CC BY
149
УДК 615.322: 615.076.8
ИССЛЕДОВАНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ ТРАВЫ ЗИЗИФОРЫ БУНГЕ STABILITY TESTING OF MEDICINAL PLANT ZIZIPHORA BUNGEANA JUZ
К.А. Жапаркулова, З.Б. Сакипова, Л.Н. Ибрагимова, Г.С. Ибадуллаева, А.М. Ермахан K.A. Zhaparkulova, Z. B. Sakipova, L.N. Ibragimova, G.S. Ibadullaeva, A.M. Ermakhan
Казахский национальный медицинский университет имени С.Д. Асфендиярова Республика Казахстан, 050000, Алматы, ул. Толе би, 88
Kazakh national medical university of S. D. Asfendiyarov Republic Kazakhstan, 050000, Almaty, Tola би St., 88
E-mail: [email protected]
Аннотация. В настоящей работе представлены результаты долгосрочных исследований стабильности травы Зизифоры Бунге в течение 18 мес. при температуре (18±2) °С и относительной влажности (60±5) Сушку и хранение сырья осуществляли на базе ТОО «ФитОлеум» (г. Есик, Республика Казахстан).
За исследуемый период хранения, лекарственного растительного сырья в мешках из трехслойной крафт-бумаги, существенных изменений в качестве продукта не обнаружено. Упаковка обеспечивает надежную защиту готового продукта от внешних воздействий, поскольку качественные, количественные и микробиологические характеристики существенно не изменились и полностью соответствовали требованиям спецификации стабильности за исследуемый период.
Resume. This paper presents the results of long-term stability studies of herb Ziziphora bungeana Juz. for 18 months. at (l8±2)° C and relative humidity (60±5)%. Drying and storage of raw materials was carried out on the basis of LLP "FitOleum" (Issyk, Kazakhstan).
No significant changes were found in the quality of medicinal plant raw materials in bags of three-layer kraft paper during the period of storage. Packaging provides reliable protection of the finished product from external influences as qualitative, quantitative and microbiological characteristics have not changed significantly and completely conform to the requirements of the stability of the specifications for the study period.
Ключевые слова: стабильность, условия хранения, long-term/real time testing, лекарственное растительное сырье, срок хранения, Зизифора Бунге, параметры качества.
Keywords: stability, storage conditions, long-term/real time testing, medicinal herbs, shelf -life, Ziziphora bungeana Juz., quality characteristics.
Введение
Растения привлекает внимание исследователей в качестве источника ценных биологически активных веществ: терпеноидов, флавоноидов, кумаринов, алколоидов, перспективных для практического применения в медицине и фармации. В последнее время наблюдается отчетливая тенденция более широкого применения в медицинской практике препаратов растительного происхождения, преимущества которых заключается в их безвредности и эффективности терапевтического действия [Сулемен Е.М. 2004].
В настоящее время исследователи из Казахского национального медицинского университета имени С.Д. Асфендиярова совместно с ТОО «ФитОлеум» проводят исследования лекарственного растительного сырья (ЛРС) травы Зизифоры Бунге (Ziziphora bungeana Juz.). Отработана в опытно-промышленных условиях технология сушки сырья, выпущено три опытно-промышленные серии готового продукта, разработан аналитический нормативный документ (АНД), опытно -промышленный регламент, проведена валидация процесса, проводятся исследования стабильности и подано регистрационное досье ЛРС на государственную экспертизу.
Цель
Цель исследования - изучить стабильность ЛРС травы Зизифоры Бунге в первичной упаковке в течении 18 мес. при длительном хранении при температуре (18±2) °С и относительной влажности (6о±5) %.
Материалы и методы исследования
Объектом исследования являлась надземная часть З. Бунге (Ziziphora bungeana Juz.), семейства Яснотковые (Lamiaceae) собранная во время цветения (июль) в высокогорных районах Алматинской области в 2014 г. и заготовленная в соответствии с требованиями Надлежащей практики сбора и заготовки ЛРС (GACP) [Жапаркулова и др., 2015].
