CC BY
55
УДК 615.27:612.273.2 Оригинальная статья
ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ И АНТИГИПОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ МЕТАЛЛОКОМПЛЕКСОВ ЖЕЛЕЗА
С. А. Шахмарданова — ФГБОУ ВПО «Московский государственный гуманитарно-экономический университет», доцент кафедры педагогики и психологии, кандидат биологических наук.
THE STUDY OF ACUTE TOXICITY AND ANTIHYPOXIC ACTIVITY OF NEW METAL COMPLEXES OF IRON
S. A. Shakhmardanova — Moscow State Humanitarian University of Economics, Department of Pedagogy and Psychology, Assistant Professor, Candidate of Biological Science.
Дата поступления — 23.04.2015 г. Дата принятия в печать — 4.06.2015 г.
Шахмарданова С. А. Исследование острой токсичности и антигипоксической активности новых металлоком-плексов железа. Саратовский научно-медицинский журнал 2015; 11 (2): 146-150.
Цель: определить острую токсичность новых металлокомплексов железа производных винилимидазола и исследовать их антигипоксическое действие в сравнении с Ацизолом и известными антигипоксантами: это-мерзолом и гипоксеном. Материал и методы. Антигипоксическая активность изучена в опытах на белых нелинейных мышах-самцах на четырех моделях острой гипоксии (гипобарическая, гипоксия с гиперкапнией, ге-мическая, гистотоксическая). Показатели острой токсичности (ЛД16 ЛД50 ЛД84) вычисляли графически по методу Миллера и Тейнтера. Изменения окислительного обмена у мышей' под влиянием наиболее активного соединения оценивали по величинам потребления кислорода и ректальной температуры. Результаты. Исследованные металлокомплексы железа относятся к мало- и умеренно токсичным. Соединение под шифром Тетравим по степени выраженности антигипоксического действия (увеличение продолжительности жизни подопытных мышей по сравнению с контрольными группами на 20-127%) в диапазоне исследуемых доз (5-250 мг/кг, в/б) превосходит другие производные винилимидазола и известные антигипоксанты: этомерзол (25-100 мг/кг, в/б) и гипоксен (50-150 мг/кг, в/б). Заключение. Полученные данные по фармакологической активности Тетравима требуют дальнейшего выяснения механизма антигипоксического действия и проведения клинических исследований с целью внедрения его на фармакологический рынок в качестве перспективного антигипоксанта.
Ключевые слова: кислород, гипоксия, антигипоксанты, железо.
Shakhmardanova SA. The study of acute toxicity and antihypoxic activity of new metal complexes of iron. Saratov Journal of Medical Scientific Research 2015; 11 (2): 146-150.
The Purpose: to determine the acute toxicity of new metal complexes of iron derived vinylimidazole and to reveal their antihypoxic activity in comparison with Acyzol and other known antihypoxic etomersol and hypoxen. Material and methods. Antihypoxic activity was studied in experiments on nonlinear white mice-males 4 models of acute hypoxia (hypobaric, hypoxia with hypercapnia, hemic, histotoxic). Rates of acute toxicity (LD16, LD LD) were calculated graphically by the method of Miller and Tainter. Changes in oxidative metabolism in mice under the influence of the most active compounds were assessed by the values of oxygen consumption and rectal temperature. Results. The studied metal complexes of iron are small and moderately toxic. The connection under the code of Tetravim on the severity of antihypoxic effect (the increase in life expectancy male mice compared to control groups on 20-127%) in the range of doses studied (5-250 mg/kg, i/p) is superior to other derivatives of vinylimidazole known and antihypoxic: etomersol (25-100 mg/kg, i/p) and hypoxen (50-150 mg/kg, i/p). Conclusion. The obtained data on the pharmacological activity of Tetravim require further clarification of the mechanism of antihypoxic effect and clinical trials with the aim of putting it on the drugs market as a promising antihypoxic agent.
Key words: oxygen, hypoxia, antihypoxic, iron.
КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
Введение. Поиск новых химических веществ с широким диапазоном эффективных антигипоксиче-ских доз и отсутствием нежелательного побочного
Ответственный автор — Шахмарданова Светлана Анатольевна
Тел. +79295320250
E-mail: lebedeva502@yandex.ru
действия является актуальной задачей современной экспериментальной и клинической фармакологии.
