CC BY
713. Докшшчш дослщження лшарських засобiв: метод. рекомендацп / За ред. чл.-кор. АМН Украши О. В. Стефанова. - К.: Авщена, 2001. - 528 с.
14. Реброва, О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета программ Statistica. - М.: Медиа Сфера, 2006. - 312 с.
15. Гублер, Е. В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях /
Е. В. Гублер, А. А. Генкин. - Л.: Медицина, 1973. -144 с.
Адресдлякорреспонденции:
61001, Украина,
г. Харьков,пл. Защитников Украины, 17,
Национальный фармацевтический университет,
кафедра промышленной фармации
и экономики ИПКСФ,
тел.: (057) 7325853,
e-mail: v. iakovenko@gmail. com,
Яковенко В.К.
Поступила 26.06.2020 г.
УДК 635.9:615.451]:615.012/.014
Т. К. Юдкевич1, С. А. Гращенкова1, И.А. Лебединец1, О. В. Полонец2,
С. М. Марчишин2
ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ЭКСТРАКТОВ
ИЗ ЦВЕТОВ И ЛИСТЬЕВ ХРИЗАНТЕМЫ САДОВОЙ МНОГОЛЕТНЕЙ ^HR YSANTHEMUM HORTORUM BAILEY)
Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина 2Тернопольский национальный медицинский университет им. И. Я. Горбачевского, г. Тернополь, Украина
Целью исследования было установить характер и выраженность повреждающего действия экстрактов из цветов (ЭЦХ) и листьев хризантемы (ЭЛХ) при внутрижелу-дочном введении мышам (самцам, самкам) в остром эксперименте. Результаты показали, что введение ЭЦХ и ЭЛХ в дозах 5000 мг/кг мышам не вызывает гибели животных, не влияет на динамику их массы, не оказывает негативного влияния на показатели внутренних органов (исключением были селезенка и печень у самцов и самок), также не оказывает раздражающего действия на слизистую оболочку желудка.
Установлено, что исследуемые объекты ЭЦХ и ЭЛХ можно отнести к V классу токсичности - практически нетоксичные вещества (5000-15000 мг/кг).
Ключевые слова: острая токсичность, мыши, экстракт из цветов хризантемы, экстракт из листьев хризантемы.
ВВЕДЕНИЕ
Приблизительно 7% мировой флоры (23 000 видов растений) используется в мире в качестве лекарственных растений. Степень изученности и широта их применения разнообразные [1]. Поэтому актуальным вопросом фармации остается поиск и создание новых лекарственных средств растительного происхождения. В этом аспекте особого внимания заслуживает хризантема садовая многолетняя (Chrysanthemum Hortorum Bailey). Используя метод дробной мацерации, на кафедре фармакогнозии ТНМУ им. И. Я. Горбачевского под руководством профессора Мар-
чишин С. М. получены сухие экстракты из цветов (ЭЦХ) и листьев (ЭЛХ) хризантемы садовой многолетней с высоким содержанием активных веществ (флавоноидов, гидроксикоричных веществ, фенольных соединений). В эксперименте полученные экстракты выявили умеренную противовоспалительную активность и показали седативное действие на поведение животных в тесте «Открытое поле» [2, 3].
Целью данной работы является оценка безопасности экстрактов из цветов (ЭЦХ) и листьев хризантемы (ЭЛХ) и установление характера и выраженности их повреждающего действия на организм экспериментальных животных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В эксперименте использовали 36 мышей (18 самцов, 18 самок). Животных содержали в отдельной комнате с контролируемыми параметрами микроклимата: температура воздуха +20-24 °С, влажность 45-65%, световой режим «12 часов день/ночь», в пластиковых клетках по 6 голов в каждой, самцы и самки находились в отдельных клетках. Животные имели свободный доступ к воде. Для питья использовали отстоянную водопроводную воду из поилок, для кормления - гранулированные сбалансированные корма. Уход за животными проводили согласно рекомендациям [4] и при соблюдении принципов GLR
При проведении экспериментов соблюдали этические нормы [5] и рекомендации по гуманному отношению к лабораторным животным [6], которые введены Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Страсбург, 1985), а также приказы Министерства охраны здоровья Украины № 944 от 14.12.2009 г. и № 95 от 16.02.2009 г.
