Научная статья на тему 'ИССЛЕДОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БЕЗОПАСНОСТИ ЭКСТРАКТОВ КАЛЛУСНЫХ КУЛЬТУР PULMONARIA OFFICINALIS И ИХ ФИТОХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НА НАЛИЧИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С ПОТЕНЦИАЛЬНЫМИ ГЕРОПРОТЕКТОРНЫМИ СВОЙСТВАМИ'

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БЕЗОПАСНОСТИ ЭКСТРАКТОВ КАЛЛУСНЫХ КУЛЬТУР PULMONARIA OFFICINALIS И ИХ ФИТОХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НА НАЛИЧИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С ПОТЕНЦИАЛЬНЫМИ ГЕРОПРОТЕКТОРНЫМИ СВОЙСТВАМИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
241
49
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
МЕДУНИЦА ЛЕКАРСТВЕННАЯ / КАЛЛУСНЫЕ КУЛЬТУРЫ / БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА / ГЕРОПРОТЕКТОРЫ / ФЕНОЛЬНЫЕ КИСЛОТЫ / ФИТОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ / ПОКАЗАТЕЛИ БЕЗОПАСНОСТИ

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Дышлюк Л. С., Дроздова М. Ю., Лосева А. И.

Старение является естественным и неизбежным процессом, сопровождающимся различными заболеваниями. Растение медуница лекарственная (Pulmonaria officinalis) является источником биологически активных веществ, способных замедлять процессы старения и улучшать качество жизни людей. Каллусная культура данного растения может быть перспективным сырьем для создания нутрицевтиков. Однако состав медуницы лекарственной по наличию индивидуальных биологически активных веществ недостаточно изучен, особенно в отношении фенольных соединений с потенциальными геропротекторными свойствами. Проведено исследование фитохимического состава экстракта каллусных культур медуницы лекарственной на наличие биологически активных веществ с потенциальными геропротекторными свойствами и определены показатели его качества. Двукратную экстракцию каллусных культур Pulmonaria officinalis проводили на водяной бане с 70%-м этиловым спиртом. Определение показателей безопасности экстрактов проводили согласно требованиям фармакопейной статьи. К важным показателям качества экстрактов относили органолептические, физико-химические и микробиологические свойства. Продемонстрировано, что содержание тяжелых металлов, радионуклидов, сухой остаток, остаточное содержание спирта, а также органолептические показатели и микробиологическая чистота соответствуют нормативным документам. Фитохимический состав экстракта каллусных культур определяли методами высокоэффективной жидкостной и трехслойной хроматографии. Идентифицированы флавоноиды (рутин, изорамнетин, кверцетин), тритерпеновые сапонины и фенольные кислоты (п-кумаровая, феруловая, галловая, кофейная, розмариновая и хлорогеновая). Наличие тритерпенового сапонина, п-кумаровой, феруловой и галловой кислот обнаружено в экстракте каллусной культуры медуницы впервые. Количественный анализ биологически активных веществ показал, что содержание кофейной, розмариновой и хлорогеновой кислот в экстракте каллусной культуры является более высоким, чем содержание этих же веществ в экстрактах из надземных частей растения.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Дышлюк Л. С., Дроздова М. Ю., Лосева А. И.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

STUDY ON SAFETY PROFILE IN EXTRACTS OF PULMONARIA OFFICINALIS CALLUS CULTURES AND THEIR PHYTOCHEMICAL COMPOSITION FOR THE PRESENCE BIOACTIVE SUBSTANCES WITH THE POTENTIAL GEROPROTECTIVE PROPERTIES

Ageing is a natural and inevitable process accompanied by different diseases. Medicinal lungwort (Pulmonaria officinalis) is a source of bioactive substances that can slow down ageing and improve the quality of human life. Callus culture of this plant can be a promising raw material to produce nutraceuticals. However, a composition of individual bioactive substances in medicinal lungwort has been studied insufficiently, particularly when it comes to phenolic compounds with potential geroprotective properties. We performed a study on the phytochemical composition of the callus cultures, extracted from the medicinal lungwort plant, for the presence of bioactive substances with the potential geroprotective properties and determined their quality profile. Twofold extraction of Pulmonaria officinalis callus cultures was carried out on a water bath with 70% ethyl alcohol. Determination of the safety profile of extracts was performed according to the requirements of the Pharmaceutical Norms and Regulations. Organoleptic, physicochemical and microbiological properties were considered important indicators of the quality of the extracts. It was demonstrated that the content of heavy metals, radionuclides, dry residue, residual alcohol content, as well as organoleptic characteristics and microbiological purity, comply with the regulatory documents. The phytochemical composition of the callus culture extract was determined by high-performance liquid chromatography and threelayer chromatography. The following flavonoids (rutin, isorhamnetin, quercetin), triterpenoid saponins and phenolic acids (p-coumaric, ferulaic, gallic, caffeic, rosmarinic and chlorogenic) were identified. The presence of triterpenoid saponin, p- coumaric, ferulaic and gallic acids is discovered in the extract of the lungwort callus culture for the first time. Quantitative analysis of bioactive substances showed that the content of caffeic, rosmarinic and chlorogenic acids in the callus culture extract is higher than that in the extracts from the aerial parts of the plant.

Текст научной работы на тему «ИССЛЕДОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БЕЗОПАСНОСТИ ЭКСТРАКТОВ КАЛЛУСНЫХ КУЛЬТУР PULMONARIA OFFICINALIS И ИХ ФИТОХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НА НАЛИЧИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С ПОТЕНЦИАЛЬНЫМИ ГЕРОПРОТЕКТОРНЫМИ СВОЙСТВАМИ»

Оригинальная статья / Original article УДК 615.322:616-003.725

DOI: https://doi.org/10.21285/2227-2925-2021 -11 -2-260-271

Исследование показателей безопасности экстрактов каллусных культур Pulmonaria officinalis и их фитохимического состава на наличие биологически активных веществ с потенциальными геропротекторными свойствами

© Л.С. Дышлюк, М.Ю. Дроздова, А.И. Лосева

Кемеровский государственный университет, г. Кемерово, Российская Федерация

Резюме: Старение является естественным и неизбежным процессом, сопровождающимся различными заболеваниями. Растение медуница лекарственная (Pulmonaria officinalis) является источником биологически активных веществ, способных замедлять процессы старения и улучшать качество жизни людей. Каллусная культура данного растения может быть перспективным сырьем для создания нутрицевтиков. Однако состав медуницы лекарственной по наличию индивидуальных биологически активных веществ недостаточно изучен, особенно в отношении фенольных соединений с потенциальными геропротекторными свойствами. Проведено исследование фитохимического состава экстракта каллусных культур медуницы лекарственной на наличие биологически активных веществ с потенциальными геропротекторными свойствами и определены показатели его качества. Двукратную экстракцию каллусных культур Pulmonaria officinalis проводили на водяной бане с 70%-м этиловым спиртом. Определение показателей безопасности экстрактов проводили согласно требованиям фармакопейной статьи. К важным показателям качества экстрактов относили органолептические, физико-химические и микробиологические свойства. Продемонстрировано, что содержание тяжелых металлов, радионуклидов, сухой остаток, остаточное содержание спирта, а также органолептиче-ские показатели и микробиологическая чистота соответствуют нормативным документам. Фито-химический состав экстракта каллусных культур определяли методами высокоэффективной жидкостной и трехслойной хроматографии. Идентифицированы флавоноиды (рутин, изорамнетин, квер-цетин), тритерпеновые сапонины и фенольные кислоты (п-кумаровая, феруловая, галловая, кофейная, розмариновая и хлорогеновая). Наличие тритерпенового сапонина, п-кумаровой, феруловой и галловой кислот обнаружено в экстракте каллусной культуры медуницы впервые. Количественный анализ биологически активных веществ показал, что содержание кофейной, розмариновой и хлорогеновой кислот в экстракте каллусной культуры является более высоким, чем содержание этих же веществ в экстрактах из надземных частей растения.

