CC BY
24
Актуальт проблемы сучасноТ медицины
УДК 615.273.55:547.458.87]:615.099.07:616-07-092.9
ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ НОВОГО ПРЕПАРАТА АНТИТР0МБ03Н0Г0 ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ГЕМИЦЕЛЛЮЛОЗ
Владимирская Т.Э., Веялкина H.H., Адамович A.B., Криворот С.Г., Торгашев В.И. ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования», г.Минск НИИ физико-химических проблем БГУ, г.Минск
В статье приведены результаты токсикологической оценки нового препарата антитромбозного действия на основе гемицеллюлоз на организм белых крыс в ходе острого опыта. Среднесмерте-льная доза для данного вида животных при однократном внутрижелудочном и внутривенном введении не определена и составляет более 5600 и 800 мг/кг соответственно. Показано, что средне-смертельная доза исследуемого препарата при однократном подкожном введении белым крысам составляет 744,05 ± 105,85мг/кг.
Ключевые слова: препарат антитромбозного действия, острая токсичность.
В настоящее время сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) являются ведущей причиной инвалидности и смертности населения всех экономически развитых стран мира. Наиболее частым проявлением ССЗ является развитие инфаркта миокарда и инсульта мозга, а также гангрены нижних конечностей. В основе данных заболеваний лежит развитие тромбоза в коронарных, мозговых и периферических артериях [1].
Основным препаратом, применяемым в настоящее время для предотвращения тромбооб-разования, является антикоагулянт прямого действия гепарин. В связи с тем, что гепарин добывается из лёгких крупного рогатого скота и мукозы свиней, препарат является потенциальным переносчиком вируса "коровьего бешенства" и иммунодефицита и должен проходить обязательный контроль на соответствующие вирусы, контроль жесткий, дорогостоящий и дефицитный.
Альтернативу гепарину за рубежом представляет пентозанполисульфат (вР-54) - прямой антикоагулянт последнего поколения. Положительной отличительной особенностью этого препарата является то, что он изготовляется из древесины бука и не требует тестирования на наличие вирусов "коровьего бешенства" и СПИДа [2].
НИИ физико-химических проблем Белорусского государственного Университета был разработан препарат антитромбозного действия на основе сульфатированных полисахаридов (гемицеллюлоз) - пентозанполисульфат натрия. Важным этапом разработки и внедрения в клиническую практику нового отечественного антикоагулянта, являются доклинические исследования данного препарата.
Целью настоящей работы явилось изучение в эксперименте острой токсичности антикоагулянта пентозанполисульфата натрия в двух лекарственных формах — порошок и 10% раствор для инфузий на белых крысах.
Материалы и методы исследования
Исследования выполнены в стационарном виварии БелМАПО белых крысах обоего пола линии Вистар массой 223-258 г. Животные содер-
жались в условиях стационарного вивария на полноценном стандартном пищевом рационе согласно установленным нормам. Для питья мелких лабораторных животных использовались автопоилки. Кормление производилось в фиксированное время. В аналогичных условиях содержались животные контрольной группы. До начала эксперимента животные находились под карантинным наблюдением в течение двух недель. В течение 24 часов накануне введения препарата животные были лишены корма.
Для определения значений острой токсичности исследуемого препарата были использованы следующие лабораторные тесты и критерии оценки: смертность животных, внешний вид, поведение, состояние шерстного покрова и видимых слизистых, симптомы интоксикации, потребление пищи и воды, масса тела, массы отдельных внутренних органов, изучение гистологической структуры органов с выраженными макроскопическими изменениями.
Все исследования проводились в соответствии с требованиями по доклиническому изучению безопасности лекарственных средств [3, 4].
Внутрижелудочно порошковую форму препарата вводили однократно крысам в объеме 1 мл. Для интрагастрального введения раствора экспериментальным животным использовали металлические зонды равного диаметра. Для внутривенного и подкожного введения использовали инфузионную форму препарата, 10% раствор пентозанполисульфата натрия. Внутривенно препарат вводили однократно крысам в объеме 2мл в хвостовую вену. Подкожно препарат вводили однократно крысам в объеме 6-1 мл при помощи инъекции в межлопаточную область. Дозы для введения рассчитывались на основании последних данных массы тела животных.