При исследовании острой токсичности использовали мышей (самцов, самок) массой тела 22-26 г, в возрасте 3-3,5 месяца. Мышей разделили на три группы по 12 животных (6 самцов, 6 самок) в каждой: 1-я - контроль, животные не получали ничего, 2-я и 3-я - получали экстракт из цветов хризантемы садовой многолетней и экстракт из листьев хризантемы садовой многолетней соответственно. Исследуемые объекты изучали в соответствии с методическими рекомендациями [6] в дозе 5000 мг/кг - максимальной дозе 4 класса токсичности химических веществ. Экстракты вводили однократно внутрижелу-дочно в виде водной суспензии из расчета 0,2 мл/10 г массы тела мышей через металлический зонд.
За 4 часа до введения исследуемых объектов и после животные были лишены еды, доступ к воде был свободным. За животными наблюдали ежедневно в течение 2 недель. Токсическое действие образцов на организм животных оценивали по массе в динамике (исходное состояние, 3, 7 и 14 сутки), по поведению животных после интоксикации (внешний вид, дыхание, слюноотделение, мочеиспускание, экскременты, употребление кормов и воды) и
до ее исчезновения. После окончания наблюдения (14 дней) животных подвергали эвтаназии под легким хлороформным наркозом и проводили макроскопический осмотр внутренних органов. Макроскопическое исследование включало: внешний вид животного, осмотр внутренних органов грудной (сердце, легкие, тимус) и брюшной (печень, селезенка, почки, семенники) полостей [1]. После макроскопического исследования внутренние органы взвешивали и рассчитывали коэффициенты масс (КМ, %) внутренних органов животных по формуле:
тт\у[ _ масса органа (г) Jnn 0/
КМ оржш - масса животного (г) • 100 %
Полученные данные выражали через среднее значение и ее ошибку (М ± m) или через среднее значение, минимальное и максимальное значения выборки (М (Min Max). Сравнение между исследуемыми группами проводили с помощью параметрических и непараметрических методов. Полученные данные обрабатывали отдельно для самцов и самок. Различия между опытными группами считали статистически значимыми при p < 0,05. Для статистической обработки использовали базовый пакет программ «Statistica 6» и Exel 2007 [7, 8].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Через 15-20 минут после введения ЭЛХ и ЭЦХ у животных наблюдали снижение двигательной активности, мыши скапливались в группы и затихали. Через 24 часа после введения все животные были активны, подвижны, с нормальной координацией движений, реакцией на внешние раздражители, частотой и глубиной дыхания. Состояние животных не отличалось от поведения животных контрольной группы.
Дальнейшие наблюдения за животными на протяжении 14 суток свидетельствовали о том, что внутрижелудочное введение ЭЛХ и ЭЦХ в дозе 5000 мг/кг не вызывало гибели ни самцов, ни самок. Все животные были активными, аккуратными, с хорошим аппетитом, реагировали на звуковые и световые раздражители, процессы мочеиспускания и дефекации были в норме, нарушения дыхания и судороги не наблюдали. Междугрупповых отличий не установлено.
Таким образом, данные, полученные в эксперименте, свидетельствуют о том, что экстракты ЭЦХ и ЭЛХ в дозе 5000 мг/кг не вызывают гибели животных, хорошо переносятся животными, не оказывают побочного действия и, согласно классификации веществ по токсичности (К. К. Сидоров, 1973 г.), могут быть отнесены к 5 классу -практически нетоксичным веществам (5000-15000 мг/кг) [6].
Токсического действия исследуемых объектов на массу животных не выявлено. Как показали наши наблюдения, прирост массы тела во всех опытных группах был позитивным, интенсивность прироста не отличалась от контрольной группы ни у самцов, ни у самок (таблица 1). Межгрупповые сравнения массы тела животных во все дни наблюдения показали отсутствие отличий относительно группы контроля.