Долгосрочные исследования стабильности проводили на опытно-промышленных сериях (табл. 1), полученных в ТОО «ФитОлеум».
Таблица 1 Table. 1
Общая характеристика опытно-промышленных серий растительного сырья Зизифоры Бунге General characteristics of experimental —industrial of the pilot batches of the herbal raw material
of Z. bungeana Juz
№ серии Размер серии, кг Дата производства Регламент исследования, мес.
080714 5-0 09.2014 г. 0, 3, 6, 9, 12, 18
200714 5.20 09.2014 г. 0, 3, 6, 9, 12, 18
310714 5.12 09.2014 г. 0, 3, 6, 9, 12, 18
Испытания ЛРС проводили в упаковке, применяемой для хранения и реализации: трехслойная крафт-бумага по ГОСТ 2228-81, размером 100x50 см, поставщиком упаковки является ТОО «ТиН», Республика Казахстан. Температура хранения препарата - (18±2) °С и относительная влажность - (60±5) %. Для стандартизации препарата во времени использованы фармакопейные методы [Государственная Фармакопея Республики Казахстан I., 2008., Государственная фармакопея СССР., 1990], а используемые методики прошли валидацию. Оценка полученных результатов осуществлялась при помощи программ Exel и Statistica 12.
Результаты и обсуждение
В связи с природой объекта исследования, термолабильные природные вещества, был выбран режим долгосрочных испытаний стабильности. Температурный режим хранения (18±2)°С и влажность (60±5) % выбраны с целью сохранения эфирного масла в объекте. На основании проекта АНД разработана спецификация качества на стабильность (табл. 2).
Таблица 2 Table. 2
Спецификация качества стабильности растительного сырья З. Бунге Quality specification of stability of the herbal raw material of Z. bungeana Juz
Показатели качества Нормы отклонений Методы испытаний
Описание Высушенные цельные или частично измельченные надземные части стеблей с листьями и цветками многолетнего травянистого растения Зизифоры Бунге ЬпрКста Ьипдеапа ,1ш.), семейства Яснотковые (Ьаш1асеае). Запах ароматный, вкус горьковато пряный, слегка холодящий По внешнему виду соответствует требованиям ГФ РК I, т. 1, общая статья "Трава".
Идентификация:
A. Макроскопия Цельное сырье. Стебли четырехгранные многочисленные, высотой15-30 см жестковатые. Листья размером 0.5-1.5 см длиной, 1.5-6 мм шириной, узколанцетные. Черешки до 4 мм длиной, густо опушенные. Чашечки короткие и узкие, 5 мм длиной В соответствии с АНД РК
Измельченное сырье. Кусочки стеблей, листьев и цветков различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет стеблей и листьев зеленоватый, цветков фиолетовый. ГФ РК I. т. 1, 2.9.12
Окончание табл. 2
B. Микроскопия Срез листа: листовая пластинка дорсовентраль-ного типа строения амфистоматическая. Эпидермис: клетки многоугольные, иногда с четко-видным утолщением, плотно сомкнутые. Устьица диацидно-го типа. На поверхности эпидермиса встречаются крупные эфиромасличные железки, которые состоят из восьми радиально расположен-ных выделительных клеток с общей кутикулой. Нижний эпидермис отличается большей извилистостью оболочек эпидермиальных клеток и большим количеством устьиц. ГФ РК I. т. 1, 2.8.3
C. Гистохимическая реакция на наличие эфирного масла При помещении поперечного среза черешка на 2-3 мин в раствор Судана IIIР, эфирные масла окрашиваются в зеленый цвет. В соответствии с АНД РК
D. Качественная реакция на пулегон На хроматограмме должно обнаруживаться темно-коричневое пятно с величиной Rf около 0.61. Тонкослойная хроматография ГФ РК, т. 1, 2.2.27
Посторонние примеси: Цельное сырье. - почерневших и побуревшие части сырья - не более 10 %, - кусочков стеблей толщиной 2 мм - не более 1 %, - органические примеси - не более 1 %, - минеральные примеси - не более 1 %. Измельченное сырье. - почерневших и побуревшие части сырья - не более 10 %, - частиц, проходящих сквозь сито с размером отверствий 0.2 мм - не более 1 %, - частиц стеблей, не проходящих сквозь сито с диаметром отверствий 7 мм - не более 19 %, - органической примеси - не более 1 %, - минеральные примеси - не более 1 %. ГФ РК, т.1, 2.8.2.
