Исследование пигментов сине-зеленой водоросли спирулины платенсис для практического использования в технологиях кондитерских изделий Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

ВестникВТУИТ/Proceedings of VSUET, Т. 81, № 2, 2019-

Оригинальная статья/Original article_

УДК 667.272/.276

DOI: http://doi.org/10.20914/2310-1202-2019-2-170-176

Исследование пигментов сине-зеленой водоросли спирулины платенсис для практического использования в технологиях _кондитерских изделий_

Татьяна К. Каленик 1 kaleniktk@rambler.ru

Елена В. Добрынина 1 elena_victory@list.ru

Виолетта М. Остапенко 1 vetaostapenko_97@mail.ru

Ясуёши Тори 2 torii.yasuyoshi@nihon-u.ac.jp

Юро Хироми_2 hiromi.juro@nihon-u.ac.jp

1 Дальневосточный федеральный университет, поселок Аякс, 10, г. Владивосток, о. Русский, 690922, Россия

2 Колледж биоресурсных наук, Нихонский университет, 1866 Камейно, Фудзисава. Канагава 252-0880, Япония Аннотация. В статье представлено исследование процесса выделения натурального синего пигмента - фикоцианина из биомассы сине-зеленой водоросли Spirulina platensis методом водной экстракции с последующим использованием его водного раствора в качестве натурального пищевого красителя в технологии производства голубого шоколада. В последнее время современные пищевые предприятия ведут свою политику в сторону расширения ассортимента выпускаемой продукции, что тесно связано с увеличением потребностей населения в пищевых продуктах нового вида. Одним из вариантов решения этого вопроса является применение пищевых добавок как природного, так и синтетического происхождения. Среди подобных компонентов широкое распространение нашли красители искусственного происхождения, которые обладают высокой красящей способностью и относительно невысокой стоимостью. Однако многие из разрешенных в нашей стране синтетические пищевые красители запрещены в ряде развитых государств как потенциально опасные для здоровья. Синтетические красители красного, желтого и зеленого цвета имеют большое количество природных аналогов - каротиноиды, лютеин, хлорофилл и т.д., за исключением синего красителя, аналогом которого является только антоцианы, являющиеся нестабильными в зависимости от условий pH среды. В данной статье проведена идентификация фикобилипротеинов и хлорофилла а в водном экстракте спирулины. Определена массовая концентрация фикобилипротеинов и хлорофилла а спектрофотометрическим методом до и после добавления насыщенного раствора сульфата аммония. Проведен сравнительный анализ влияния фракционирования (высаливания) на степень очистки раствора фикоцианина. Представлена и описана технологическая схема извлечения фикоцианина, которая позволяет использовать его в пищевых технологиях в качестве экстракта, либо сухого порошка. Установлена концентрация экстракта фикоцианина из сине-зеленой водоросли спирулины для использования его в производстве голубого шоколада. Определены органолептические и гигиенические показатели готового продукта.

Ключевые слова: сине-зеленые водоросли, спирулина платенсис, фикобилипротеины, фикоцианин, хлорофилл а, экстракция, спек-трофотометрия,^ату|ральные^расители^о^

Research of pigments of blue-green algae spirulina platensis _for practical use in confectionery technology_