Ключевые слова: медуница лекарственная, каллусные культуры, биологически активные вещества, геропротекторы, фенольные кислоты, фитохимический состав, показатели безопасности

Благодарности: Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования РФ (проект FZSR-2020-0006 «Скрининг биологически активных веществ растительного происхождения, обладающих геропротекторными свойствами, и разработка технологии получения нутрицевтиков, замедляющих старение».

Для цитирования: Дышлюк Л.С., Дроздова М.Ю., Лосева А.И. Исследование показателей безопасности экстрактов каллусных культур Pulmonaria officinalis и их фитохимического состава на наличие биологически активных веществ с потенциальными геропротекторными свойствами. Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2021. Т. 11. N 2. С. 260-271. https://doi.org/10.21285/2227-2925-2021-11-2-260-271

Study on safety profile in extracts of Pulmonaria officinalis callus cultures and their phytochemical composition for the presence bioactive substances with the potential geroprotective properties

Lyubov S. Dyshlyuk, Margarita Yu. Drozdova, Anna I. Loseva

Kemerovo State University, Kemerovo, Russian Federation

Abstract: Ageing is a natural and inevitable process accompanied by different diseases. Medicinal lungwort (Pulmonaria officinalis) is a source of bioactive substances that can slow down ageing and improve the quality of human life. Callus culture of this plant can be a promising raw material to produce nutraceuticals. However, a composition of individual bioactive substances in medicinal lungwort has been studied insufficiently, particularly when it comes to phenolic compounds with potential geroprotective properties. We performed a study on the phytochemical composition of the callus cultures, extracted from the medicinal lungwort plant, for the presence of bioactive substances with the potential geroprotective properties and determined their quality profile. Twofold extraction of Pulmonaria officinalis callus cultures was carried out on a water bath with 70% ethyl alcohol. Determination of the safety profile of extracts was performed according to the requirements of the Pharmaceutical Norms and Regulations. Organoleptic, physicochemical and microbiological properties were considered important indicators of the quality of the extracts. It was demonstrated that the content of heavy metals, radionuclides, dry residue, residual alcohol content, as well as organoleptic characteristics and microbiological purity, comply with the regulatory documents. The phytochemical composition of the callus culture extract was determined by high-performance liquid chromatography and thre-elayer chromatography. The following flavonoids (rutin, isorhamnetin, quercetin), triterpenoid saponins and phenolic acids (p-coumaric, ferulaic, gallic, caffeic, rosmarinic and chlorogenic) were identified. The presence of triterpenoid saponin, p- coumaric, ferulaic and gallic acids is discovered in the extract of the lungwort callus culture for the first time. Quantitative analysis of bioactive substances showed that the content of caffeic, rosmarinic and chlorogenic acids in the callus culture extract is higher than that in the extracts from the aerial parts of the plant.

Keywords: medicinal lungwort, callus cultures, bioactive substances, geroprotectors, phenolic acids, phyto-chemical composition, safety profile

Acknowledgments: This work was supported by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (project FZSR-2020-0006 "Screening of biologically active substances of plant origin with geroprotective properties, and development of technology for obtaining nutraceuticals that slow down aging").

For citation: Dyshlyuk LS, Drozdova MYu, Loseva AI. Study on safety profile in extracts of Pulmonaria officinalis callus cultures and their phytochemical composition for the presence bioactive substances with the potential geroprotective properties. Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Biotekhnologiya = Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology. 2021;11(2):260-271. (In Russian) https://doi.org/10.212 85/2227-2925-2021-11-2-260-271

ВВЕДЕНИЕ

Процесс старения носит естественный и неизбежный характер. В организме с течением времени происходят необратимые повреждения органов, тканей и клеток. Старение - универсальный процесс, продолжающийся до самой смерти. Увеличение продолжительности жизни и замедление процесса старения привлекали внимание исследователей на протяжении всего времени существования человечества [1-3].

В мире непрерывно возрастает процент людей пожилого возраста. Предполагается, что к 2050 г. население старше 60 лет будет составлять около двух млрд человек, в то время как в 2015 г. таких людей было 900 млн [4, 5]. С одной стороны, наблюдается непрерывное увеличение продолжительности жизни населения, а с другой - отсутствие физических нагрузок, неправильное питание с высоким потреблением калорий приводят к различным метаболическим заболеваниям и таким расстройствам, как диабет, ожирение, сердечно-

сосудистые заболевания, которые ухудшают качество жизни людей [1, 6].

На молекулярном уровне процесс старения зависит от стабильности и целостности ДНК. Геном организма постоянно подвергается угрозам со стороны химических, физических и биологических экзогенных факторов. К эндогенным угрозам относятся: ошибки репликации ДНК, снижение ее способности к репарации; окислительный и ультрафиолетовый стрессы; спонтанные гидролитические реакции [4, 7]. Избыточное накопление активных форм кислорода и снижение активности ферментов, контролирующих радикалы, способствуют развитию различных нейроде-генеративных заболеваний, включая болезнь Альцгеймера и Паркинсона [8, 9].

Самая распространенная причина деменции у пожилых людей - болезнь Альцгеймера. Предполагается, что к 2030 г. количество больных людей составит около 66 млн человек. Вторым по распространенности нейродегенеративным заболева-

нием является болезнь Паркинсона. Она поражает примерно 2% людей старше 65 лет [10, 11].

Профилактика возрастных заболеваний и замедление процессов старения является глобальной проблемой. Следовательно, возникает растущая потребность в создании новых нутрицевтиков с геропротекторными свойствами [5]. При разработке новых препаратов против старения предпочтение отдается ингредиентам из растительного сырья. Это связано прежде всего с более мягким воздействием и отсутствием побочных эффектов на живой организм. Нутрицев-тики на растительной основе не вызывают привыкания и обладают широким спектром лечебного действия [12].

Лекарственные растения, произрастающие на территории Сибирского федерального округа (СФО), являются перспективным источником сырья для создания нутрицевтиков. Из растений можно выделять индивидуальные биологически активные вещества (БАВ), обладающие геропротекторными свойствами. К многочисленным диким растениям СФО относится медуница лекарственная (Pulmonaria officinalis).

Многолетнее травянистое растение Pulmonaria officinalis относится к семейству Boragina-ceae. Традиционно его используют для лечения респираторных, бронхо-легочных заболеваний, заболеваний желудочно-кишечного тракта и почек, а также применяют как противоопухолевое средство [13, 14].