Потеря в массе при высушивании Не более 13 % ГФ РК I, т. 1, 2.2.32
Лекарственное растительное сырье должно соответствовать требованиям ГФ РК I, т. 1, 5.1.4, категория 4 В - Общее число жизнеспособных аэробных микроорганизмов: В 1.0 г допускается не более 105 бактерий и не более 104 грибов; не более 103, энтеробактерий и некоторых других грамотрицательных бактерий; отсутствие Escherichia coli в 1 г; отсутствие Salmonella в 10 г.
Микробиологическая чистота ГФ РК I, т. 1, 2.6.12, т. 2.6.13
Количественное определение: - эфирное масло в сухом сырье Не менее 0.8 мл/кг Определение эфирных масел в лекарственном растительном сырье, ГФ РК т.1, 2.8.12
- содержание пулегона в эфирном масле Не менее 40 % в Газовая хроматография, ГФ РК т.1, 2.2.28
В табл. 3, 4, 5 представлены результаты стабильности, охватывающие комплекс характеристик, полученные при физико-химических и микробиологических испытаниях, согласно спецификации стабильности (табл. 2). При исследовании стабильности трех опытно-промышленных серий травы Зизифоры Бунге, изучали следующие показатели качества: описание, макро- и микроскопию, гистохимическую реакцию, качественную реакцию на пулегон, посторонние примеси, потеря в массе при высушивании, микробиологическая чистота, количественное определение эфирного масла и пулегона в эфирном масле. Периодичность контроля образцов составляла по основным показателям качества: 0, 3, 6, 9, 12, 18 месяцев, для показателя микробиологическая чистота - 0, 24 месяца, данное условие позволяет подтвердить устойчивость активных компонентов во времени.
На протяжении указанного срока и условий хранения лекарственное растительное сырье, помещенное в первичную упаковку, характеризуется постоянством состава во времени, его качественные и количественные характеристики находятся в пределах регламентируемых норм. Описание и идентификация (макро- и микроскопия, гистохимическая реакция, качественная реакция на пулегон), микробиологическая чистота соответствуют требованиям спецификации, дополнительных посторонних примесей в продукте не обнаружено, потеря в массе при высушивании варьирует от 7.0 % до 8.79 % (рис. 1), количественное определение эфирного масла в сырье находится в интервале от 1.42 мг/кг до 1.64 мг/кг (рис. 2), количественное определение пулегона в эфирном масле - от 54.8 % до 60.1 % (рис. 3).
OJ и
15
х
(И
Э
>
и л m
10 5
6 9 12 18
.-080714 200714 -в-зЙТДО, мес
Рис. 1. Потеря в массе при высушивании Fig.1. Loss on drying
70
0 3 6 9 12 18
-080714
200714
Время, мес •310714
Рис. 2. Количественное определение пулегона в эфирном масле Fig.2. Quantative determination of pulegone in the Ziziphora bungeana Juz. essential oil
3
0
i_
0 2
е X
0 р
X s
X е ■a m 1
m 1- е CO
с s 0
е X с
T е re
s м
^ е
0 ct
е
р
с
о
12
18
-080714
200714
Время, мес 310714
Рис. 3. Количественное определение эфирного масла в траве Зизифоры Бунге Fig. 3. Quantitative determination of the essential oil in the herb Ziziphora bungeana Juz
Таблица 3 Table. 3
Результаты испытаний стабильности лекарственного растительного сырья «Зизифоры Бунге трава», серия 080714 The results of the stability of the herbal raw material Ziziphora bungeana Juz, batches 080714
0
0
3
0
3
6
9
Упаковка: мешки из крафт-бумаги, трехслойные
Температура: (18 ± 2) °С. Относительная влажность: (60±5) % Партия: 080714 Дата начала испытания: 09.2014 г. Дата окончания испытания: 03.2016 г
Показатели Нормы Периоды контроля, мес.