По истечении срока наблюдения животных (опытных и контрольных) забивали путем мгновенной декапитации с соблюдением принципов биоэтики (в соответствии со стандартами СЬР) на фоне тиопенталового наркоза [5]. После некропсии проводили макроскопическое исследование внутренних органов животных.
Том 9, Выпуск 4
29
В1СНИК Украгнсъког' медичног' стоматологгчног академгг
Результаты и их обсуждение
При однократном внутрижелудочном введении исследуемого препарата белым крысам в дозе 5600 мг/кг гибели животных течение срока наблюдения (14 суток) не происходило.
Через сутки после введения препарата отмечена диарея и повышенное потребление воды. В целом животные имели нормальный внешний вид, охотно поедали корм.
Внешний вид, поведение, состояние шерстного покрова, кожи и видимых слизистых оболочек подопытных животных в течение всего периода наблюдения (14 суток) не были изменены.
Макроскопическая картина внутренних органов животных в опытной группе не отличалась от таковой у животных контрольной группы. Патологических изменений не выявлено.
Таким образом, при внутрижелудочном введении исследуемого препарата в дозе 5600 мг/кг смертности животных не наблюдалось, значение Ю50 не установлено, данный параметр превышает значение вышеуказанной дозы.
При внутривенном введении в дозе 800 мг/кг отмечена гибель одного животного через сутки после введения препарата.
Остальные животные мало отличались от контрольной группы (снижена двигательная активность), внешний вид и состояние шерстного покрова, кожи и видимых слизистых оболочек подопытных животных в течение всего периода наблюдения не были изменены.
Отмечено снижение массы тела животных опытной группы по сравнению с контрольной.
Таким образом, при внутривенном введении исследуемого препарата в дозе 800 мг/кг наблюдалась единичная смертность животных, значение Ю50 не установлено, данный параметр превышает значение вышеуказанной дозы.
При подкожном введении препарата белым крысам в дозе 2400 мг/кг отмечена гибель всех (4) животных. Во время вскрытия павших животных, на месте инъекции отмечена обширная гематома.
При подкожном введении препарата в дозе 1200 мг/кг группе животных (п=10), отмечена гибель 8 животных. При вскрытии наблюдались обширные подкожные кровоизлияния на месте инъекции. Желудок и верхние отделы кишечника наполнены жидким содержимым с примесью крови, содержание крови в нижних отделах желудочно-кишечного тракта отмечалось в меньшей степени. Остальные внутренние органы без видимых изменений.
У всех животных этой группы наблюдалось наличие крови в кале, также отмечено угнетение двигательной активности и пищевого поведения животных.
При подкожном введении препарата в дозе 800 мг/кг группе животных (п=10), отмечена гибель 7 животных. Смерть животных фиксировалась на 1-3 сутки эксперимента. Начиная со вторых суток, у всех экспериментальных живот-
ных наблюдалось повышенное потребление воды и наличие крови в кале, на месте инъекции наблюдался значительный отек.
При вскрытии павших животных отмечена обширная гематома в месте инъекции, кишечник заполнен кровью. На макроскопическом уровне наблюдались полиочаговые кровоизлияния в слизистой желудка и тонкой кишки крыс.
При микроскопическом исследовании отмечались распространенные поверхностные эрозии слизистой оболочки желудка с некрозом, отторжением эпителия.
При подкожном введении препарата в дозе 400 мг/кг группе животных (п=10) отмечена гибель 2 животных на вторые сутки после введения исследуемого препарата.
У выживших животных в течение первой недели наблюдения отмечено снижение двигательной активности, и пищевого поведения. Отечность в области холки сохранялась на протяжении всего срока наблюдения.
При макроскопическом исследовании желудка и кишечника крыс - полиочаговые кровоизлияния и изъязвления в слизистой желудка и тонкой кишки. На микроскопическом уровне - распространенные поверхностные эрозии слизистой оболочки желудка с некрозом, отторжением эпителия. В отдельных препаратах наблюдались язвы - дефект распространяется до мышечной пластинки слизистой оболочки.
Данные расчета показателя ЛД50 представлены в таблице:
Таблица
Расчетные показатели среднесмертельной дозы препарата «Сульфагем» для крыс при
подкожном введении
ЛД50 744,05
Стандартная ошибка ЛД50 105,85
Нижняя граница ЛД50 (Ш50 1-С1_) 527,57
Верхняя граница ЛД50 (иЭ50иС1_) 960,54
Уровень значимости 0,05
Полученные нами результаты исследования острой токсичности разрабатываемого препарата антитромбозного действия, согласуются с литературными данными об острой токсичности аналогичных препаратов [6], которые также указывают на низкую токсичность пентозанполи-сульфата натрия при внутрижелудочном и внутривенном введении и отмечают смертность животных при подкожном введении.