В экстрактах надземных частей Pulmonaria officinalis содержатся биологически активные комплексы и индивидуальные вещества, которые можно использовать для увеличения продолжительности и качества жизни. Полифенолы, фе-нольные кислоты, флавоноиды, проантоциани-дины, витамин С ответственны за антиоксидант-ные и антирадикальные свойства растения [15]. Однако фитохимический состав медуницы лекарственной по наличию индивидуальных биоактивных веществ недостаточно изучен, особенно в отношении фенольных соединений.

В исследованиях M.A. Hawryl и других указывается на наличие хлорогеновой кислоты, акаце-тина, кверцетина, мирицетина, геспередина, апи-генина и нарингенина в метанольном экстракте Pulmonaria officinalis [16]. На основании анализа также было сообщено, что розмариновая кислота являлась основным компонентом в водных и этанольных экстрактах медуницы. Кроме нее было обнаружено небольшое количество рутина и гиперозида [15].

Исследования Krzyzanowska-Kowalczyk J. и других показали, что экстракт медуницы лекарственной включает юннановую кислоту B. Это уникальное вещество, которое было выделено только из Salvia yunnanensis, является мощным геропротектором [17, 18]. Однако эти сообщения дают неполное представление о фитохимиче-

ских веществах, присутствующих в медунице лекарственной. Все данные о составе индивидуальных БАВ растения были получены в результате исследования надземных частей Pulmonaria officinalis, собранных в естественном местообитании. Фитохимический состав каллусных культур не исследовался.

Во всем мире для достижения терапевтических эффектов используются пищевые добавки на основе растений. Очевидно, что для промышленного производства биологически активных добавок (БАД) требуется большой объем растительного сырья, сбор которого с территории произрастания может привести к значительному уменьшению количества растений вплоть до полного исчезновения вида, что в целом негативно скажется на состоянии экосистем региона [19]. Поэтому предпочтение отдается использованию каллусных культур. При культивировании растения in vitro сырье для экстрактов можно получать круглый год. При этом можно добиваться выращивания «чистых» растений, не зараженных бактериями и вирусами, ведь для создания БАД необходимо учитывать не только фитохимический состав сырья, но и его безопасность.

При культивировании Pulmonaria officinalis in vitro образуются каллусные культуры, обогащенные БАВ, которые можно использовать для создания нутрицевтиков. Здесь также важно отсутствие негативного воздействия нутрицевтиков на организм [20].

Целью настоящей работы являлось исследование показателей безопасности экстрактов каллусных культур P. officinalis и их фитохимического состава на наличие биологически активных веществ с потенциальными геропротекторными свойствами.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Объектом изучения являлись каллусные культуры медуницы лекарственной, выращенной в условиях in vitro на твердых питательных средах. В минеральный и гормональный состав для культивирования каллусных культур медуницы лекарственной входили: макросоли MS 20х (50,00 мл), микросоли 20x MS (1,00 мл), Fe-ЭДТА (5,00 мл), сахароза (30,00 г), никотиновая кислота (0,50 мг), пиридоксин (0,50 мг), тиамин (0,10 мг), гидролизат казеина (500,00 мг), инозит (100,00 мг), кинетин (2,00 мг), 6-БАП (0,50 мг), НУК (3,00 мг), агар (20,00 г). Цикл выращивания культуры составил 5 недель.

Для получения экстрактов использовали 70%-й этиловый спирт. Каллусные культуры высушивали и измельчали в мельнице ЛЗМ-1М (Россия). Измельченное сырье просеивали через сито с диаметром пор 1 мм2. Подготовленное сырье хранилось в темном помещении при комнатной температуре.

Мелкодисперсный порошок Pulmonaria offici-

nalis в количестве 3,0 г экстрагировали в 260 мл 70%-го этилового спирта в статических условиях. Экстрагирование каллусных культур осуществлялось на лабораторной водяной бане Экрос ПЭ-4310 (Экросхим, Россия) с обратным холодильником. Экстракцию проводили двукратно.

Продолжительность экстрагирования при 70%-й концентрации экстрагента каллусных культур медуницы лекарственной при температуре 30 °С составила: для образца № 1 - 2 ч; для образца № 2 - 4 ч; для образца № 3 - 6 ч.

Определение БАВ в экстракте каллусной культуры медуницы лекарственной осуществляли на стеклянной хроматографической колонке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием хроматографа Shimadzu LC-20AD, стальной колонки высокого давления диаметром 2,5 мм и длинной 250 мм с размером сорбента 2,5 мкм. Условия элюирования: скорость потока - 1 мл/мин, элюент - вода:метанол, 0,1%-ая трифторуксус-ная кислота с линейным градиентом от 40 до 90% метанола за 20 мин. Детектирование проводили при длине волны 254 нм.

Совместно с ВЭЖХ-анализом использовали тонкослойную хроматографию (ТСХ). Путем применения ТСХ проводили анализ компонентного состава экстракта каллусных культур Pulmonaria officinalis. Исследование выполняли на пластинах Sorbfil ПТСХ-АФ-А и пластинах HPLC Silica gel 60 RP-18 (Merk) с последующей денси-тометрией ТСХ-пластины Sorbfil. Использовали денситометр с системой фотофиксации Sony (Handycam HDR-CX405) (ООО «ИМИД», Россия). Фотофиксацию осуществляли при длинах волн 254, 365 нм и в диапазоне видимого излучения после специфической дериватизации. Элюиро-вание осуществляли в системе подвижной фазы: н-бутанол : уксусная кислота : вода (60 : 15 : 25). В качестве проявителя был использован 25%-й этанольный раствор фсфорно-вольфрамовой кислоты. Идентификацию веществ в экстракте проводили, используя стандартные образцы рутина, изорамнетина, кверцетина, галловой, п-кумаровой, феруловой, кофейной, розмариновой, хлорогеновой кислот («Sigma-Aldrich», США).

Содержание тяжелых металлов в экстрактах

каллусных культур определяли по 0ФС.1.5.3.0009.15 «Определение содержания тяжелых металлов и

мышьяка в лекарственном растительном сырье и

1

лекарственных растительных препаратах»'

Содержание радионуклидов определяли по 0ФС.1.5.3.0001.15 «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном

сырье и лекарственных растительных препара-

1

тов» .

Органолептическим методом определяли цвет и запах экстракта. При необходимости отмечали наличие опалесценции, возможность образования осадка при хранении.

Для определения сухого остатка 5,0 мл жидкого экстракта медуницы лекарственной помещали в предварительно взвешенный бюкс. Далее проводили выпаривание экстракта на водяной бане и сушили 3 ч при температуре 102,5±2,5 °С. Сухой остаток охлаждали в эксикаторе в течение 30 мин и затем взвешивали.

Контролировали остаточное содержание спирта в соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители»1.

Микробиологическую чистоту определяли согласно 0ФС.1.2.4.0002.15 «Микробиологическая 1

чистота» .

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

К необходимым исследованиям безопасности экстрактов относятся органолептические, физико-химические и микробиологические исследования. Экстракты по своим показателям безопасности должны отвечать нормативным документам1. В табл. 1 приведены результаты исследования физико-химических свойств трех образцов экстрактов каллусных культур медуницы лекарственной, при этом каких-либо особенностей не обнаружено.

