Yu W., Wen G., Lin H., Yang Y., Huang X., Zhou C., et al. Effects of dietary Spirulina platensis on growth performance, hematological and serum biochemical parameters, hepatic antioxidant status, immune responses and disease resistance of Coral trout Plectropomus leopardus (Lacepede, 1802). Fish & Shellfish Immunology. 2018;74:649-655. https://doi.org/10.1016/j.fsi.2018.01.024.

15. Bechelli J., Coppage M., Rosell K., Liesveld J. Cytotoxicity of algae extracts on normal and malignant cells. Leukemia Research and Treatment.

2011. https://d0i.0rg/l 0.4061/2011/373519.

16. Wu X., Liu Z., Liu Y., Yang Y., Shi F., Cheong K. L., et al. Immunostimulatory effects of polysaccharides from Spirulina platensis in vivo and vitro and their activation mechanism on RAW246.7 macrophages. Marine Drugs. 2020;18(11):538. https://doi. org/10.3390/md18110538.

17. Ngo-Matip M.-E., Pieme C. A., Azabji-Kenfack M., Moukette B. M., Korosky E., Stefanini P., et al. Impact of daily supplementation of Spirulina platensis on the immune system of naïve HIV-1 patients in Cameroon: a 12-months single blind, randomized, multicenter trial. Nutrition Journal. 2015;14. Article number 70. https://doi.org/10.1 186/s12937-015-0058-4.

18. Hasegawa T., Yoshikai Y., Okuda M., Nomoto K. Accelerated restoration of the leukocyte number and augmented resistance against Esche-

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ А. П. Лыков,

к.м.н., ведущий научный сотрудник, Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии -филиал Института цитологии и генетики СО РАН, 630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2, Российская Федерация; старший научный сотрудник, Новосибирский научно-исследовательский институт туберкулеза Минздрава РФ, 630040, г. Новосибирск, ул. Охотская, 81А, Российская Федерация, [email protected]

https://orcid.org/0000-0003-4897-8676

richia coli in cyclophosphamide-treated rats orally administered with a hot water extract of Chlorella vulgaris. International Journal of Immunopharma-cology. 1990;12(8):883-891. https://doi.org/10.1016/ 0192-0561(90)90007-a.

19. Kavitha M. D., Gouda K. G. M., Aditya Rao S. J., Shilpa T. S., Shetty N. P., Sarada R. Atheroprotective effect of novel peptides from Porphyridium purpureum in RAW 264.7 macrophage cell line and its molecular docking study. Biotechnology Letters. 2019;41 (1):91-106. https://doi.org/10.1007/s10529-018-2621-5.

20. Lauritano C., Helland K., Riccio G., Andersen J. H., lanora A., Hansen E. H. Lysophosphati-dylcholines and chlorophyll-derived molecules from the Diatom Cylindrotheca closterium with antiinflammatory activity. Marine Drugs. 2020;18(3):166. https://doi.org/10.3390/md18030166.

INFORMATION ABOUT THE AUTHORS Alexander P. Lykov,

Cand. Sci. (Medicine), Leading Researcher, Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology - Branch of Institute of Cytology and Genetics, 2, Timakov St., Novosibirsk, 630060, Russian Federation; Senior Researcher,

Novosibirsk Tuberculosis Research Institute, 81 A, Okhotskaya St., Novosibirsk, 630040, Russian Federation, [email protected]

https://orcid.org/0000-0003-4897-8676

И. П. Уваров,

руководитель,

Управление ветеринарии города Новосибирска, 630091, г. Новосибирск, ул. Достоевского, 9, Российская Федерация, [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1378-5671

Р. Г. Геворгиз,

к.б.н., старший научный сотрудник,

Институт биологии южных морей

им. А. О. Ковалевского РАН,

299011, г. Севастополь, пр. Нахимова, 2,

Российская Федерация,

[email protected]

https://orcid.org/0000-0002-8017-5593

С. Н. Железнова,

младший научный сотрудник,

Институт биологии южных морей

им. А. О. Ковалевского РАН,

299011, г. Севастополь, пр. Нахимова, 2,

Российская Федерация,

[email protected]

Ivan P. Uvarov,

Head of the Department of Veterinary Medicine of the city of Novosibirsk, 9, Dostoevsky St., Novosibirsk, 630091, Russian Federation, [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1378-5671

Ruslan G. Gevorgiz,

Cand. Sci. (Biology), Senior Researcher, Institute of Biology of the Southern Seas named after A. O. Kovalevsky RAS, 2, Nakhimov Ave., Sevastopol, 299011, Russian Federation, [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8017-5593

Svetlana N. Zheleznova,

Junior Researcher,

Institute of Biology of the Southern Seas named after A. O. Kovalevsky RAS, 2, Nakhimov Ave., Sevastopol, 299011, Russian Federation, [email protected]

https://orcid.org/0000-0003-1800-5902

О. В. Повещенко,

д.м.н., заведующая лабораторией, Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии -филиал Института цитологии и генетики СО РАН, 630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2, Российская Федерация, [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1378-5671

Вклад авторов

А. П. Лыков - дизайн исследования; выполнение

экспериментальных исследований

с лабораторными животными; обработка данных

и построение графиков.

И. П. Уваров - дизайн исследования.

Р. Г. Геворгиз - дизайн исследования; выполнение

работы по наращиванию, лиофилизации

микроорганизмов; обработка данных и построение

графиков.

С. Н. Железнова - выполнение работы по наращиванию, лиофилизации микроорганизмов. О. В. Повещенко - дизайн исследования.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Информация о статье

Поступила в редакцию 02.07.2021. Одобрена после рецензирования 15.02.2022. Принята к публикации 28.02.2022.

https://orcid.org/0000-0003-1800-5902

Olga V. Poveshchenko,

Dr. Sci. (Medicine), Head of Laboratory, Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology - Branch of Institute of Cytology and Genetics, 2, Timakov St., Novosibirsk, 630060, Russian Federation, [email protected] https://orcid.org/0000-0003-1378-5671

Contribution of the authors

Alexander P. Lykov - research design; performing experimental studies with laboratory animals; data processing and graphing.

Ivan P. Uvarov - research design. Ruslan G. Gevorgiz - research design; performance of work on building up, lyophilization of microorganisms; data processing and graphing. Svetlana N. Zheleznova - performance of work on building up, lyophilization of microorganisms.

Olga V. Poveshchenko - research design.

Conflict interests The authors declare no conflict of interests regarding the publication of this article.

The final manuscript has been read and approved by all the co-authors.

Information about the article The article was submitted 02.07.2021. Approved after reviewing 15.02.2022. Accepted for publication 28.02.2022.