CC BY
69
Исследование специфической активности
{2 комплексного метаболитного пробиотика
0
Ф Несчисляев В.А., Крылова Т.В., Чистохина Л.П.
>0 Филиал ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России в г. Пермь «Пермское НПО «Биомед»
1
| Specific activity assessment of the complex
metabolic probiotic
Neschislyaev V.A., Krylova T.V., Chistokhina L.P.
Perm branch of the Federal State Unitary Enterprise «Scientific Production Association «Microgen» of the Ministry of Health of Russia - "Perm SPA «Biomed»
Новый комплексный метаболитный пробиотик «Хилабикс», разработанный в Пермском НПО «Биомед», в отдельных моделях экспериментов превосходит «Хилак форте» по специфической активности.
Ключевые слова: лактобактерии, бифидобактерии, метабиотик, специфическая активность. Библиографическое описание: Несчисляев В.А., Крылова Т.В., Чистохина Л.П. Исследование специфической активности комплексного метаболитного пробиотика // Биопрепараты.2013. № 2. С. 32-34.
Specific activity of the new complex metabolic probiotic «Hilabiks», developed by Perm «Biomed»,
in some experimental models excels «Hilak forte».
Key words: lactobacteria, bifidobacteria, metabiotik, specific activity.
Bibliographic description: Neschislyaev V.A., Krylova T.V., Chistokhina L.P. Specific activity assessment of the complex metabolic probiotic//Biopreparation (Biopharmaceuticals). 2013. № 2. P. 32-34.
Для корреспонденции:
Несчисляев В.А. - начальник отделения препаратов бактериотерапии Филиала ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России «Пермское НПО «Биомед». Адрес: 614089, г Пермь, ул. Братская, д. 177 e-mail: [email protected]
Статья поступила 05.04.2013 г, принята к печати 22.05.2013 г
Необходимость обеспечения практического здравоохранения широким арсеналом эффективных и доступных препаратов для коррекции дисбиоза предполагает разработку пробиотиков нового поколения. Одним из перспективных направлений в сфере создания проби-отических препаратов является использование биологически активных метаболитов, продуцируемых бактериями нормальной микрофлоры организма человека. Экзометаболиты лакто- и бифидобактерий поддерживают состояние эубиоза в макроорганизме путем угнетения роста условно-патогенных микробов и стимуляции роста представителей нормофлоры, участвуют в обмене веществ, поддержании водно-электролитного баланса в кишечнике, являются источником питания для кишечного эпителия, оказывают антиканцерогенное и антимутагенное действие, регулируют деятельность иммунной системы макроорганизма и т.д. [1, 9]. Поэтому препараты, содержащие метаболиты пробиотических штаммов, могут быть рекомендованы для лечения и профилактики
кишечных инфекций, для профилактики дисбиозов при приеме антибактериальных препаратов (одновременно с приемом антибиотиков), в комплексной терапии гастритов, колитов, диспепсии, синдрома недостаточности пищеварения, заболеваний желчного пузыря и печени, аллергических заболеваний, иммунодефицитов различной этиологии [4, 5]. В настоящее время на фармацевтическом рынке России представлен только один пробиотик метаболитного типа - «Хилак форте», содержащий продукты жизнедеятельности четырех видов микроорганизмов нормофлоры [3].
Цель работы: сравнительная оценка специфической активности комплексных метаболитных пробиотиков.
Материалы и методы
Исследовали специфическую активность комплексного препарата «Хилабикс», разработанного в
ПРЕПАРАТЫ
Пермском НПО «Биомед», содержащего метаболиты трех штаммов бактерий (Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus acidophilus), и импортного препарата «Хилак форте» производства «Ra-tiopharm» (Германия), содержащего метаболиты четырех штаммов бактерий (Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus helveti-cus). При сравнительном исследовании активности в экспериментах in vitro рН данных препаратов доводили до единого значения (5,8±0,1).
Пробиотическое действие препаратов оценивали по влиянию на активность кислотообразования лактобак-терий L. plantarum [8]. Лактобактерии вносили из расчета 108 КОЕ на 1 мл обезжиренного молока, в которое добавляли исследуемые препараты в количестве 10% от объема среды, в контрольную пробу вносили соответствующее количество 0,9% раствора натрия хлорида. Определяли фоновый показатель кислотности в контрольной и опытных пробах через 24 ч инкубирования при температуре (37±1)оС рассчитывали величину прироста кислотности в пробах.
Антимикробную активность в отношении энтеробак-терий определяли в тесте ингибирования биолюминесценции индикаторного штамма Escherichia coli lum+ [7, 8]. 0,5 мл культуры тест-штамма смешивали с 0,5 мл препарата (цельного или разведенного 0,9% раствором натрия хлорида в 5 и 10 раз) и выдерживали при температуре (22±2)оС в течение 30-120 мин. Динамику интенсивности биолюминесценции бактерий E. coli lum+ в пробах регистрировали с помощью люминометра «Биотокс-10М» (ООО «НЕРА-С», Россия). Относительную степень изменения интенсивности биолюминесценции опытной пробы по сравнению с контрольной выражали количественно в виде индекса антибактериальной активности (ИАА) по формуле: ИАА = (1к - 1о)/1кх100%, где 1к -интенсивность биолюминесценции контрольной пробы (без препарата), 1о - интенсивность биолюминесценции опытной пробы (с препаратом).