Результаты исследования физико-химических показателей экстрактов каллусных культур медуницы лекарственной соответствуют требованиям 0ФС.1.4.1.0021.15 «Экстракты» (см. табл. 1). Следовательно, извлеченные комплексы веществ можно использовать в дальнейших исследованиях при создании нутрицев-тиков. Добавление экстрактов каллусных культур медуницы или извлеченных из них БАВ будет безопасно по исследованным параметрам.

Таблица 1. Физико-химические свойства экстрактов каллусных культур медуницы лекарственной (Pulmonaria officinalis)

Table 1. Physiochemical properties of Pulmonaria officinalis L. callus crops

Образец Цвет Запах Сухой остаток, % Остаточное содержание спирта, %

норма результат

1 желтый 3,86±0,07 68,00±0,48

2 светло-желтый характерный < 5,00 3,42±0,08 66,00±0,24

3 зелено-желтый 3,12±0,01 68,00±0,64

1 Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 2. 2015. [Электронный ресурс] // Федеральная электронная медицинская библиотека. URL: http://femb.ru/femb/pharmacopea13.php (01.02.2021).

Используемое для производства нутрицевти-ков сырье на основе лекарственных растений может быть загрязнено токсикантами, что является фактором риска для здоровья человека. Определение наличия в сырье тяжелых металлов - важный этап в разработке БАД на основе экстрактов лекарственных растений. От этого зависит качество и безопасность продукта.

Исследованные показатели безопасности экстрактов культуры медуницы по содержанию примесей тяжелых металлов: свинца ртути висмута (ВО, сурьмы ^Ь), олова ^п), кадмия серебра (Ад), меди (Си), молибдена (Мо), ванадия (V), рутения ^и), платины (Р^, палладия представлены в табл. 2.

Анализируя показатели, приведенные в табл. 2, можно сделать вывод о том, что содержание тяжелых металлов во всех образцах экстрактов каллусных культур медуницы лекарственной

не превышает предельно допустимого уровня. Экстракты соответствуют установленным требованиям ОФС.1.4.1.0021.15 «Экстракты», ОФС 1.5.3.0009.15 «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах». Как показывают полученные результаты, данные экстракты пригодны для использования в дальнейших исследованиях.

Радионуклиды Cs137 и Sr90 не обнаружены ни в одном из исследуемых образцов. Показатели соответствуют требованиям ОФС.1.4.1.0021.15 «Экстракты», а также МУК 2.6.1.1194-03 «Радиационный контроль. Стронций-90 и цезий-137. Пищевые продукты. Отбор проб, анализ и гигиеническая оценка».

Результаты определения микробиологической чистоты экстрактов каллусных культур представлены в табл. 3.

Таблица 2. Содержание примесей тяжелых металлов в экстрактах каллусных культур медуницы лекарственной (Pulmonaria officinalis)

Table 2. Heavy metal content in Pulmonaria officinalis L. callus crops

Образец Содержание примесей тяжелых металлов, мг/кг

Pb Hg Bi Sb

Норма Значение Норма Значение Норма Значение Норма Значение

1 2 3 <3,0000 0,8354±0,0009 0,7494±0,0009 0,7124±0,0002 <0,1000 0,0092±0,0009 0,0114±0,0004 0,0128±0,0006 Не нормируется 0,0476±0,0001 0,0456±0,0001 0,0416±0,0002 Не нормируется 0,0044±0,0001 0,0040±0,0004 0,0033±0,0007

Образец Содержание примесей тяжелых металлов, мг/кг

Sn Cd Ag Cu

Норма Значение Норма Значение Норма Значение Норма Значение

1 2 3 Не нормируется 0,0146±0,0003 0,0139±0,0001 0,0126±0,0001 <1,0000 0,0748±0,0008 0,0741±0,0003 0,0723±0,0007 Не нормируется н/о* <3,0000 1,2783±0,0066 1,2601±0,0049 1,2508±0,0021

Образец Содержание примесей тяжелых металлов, мг/кг

Mo V Ru Pt Pd

Норма Значение Норма Значение Норма Значение Норма Значение Норма Значение

1 2 3 Не нормируется 0,0001± 0,0001 0,0001± 0,0001 0,0002± 0,0001 Не нормируется н/о Не нормируется н/о Не нормируется н/о Не нормируется н/о

*н/о - не обнаружено.

Таблица 3. Микробиологическая чистота экстрактов каллусных культур медуницы лекарственной Table 3. Results of determination of microbiological purity of Pulmonaria officinalis L. callus crops

Номер образца Микробиологические показатели

Общее число аэробных микроорганизмов Общее число дрожжевых и плесневых грибов Общее число энтеробактерий, устойчивых к желчи E. coli Бактерии рода Salmonella

Значение Норма Значение Норма Значение Норма Значение Норма Значение Норма

1 2 3 н/о Не более 105 КОЕ в 1 г н/о Не более 104 КОЕ в 1 г н/о Не более 103 КОЕ в 1 г н/о Отсутствие в 1 г н/о Отсутствие -в 25 г

*н/о - не обнаружено

Микробиологические показатели, представленные в табл. 5, соответствуют требованиям ОФС.1.4.1.0021.15 «Экстракты».

Хроматографический анализ экстрактов показал наибольший выход биологически активных веществ в образце № 2. При анализе фитохими-ческого состава данного экстракта каллусных культур медуницы лекарственной с применением ТСХ было идентифицировано два пятна со значением коэффициента распределения Rf 0,61; 0,69 (рис. 1). Качественные реакции с обнаруженными веществами позволили предположить, что это - тритерпеновые сапонины, производные ß-амирина. Исследование I.T. Henneh, B. Huang и других показало, что ß-амирин можно приме-

нять при лечении ревматоидного артрита [21]. Также соединение проявляет гепатопротектор-ную, противовоспалительную активность и эффективен при лечении ожирения у мышей [22].

Анализ содержащихся флавоноидов проведен после предварительного концентрирования с использованием роторного испарителя 1КА8 при вакуумировании 72 Мбар до густой консистенции. Денситограмма представлена на рис. 2. Идентифицированы рутин ^ = 0,69), изорам-нетин (^ = 0,81), кверцетин (^ = 0,925). Было показано, что данные флавоноиды положительно влияют на продолжительность жизни модельного организма C. elegans [23, 24].

;

д.д : : / :

/1 V ! V^-Jv, : / 4 S S 7 8 v 9 ^

е «я

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Рис. 1. Денситограмма экстракта каллусных культур медуницы лекарственной на пластине Sorbfil ПТСХ-АФ-А (проявитель - 25%-й этанольный раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты)

Fig. 1. Densitogram of the extract from the Pulmonaria officinalis L. callus crops on Sorbfil PTSKh-AF-A plate (developer - 25% ethanol solution of phosphoric-tungstic acid)

Рис. 2. Денситограмма экстракта каллусных культур медуницы лекарственной в ультрафиолете после обработки парами аммиака

Fig. 2. Densitogram of the extract from the Pulmonaria officinalis L. callus crops in ultraviolet light after treatment with ammonia vapor

С помощью ВЭЖХ-анализа было определено количественное содержание биологически активных веществ в экстракте каллусной культуры Pulmonaria officinalis (рис. 3, табл. 4).