Tatyana K. Kalenik 1 kaleniktk@rambler.ru

Elena V. Dobrynina 1 elena_victory@list.ru

Violetta M. Ostapenko 1 vetaostapenko_97@mail.ru

Yasuyoshi Torii 2 torii.yasuyoshi@nihon-u.ac.jp

Juro Hiromi_2 hiromi.juro@nihon-u.ac.jp

1 Far Eastern Federal University, Ajax Bay, 10 Vladivostok, i. Russky, 690922, Russia

2 College of Bioresource Sciences, Nihon University, 1866 Kameino, Fujisawa-shi, Kanagawa 252-0880, Japan

Abstract. The article presents a study of the process of isolation of natural blue pigment - phycocyanin from the biomass of blue-green algae Spirulina platensis by water extraction, followed using its water solution as a natural food colorant in the production of milk chocolate. Recently, modern food enterprises are pursuing their policy towards expanding the range of products, which is closely related to the increasing needs of the population in food of a new kind. One of the solutions to this problem is the use of food additives of both natural and synthetic origin. Among the similar components widespread found dyes synthetic origin, which have high coverage rates and relatively low cost. However, many of the permitted in our country synthetic food dyes are banned in several developed countries as potentially dangerous to health. Synthetic dyes of red, yellow and green color have many natural analogues - carotenoids, lutein, chlorophyll, etc., except for the blue dye, the analogue of which is only anthocyanins, which are unstable depending on the pH conditions. In this article were identified phycobiliproteins and chlorophyll a in a water extract of spirulina. The mass concentration of phycobiliproteins and chlorophyll a was determined by spectrophotometric method before and after the addition of ammonium sulfate. A comparative analysis of the effect of fractionation (salting out) on the degree of purification of the phycocyanin solution. Presented and described the technological scheme of extraction of phycocyanin which allows to use it in food technologies as an extract or a dry powder. Established the concentration of phycocyanin extract from blue-green algae spirulina to produce milk blue chocolate. Determined organoleptic and hygienic characteristics of the finished product

Keywords: blue-green algae, spirulina platensis, phycobiliproteins, phycocyanin, chlorophyll a, extraction, spectrophotometry, natural colorants, blue chocolate

Для цитирования Каленик Т.К., Добрынина Е.В., Остапенко В.М., Тори Ясуёши, Хироми Юро Исследование пигментов сине-зеленой водоросли спирулины платенсис для практического использования в технологиях кондитерских изделий // Вестник ВГУИТ. 2019. Т. 81. № 2. С. 170-176. ао1:10.20914/2310-1202-2019-2-170-176

For citation

Kalenik T.K., Dobrynina E.V., Ostapenko V.M., Torii Yasuyoshi, Hiromi Juro Research of pigments of blue-green algae spirulina platensis for practical use in confectionery technology. Vestnik VGUIT [Proceedings of VSUET]. 2019. vol. 81. no. 2. pp. 170-176. (in Russian). doi:10.20914/2310-1202-2019-2-170-176

Введение

В настоящее время перспективным сырьем для получения биологически активных веществ являются макро- и микроводоросли [1]. Одним из альтернативных источников получения натурального пигмента синего цвета, который может быть использован в качестве натурального пищевого красителя, является сине-зеленая водоросль спирулина платенсис (БртИпа platensis).

Вид цианобактерии спирулина платенсис представляет собой нитчатую микроскопическую, не образующую гетероцист, неазотофик-сирующую, спиралевидную цианобактерию, использующую для роста энергию фотосинтеза и относящуюся к прокариотам [2].

Спирулина содержит множество пигментов, которые могут быть полезны и биодоступны, в том числе бета-каротин, зеаксантин, хлорофилл а (хлорофилл Ь отсутствует), ксантофилл, эхиненон, миксооксантофил, кантаксантин, диатоксантин, З'-гидроксиэхиненон, бетакрип-токсантин и осциллаксантин, а также фикобилипротеины (ФБП) - С-фикоцианин, аллофикоцианин и фикоэритрин [3].

Фикоцианин - белок, входящий в состав фотосинтезирующих пигментных комплексов спирулины - фикобилисом. В составе биомассы спирулины он представлен несколькими изоформами, включая аллофикоцианин и С-фикоцианин. Последний состоит из 2 типов субъединиц молекулярной массой 17-21 кД, организованных в нативном белке в гексамерный комплекс. Каждая субъединица содержит кова-лентно связанный хромофор фикоцианобилин, определяющий его биологическую активность. Фикоцианобилин является веществом, родственным билирубину сыворотки крови, и подобно ему обладает свойствами гасителя свободных радикалов. Благодаря этому фикоцианин является активным пищевым антиоксидантом [4]. Фикоцианин подавляет развитие опухолевых клеток, снижает содержание медиаторов воспаления. Кроме этого, он ингибирует окислительный стресс клетки, предотвращает перекисное окисление липидов, повреждения ДНК, разрушение клеточных мембран и гибель клетки [5-7].

С-фикоцианин является не единственным продуктом, извлекаемым из клеточной массы, используются каротиноиды, биополимеры и низкомолекулярные продукты клеток. При сушке получаемой биомассы С-ФЦ частично денатурирует, но сине-зеленая окраска и биологическая активность высушенных препаратов сохраняются годами [8].