Перспективными в этом плане являются синтезированные в Иркутском институте химии СО РАН новые металлокомплексные производные винилимидазола, на основе которых разработано лекарственное средство Ацизол (бис (1-винилимидазол) цинкдиаце-
тат). Ацизол является самым мощным в мире антидотом при острых отравлениях смертельными дозами монооксида углерода и другими продуктами горения, а также профилактическим и лечебным средством при поражениях нейротоксическими веществами [1, 2]. Являясь высокоэффективным антигипоксантом, препарат способен защитить организм при низком парциальном давлении кислорода и недостаточной оксигенации гемоглобина [3].
Цель: определение острой токсичности новых металлокомплексов железа производных винилими-дазола под шифрами Тетравим и ВИМ и сравнительное исследование их антигипоксического действия с Ацизолом и известными антигипоксантами: этомер-золом и гипоксеном.
Материал и методы. Синтез производных вини-лимидазола описан ранее [4]. Структурные формулы соединений Тетравим [ (тетра (1-винилимидазол) железа трихлод] и ВИМ [бис (1-винилимидазол) железа диацетат] представлены на рис. 1 и 2.
В качестве препаратов сравнения были взяты химически чистые субстанции Ацизола и этомерзола, а также лекарственная форма гипоксена (ЗАО «Корпорация Олифен», Россия).
Исследования проведены на 1950 белых нелинейных мышах-самцах массой 19-23 г с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директиве Европейского сообщества (86/609/ЕС) и в Правилах лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г.). В каждой серии опыта были контрольная и подопытная группы, в которые подбирали животных одинаковой массы.
Показатели острой токсичности (ЛД16 ЛД50 ЛД84) изучали при внутрибрюшинном введении водных растворов в возрастающих дозах по методу Миллера и Тейнтера [5] и оценивали согласно классификации химических веществ [6].
Антигипоксическую активность исследовали в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве анти-гипоксических средств» [7]. Острую гипобарическую гипоксию (ОГБГ) моделировали путем «поднятия» животных на «высоту» 10000 м над уровнем моря со скоростью 50 м/с. Острую гипоксию с гиперкапнией (ОГсГк) вызывали помещением каждого животного в аптечный шланглас из прозрачного стекла с притертой стеклянной пробкой объемом 250 мл. Острую ге-мическую гипоксию (ОГеГ) моделировали введением мышам под кожу спины натрия нитрита в дозе 400 мг/кг, а острую гистотоксическую гипоксию (ОГтГ) — 0,2% раствора натрия нитропруссида в дозе 20 мг/ кг. На всех моделях регистрировали продолжительность жизни животных в минутах.
Для объяснения антигипоксического действия наиболее активного соединения оценивали изменения окислительного обмена мышей по величинам потребления кислорода и ректальной температуры с использованием разобщителя окислительного фос-форилирования 2,4-динитрофенола (DNP). Потребление кислорода исследовали в аппарате закрытого типа конструкции С. В. Миропольского в течение 9-12 минут после предварительной 10-минутной адаптации животных в респирационной камере.
Исследуемые металлокомплексные соединения вводили внутрибрюшинно (в/б) в диапазоне доз от 1 до 250 мг/кг за 1 час до начала действия избранного фактора. Срок введения и дозы были выбраны на основании известных данных о фармакологической
Рис. 1. Структурная формула Тетравима
Рис. 2. Структурная формула ВИМа
активности производных винилимидазола [4]. Лекарственные средства сравнения: этомерзол и гипоксен вводили таким же путем в дозах, которые, по данным литературы, проявляют эффект при той или иной патологии [8-10). Животным контрольных групп тем же путем и в тот же срок вводили равный объем дистиллированной воды.
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью компьютерной программы Microsoft Excel XP в среде Windows XP и Statistica 6,0. Для вариационного ряда выборки вычисляли среднюю арифметическую величину (М) и ее ошибку (m). Нормальность выборок проверяли по критерию Шапиро — Уилка. Так как выборки имели близкое к нормальному распределение, значимость различий между экспериментальными группами определяли с помощью одномерного дисперсионного анализа с дальнейшей обработкой методом множественных сравнений Стьюдента с поправкой Бонферрони.