0 3 6 9 12 18
Описание Высушенные цельные или частично измельченные надземные части стеблей с листьями и цветками многолетнего травянистого растения Зизифоры Бунге (Ziziphora bungeana Juz.), семейства Яснотковые (Lamiaceae). Запах ароматный, вкус горьковато пряный, слегка холодящий. + + + + + +
Окончание табл. 3
Идентификация: + + + + + +
A Макроскопия В соответствии со спецификацией + + + + +
B Микроскопия В соответствии со спецификацией + +
C Гистохимическая реакция При помещении поперечного среза черешка на 2-3 мин в раствор Судана III Р, эфирные масла окрашиваются в зеленый цвет. + + + + + +
D Качественная реакция на пулегон Тонкослойная хроматография + + + + + +
Посторенние примеси Цельное сырье:
- почерневших и побуревшие части сырья -не более 10 % 8. 2 8.5 8.0 8.6 8.4 8.8
- кусочков стеблей толщиной 2 мм -не более 1 % 0.33 0.35 0.35 0.32 0.30 0.47
- органические примеси - не более 1 % 0.86 0.82 0.84 0.87 0.85 0.99
- минеральные примеси - не более 1 % 0.84 0.84 0.84 0.84 0.84 0.93
Измельченное сырье:
- почерневших и побуревшие части сырья -не более 10 % 8.5 8.5 8.4 8.6 8.2 8.6
- частиц, проходящих сквозь сито с размером отверствий 0.2 мм - не более 1 % 0.3 0.55 0.51 0.53 0.55 0.68
- частиц стеблей, не проходящих сквозь сито с диаметром отверствий 7 мм - не более 19 % 15.0 15.3 15.1 15.4 15.2 15.5
- органической примеси - не более 1 % 0.96 0.91 0.95 0.94 0.95 0.99
- минеральные примеси - не более 1 % 0.86 0.85 0.84 0.86 0.86 0.93
Потеря в массе при высушивании Не более 13 % 7.0 7.1 7.3 7.1 7.0 7.6
Количественное определение:
- эфирное масло Не менее 0.8 мл/кг 1.64 1.62 1.60 1.58 1.50 1.41
- пулегон Не менее 40 % в эфирном масле 55.5 54.3 54.5 55.7 55.1 54.4
Примечание: + обозначение соответствия
Таблица 4 Table. 4
Результаты испытаний стабильности лекарственного растительного сырья «Зизифоры Бунге трава», серия 200714 The results of the stability of the herbal raw material Ziziphora bungeana Juz, batches 200714
Упаковка: мешки из крафт-бумаги, трехслойные
Партия: 310714
Температура: (18 ± 2) °С. Относительная влажность: (60±5) % Дата начала испытания: 09.2014 г.
Дата окончания испытания: 02.2016 г
Показатели Нормы Периоды контроля, мес.
0 3 6 9 12 18
Высушенные цельные или частично из-
мельченные надземные части стеблей с ли-
стьями и цветками многолетнего травяни-
Описание стого растения Зизифоры Бунге (Ziziphora bungeana Juz.), семейства + + + + + +
Яснотковые (Lamiaceae). Запах ароматный,
вкус горьковато пряный, слегка холодящий.
Идентификация: + + + + + +
A Макроскопия В соответствии со спецификацией + + + + +
B Микроскопия В соответствии со спецификацией + +
C Гистохимическая При помещении поперечного среза черешка + + + + + +
реакция на 2-3 мин в раствор Судана III Р, эфирные масла окрашиваются в зеленый цвет.