По данным ВЭЖХ-анализа, во втором образце извлечений из культуры медуницы обнаружено содержание фенолкарбоновых кислот и тритерпе-нового сапонина. Также из представленных в табл. 4 данных видно, что среди идентифицированных кислот в наибольшем количестве содержится л-кумаровая кислота - 41,47±0,92 мг/мл. Известно, что данная кислота оказывает противораковое действие, а также проявляет мощный антиоксидантный и антидиабетический эффект [25-27]. Количество измеренной феруловой кислоты составило 15,07±0,76 мг/мл. Она задерживает патологические симптомы при болезни Альцгеймера [28] и Паркинсона [29], а также проявляет антиоксидантную и противовоспалительную активность. Галловая кислота оказывает противораковую и антиоксидантную активность, а также уменьшает тревожность и депрессию (по резуьтатам исследования на крысах). Ее содержание в экстракте каллусной культуры медуницы лекарственной составило 8,34±0,44 мг/мл. Отметим, что ранее об идентификации в этанольных экстра-тах названных фенольных кислот не сообщалось.

Содержание кофейной, розмариновой и хло-рогеновой кислот в этанольном экстракте каллусной культуры Pulmonaria officinalis относительно высокое - от 8,23 до 13,29 мг/мл. Исследование J.Q. Li, J.S. Fang и их коллег показало, что ко-

фейная кислота продлевает жизнь и увеличивает устойчивость к стрессу у D. melanogaster [30]. Розмариновая кислота проявляет антиоксидант-ную активность, ослабляя окислительный стресс у крыс. При этом доза кислоты 12 мг/кг массы тела оказывает положительный эффект при заболевании Хантингтона. Хлорогеновая кислота снижает уровень свободных радикалов в корковых срезах крыс при окислительном стрессе, который был вызван H2O2 [29]. Она также увеличивает продолжительность жизни C. elegans через сигнальный путь инсулина/IGF-l и выживаемость при тепловом стрессе [31]. Ранее сообщалось о наличии данных БАВ в экстракте надземных частей Pulmonaria officinalis, но их содержание было меньше. Так, в исследованиях E. Neagu и других содержание кофейной и хлорогеновой кислоты в этанольном экстракте медуницы составило 3,360 и 3,030 мг/мл соответственно [15]. Авторами работы [18] количество кофейной, розмариновой и хлорогеновой кислот было обнаружено в объеме 0,023; 7,002 и 0,241 мг/мл соответственно.

В настоящем исследовании впервые в экстракте каллусной культуры медуницы измерено содержание тритерпенового сапонина, которое составило 35,16±0,60 мг/мл. В работе [32] сообщается, что сапонины проявляют нейропротек-тивный и кардиозащитный эффект за счет активации аутофагии. Также они имеют потенциал при лечении рака.

Рис. 3. Хроматограмма экстракта каллусных культур медуницы лекарственной (колонка Kromasil 5 мкм 110 Á, С - 18 250х4,6 мм)

Fig. 3. Chromatogram of the extract from the Pulmonaria officinalis L. callus crops (column Kromasil 5 |jm 110 Á, С - 18 250х4.6 mm)

Таблица 4. Компонентный состав образцов экстракта каллусных культур медуницы лекарственной Table 4. Components identified in Pulmonaria officinalis L. callus crops

Время удерживания, мин Наименование компонента Количественное содержание, мг/мл

4,79 галловая кислота 8,34±0,44

5,40 тритерпеновый сапонин 35,16±0,60

6,28 л-кумаровая кислота 41,47±0,92

7,93 феруловая кислота 15,07±0,76

8,15 кофейная кислота 13,29±0,72

10,39 розмариновая кислота 9,12±0,48

24,25 хлорогеновая кислота 8,23±0,50

В дальнейших исследованиях планируется изучить in vivo потенциальные геропротекторные свойства экстракта и индивидуальных биологически активных веществ из каллусной культуры медуницы лекарственной на модели нематоды C. elegans.

ВЫВОДЫ

Таким образом, результаты проведенного анализа трех образцов экстрактов каллусных культур медуницы лекарственной подтвердили их безопасность по физико-химическим и микробиологическим показателям. Содержание тяжелых металлов и радионуклидов соответствует требованиям ОФС.1.4.1.0021.15 «Экстракты» и МУК 2.6.1.1194-03 «Радиационный контроль. Стронций-90 и цезий-137. Пищевые продукты. Отбор проб, анализ и гигиеническая оценка».

В ходе исследования был изучен фитохими-ческий состав экстрактов, полученных из био-

массы каллусных культур медуницы лекарственной, и измерено количественное содержание биологически активных соединений с потенциальными геропротекторными свойствами. С помощью методов ВЭЖХ и ТСХ было обнаружено содержание таких веществ, как рутин, изорам-нетин, кверцетин, тритерпеновый сапонин, а также фенольные кислоты. Впервые в экстракте каллусных культур медуницы лекарственной были идентифицированы и количественно измерены тритерпеновый сапонин и фенольные кислоты (л-кумаровая, феруловая, галловая). Содержание кофейной, розмариновой и хлорогеновой кислот в извлечениях из каллусных культур оказалось выше, чем в экстрактах из надземных частей растения. Таким образом, в дальнейшем экстракт из каллусных культур медуницы лекарственной можно исследовать на наличие у него геропротекторных свойств.

СПИСОК Л

1. Prasanth M.I., Sivamaruthi B.S., Kesika P., Rosmol P.S., Tencomnao T. Unraveling the mode of action of medicinal plants in delaying age-related diseases using model organisms // Medicinal and Aromatic Plants. 2021. P. 37-60. https://doi.org/

10.1016/B978-0-12-819590-1.00002-1

2. Pandey S., Phulara S.C., Mishra S.K., Bajpai R., Kumar A., Niranjan A., et al. Betula utilis extract prolongs life expectancy, protects against amyloid-p toxicity and reduces Alpha Synuclien in Caenorhab-ditis elegans via DAF-16 and SKN-1 // Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology. 2020. Vol. 228, 108647. https://doi. org/10.1016/j.cbpc.2019.108647

3. Song B., Zheng B., Li T., Liu R.H. Raspberry extract ameliorates oxidative stress in Caenorhabdi-tis elegans via the SKN-1/Nrf2 pathway // Journal of Functional Foods. 2020. Vol. 70. Issue 17. 103977. https://doi.org/10.1016/j.jff.2020.103977

4. Santos M.A., Franco F.N., Caldeira C.A., de Araujo G.R., Vieira A., Chaves M.M., et al. Antioxidant effect of Resveratrol: Change in MAPK cell signaling pathway during the aging process // Archives of Gerontology and Geriatrics. 2020. Vol. 92. 104266. https://doi.org/10.1016/j.archger.2020.104266

5. Folch J., Busquets O., Ettcheto M., Sanchez-Lopez E., Pallas M., Beas-Zarate C., et al. Experimental models for aging and their potential for novel drug discovery // Current Neuropharmacology. 2018. Vol. 16. Issue 10. P. 1466-1483. https://doi.org/10.2174/157015 9X15666170707155345