Значение средней арифметической величины у мышей подопытной группы определяли по отношению к контролю, принятому за 100%, а ее ошибку выражали в процентах к средней арифметической величине. Поэтому при таких расчетах в соответствующих таблицах М±т представлены в процентах.
Результаты. Оценка острой токсичности показала, что ВИМ относится к умеренно токсичным, а Тетравим — к классу малотоксических соединений. ЛД16, ЛД50, ЛД84 для мышей-самцов при в/б введении составляют для ВИМа и Тетравима 705, 975, 1200 и 1300, 1625, 2100 мг/кг соответственно.
Результаты, характеризующие влияние производных винилимидазола и эталонных препаратов сравнения на выживаемость мышей в условиях острой гипоксии, представлены в табл. 1.
Введение Тетравима в дозах 5, 10, 25, 50, 100, 150, 200 и 250 мг/кг повышало выживаемость мышей в условиях ОГБГ на 54, 127, 82, 90, 87, 97, 107 и
Таблица 1
Влияние производных винилимидазола и препаратов сравнения на продолжительность жизни мышей при острой гипоксии по отношению к контролю, принятому за 100% (п=10) **
Шифр Доза, мг/кг, в/б
соединения 1 5 10 25 50 100 150 200 250
Острая гипобарическая гипоксия
Тетравим 114±9 154±5* 227±5* 182±5* 190±6* 187±9* 197±6* 207±6* 200±9*
ВИМ 115±8 158±6* 153±7* 144±6* 150±8* 193±5* 175±6* - -
Ацизол - 95±6 216±14* 276±18* 222±9* 162±12* 111 ±8 - -
Этомерзол - - - 98±10 108±11 157±9* - - -
Гипоксен - - - 110±5 244±9* 251±7* 267±8* - -
Острая гипоксия с гиперкапнией
Тетравим - - 110±5 107±5 197±7* 175±5* 150±5* 145±5* 142±4*
ВИМ - - 111 ±5 114±7 158±7* 157±4* 154±4* - -
Ацизол - - 103±5 138±9* 199±8* 174±5* 180±2* - -
Этомерзол - - - 96±8 96±9 132±3* - - -
Гипоксен - - - - 97±5 126±4* 129±4* - -
Острая гемическая гипоксия
Тетравим - - - 113±4 123±5* 137±8* 131±9* 126±3* 126±5*
ВИМ - - - 98±13 96±10 102±9 - - -
Ацизол - - - 114±12 161±11* 192±6* 166±10* - -
Этомерзол - - - 125±7* 143±4* 106±8 - -
Гипоксен - - - - - 112±2 121±2* - -
Острая гистотоксическая гипоксия
Тетравим 104±10 131 ±7* 135±7* 131±6* 136±8* 121±2* 129±6* 125±9* 120±5*
ВИМ - - - 97±9 99±7 92±4 - - -
Ацизол - - - 88±10 98±20 - - - -
Этомерзол - - - 114±4* 106±5 94±7 - - -
Гипоксен - - - 104±4 143±3* 189±6* 119±3* - -
Примечание: * — статистически М — значение средней арифметической средней арифметической величине.
достоверные различия (Р<0,05) по сравнению с контролем; ** — данные представлены как М±т, где по отношению к контролю, принятому за 100%, т — стандартная ошибка средней, выраженная в % к
100%, а ВИМа в дозах 5, 10, 25, 50, 100 и 150 мг/кг — на 58, 53, 44, 50, 93, 75% соответственно по сравнению с контрольными группами животных (Р<0,05).
В тех же условиях опыта Ацизол проявлял активность в дозах 10, 25, 50 и 100 мг/кг, статистически значимо увеличивая время жизни опытных мышей на 116, 176, 122 и 62% соответственно по сравнению с животными контрольных групп. Гипоксен в дозах 50, 100 и 150 мг/кг значимо увеличивал время жизни мышей на 144, 151 и 167% соответственно по сравнению с контрольными животными. Введение этомерзола в дозе 100 мг/кг увеличивало выживаемость подопытных мышей на 49% по сравнению с контрольной группой (Р<0,05).
