Исследование уровня экспрессии гена Севра у пациентов с острым миелобластным лейкозом Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XVIII • №-3 • 2011

© Коллектив авторов, 2011 г. УДК 616.155.392.8-036.11:575

И. Ю. Сабурова, К. Ю. Слободнюк, М. В. Горчакова, Е. Е. Зуева, Д. В. Чередниченко, В. Л. Эмануэль, М. И. Зарайский

ИССЛЕДОВАНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА СЕВРА У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ МИЕЛОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

Кафедра клинической лабораторной диагностики с курсом молекулярной медицины Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова

Острый миелобластный лейкоз (ОМЛ) возникает в результате накопления генетических нарушений в предшественниках гемопоэтических клеток. Заболеваемость ОМЛ составляет 2,5-4,3 случая на 100 000 населения в год. Основным в диагностике ОМЛ традиционно является морфологический метод. Использование дополнительно методов иммунофено- и карио-типирования существенно повысило точность диагностики заболевания. Однако примерно у половины пациентов не удается выявить клональных хромосомных перестроек. Гетерогенность клинических проявлений ОМЛ и ответа на терапию у таких пациентов достаточно велика, что требует поиска новых диагностических маркеров.

Белок СЕВРА вовлечен в регуляцию баланса между клеточной пролиферацией и терминальной диффе-ренцировкой и в гемопоэзе важен на ранних стадиях миелоидной дифференцировки. Однако механизм его участия остается до конца не ясным.

Цель исследования: оценка уровней экспрессии гена СЕВРА у пациентов с ОМЛ и изучение его диагностической значимости.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследуемую группу составили 68 пациентов с подтвержденным диагнозом «ОМЛ», находившихся под наблюдением в СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова в период с 2009 по 2010 гг. Средний возраст в группе составил 54 года. Верификацию диагнозов проводили морфологическим, цитогенетическим и иммунофено-типическим методами по критериям, принятым ВОЗ. В качестве отрицательного контроля были использованы образцы крови 32 лиц с доказанным отсутсвием онкогематологических заболеваний.

Тотальная РНК выделялась фенол-хлороформным методом, приготовление кДНК проводили с помощью реакции обратной транскрипции («Реверта-Л-100»). Уровень экспрессии гена СЕВРА оценивали методом ПЦР в реальном времени на амплификаторе ДТ-96

(«ДНК-Технология», Россия). Каждая проба исследовалась раздельно с праймерами для гена СЕВРА (СЕВРА-Б 5'-сисаас§ас§а§исс£§сс§а-3', СЕВРА-Я 5'-а§с1§с觧сйса1сс1сс1-3') и референс-гена - 02-микро-глобулина (В2М-Б 5Часа1§1с1с§а1сссасиаас1а1-3', В2М-Я 5'-а§с§1ас1ссааа§аИс১И-3').

Расчет относительного уровня экспрессии (ОУЭ) гена СЕВРА вычислялся в относительных единицах (ОЕ) как разница между расчетными циклами выхода на фазу экспоненциального роста сигналов исследуемого и референс генов. Достоверность полученных результатов проверяли с помощью стандартного статистического пакета «Статистика 5.0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Данные по УОЭ гена СЕВРА в исследуемой (-1,7 ОЕ) и контрольной (-0,2 ОЕ) группах показали отрицательные величины и были достоверно различимы (Р<0,05). Для исследования уровней экспрессии исследуемого гена у пациентов с ОМЛ в зависимости от морфологического типа заболевания были сформированы группы согласно критериям Франко-американо-британской классификации 1989: М0 - 6 пациентов; М1 - 14; М2 - 14; М3 - 10; М4 - 17 и М5 - 7 пациентов. Данные по ОУЭ в этих группах были: -4,55; -1,88; -1,73; -2,8; -0,74 и -0,31 ОЕ соответственно, и имели тенденцию к увеличению от М0 до М5. Обращает на себя внимание тот факт, что у пациентов с ОМЛ М5 значение ОУЭ гена СЕВРА практически не отличалось от значений контрольной группы. Различия по экспрессии гена СЕВРА у пациентов с ОМЛ М0 и ОМЛ М5 имели достоверные различия (Р<0,05).