Создание методов извлечения С-фикоциа-нина связано с исследованиями, выполненными в начале XX века Т. Сведбергом [9]. ФБП как окрашенные протеины в развитии этого направления оказались чрезвычайно удобны.

Цель работы - научный поиск и исследование источников натурального пищевого красителя синего цвета, а также возможность его использования в пищевом производстве.

Задачи исследования включали следующие этапы:

- исследование процесса выделения С-фикоцианина из сине-зеленой водоросли спирулины платенсис методом водной экстракции;

- идентификацию ФБП и хлорофилла а в экстрактах спирулины спектрофотометриче-ским методом;

- сравнительный анализ влияния фракционирования на степень очистки раствора фикоцианина;

- возможность применения водного экстракта С-фикоцианина в качестве натурального пищевого красителя в производстве шоколада;

- исследование органолептических и гигиенических показателей готового продукта.

Материалы и методы

Объекты исследования: сухой порошок спирулины (XI'AN FRANKHERB BIOTECH CO., LTD, Китай), водный экстракт спирулины, шоколад с добавлением экстракта фикоцианина.

Экстракцию С-фикоцианина проводили при температуре 45 °С в течение 1 ч, соотношение массы сырья к экстрагенту составляло 1:20. В качестве экстрагента использовали дистиллированную воду.

Массовую концентрацию С-фикоцианина и отдельных ФБП в экстрактах определяли по спектрам поглощения пигментов. Спектрофотомет-рические исследования полученных пигментных комплексов проводили при длинах волн от 200 до 700 нм. Измерение оптической плотности экстрактов проводили на спектрофотометре Shimadzu UV-1800 (Япония) при длине волны: фикоэритрин - 565 нм, С-фикоцианин - 620 нм и аллофикоцианин - 650 нм, хлорофилл a - 664 нм и 750 нм, соответственно до и после добавления 80%-ного раствора сульфата аммония.

Концентрацию фикобилипротеинов в экстракте определяли по формуле, вытекающей из закона Бугера-Ламберта-Бера [10]. Массовую концентрацию хлорофилла а в образцах экстракта спирулины платенсис определяли спектрофотометрическим методом по стандартной методике [11]. Экстракт перед повторным измерением подкисляют 0,01 см3 соляной кислоты на 10 см3 объема экстракта.

Для связи с редакцией: post@vestnik-vsuet.ru

171

ю

II

О 2 та

S3" Я

% а

а а

О та

M

El g

о, О

« Й й я

En О В-' <")

1« Р

ÏÏ

о к» ЧО

On

Н-о о о

сл tû

С го

^ s

I н

О (Я

ГО о

(Я

fa О

m Е S а " Я

СТО Я !"

Р' S

0

1 « § й го го о я 3 Я О ГО Я;

5 а

та я

^ U

о о

ça H

Я

р. о

го о

» Й

¡2 я

со я

s

со Я Я го

я о

о я

р h н

& я я

5 я 2

"ой

^ й О

р со я

2- я о

6 s » В-' 0

& M

сл м

о w

Р

s

О ^

- ^ д

*IJ5 g

р и

о

с

►о с

1

<

со о о

3

о

о

ЕЗ-

о

сг

^

а 5'

со &

в

ЕЗ Р

й СО

ЕЗ

«

S

со о H W

со «

я Е

St

S

Я о и s л

со о

Й со Я Я

Е

SC о О о

н g

H

t:

сГ ю

я* й Î=I а

S g Й р р s

Алло фикоцианин Allophycocyanin Фикоэритрин Phycoerythrin С-фикоцианин C-phycocyanin Вещество Substance

ON L/i О L/i os L/i OS о Длина волны, нм Wavelength, nm

О О о Значение оптической

о VO о О L/i О плотности Optical density value

15,52 ±0,07 13,34 ±0,01 20,55 ±0,03 Массовая концентрация, мг/л Mass concentration, mg /1

Алло фикоцианин Allophycocyanin Фикоэритрин Phycoerythrin С-фикоцианин C-phycocyanin Вещество Substance