Таблица 1. - Динамика массы тела (г) мышей (самцы, самки), п = 6, (М ± т)
Дни наблюдения Контроль ЭЛХ, 5000 мг/кг ЭЦХ, 5000 мг/кг
самцы
исходное состояние 22,33 ± 1,41 22,08 ± 0,92 21,53 ± 1,25
3 день 22,57 ± 1,42 22,00 ± 0,95 21,45 ± 1,31
7 день 23,38 ± 1,46 23,32 ± 0,93 22,27 ± 1,37
14 день 24,02 ± 1,66 23,95 ± 0,83 22,97 ± 1,46
самки
исходное состояние 22,78 ± 0,85 22,98 ± 0,61 23,60 ± 0,95
3 день 22,83 ± 0,85 23,08 ± 0,63 23,62 ± 0,97
7 день 23,77 ± 0,83 23,97 ± 0,63 24,40 ± 0,97
14 день 24,52 ± 0,87 24,92 ± 0,68 25,48 ± 0,98
Примечание: п - количество животных в каждой группе.
По окончании исследования (14 день) животных выводили из эксперимента дислокацией шейных позвонков. При внешнем осмотре все опытные и контрольные животные на 14 день эксперимента имели нормальный внешний вид: опрятные, шерсть сухая, плотно прилегала к телу. Слизистая оболочка рта розового цвета, гладкая, блестящая. Язык свободно помещался в ротовой полости, без налета. Слизистая оболочка носа гладкая, блестящая, без выделений. Анальное отверстие не загрязнено, фекальные массы сформированы. У самок вагинальное отверстие чистое. У самцов оба яичка расположены в мошонке, подвижные.
При макроскопическом исследовании внутренних органов мышей видимых изменений не выявлено: тимус обычного размера, сердце обычной конфигурации и нормального размера. Легкие заполняют всю плевральную полость, бледно-розовые, без спаек между листками плевры. В брюшной полости расположение органов анатомически правильное, постороннего содержимого не найдено. Различий между опытными группами не установлено. Слизистая оболочка железистого отдела желудка с характерным рельефом складок, нормального цвета, без рубцов, отеков и эрозивных повреждений.
Расчет и дальнейший статистический анализ относительных коэффициентов массы внутренних органов животных показали, что применение ЭЛХ и ЭЦХ в дозах 5000 мг/кг приводило к некоторым их изменениям по сравнению с животными контрольной группы как у самцов, так и у самок. При введении ЭЛХ у самцов регистрировали значимое увеличение КМ селезенки, у самок - его уменьшение. При введении ЭЦХ у самцов все показатели КМ находились в пределах физиологической нормы (таблица 2), только у самок значимо уменьшились КМ печени и селезенки.
ВЫВОДЫ
Внутрижелудочное введение ЭЛХ и ЭЦХ в дозе 5000 мг/кг не вызывает гибели мышей (самцов и самок). Согласно классификации К. К. Сидорова, ЭЛХ и ЭЦХ можно отнести к 5 классу токсичности -практически нетоксичным веществам (5000-15000 мг/кг).
Изученные объекты не влияют на динамику массы животных, не вызывают раздражающего действия на слизистую оболочку желудка. Макроскопических изменений внутренних органов у лаборатор-
Таблица 2. - Относительные коэффициенты масс внутренних органов (%) мышей
N = 6, M (Min ■ Max)
Внутренние органы Контроль ЭЛХ, 5000 мг/кг ЭЦХ, 5000 мг/кг Контроль ЭЛХ, 5000 мг/кг ЭЦХ, 5000 мг/кг
самцы самки
Печень 5,96 (4,26-7,70) 5,31 (4,68-5,72) 6,23 (5,19-7,23) 5,52 (4,71-6,02) 4,92 (4,45-5,94) 4,79 (4,47-5,31)*
Почки 1,71 (1,52-1,90) 1,57 (1,42-1,67) 1,59 (1,41-1,65) 1,37 (1,22-1,49) 1,28 (1,16-1,47) 1,26 (1,17-1,36)
Сердце 0,52 (0,43-0,62) 0,54 (0,42-0,73) 0,51 (0,45-0,63) 0,53 (0,49-0,59) 0,49 (0,38-0,61) 0,48 (0,45-0,53)
Легкие 0,85 (0,66-1,04) 0,96 (0,77-1,13) 0,85 (0,63-0,97) 0,91 (0,78-1,08) 0,82 (0,61-0,99) 0,79 (0,60-0,96)
Селезенка 0,70 (0,49-1,09) 1,03 (0,87-1,29)* 0,81 (0,62-1,19) 1,01 (0,60-1,32) 0,69 (0,58-0,82)* 0,63 (0,51-0,72)*
Тимус 0,255 (0,095-0,392) 0,271 (0,151-0,374) 0,255 (0,208-0,335) 0,335 (0,206-0,440) 0,393 (0,277-0,490) 0,328 (0,288-0,496)
Семенники 0,76 (0,68-0,85) 0,77 (0,68-0,85) 0,84 (0,68-1,18) - - -
Примечания: * - значение n - количество животных в
статистически значимо относительно каждой группе.