Интерес к гену СЕВРА неслучаен и подтверждается высокой диагностической значимостью выявления ряда мутаций в нем. Работ же по исследованию эксп-рессионного анализа гена СЕВРА немного. Нами показано, что ген СЕВРА в лейкоцитах периферической крови больных с ОМЛ находится в крайне супресси-рованном состоянии. Уровень супрессии достоверно отличается от контрольной группы. Этот феномен нам кажется крайне важным, так как дает дополнительную возможность повышения достоверности диагностического процесса, особенно у пациентов с ОМЛ М0-М3.

РЕЗЮМЕ

И. Ю. Сабурова, К. Ю. Слободнюк, М. В. Горчакова, Е Е. Зуева, Д. В. Чередниченко, В. Л. Эмануэль, М. И. Зарайский

Исследование уровня экспрессии гена СЕВРА у пациентов острым миелобластным лейкозом

Цель исследования: оценка уровней экспрессии гена СЕВРА у пациентов с острым миелобластным лейкозом и изучение его диагностической значимости.

Ключевые слова: острый миелобластный лейкоз, экспрессия гена СЕВРА, ПЦР.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

РЕЗЮМЕ

I. Yu. Saburova, K. Yu. Slobodnyuk, M. V. Gorcha-kova, E. E. Zuyeva, D. V. Cherednichenko, V. L. Emanuel, M. I. Zaraiski

Assessment of the SEVRA gene expression level in patients with acute myeloblastic leukemia

The aim of the study was to estimate the levels of the SEVRA gene expression in patients with acute myeloblastic leukemia and to study its diagnostic value.

Key words: acute myeloblastic leukemia, SEVRA gene expression, PCR.

© Е. Г. Захаров, Д. Н. Дойников, 2011 г. УДК 616.132:616.71-003.84

Е. Г. Захаров, Д. Н. Дойников

КАЛЬЦИНОЗ ВРОЖДЕННОГО ДВУСТВОРЧАТОГО АОРТАЛЬНОГО КЛАПАНА

Кафедра госпитальной хирургии № 2 Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова

ВВЕДЕНИЕ

Врожденный двустворчатый аортальный клапан (ВДАК) - самый частый врожденный порок сердца, поражающий приблизительно 2 % человеческой популяции [1]. Этиология данного порока на сегодняшний день остается не до конца изученной. Очень часто ВДАК сочетается с другими врожденными пороками, такими как коарктация аорты, супрааортальная мембрана, пролапс митрального клапана, дефект меж-предсердной перегородки и др. Также ВДАК часто сочетается с расширением восходящей аорты, формированием аневризмы и ее расслоением [1]. Нередко ВДАК осложняется развитием инфекционного эндокардита [2]. При ВДАК очень часто выявляется каль-циноз, который может развиваться вследствие постоянной травматизации, возникающей из-за аномальной

деформации створок [3]. Возможно, что кальциноз при ВДАК генетически детерминирован и возникает в результате локального нарушения кальциевого обмена и является следствием естественного течения ВДАК [4]. Также нельзя исключить сочетание механического повреждения створок аортального клапана и генетического фактора.

Цель исследования - изучить взаимосвязь ВДАК с формированием аортального порока, требующего хирургической коррекции; сравнить встречаемость кальциноза и его выраженность при ВДАК и трехстворчатом аортальном клапане (ТАК); оценить вид аортального порока при ВДАК и ТАК по данным клиники госпитальной хирургии № 2 СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В ретро- и проспективное исследование включили 243 больных (157 мужчин и 86 женщин), оперированных по поводу порока аортального клапана в период с 2005 по 2009 гг. в клинике госпитальной хирургии № 2 СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова. Был произведен анализ причин, приводящих к формированию аортального порока, требующего хирургической коррекции. Сравнивались наличие кальциноза и его выраженность при ВДАК и ТАК в различных возрастных группах. Также был изучен вид аортального порока при ТАК и ВДАК. Интраоперационно оценивались структура

Рис. 1. Первая степень кальциноза

Рис. 2. Вторая степень кальциноза