Качественная
D реакция на пулегон Тонкослойная хроматография + + + + + +
Окончание табл. 4
Посторенние примеси Цельное сырье:
- почерневших и побуревшие части сырья -не более 10 % 8.0 8.3 8.4 8.1 8.4 8.9
- кусочков стеблей толщиной 2 мм - не более 1 % 0.28 0.31 0.27 0.27 0.28 0.30
- органические примеси - не более 1 % 0.86 0.86 0.88 0.85 0.86 0.89
- минеральные примеси - не более 1 % 0.89 0.90 0.89 0.90 0.90 0.94
Измельченное сырье:
- почерневших и побуревшие части сырья -не более 10 % 8.61 8.60 8.65 8.64 8.62 8.68
- частиц, проходящих сквозь сито с размером отверствий 0.2 мм - не более 1 % 0.56 0.56 0.53 0.55 0.55 0.59
- частиц стеблей, не проходящих сквозь сито с диаметром отверствий 7 мм - не более 19 % 14.6 15.0 15.1 14.9 14.7 15.2
- органической примеси - не более 1 % 0.90 0.91 0.88 0.93 0.87 0.90
- минеральные примеси - не более 1 % 0.84 0.85 0.85 0.84 0.83 0.87
Потеря в массе при высушивании Не более 13 % 8.75 8.79 8.72 8.75 8.79 8.98
Количественное определение:
- эфирное масло Не менее 0.8 мл/кг 1.60 1.55 1.48 1.42 1.42 1.40
- пулегон Не менее 40 % в эфирном масле 60.1 60.0 59.3 58.9 58.2 57.3
Примечание: + обозначение соответствия
Таблица 5 Table. 5
Результаты испытаний стабильности лекарственного растительного сырья «Зизифоры Бунге трава», серия 310714 The results of the stability of the herbal raw material Ziziphora bungeana Juz, batches 310714
Упаковка: мешки из крафт-бумаги, трехслойные
Температура: (18 ± 2) °С. Относительная влажность: (60±5) % Партия: 310714 Дата начала испытания: 09.2014 г. Дата окончания испытания: 02.2016 г
Показатели Нормы Периоды контроля, мес.
0 3 6 9 12 18
Описание Высушенные цельные или частично измельченные надземные части стеблей с листьями и цветками многолетнего травянистого растения Зизифоры Бунге (ЯЫркота Ьипдеапа Juz.), семейства Яснотковые (1ат1асеаё). Запах ароматный, вкус горьковато пряный, слегка холодящий. + + + + + +
Идентификация: + + + + + +
A Макроскопия В соответствии со спецш шкациеи + + + + +
B Микроскопия В соответствии со спецш шкациеи + +
C Гистохимическая реакция При помещении поперечного среза черешка на 2-3 мин в раствор Судана IIIР, эфирные масла окрашиваются в зеленый цвет. + + + + + +
D Качественная реакция на пулегон Тонкослойная хроматография + + + + + +
Посторенние примеси Цельное сырье:
- почерневших и побуревшие части сырья -не более 10 % 7.8 8.2 8.2 7.5 7.7 7.9
- кусочков стеблей толщиной 2 мм - не более 1 % 0.30 0.34 0.30 0.32 0.34 0.40
- органические примеси - не более 1 % 0.50 0.56 0.53 0.58 0.59 0.63
- минеральные примеси - не более 1 % 0.30 0.34 0.30 0.32 0.27 0.40
Измельченное сырье:
- почерневших и побуревшие части сырья -не более 10 % 8.46 8.51 8.46 8.45 8.47 8.61
- частиц, проходящих сквозь сито с размером отверствий 0.2 мм - не более 1 % 0.36 0.36 0.37 0.37 0.35 0.38
- частиц стеблей, не проходящих сквозь сито с диаметром отверствий 7 мм - не более 19 % 14.98 % 15.0 % 14.9 15.1 15.2 15.4
- органической примеси - не более 1 % 0.97 0.94 0.97 0.97 0.98 0.98
- минеральные примеси - не более 1 % 0.85 0.87 0.86 0.89 0.90 0.95
Окончание табл. 5
Потеря в массе при высушивании Не более 13 % 7.3 7.9 7.2 7.5 7.9 8.3
Количественное определение:
- эфирное масло Не менее 0.8 мл/кг 1.62 1.65 1.57 1.54 1.52 1.43
- пулегон Не менее 40 % в эфирном масле 56.7 56.0 55.0 55.3 54.8 53.7
Примечание: + обозначение соответствия
На основании проведенных исследований можно заключить, что трава Зизифоры Бунге стабильна в течение 1.5 лет и сохраняет свои физико-механические и биофармацевтические показатели.