ON О L/i os os о Длина волны, нм Wavelength, шп

о о L/i os О о os о о о os Значение оптической плотности Optical density value

9,66 ± 0,01 7,48 ± 0,02 8,36 ± 0,02 Массовая концентрация, мг/л Mass concentration, mg /1

g (« и

О о ^

g ^

Л 3 О

Я та я

Ори

о Я

H 2

5 Б

S ft

— " о

W и

« Р

ft О

*

s

та р

H

о

СО л M

о я

° s

* р

я я w Е

Й ft ft |

Л 2 S

1 Р S â

й О Р о

H

ю S

н о

os g S § Й

LtJ

H ^

л я S p о

Й s ft

я s ft

s g w

2 я я та

ft О ft g

У я

Lti H

V о О

о4- а

P X

о р

а та

p Р

О о

s

о я

я ^

Я и р fa

•3

о я

ы

и §

ft

* У S а

p g ^ я О 3 я \Р s g а я

И Я g

я я w и о о Я X

^ Я ^ «

s о О Р

о ч ь 2

я о ^ s

ft 3 я о

ft О I ft

я Б Я

g M

Я та

О я

аз 2

Ё 2

Р щ

СП g

ft ^ й « е я

Яс ?

W «

о 5

<*> -ё

я 5

и а я р

о и о

я л ft

о _ Я Р ft ~ ' и о

о

о *

я о

3 -е

я

о

о та м Р

S v: о g ы та Р

й о\

я о о о

я Е

я

S я

ft о о

3 Я яс

H Я

p та v:

я и я я бг1 Й и я

я о

о и

о о

и Я

ft о я

tl и л

о W ft о

р я

S и о

я я яс

It

a* ft

в H

сл ft СП О

сг

I*

<~> у

X я ►е-о

я ^

Я S

о я

s- ^

rt о

s

BL В

CTQ СГ 02 ft

13. ft

S g

та о

S 3 ft о

Ш >6 к

о о

о с

Я

02 • «

я , « н 02 ft

У, «

о

Я й

U1 О TI

с\ Я я S

о Я

Я го

ft Сг*

w fi

ft ft

Й й

ft ft

g g

Я; S

i. »

Экспериментальным путем был проведен подбор различных концентраций экстракта С-фикоцианина для производства шоколада, основанный на органолептической оценке консистенции, цвета, запаха и вкуса. Для этого были исследованы следующие концентрации экстракта, %: 5, 10, 13, 15. Добавку в жидком виде вносили в количестве 5-10-13-15 мл на 100 г продукта на стадии разведения шоколадной массы перед коншированием и темперированием. При этом шоколадная масса приобретала голубой оттенок.

В результате проведенного исследования было определено, что оптимальные

органолептические характеристики достигаются при использовании концентрации пигмента в количестве 13% на 100 г продукта. При повышении концентрации отмечается присутствие запаха и привкуса водорослей. На консистенцию шоколадной массы данная добавка влияния не оказывает. После охлаждения цвет готового шоколада остается неизменным.

Органолептическую оценку голубого шоколада проводили по следующим показателям: внешний вид, консистенция, структура, запах и вкус (таблица 4).

Органолептическая оценка Organoleptic evaluation

Таблица 4.

Table 4.

Показатель Indicator Характеристика шоколада в соответствии с ГОСТ 31721-2012. Шоколад. ОТУ Chocolate characterization in accordance with GOST 31721-2012. Chocolate. OTU Характеристика шоколада с использованием экстракта фикоцианина Characterization of chocolate using phycocyanin extract

Вкус и запах Taste and smell Свойственные для конкретного типа шоколада, без постороннего привкуса и запаха Typical for a particular type of chocolate, without foreign taste and smell Свойственные для конкретного типа шоколада, не имеет привкуса и запаха водорослей Typical for a particular type of chocolate, has no taste and smell of algae

Внешний вид Appearance Лицевая поверхность ровная или волнистая, с рисунком или без него, блестящая The front surface is smooth or wavy, with or without pattern, shiny Лицевая поверхность ровная, но недостаточно блестящая, без поседения The front surface is smooth, but not shiny enough, without graying

Форма Form Соответствующая рецептуре, используемому оборудованию, без деформации для всех видов шоколада, кроме весового Corresponding to the formulation used equipment, without deformation for all types of chocolate, except weight

Консистенция Consistency Твердая | Solid

Структура Structure Однородная | Homogeneous

Огранолептическая оценка показала, что шоколад с добавлением экстракта С-фикоцианина имеет вкус и запах, свойственные шоколаду. Шоколад имеет блестящую ровную лицевую поверхность, без поседения, твердую структуру и однородную консистенцию, не имеет запаха и привкуса водорослей (рисунок 2).