группы контроля, р
< 0,05;
ных животных после введения ЭЛХ и ЭЦХ не выявлено. Расчеты относительных коэффициентов массы внутренних органов выявили органы-мишени - это печень и селезенка.
SUMMARY
T. K. Yudkevich, S. А. Grastahenkova, S. A. Lebedynets, O. V. Polonets, S. M. Marchishyn
ACUTE TOXICITY RESEARCH OF CHRYSANTHEMUM FLOWERS AND LEAVES EXTRACTS
(CHRYSANTHEMUM HORTORUM BAILEY)
The aim of the research was to estimate the type and intensity of harmful effect of chrysanthemum flowers (ECF) and leaves (ECL) extracts in oral administration to mice (male, female) in an acute experiment. The results demonstrated that ECF and ECL injection in the dose of 5000 mg/kg to mice doesn't affect animal mortality, their weight ratio, their internal indexes (except the spleen and the liver in males and females) and doesn't have an irritating action on the stomach mucous membrane as well.
It was stated that the objects ECF and ECL studied can be referred to toxicity Class V - almost non-toxic substances (5000-15000 mg/kg).
Keywords: acute toxicity, mice, chrysanthemum flowers extract, chrysanthemum leaves extract.
ЛИТЕРА ТУРА
1. Лкувальш властивосп Хризанте-ми [Ел. ресурс]. - Режим доступа: http:// uk.fungodoctor.com.ua/ru/?option=com_k2 &view=item&id=197:khrizantema&Item id=140. - Дата доступа: 03.02.2020.
2. II Мiжнародна науково-практична конференщя «Сучасш досягнення фарма-цевтично! науки в створенш та стандарти-зацп лшарських засобiв i дieтичних добавок, що мютять компоненти природного походження», 11 березня 2020 р. : матерь али штернет-конф. / Нац. фарм. ун-т; ред-кол. А. А. Котвщька (гол. ред.) [та ш.]. -Харюв: НФаУ, 2020. - С. 199.
3. IV Мiжнародна науково-практична конференщя «Лши - людиш. Сучасш про-блеми фармакотерапп i призначення ль карських засобiв», 12-13 березня 2020 р.: матерiали конф. у 2-х т. / Нац. фарм. ун-т; редкол. А. А. Котвщька (гол. ред.) [та ш.]. -Харюв: НФаУ, 2020. - Т. 2. - С. 195.
4. Науково-методичш рекомендацп з утримання лабораторних тварин та роботи з ними/ Ю.М. Кожем'якш [та ш.]; за ред. Ю.М. Кожем'якша. - Кшв: Авщена, 2002. -156 с.
5. Чадаев, В. Е. Этические принципы при работе с лабораторными животными [Электронный ресурс] / В. Е. Чадаев // Вю-ник проблем бюлогп i медицини. - Полтава, 2012. - Вип.2, т. 1 (92). - С. 113-115. -Режим доступа: https://cyberleninka.ru/
article/n/eticheskie-printsipy-pri-rabote-s-laboratomymi-zhivotnymi/viewer. - Дата доступа: 03.02.2020.
6. Доклшчш дослщження лiкарських засобiв (методичш рекомендацп) // За ред. чл.-кор. АМН Украши О. В. Стефанова. -Кив: Авiцена, 2001. - 528. с.
7. Реброва, О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета программ Statistica / О. Ю. Реброва -М.: МедиаСфера, 2006. - 312 с.
8. Основные методы статистической обработки результатов фармакологических
экспериментов // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р. М. Салимов; под ред. В. П. Фисенко. -Москва: Ремедиум, 2000. - С. 349-354.
Адрес для корреспонденции:
61002, Украина,
г. Харьков, ул. Куликовская, 12,
Национальный фармацевтический университет,
Учебно-научный институт прикладной фармации,
моб. тел.: (+38) 097-89-487-89,
e-mail: grashenkovas@ukr.net,
Гращенкова С.А.
Поступила 18.06.2020 г.