6. Lopez-Otin C., Galluzzi L., Freije J.M., Madeo F., Kroemer G. Metabolic control of longevity // Cell. 2016. Vol. 166. Issue 4. P. 802-821. https://doi.org/ 10.1016/j.cell.2016.07.031

7. Petr M.A., Tulika T., Carmona-Marin L.M., Scheibye-Knudsen M. Protecting the Aging Genome

// Trends in Cell Biology. 2020. Vol. 30 Issue 2. P. 117-132. https://doi.org/10.1016/j.tcb.2019.12.001

8. Senol F.S., Orhan I., Yilmaz G., Cicek M., Se-ner B. Acetylcholinesterase, butyrylcholinesterase, and tyrosinase inhibition studies and antioxidant activities of 33 Scutellaria L. taxa from Turkey // Food and Chemical Toxicology. 2010. Vol. 48 Issue 3. P. 781788. https://doi.org/10.1016/j.fct.2009.12.004

9. Gu J., Li Q., Liu J., Ye Z., Feng T., Wang G., et al. Ultrasonic-assisted extraction of polysaccharides from Auricularia auricula and effects of its acid hydrolysate on the biological function of Caeno-rhabditis elegans // International Journal of Biological Macromolecules. 2020. Vol. 167. P. 423-433. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2020.11.160

10. Markaki M., Tavernarakis N. Caenorhabditis elegans as a model system for human diseases // Current Opinion in Biotechnology. 2020. Vol. 63. P. 118125. https://doi.org/10.1016/j.copbio.2019.12.011

11. Apfeld J., Alper S. What can we learn about human disease from the nematode C. elegans? // Disease Gene Identification. 2018. Vol. 1706. P. 5375. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7471-9_4

12. Полухина Т.С., Нургалиева Г.Б. Изучение количественного содержания аскорбиновой кислоты в надземной части медуницы лекарственной (Pulmonaria officinalis L.) // Фундаментальные и прикладные научные исследования: актуальные вопросы, достижения и инновации: сб. ст. победителей V Междунар. науч.-практ. конф.: в 4 ч. (Пенза, 15 мая 2017 г.). Пенза: Наука и Просвещение, 2017. С.243-245.

13. Dyshlyuk L.S., Fedorova A.M., Dolganyuk V.F., Prosekov A.Y. Optimization of extraction of poly-phenolic compounds from medicinal lungwort (Pulmonaria officinalis L.) // Journal of Pharmaceutical Research International. 2020. Vol. 32. Issue 24. P. 36-

45. https://doi.org/10.9734/jpri/2020/v32i2430807

14. Akram M., Rashid A. Anti-coagulant activity of plants: mini review // Journal of Thrombosis and Thrombolysis. 2017. Vol. 44. Issue 3. P. 406-411. https://doi.orrg/10.1007/s11239-017-1546-5

15. Neagu E., Radu G.L., Albu C., Paun G. Antioxidant activity, acetylcholinesterase and tyrosinase inhibitory potential of Pulmonaria officinalis and Centarium umbellatum extracts // Saudi Journal of Biological Sciences. 2018. Vol. 25. Issue 3. P. 578-585. https://doi.org/10.1016/j.sjbs.2016.02.016

16. Hawryl M.A., Waksmundzka-Hajnos M. Micro 2D-TLC of selected plant extracts in screening of their composition and antioxidative properties // Chroma-tographia. 2013. Vol. 76. Issue 19-20. P. 1347-1352. https://doi.org/10.1007/s10337-013-2490-y

17. Krzyzanowska-Kowalczyk J., Kolodziejczyk-Czepas J., Kowalczyk M., Pecio L., Nowak P., Sto-chmal A. Yunnaneic acid B, a component of Pulmonaria officinalis extract, prevents peroxynitrite-induced oxidative stress in vitro // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2017. Vol. 65. Issue 19. P. 38273834. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.7b00718

18. Krzyzanowska-Kowalczyk J., Pecio L., Moldoch J., Ludwiczuk A., Kowalczyk M. Novel phenolic constituents of Pulmonaria officinalis L. LC-MS/MS comparison of spring and autumn metabolite profiles // Molecules. 2018. Vol. 23. Issue 9. 2277. https://doi.org/10.3390/molecules23092277

19. Захарова О.А., Любаковская Л.А., Гурина Н.С., Спиридович Е.В. Каллусная культура как альтернативный источник микроклонального размножения // Современные проблемы природопользования, охотоведения и звероводства. 2004. N 1. C. 54-55.)

20. Waidyanatha S., Pierfelice J., Cristy T., Mut-lu E., Burback B., Rider C.V., et al. A strategy for test article selection and phytochemical characterization of Echinacea purpurea extract for safety testing // Food and Chemical Toxicology. 2020. Vol. 137. 111125. https://doi.org/10.1016/j.fct.2020.111125

21. Henneh I.T., Huang B., Musayev F.N., Al Hashimi R., Safo M.K., Armah F.A., et al. Structural elucidation and in vivo anti-arthritic activity of Д-amyrin and polpunonic acid isolated from the root bark of Ziziphus abyssinica HochstEx. A Rich (Rhamnaceae) // Bioorganic chemistry. 2020. Vol. 98. 103744. https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2020.103744

22. De Melo K.M., de Oliveira F.T.B., Silva R.A.C., Quindere A.L.G., Marinho Filho J.D.B., Araujo A.J., et al. a,p-Amyrin, a pentacyclic triterpe-noid from Protium heptaphyllum suppresses adipocyte differentiation accompanied by down regulation of PPARy and C/EBPa in 3T3-L1 cells // Biomedi-cine & Pharmacotherapy. 2019. Vol. 109. P. 18601866. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.11.027

23. Cordeiro L.M., Machado M.L., da Silva A.F.,

Baptista F.B.O., da Silveira T.L., Soares F.A.A., et al. Rutin protects Huntington's disease through the insulin/IGF1 (IIS) signaling pathway and autophagy activity: study in Caenorhabditis elegans model // Food and Chemical Toxicology. 2020. Vol. 141. 111323. https://doi.org/10.1016/j.fct.2020.111323

24. Sugawara T., Sakamoto K. Quercetin enhances motility in aged and heat-stressed Caenorhabditis elegans nematodes by modulating both HSF-1 activity, and insulin-like and p38-MAPK signalling // PloS ONE. 2020. Vol. 15. Issue 9. e0238528. https://doi.org/10.13 71/journal.pone.0238528

25. Sharma S.H., Rajamanickam V., Nagarajan S. Supplementation of p-coumaric acid exhibits chemo-preventive effect via induction of Nrf2 in a short-term preclinical model of colon cancer // European Journal of Cancer Prevention. 2019. Vol. 28. Issue 6. P. 472482. https://doi.org/10.1097/CEJ.0000000000000496

26. Amalan V., Vijayakumar N., Indumathi D., Ramakrishnan A. Antidiabetic and antihyperlipidem-ic activity of p-coumaric acid in diabetic rats, role of pancreatic GLUT 2: in vivo approach // Biomedicine and Pharmacotherapy. 2016. Vol. 84. P. 230-236. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2016.09.039