По результатам долгосрочных испытаний стабильности травы Зизифоры Бунге можно сделать следующие выводы:
- за период контроля (18 мес.) значительных изменений показателей качества не наблюдалось, что подтверждает его стабильность в течение 1.5 лет;
- на основе полученных результатов эксперимента период переконтроля составляет 1.5 года;
- рекомендуемые условия хранения субстанции: «Хранить в сухом месте при температуре не выше 18 °С».
Выводы
В результате проведенных исследований изучена стабильность травы Зизифоры Бунге. В процессе хранения в условиях долгосрочных испытаний не выявлено значительных изменений контролируемых параметров качества, что соответствует требованиям фармацевтической разработки ICH Q8 [ICH HARMONISED TRIPARTITE GUIDELINE Q8 (R2)]. Соответствие значений показателей качества требованиям спецификации стабильности позволяет установить срок хранения 18 мес. На данном этапе долгосрочные исследования стабильности продолжаются.
Список литературы References
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 567.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 567. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1:249.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1:249. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 563
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 563. (in Russian)
Государственная фармакопея СССР. 1990. Москва: «Медицина»,. методы анализа лекарственного растительного сырья, XI. 2: 299.
Gosudarstvennaja farmakopeja SSSR. 1990. Moskva: «Medicina»,. metody analiza lekarstvennogo ras-titel'nogo syr'ja, XI. 2: 299. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 71.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 71. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 226.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 226. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 91.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I. 2008 [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. Astana. 1: 91. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 176-181.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 176-181. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 230.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 230. (in Russian)
Государственная Фармакопея Республики Казахстан I. 2008. Астана. 1: 74.
Gosudarstvennaja Farmakopeja Respubliki Kazahstan I [State Pharmacopoeia of the Republic of Kazakhstan I]. 2008. Astana. 1: 74. (in Russian)
Жапаркулова К.А., Сакипова З.Б., Ибрагимова Л.Н., Ибадуллаева Г.С. Бимурзаев А.А. Правила сбора, заготовки и хранения лекарственного растения Зизифоры Бунге (Ziziphora bungeana Juz.). 2015. Вестник КазНМУ. ISSN 9965-01-300-4. 5: 239-241.
Zhaparkulova KA., Sakipova Z.B., Ibragimova L.N., Ibadullaeva G.S. Bimurzaev AA Pravila sbora, zagotovki i hranenija lekarstvennogo rastenija Zizifory Bunge (Ziziphora bungeana Juz.) [Rules collection, preparation and storage of medicinal plants ziziphora Bunge (Ziziphora bungeana Juz.)]. 2015. Vestmk KazNMU. ISSN 9965-01-300-4. 5: 239-241. (in Russian)
Сулеймен Е.М. Новые биологически активные моно-сесквитерпеноиды. Автореферат диссертации на соискание учебной степени кандидата химических наук, специальности 02.00.10. Биоорганическая химия. Астана. 24
Sulejmen E.M. 2004. Novye biologicheski aktivnye mono-seskviterpenoidy [New biologically active mono-sesquiterpenoids]. Avtoreferat dissertacii na soiskanie uchebnoj stepeni kandidata himicheskih nauk cspecial'nosti 02.00.10 -Bioorganicheskaja himija. Astana. 24. (in Russian)
ICH HARMONISED TRIPARTITE GUIDELINE Q8 (R2). Pharmaceutical Development - 4 versions, August 2009. 23.