В условиях ОГсГк введение соединения под шифром Тетравим оказывало положительное влияние на продолжительность жизни мышей в дозах 50, 100, 150, 200 и 250 мг/кг с эффектом, превышающим контрольные показатели на 97, 75, 50, 45 и 42% (Р<0,05). Дозы 10 и 25 мг/кг были неэффективны. Соединение под шифром ВИМ в этих дозах также не изменяло время жизни мышей, а дозы 50, 100 и 150 мг/кг оказывали положительное действие, что проявлялось
значимым увеличением продолжительности жизни животных примерно на одинаковую величину (58, 57 и 54% соответственно). В условиях ОГсГк Ацизол в дозе 10 мг/кг не влиял, а в дозах 25, 50, 100 и 150 мг/кг значимо увеличивал продолжительность жизни мышей на 38, 99, 74 и 80% соответственно по сравнению с контрольными группами животных. Этомер-зол был эффективен только в дозе 100 мг/кг, введение которой увеличивало выживаемость подопытных групп мышей на 32% соответственно по сравнению с контрольными группами. Введение гипоксена в дозах 100 и 150 мг/кг повышало выживаемость мышей на 26 и 29% соответственно (Р<0,05).
В условиях ОГеГ Тетравим проявлял антигипокси-ческую активность в дозах 50, 100, 150, 200 и 250 мг/ кг, введение которых статистически значимо увеличивало продолжительность жизни мышей на 23, 37, 31, 26 и 26% соответственно. В тех же условиях опыта ВИМ в дозах 25, 50, 100 мг/кг не проявлял антиги-поксического эффекта. При ОГеГ введение Ацизола в дозах 50, 100, 150 мг/кг значимо увеличивало время жизни животных на 61, 92 и 66% соответственно по сравнению с контрольными показателями. При
Таблица 2
Влияние Тетравима (50мг/кг), DNP (5 мг/кг) и их сочетаний на показатели кислородного обмена у мышей (п = 10) **
Потребление кислорода, мл/мин/100 г массы тела
Характер воздействия исходное через 1 час через 24 часа
М±т М±т % М±т %
Контроль DNP
Тетравим Тетравим+DNP
Потребление кислорода, мл/мин/100 г массы тела 5,0±0,18 5,0±0,18 100
5,1±0,18 6,9±0,35 138*
5,0±0,18 3,0±0,27 60*
5,0±0,18 4,1±0,09 82*
Ректальная температура, °С
5,0±0,18 5,1±0,27 5,1±0,18 4,1±0,09
100 102 102 102
Контроль 37,0±0,05 36,9±0,06 100 37,0±0,05 100
DNP 36,9±0,05 39,6±0,05 107* 36,9±0,11 99
Тетравим 37,0±0,05 34,5±0,11 93* 36,9±0,11 100
Тетравим+DNP 37,0±0,05 36,5±0,09 99 36,5±0,09 99
Примечание: * — статистически достоверные различия (Р<0,05) по сравнению с контролем; ** — данные представлены как М±т, где М — значение средней арифметической по отношению к контролю, принятому за 100%, т — стандартная ошибка средней, выраженная в % к средней арифметической величине.
введении этомерзола в дозах 25 и 50 мг/кг продолжительность жизни подопытных мышей повышалась на 25 и 43%, а гипоксена в дозе 150 мг/кг — на 21 % (Р<0,05).
При ОГтГ Тетравим проявлял защитный эффект в дозах 5, 10, 25, 50, 100, 150, 200, 250 мг/кг, значимо увеличивая время жизни мышей примерно на одинаковую величину (31, 35, 31, 36, 21, 29, 25, 20%) соответственно. ВИМ и Ацизол не оказывали видимого антигипоксического действия. Гипоксен в дозах 50, 100 и 150 мг/кг статистически значимо увеличивал время жизни животных на 43, 89 и 19% соответственно по сравнению с контролем. Этомерзол в дозах 25, 50 и 100 мг/кг не оказывал существенного влияния на выживаемость мышей.