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента [2]. Различия считали статистически значимыми при p<0,05. Результаты в таблицах представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (M ± m).
Результаты и обсуждение
Разработка отечественных пробиотиков, в том числе метаболитного типа, предполагает появление на нашем фармацевтическом рынке препаратов с высокой специфической активностью, обеспечивающей конкурентоспособность продукции в сравнении с зарубежными аналогами.
Полученные результаты свидетельствуют, что «Хилак форте» и «Хилабикс» оказывают выраженное действие на функциональную активность лактобактерий, а именно на активность кислотообразования, являющуюся одним из важнейших факторов антагонистического действия бактерий нормофлоры. В данном эксперименте «Хилабикс» оказал статистически значимо бо-
лее выраженное стимулирующее действие, чем «Хилак форте» (табл. 1).
Оба метаболитных пробиотика обладают угнетающим действием на энтеробактерии E. coli lum+. Цельные препараты быстро и значительно (более чем на 90%) ингибируют биолюминесценцию тест-штамма. Разведение метабиотиков в 10 раз позволило выявить достоверные отличия их антибактериальной активности. При равных значениях рН (5,8±0,1) «Хилабикс» в большей степени угнетает свечение E. coli lum+ по сравнению с препаратом «Хилак форте» (табл. 2).
Проведенные исследования показали, что комплексный метаболитный пробиотик «Хилабикс», разработанный в Пермском НПО «Биомед», в данных моделях экспериментов превосходит «Хилак форте» по специфической активности.
Таблица 1. Влияние метабиотиков на активность кислотообразования лактобактерий на обрате молока
Образец Величина прироста общей кислотности, °Т
Контроль 56,72+4,53
«Хилак форте» 76,46+3,16**
«Хилабикс» 96,03+0,20***(*)
Примечание: ***р<0,001; **р<0,01 по Г-критерию Стьюдента в сравнении с контролем; (*) p<0,05 в сравнении с «Хилак форте».
Таблица 2. Оценка антибактериальной активности метабиотиков
ИАА, %
Образцы метабиотиков «Хилак форте» «Хилабикс»
Нативный
Время экспозиции, мин 30 99,96+0,11 99,85+0,12
60 99,99+0,25 99,95+0,11
120 99,98+0,23 99,97+0,11
Разведенный в 5 раз
Время экспозиции, мин 30 89,08+0,14 94,46+0,40
60 88,30+0,15 94,71+0,24
120 87,11+0,12 90,52+3,48
Разведенный в 10 раз
Время экспозиции, мин 30 49,55+0,13 77,36+2,26***
60 50,23+0,17 72,86+0,86***
120 33,06+0,16 61,68+5,71**
Примечание: ***p<0,001; **p<0,01 по t-критерию Стьюдента в сравнении с «Хилак форте».
Литература:
1. Асташкина А.П. Современные взгляды на биологи-
ческую роль бифидо- и лактобактерий // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. 2010. № 1. С. 133-139.
2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. 459 с.
3. Грачева Н.М., Леонтьева Н.И., Щербаков И.Т., Партин
О.С. Хилак-форте в комплексном лечении больных острыми кишечными инфекциями и хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта с явлениями дисбактериоза кишечника // Consilium medicum. Гастрэнтерология (Приложение). 2004. № 6 (1). С. 18-21.
4. Дисбиоз кишечника. Руководство по диагностике и
лечению / Под ред. Ткаченко Е.И., Суворова А.Н. СПб.: Спецлит, 2007. 238 с.
5. Калмыкова А.И., Селятицкая В.Г., Пальчикова Н.А.,
Бгатова Н.П. Клеточные и системные механизмы действия пробиотиков. Новосибирск, 2007. 280 с.
6. Пшеничнов Р.А., Масленникова И.Л., Никитина Н.М.
Микробиолюминесценция (оптимизация сенсоров и расширение сферы использования реакции) / Пермь: Перм. гос. техн. ун-т, 2005. 76 с.
7. Способ определения антагонистической активности пробиотиков. Патент России №2187801 / В.А. Несчисляев [и др.]. Заяв. 10.07.2000. Опубл. 20.08.2002. Бюл. № 23.
8. ФСП 42-0504-7298-05 «Лактобактерин сухой, лио-
филизат для приготовления суспензии для приема внутрь и местного применения».
9. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и
функциональное питание. Т. 3. Пробиотики и функциональное питание. М.: Изд-во «Грантъ», 2001. 287 с.
э