Выводы
Однократное внутрижелудочное введение исследуемого препарата антитромбозного действия белым крысам в максимально допустимом объеме (доза 5600 мг/кг) не вызывало гибели животных, следовательно Ю50 данного препарата при пероральном введении для крыс >5600мг/кг.
Актуальт проблемы сучасно! медицини
При внутривенном введении исследуемого кровообращении (экспериментальное исследова-
препарата белым крысам в дозировке 800мг/кг ние) / с в- Оболенский, В В. Козлов // Вестн.
наблюдалась единичная гибель животного, еле- ни^П-Т2^07Р--СМКоИ1 -с Тм Тог ИМ.
довательно LD50 данного препарата при внутри- 3. Методические' указ"ания
"Постановка исследова-
венном введении для крыс >8°° мг/кг. в объеме первичной токсикологической оцен-
Подкожное введение исследуемого препарата Ки веществ". - N 48-9405 от 30.06.94. - МЗ РБ,
белым крысам в дозах 2400, 1200, 800 и 400 Мн., 1996. - С. 8-13.
мг/кг вызывало гибель животных, расчетный по- 4. Руководящий нормативный документ РД-126-91.
казатель LD50 данного препарата при подкожном «Правила доклинической оценки безопасности
введении для крыс составил 744,05 ± 105,85 фармакологических средств (GLP)» - М., 1992. -
мг^кг 5. Обезболивание животных в эксперименте : Мето-
Литература дические рекомендации. - М., 1985. - 54 с.
1. Tendera M. Epidemiology, treatment, and guidelines 6. AbdOc^cm^emcrty 0f 0Elmiron irl
for the treatment of heart failure in Europe / M. Ten- F344/N rats andt B603^1 ™ceл^™^ 2 ye,ars of
dera // Eur Heart J - 2005 - V7 - P 5 10 gavage administration // K.M. Abdo, J.D. Johnson,
2. Оболенский C.B. ' Пентозанполисульфат (SP-54) p y^™ ArCh. Toxicology. - 2003. - V 77, №12. -как альтернатива гепарина при искусственном . .
Реферат
ДОСЛ1ДЖЕННЯ ГОСТРОТ ТОКСИЧНОСТ1 НОВОГО ПРЕПАРАТУ АНТИТРОМБОЗНОТ Д11 НА OCHOBI ГЕМ1ЦЕ-ЛЮЛОЗ
Владимирська Т.Э., Веялюна Н.М., Адамович А.В., Криворот С.Г., Торгашов B.I. Ключов1 слова: препаратантитромбоноТдп, гостра токсичнють.
В стэтл наведено результати токсиколопчноТ оцшки нового препарату антитромбозноТ дй на основ! гем1целюлоз на орган1зм бтих щур1в в xofli гострого дослщу. Середньосмертельна доза для даного виду тварин при одноразовому внутр1шньошлунковому та внутр1венному введенн1 не визначена i складае ¿¡льш як 5600 и 800 мг/кг вщповщно. Показано, що середньосмертельна доза досл1джуваного препарату при одноразовому пщшюрному введенн1 складае 744,05 ± 105,85мг/кг.
Summary
INVESTIGATION OF ACUTE TOXICITY OF NEW MEDICINE BASED ON HEMICELLULOSE WHICH HAS ANTITHROMBOTIC EFFECT
Vladimirskaya T.E., Veyalkina N.N., Adamovich A.V., Krivorot S.G., Torgashev V.I. Key words: substance, antithrombotic effect, acute toxicity.
The paper presents the results of toxicological estimation of a new drug based on hemicellulose which has antithrombotic properties. The estimation was carried out on white rats during the acute experiment. Mean lethal dose of tested drug for the animals has not been determined by single intragastric and intravenous introduction and most likely is above 5 600 and 800 mg/kg, accordingly. It has been shown that 744,05 ± 105,85 mg/kg is the mean lethal dose of investigated substance by subcutaneous introduction for the white rats.
Tom 9, Выпуск 4
31