Следовательно, в условиях острой гипоксии производные винилимидазола проявляли защитный эффект, который зависел от дозы соединения и модели гипоксии. Соединение железа под шифром Тетравим по степени выраженности антигипоксического действия при четырех видах острой гипоксии (увеличение продолжительности жизни подопытных мышей по сравнению с контрольными группами на 20-127%) в диапазоне исследуемых доз (5-250 мг/кг) превосходит другие производные винилимидазола и известные антигипоксанты: этомерзол и гипоксен.
С целью определения возможного направления по изучению механизма антигипоксического действия Тетравима изучено его влияние на потребление кислорода и ректальную температуру мышей. В экспериментах использовали дозу 50 мг/кг, занимающую среднее положение в ряду эффективных анти-гипоксических доз, и DNP в дозе 5 мг/кг.
Исходное потребление кислорода интактными мышами составляло 5,0±0,18 мл/мин на 100 г массы тела. У животных контрольной группы этот показатель не изменялся через 1 и 24 часа после введения дистиллированной воды. Потребление кислорода мышами через 1 час после введения Тетравима в дозе 50 мг/кг достоверно снижалось по сравнению с исходными значениями на 40%, а спустя 24 часа существенно не отличалось от исходной величины. DNP в дозе 5 мг/кг повышал потребление кислоро-
да мышами спустя 1 час после введения на 38% (Р<0,05), а через сутки не проявлял такого действия. При сочетанном введении DNP в дозе 5 мг/кг с Тетра-вимом (50 мг/кг) потребление кислорода животными статистически значимо снижалось через 1 час на 18% по сравнению с контрольной группой и практически не отличалось от исходной величины через 24 часа (табл. 2). Следовательно, Тетравим снижал потребление кислорода и уменьшал неблагоприятное влияние на этот показатель DNR
Исходная ректальная температура у интактных мышей была в пределах от 36,8 до 37,3° С. Ректальная температура у мышей, которым вводили дистиллированную воду, через 1 и 24 часа от начала опыта не изменялась. Через 1 час после инъекции Тетравима температура у опытных животных снизилась на 7% (Р<0,05) по сравнению с контрольными значениями. Спустя сутки от начала опыта этот показатель не отличался от исходного. Через 1 час после введения DNP в дозе 5 мг/кг температура изменялась до 39,6° С, что выше контрольных значений на 7%, и только спустя 24 ч от начала эксперимента этот показатель практически не отличался от исходного (см. табл. 2). При сочетанном введении Тетравима и DNP в тех же дозах ректальная температура мышей существенно не отличалась от исходного значения на обоих сроках наблюдения.
Обсуждение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что ВИМ относится к умеренно токсичным, а Тетравим — к классу малотоксичных соединений. Производные винилимидазола оказывают антигипоксический эффект, степень проявления которого зависит от модели гипоксии и структуры соединения. Наибольшим защитным действием обладает металлокомплексное производное винилимидазола под шифром Тетравим, антигипоксический эффект которого на четырех моделях острой гипоксии разного генеза по широте эффективных доз и степени выраженности превосходит ВИМ, Ацизол, этомерзол и гипоксен.
Понижение температуры тела под влиянием Те-травима, возможно, является одним из факторов резистентности организма к кислородной недостаточности.
Известно, что в охлажденном состоянии организм приобретает устойчивость к некоторым вредным воздействиям. Применение веществ, снижающих скорость метаболизма, может быть одним из способов повышения устойчивости к дефициту кислорода. Влияние Тетравима на окислительный обмен, возможно, обусловлено его способностью переводить аэробное окисление в анаэробное, при котором потребность в кислороде уменьшается. Восстановление газообмена через 24 часа после введения соединения может быть связано с его значительным выведением к этому сроку и образованием компонентов метаболизма, не влияющих на потребление кислорода. Получение энергии более экономичным путем можно объяснить тем, что соединение вмешивается в механизм сопряжения окисления с фосфорилированием в митохондриях. Поэтому можно предполагать, что исследованный металлокомплекс благотворно влияет на функции митохондрий при экстремальных условиях, уменьшая разобщение окисления с фосфорилирова-нием.