27. Peng J., Zheng T.-T., Liang Y., Duan L.-F., Zhang Y.-D., Wang L.J., et al. p-Coumaric acid protects human lens epithelial cells against oxidative stress-induced apoptosis by MAPK signaling // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018. Vol. 2018. 8549052. https://doi.org/10.1155/2018/8549052

28. Wang N., Zhou Y., Zhao L., Wang C., Ma W., Ge G., et al. Ferulic acid delayed amyloid p-induced pathological symptoms by autophagy pathway via a fasting-like effect in Caenorhabditis elegans // Food and Chemical Toxicology. 2020. Vol. 146. 111808. https://doi.org/10.1016/j.fct.2020.111808

29. Szwajgier D., Borowiec K., Pustelniak K. The neuroprotective effects of phenolic acids: molecular mechanism of action // Nutrients. 2017. Vol. 9. Issue 5. 477. https://doi.org/10.3390/nu9050477

30. Li J.-Q., Fang J.-S., Qin X.-M., Gao L. Metabo-lomics profiling reveals the mechanism of caffeic acid in extending lifespan in Drosophila melanogaster // Food & Function. 2020. Vol. 11. Issue 9. P. 82028213. https://doi.org/10.1039/d0fo01332c

31. Carranza A.D.V., Saragusti A., Chiabran-do G.A., Carrari F., Asis R. Effects of chlorogenic acid on thermal stress tolerance in C. elegans via HIF-1, HSF-1 and autophagy // Phytomedicine. 2019. Vol. 66. P. 153132. https://doi.org/10.1016/j. phymed.2019.153132

32. Han B., He C. Targeting autophagy using saponins as a therapeutic and preventive strategy against human diseases // Pharmacological Research. 2021. Vol. 166. 105428. https://doi.org/10.1 016/j.phrs.2021.105428

REFERENCES

1. Prasanth MI, Sivamaruthi BS, Kesika P, Rosmol PS, Tencomnao T. Unraveling the mode of action of medicinal plants in delaying age-related diseases using model organisms. Medicinal and Aromatic Plants. 2021:37-60. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-819590-1.00002-1

2. Pandey S, Phulara SC, Mishra SK, Bajpai R, Kumar A, Niranjan A, et al. Betula utilis extract prolongs life expectancy, protects against amyloid-p toxicity and reduces Alpha Synuclien in Caenorhab-ditis elegans via DAF-16 and SKN-1. Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology. 2020;228:108647. https://doi.org/10. 1016/j.cbpc.2019.108647

3. Song B, Zheng B, Li T, Liu RH. Raspberry extract ameliorates oxidative stress in Caenorhabditis elegans via the SKN-1/Nrf2 pathway. Journal of Functional Foods. 2020;70(17):103977. https://doi. org/10.1016/j.jff.2020.103977

4. Santos MA, Franco FN, Caldeira CA, de Araujo GR, Vieira A, Chaves MM, et al. Antioxidant effect of Resveratrol: Change in MAPK cell signaling pathway during the aging process. Archives of Gerontology and Geriatrics. 2020;92:104266. https://doi.org/10.1016Zj.archger.2020.104266

5. Folch J, Busquets O, Ettcheto M, Sanchez-Lopez E, Pallas M, Beas-Zarate C, et al. Experimental models for aging and their potential for novel drug discovery. Current Neuropharmacology. 2018;16(10): 1466-1483. https://doi.org/10.2174/1570159X1566617 0707155345

6. Lopez-Otin C, Galluzzi L, Freije JM, Madeo F, Kroemer G. Metabolic control of longevity. Cell. 2016;166(4):802-821. https://doi.org/10.1016/j.cell. 2016.07.031

7. Petr MA, Tulika T, Carmona-Marin LM, Scheibye-Knudsen M. Protecting the Aging Genome. Trends in Cell Biology. 2020;30(2):117-132. https://doi.org/10.1016/j.tcb.2019.12.001

8. Senol FS, Orhan I, Yilmaz G, Cicek M, Sener B. Acetylcholinesterase, butyrylcholinesterase, and tyrosinase inhibition studies and antioxidant activities of 33 Scutellaria L. taxa from Turkey. Food and Chemical Toxicology. 2010;48(3):781-788. https:// doi.org/10.1016/j.fct.2009.12.004

9. Gu J, Li Q, Liu J, Ye Z, Feng T, Wang G, et al. Ultrasonic-assisted extraction of polysaccharides from Auricularia auricula and effects of its acid hy-drolysate on the biological function of Caenorhabditis elegans. International Journal of Biological Mac-romolecules. 2020;167:423-433. https://doi.org/10.1 016/j.ijbiomac.2020.11.160

10. Markaki M, Tavernarakis N. Caenorhabditis elegans as a model system for human diseases. Current Opinion in Biotechnology. 2020;63:118-125. https://doi.org/10.1016/j.copbio.2019.12.011

11. Apfeld J, Alper S. What can we learn about human disease from the nematode C. elegans? Disease Gene Identification. 2018;1706:53-75.

https://doi.org/10.1007/978-1-4939-7471-9_4

12. Polukhina TS, Nurgalieva GB. Study of quantitative content of ascorbic acid in the supervisory part of the Pulmonaria officinalis. In: Funda-mental'nye i prikladnye nauchnye issledovaniya: aktual'nye voprosy, dostizheniya i innovatsii: sbornik statei pobeditelei V Mezhdunarodnoi nauchno-prakticheskoi konferentsii = Fundamental and Applied Scientific Research: Topical Issues, Achievements and Innovations: Collection of Articles by the Winners of the V International Scientific and Practical Conference. Penza,15 May 2017. Penza: Nauka i Prosveshchenie; 2017, p 243-245. (In Russian)

13. Dyshlyuk LS, Fedorova AM, Dolganyuk VF, Prosekov AY. Optimization of extraction of polyphenols compounds from medicinal lungwort (Pulmonaria officinalis L.). Journal of Pharmaceutical Research International. 2020;32(24):36-45. https://doi. org/10.9734/jpri/2020/v32i2430807

14. Akram M, Rashid A. Anti-coagulant activity of plants: mini review. Journal of Thrombosis and Thrombolysis. 2017;44(3):406-411. https://doi.org/ 10.1007/s11239-017-1546-5

15. Neagu E, Radu GL, Albu C, Paun G. Antioxidant activity, acetylcholinesterase and tyrosinase inhibitory potential of Pulmonaria officinalis and Centarium umbellatum extracts. Saudi Journal of Biological Sciences. 2018;25(3):578-585. https:// doi.org/10.1016/j.sjbs.2016.02.016

16. Hawryl MA, Waksmundzka-Hajnos M. Micro 2D-TLC of selected plant extracts in screening of their composition and antioxidative properties. Chroma-tographia. 2013;76(19-20):1347-1352. https://doi.org/

10.1007/s10337-013-2490-y

17. Krzyzanowska-Kowalczyk J, Kolodziejczyk-Czepas J, Kowalczyk M, Pecio L, Nowak P, Sto-chmal A. Yunnaneic acid B, a component of Pulmonaria officinalis extract, prevents peroxynitrite-induced oxidative stress in vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2017;65(19):3827-3834. https://doi.org/10.1021 /acs.jafc.7b00718