Из результатов таблицы 4 видно, что шоколад с использованием экстракта С-фикоцианина соответствует ГОСТ 31721-2012. «Шоколад. Общие технические условия» по всем органо-лептическим показателям.

Согласно ТР ТС 021\2011 «О безопасности пищевой продукции» шоколад нормируется по следующим токсичным элементам: свинец, мышьяк, кадмий, ртуть. Результаты проведенных исследований по количеству токсичных

элементов в шоколаде с добавлением экстракта С-фикоцианина представлены в таблице 5.

Вкус Taste

Форма Form

Структура Structure

Аромат Aroma

Консистенц ия

Consistency

Рисунок 2. Профилограмма органолептических показателей готового продукта

Figure 2. Profilogram of organoleptic characteristics of the finished product

6

Таблица 5.

Гигиенические показатели шоколада с использованием экстракта фикоцианина

Table 5.

Hygienic parameters of chocolate using extract of phycocyanin

Показатель Indicator Допустимые уровни, мг/кг Permissible levels, mg / kg, Фактическое значение, мг/кг Actual value, mg / kg Погрешность измерений при P=0,95 Measurement error at P=0.95

Pb <1,0 0,040 ±0,014

As <1,0 0,031 ±0,012

Cd <0,5 <0,050 -

Hg <0,1 <0,005 -

По данным таблицы 5 можно сделать вывод о том, что шоколад с экстрактом С-фикоциа-нина полностью соответствует гигиеническим требованиям безопасности ТР ТС 021\2011 «О безопасности пищевой продукции» и, следовательно, является безопасным.

Заключение

Изучен процесс выделения синего пигмента С-фикоцианина из сине-зеленой водоросли спирулины методом экстракции. Установлено, что С-фикоцианин экстрагируется водой при температуре 45 °С в течение 1 ч. Для повышения выхода С-фикоцианина в водный экстракт предварительно проводится дезинтеграция биомассы спирулины.

Идентификация ФБП и хлорофилла а в водном экстракте спирулины показала, что преобладающим является С-фикоцианин в смеси ФБП. Установлено, что полученный водный экстракт спирулины содержит хлорофилл a, который влияет на цвет экстракта С-фикоцианина.

ЛИТЕРАТУРА

1 Каленик Т.К., Кадникова И.А., Добрынина Е.В., Захаренко А.М. и др. Получение биологически активных веществ из красной водоросли анфельции тобучинской // Хранение и переработка сельхозсырья. 2017. № 10. С. 19-22.

2 Тамбиев А.Х. Биоэлементология и ее связь с другими дисциплинами // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2015. № 12. С. 23-37.

3 Бобылева А.В. Перспективы использования нетрадиционного растительного сырья в производстве мучных кондитерских изделий функционального назначения // Евразийское научное объединение. 2018. № 12. С. 63-67.

4 Патент № 2320195, RU, A23J3/20. Способ получения белкового препарата из цианобактерий I Мазо В.К., Гмошинский И.В.; Заявитель и патентообладатель Мазо В.К. № 2006118740I13; Заявл. 31.05.2006; Опубл. 27.03.2008, Бюл. №9.

5 Li B., Zhang X., Gao M., Chu X. Effects of CD59 on antitumoral activities of phycocyanin from Spirulina platensis // Biomed Pharmacother. 2005. V. 59. № 10. P. 551-560.

6 Romay C., Delgado R., Remirez D., González R. et al. Effect of phycocyanin extract on tumor necrosis factor - and nitrite levels in serium wice treated with endotoxim // Arzneim. - Forsch. 2001. № 9. P. 733-736.

Исследовали влияние процесса фракционирования на степень очистки раствора С-фикоцианина. Использование в технологии процесса осаждения 80%-ным раствором сульфата аммония позволяет получить чистый экстракт С-фикоцианина, исключая присутствие хлорофилла а.