Тетравим и DNP оказывали противоположное влияние на показатели окислительного обмена. Под влиянием Тетравима потребление кислорода и ректальная температура у мышей снижались, а при введении DNP, наоборот, увеличивались. При сочетанном введении Тетравима с DNP избранные показатели окислительного процесса у мышей существенно не отличались от исходных значений. Однократное введение Тетравима приводит к уменьшению энергетических запросов организма, повышает устойчивость его к недостатку кислорода, увеличивая тем самым продолжительность жизни в условиях острой гипоксии.
Заключение. Полученные данные по фармакологической активности исследуемого металло-комплексного соединения под шифром Тетравим требуют дальнейшего выяснения механизма анти-гипоксического действия и проведения клинических исследований с целью внедрения его на фармакологический рынок в качестве перспективного анти-гипоксанта.
Конфликт интересов не заявляется.
Литература (References)
1. Barinov AV, Nechiporenko SP. Developed an antidote for carbon monoxide. UNIFOR RASHA 2006: 116-117. Russian (Баринов А. В., Нечипоренко С. П. Разработан антидот угарного газа. UNIFOR RASHA 2006: 116-117).
2. Patent RF № 2331417, 20.08.2008. Russian (Патент РФ № 2331417, 20.08.2008).
3. Babanijazov HH, Trofimov BA, Nechiporenko SP, et al. The experience of studying the pharmacological properties of acizol in experiment and clinic. Messenger of the reduction medicine 2008; (5): 7-11. Russian (Бабаниязов Х. Х., Трофимов Б. А., Нечипоренко С. П. и др. Опыт изучения фармакологических свойств ацизола в эксперименте и клинике. Вестник восстановительной медицины 2008; (5): 7-11).
4. Patent RF № 2397175/23, 20.08.2010. Russian (Патент РФ № 2397175/23, 20.08.2010).
5. Arzamastsev EV, Guskova TA, Berezovskaya IV, et al. Methodical instructions for study of General toxic effect of pharmacological substances: Guide to the experimental (preclinical) studying of new pharmacological substances. M., 2005. P. 41-54. Russian (Арзамасцев Е. В., Гуськова Т. А., Березовская И. В., Любимов Б. И. и др. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ: руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2005. С. 41-54).
6. Berezovskaja IV. Classification of chemicals in the parameters of acute toxicity of parenteral routes of administration. Chemical and pharmaceutical magazine 2003; 37 (3): 32-34. Russian (Березовская И. В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения. Химико-фармацевтический журнал 2003; 37 (3): 32-34.
7. L. D. Luk'janova, ed. Methodical recommendations on the experimental study of drugs proposed for clinical studies as antihypoxic funds. M., 1990. 18 p. Russian (Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств / под ред. Л. Д. Лукьяновой. М., 1990. 18 с.
8. Katunina NP, Katunin MP. The study of the influence phenylethylamine derivatives of 3-hydroxypyridine on the lifespan of mice during acute hypoxia with hypercapnia and acute hypobaric hypoxia. Saratov Journal of Medical Scientific Research 2007; 3 (1): 100-103. Russian (Катунина Н. П., Катунин М. П. Изучение влияния фенилэтилзамещенных производных 3-оксипиридина на продолжительность жизни мышей при острой гипоксии с гиперкапнией и острой гипобарической гипоксии. Саратовский научно-медицинский журнал 2007; 3 (1): 100-103).
9. Kurbanov AI, Samojlov NN, Stratienko EN, et al. Antihy-poxic activity of new derivatives of 3-hydroxypyridine. Psycho-pharmacology and biological narcology 2006; 6 (1): 1149-1153. Russian (Курбанов А. И., Самойлов Н. Н., Стратиенко Е. Н. и др. Антигипоксическая активность новых производных 3-оксипиридина. Психофармакол. и биол. наркол. 2006; 6 (1): 1149-1153).
10. Stratienko EN, Bogus SK, Katunina NP, et al. The study of antihypoxic activity of new metal-complex compounds derived alkenilimidazol. Kuban scientific medical bulletin 2009; (8): 76-78. Russian (Стратиенко Е. Н., Богус С. К., Катунина Н. П. и др. Изучение антигипоксической активности новых металлокомплексных соединений производных алкенилимидазола. Кубанский научный медицинский вестник 2009; (8): 76-78).