18. Krzyzanowska-Kowalczyk J, Pecio L, Moldoch J, Ludwiczuk A, Kowalczyk M. Novel phenolic constituents of Pulmonaria officinalis L. LC-MS/MS comparison of spring and autumn metabolite profiles. Molecules. 2018;23(9):2277. https://doi. org/10.3390/molecules23092277

19. Zakharova OA, Lyubakovskaya LA, Gurina NS, Spiridovich EV. Callus as alternative source of microclonaric multiplication. Sovremennye problemy prirodopol'zovaniya, okhotovedeniya i zverovodstva = Modern problems of nature management, hunting and animal husbandry. 2004;1:54-55. (In Russian)

20. Waidyanatha S, Pierfelice J, Cristy T, Mutlu E, Burback B, Rider CV, et al. A strategy for test article selection and phytochemical characterization of Echinacea purpurea extract for safety testing. Food and Chemical Toxicology. 2020;137:111125. https://doi.org/10.1016/j.fct.2020.111125

21. Henneh IT, Huang B, Musayev FN, Al Ha-shimi R, Safo MK, Armah FA, et al. Structural elucidation and in vivo anti-arthritic activity of ^6-amyrin and polpunonic acid isolated from the root bark of Ziziphus abyssinica HochstEx. A Rich (Rhamna ceae). Bioorganic chemistry. 2020;98:103744. https://doi.org/10.1016/j.bioorg.2020.103744

22. De Melo KM, de Oliveira FTB, Silva RAC, Quindere ALG, Marinho Filho JDB, Araujo AJ, et al. a,p-Amyrin, a pentacyclic triterpenoid from Protium heptaphyllum suppresses adipocyte differentiation accompanied by down regulation of PPARy and C/EBPa in 3T3-L1 cells. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2019;109:1860-1866. https://doi.org/10.1 016/j.biopha.2018.11.027

23. Cordeiro LM, Machado ML, da Silva AF, Baptista FBO, da Silveira TL, Soares FAA, et al. Rutin protects Huntington's disease through the in-sulin/IGF1 (IIS) signaling pathway and autophagy activity: study in Caenorhabditis elegans model. Food and Chemical Toxicology. 2020;141;111323. https://doi.org/10.1016/j.fct.2020.111323

24. Sugawara T, Sakamoto K. Quercetin enhances motility in aged and heat-stressed Caenorhabditis elegans nematodes by modulating both HSF-1 activity, and insulin-like and p38-MAPK signaling. PloS ONE. 2020;15(9):e0238528. https://doi. org/10.1371/journal.pone.0238528

25. Sharma SH, Rajamanickam V, Nagarajan S. Supplementation of p-coumaric acid exhibits chem-opreventive effect via induction of Nrf2 in a short-term preclinical model of colon cancer. European Journal of Cancer Prevention. 2019;28(6):472-482. https://doi.org/10.1097/CEJ.0000000000000496

26. Amalan V, Vijayakumar N, Indumathi D, Ramakrishnan A. Antidiabetic and antihyperlipidem-

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ

Дышлюк Любовь Сергеевна,

к.б.н., доцент кафедры бионанотехнологии, Кемеровский государственный университет, 650000, г. Кемерово, ул. Красная, 6, Российская Федерация, e-mail: soldatovals1984@mail.ru

Дроздова Маргарита Юрьевна,

магистрант, лаборант-исследователь лаборатории биотестирования природных нутрицевтиков,

Кемеровский государственный университет, 650000, г. Кемерово, ул. Красная, 6, Российская Федерация, И e-mail: drozdowa.margarita.00@yandex.ru

Лосева Анна Ивановна,

к.т.н., начальник Центра научной периодики, Кемеровский государственный университет, 650000, г. Кемерово, ул. Красная, 6,

ic activity of p-coumaric acid in diabetic rats, role of pancreatic GLUT 2: in vivo approach. Biomedicine and Pharmacotherapy. 2016;84:230-236. https:// doi.org/10.1016/j.biopha.2016.09.039

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

27. Peng J, Zheng T-T, Liang Y, Duan L-F, Zhang Y-D, Wang L-J, et al. p-Coumaric acid protects human lens epithelial cells against oxidative stress-induced apoptosis by MAPK signaling. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018;2018:8549052. https://doi.org/ 10.1155/2018/8549052

28. Wang N, Zhou Y, Zhao L, Wang C, Ma W, Ge G, et al. Ferulic acid delayed amyloid p-induced pathological symptoms by autophagy pathway via a fasting-like effect in Caenorhabditis elegans. Food and Chemical Toxicology. 2020;146:11808. https:// doi.org/10.1016/j.fct.2020.111808

29. Szwajgier D, Borowiec K, Pustelniak K. The neuroprotective effects of phenolic acids: molecular mechanism of action. Nutrients. 2017;9(5):477. https://doi.org/10.3390/nu9050477

30. Li J-Q, Fang J-S, Qin X-M, Gao L. Metabo-lomics profiling reveals the mechanism of caffeic acid in extending lifespan in Drosophila melano-gaster. Food & Function. 2020;11(9):8202-8213. https://doi.org/10.1039/d0fo01332c

31. Carranza ADV, Saragusti A, Chiabrando GA, Carrari F, Asis R. Effects of chlorogenic acid on thermal stress tolerance in C. elegans via HIF-1, HSF-1 and autophagy. Phytomedicine. 2019;66:153132. https://doi.org/10.1016/j.phymed.2019.153132

32. Han B, He C. Targeting autophagy using saponins as a therapeutic and preventive strategy against human diseases. Pharmacological Research. 2021 ;166:105428. https://doi.org/10.1016/j.phrs.2021. 105428

INFORMATION ABOUT THE AUTHORS Lubov S. Dushlyuk,

Cand. Sci. (Biology), Associate Professor, Department of Bionanotechnology, Kemerovo State University, 6, Krasnaya St., Kemerovo, 650000, Russian Federation, e-mail: soldatovals1984@mail.ru

Margarita Yu. Drozdova,

Master Student, Researcher, Natural Nutraceutical Bioassay Laboratory, Kemerovo State University, 6, Krasnaya St., Kemerovo, 650000, Russian Federation,

El e-mail: drozdowa.margarita.00@yandex.ru

Anna I. Loseva,

Cand. Sci. (Engineering),

Head of the Department of Scientific

and Publishing Activities,

Российская Федерация, e-mail: unid.kemsu@mail.ru

Заявленный вклад авторов

Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Поступила в редакцию 03.02.2021. Одобрена после рецензирования 18.04.2021. Принята к публикации 31.05.2021.

Kemerovo State University, 6, Krasnaya St., Kemerovo, 650000, Russian Federation, e-mail: unid.kemsu@mail.ru

Contribution of the authors

The authors contributed equally to this article.

Conflict interests

The authors declare no conflict of interests regarding the publication of this article.

The final manuscript has been read and approved by all the co-authors.

The article was submitted 03.02.2021. Approved after reviewing 18.04.2021. Accepted for publication 31.05.2021.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.