Исследована возможность использования экстракта пигментов из спирулины в кондитерском производстве. Установлена концентрация экстракта С-фикоцианина для применения в технологии шоколада. Органолептическая оценка подтверждает, что использование добавки в концентрации 13% на 100 г шоколадной массы в качестве натурального красителя синего цвета придает ей оригинальный голубой цвет. Шоколад с добавлением экстракта С-фикоцианина соответствует требованиям ТР ТС 021\2011 «О безопасности пищевой продукции».

7 Belay A., Amer J. The potential Application of Spirulina (Arthrospira) as nutritional and therapeutic supplement in health management // Nutraceutical Assoc. 2002. № 2. P. 27-49.

8 Morais M.G., Vaz M.G., Morais E.G., Costa J.A. Biologically Active Metabolites Synthesized by Microalgae // Biomed. Res. Int. 2014. № 5. P. 1-16.

9 Svedberg T., Lewis N.B. The molecular weights of phycoerythrin and of phycocyan // J. Am. Chem. Soc. 1928. № 2. P. 525-536.

10 Бриттон Г. Биохимия природных пигментов: пер. с англ. Москва: Мир, 1986. 442 с.

11 РД 52.24.784-2013. Массовая концентрация хлорофилла «a» Методика измерений спектрофо-тометрическим методом с экстракцией этанолом. Ростов-на-Дону: ФГБУ ГХИ, 2013. 6 с.

12 Ефимов А.А. Технология получения фикоцианина из термофильных сине-зеленых водорослей как пищевой добавки // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. 2007. № 5. С. 43-45.

13 Береговая Н.М., Геворгиз Р.Г., Нехорошев М.В. Получение фикобилипротеинов методом горячей экстракции из биомассы спирулины. Керчь: Керченский филиал («ЮгНИРО») федерального государственного бюджетного научного учреждения «Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства», 2013. 195 с.

14 ГОСТ 31721-2012. Шоколад. Общие технические условия. М.: Стандартинформ, 2013. 4 с.

Для связи с редакцией: post@vestnik-vsuet.ru

175

REFERENCES

1 Kalenik T.K., Kadnikova I.A., Dobrynin E.V., Zakharenko A.M. et al. Obtaining biologically active substances from the red algae of the tobuchinsky anfelia. Storage and processing of agricultural raw materials. 2017. no. 10. pp. 19-22. (in Russian).

2 Tambiev A. Kh. Bioelementology and its connection with other disciplines. Questions of biological, medical and pharmaceutical chemistry. 2015. no. 12. pp. 23-37. (in Russian).

3 Bobyleva A.V. Prospects for the use of non-traditional plant materials in the production of flour confectionery products for functional purposes. Eurasian Scientific Association. 2018. no. 12. pp. 63-67. (in Russian)

4 Maso V.K., Gmoshinsky I.V. A method of obtaining a protein preparation from cyanobacteria. Patent RF, no. 2320195, 2008.

5 Li B., Zhang X., Gao M., Chu X. Effects of CD59 on antitumoral activities of phycocyanin from Spirulina platensis. Biomed Pharmacother. 2005. vol. 59. no. 10. pp. 551-560.

6 Romay C., Delgado R., Remirez D., González R. et al. Effect of phycocyanin extract on tumor necrosis factor - and nitrite levels in serium wice treated with endotoxim. Arzneim. - Forsch. 2001. no. 9. pp. 733-736.

7 Belay A., Amer J. The potential Application of Spirulina (Arthrospira) as nutritional and therapeutic

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ Татьяна К. Каленик д.б.н., профессор, Департамент пищевых наук и технологий, Дальневосточный федеральный университет, поселок Аякс, 10, г. Владивосток, о. Русский, 690922, Россия, kaleniktk@rambler.ru

Елена В. Добрынина к.т.н., доцент, Департамент пищевых наук и технологий, Дальневосточный федеральный университет, поселок Аякс, 10, г. Владивосток, о. Русский, 690922, Россия, elena_victory@list.ru

Виолетта М. Остапенко магистр, Департамент пищевых наук и технологий, Дальневосточный федеральный университет, поселок Аякс, 10, г. Владивосток, о. Русский, 690922, Россия, vetaostapenko_97@mail.ru

Ясуёши Тори доцент, Департамент сельскохозяйственной биологии, Колледж биоресурсных наук, Нихонский университет, 1866 Камейно, Фудзисава, Канагава 252-0880, Япония, torii.yasuyo shi@nihon-u.ac .jp

Юро Хироми профессор, Департамент сельскохозяйственной биологии, Колледж биоресурсных наук, Нихонский университет, 1866 Камейно, Фудзисава, Канагава 252-0880, Япония, hiromi.juro@nihon-u.ac.jp

КРИТЕРИЙ АВТОРСТВА

Татьяна К. Каленик, Елена В. Добрынина методика проведения эксперимента

Виолетта М. Остапенко написала рукопись, корректировала её до подачи в редакцию и несёт ответственность за плагиат Ясуёши Тори, Юро Хироми консультация в ходе исследования

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. ПОСТУПИЛА 10.03.2019 ПРИНЯТА В ПЕЧАТЬ 14.05.2019

supplement in health management. Nutraceutical Assoc. 2002. no. 2. pp. 27-49.

8 Morais M.G., Vaz M.G., Morais E.G., Costa J.A. Biologically Active Metabolites Synthesized by Microalgae. Biomed. Res. Int. 2014. no. 5. pp. 1-16.

9 Svedberg T., Lewis N.B. The molecular weights of phycoerythrin and of phycocyan. J. Am. Chem. Soc. 1928. no. 2. pp. 525-536.

10 Britton G. Biochemistry of natural pigments. Moscow, Mir, 1986, 442 p. (in Russian).

11 Guiding Document 52.24.784-2013. Mass concentration of chlorophyll "a" Measurement procedure by spectrophotometric method with ethanol extraction. Rostov-on-Don, FSBI GHI, 2013. 6 p. (in Russian).

12 Efimov A.A. The technology for the production of phycocyanin from thermophilic blue-green algae as a food additive. News of higher educational institutions. Food technology. 2007. no. 5. pp. 43-45. (in Russian).

13 Beregovaya N.M., Gevorgiz R.G., Nekhoroshev M.V. Preparation of phycobiliproteins by hot extraction from spirulina biomass. Kerch, Kerch branch ("YugNIRO") of the Federal State Budget Scientific Institution "Azov Research Institute of Fisheries", 2013. 195 p. (in Russian)

14 State Standard 31721-2012. Chocolate. General specifications. Moscow, Standartinform Publ., 2013. 4 p. (in Russian).

INFORMATION ABOUT AUTHORS Tatyana K Kalenik Dr. Sci. (Biol.), professor, Department of Food Science and Technology, Far Eastern Federal University, Ajax Bay, 10 Vladivostok, 690922, Russia, kaleniktk@rambler.ru

Elena V. Dobrynina Cand. Sci. (Engin.), associate professor, Department of Food Science and Technology, Far Eastern Federal University, Ajax Bay, 10 Vladivostok, 690922, Russia, elena_victory@list.ru

Violetta M. Ostapenko master student, Department of Food Science and Technology, Far Eastern Federal University, Ajax Bay, 10 Vladivostok, 690922, Russia, vetaostapenko_97@mail.ru

Yasuyoshi Torii associate professor, Department of Agricultural Bioscience, College of Bioresource Sciences, Nihon University, 1866 Kameino, Fujisawa-shi, Kanagawa 252-0880, Japan, torii.yasuyoshi@nihon-u.ac.jp

Juro Hiromi professor, Department of Agricultural Bioscience, College of Bioresource Sciences, Nihon University, 1866 Kameino, Fujisawa-shi, Kanagawa 252-0880, Japan, hi-romi.juro @nihon-u. ac .jp

CONTRIBUTION Tatyana K. Kalenik, Elena V. Dobrynina scheme of the experiment

Violetta M. Ostapenko wrote the manuscript, correct it before filing in editing and is responsible for plagiarism Yasuyoshi Torii, Juro Hiromi consultation during the study

CONFLICT OF INTEREST The authors declare no conflict of interest. RECEIVED 10.3.2019 ACCEPTED 5.14.2019