CC BY
63
Контроль "Ноофит", "Ноофит", "Ноофит", Пирацетам 2мл/кг 5мл/кг 1 Омл/кг
1 ■ ■ ■ ■ I Порог возниконовения агрессивной реакции, Вт I —А—Длительность иммобилизации, с
Рис. 3. Влияние «Ноофита» и пирацетама на длительность иммобилизации белых крыс в тесте «поведенческое отчаяние» по Порсолту и порог возникновения агрессивной реакции.
мах увеличивает порог возникновения агрессивной реакции в 1,6 и 1,8 раза соответственно по сравнению с контролем (рис. 3).
Таким образом, «Ноофит» в экспериментально-терапевтических дозах обладает ноотропным видом действия, активируя выработку условного рефлекса с отрицательным подкреплением, проявляет анксиолитическую, антиагрессивную, антидепрессивную и умеренную седативную активность. При этом установлено, что наиболее выраженное анксиолитиче-ское, антидепрессивное, антиагрессивное и седативное действие, превосходящее эффект препарата сравнения, исследуемый экстракт оказывает в объеме 10 мл/кг, а в дозе 5 мл/кг - стимулирует когнитивные функции мозга.
ЛИТЕРАТУРА
1. Арушанян Э.Б. Препараты корня женьшеня и других растительных адаптогенов как ноотропные средства // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2008. -Т. 71. №6. - С.58-66.
2. Бочарова Е.В., Иванова-Смоленская И.А., Полещук В.В. и др. Возможности фитоадаптогена-нейропротектора при лечении нейродегенеративного заболевания (на примере Болезни Паркинсона) // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 149. №6. - С.619-621.
3. Воробьева О.В., Акарачкова Е.С. Фитопрепараты в профилактике и терапии психовегетативных расстройств // Врач. - 2007. - №4 - С.57-68.
4. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Методические указания по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - С.253-263.
5. Дамдинова Г.Х. Ноотропное действие экстракта шлемника байкальского: Автореф. дисс.... канд. мед. наук. - Улан-Удэ, 2001. -20 с.
6. Николаев С.М. Многокомпонентные лекарственные средства традиционной медицины как регулирующие фармакологические системы // Байкальские чтения-3: сборник трудов. - СПб., 2008. - С.140-142.
7. Сергиенко В.И., Бондаренко И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М., 2006. - 256 с.
8. Ушкалова А.В., Илларионова Т.С. Эффективность и безопасность антидепрессивных и седативных средств рас-
тительного происхождения // Фармация. - 2008. - № 20 (154).
- С.10-14.
9. Andreatini, R., Sartori V.A., Seabra M.L., et al. Effect of valepotriates (valerian extract) in generalized anxiety disorder: a randomized placebo-controlled pilot study // Phytother Res. -2002. - №16. - Р.650-654.
10. Baretta I.P., Felizardo R.A., Bimbato V.F., et al. Anxiolyticlike effects of acute and chronic treatment with Achillea millefolium L. extract // J. Ethnopharmacol. - 2012 - Vol. 14. №1. - P.46-54.
11. Conforti F., Sosa S., Marrelli M., Menichini F., et al. In vivo anti-inflammatory and in vitro antioxidant activities of Mediterranean dietary plants // J. Ethopharmacol. - 2008. - Vol. 116. №1. - P.144-151.
12. Heo H., Shin Y., Cho W., Choi Y., Kim H. Memory improvement in ibotenic acid induced model rats by extracts of Scutellaria baicalensis // J. Ethnopharmacol. - 2009. - Vol. 122. №l. - P.20-27.
13. Jeong, J.O., An N.Y., Park S.H., Oh J.G., et al. The anxiolyticlike effects of Scutellaria baicalensis using elevated plus-maze in rats // Kor. J. Pharmacogn. - 2004. - Vol. 35. - P.22-27.
14. Occhiuto F., Pino A., Palumbo D.R., et al. Relaxing effects of Valeriana officinalis extracts on isolated human uterine muscle // J. Pharm. Pharmacol. - 2009. -Vol. 61. №2. - P.251-256.
15. Valle-Mogica Del L.M., Cordero-HernandezJ.M., Gonzalez-Medina G., et al. Aqueous and ethanolic Valeriana officinalis extracts change the binding of ligands to glutamate receptors // Evid. Based Compliment. Alternat. Med. - 2011. - Vol. 2011. -P.891-898.
Информация об авторах: Разуваева Янина Геннадьевна - старший научный сотрудник, к.б.н.; Николаев Сергей Матвеевич
- д.м.н., профессор, 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, тел. (3012) 433463, e-mail: tatur75@mail.ru; Верлан Надежда Вадимовна - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Убеева Ираида Поликарповна - д.м.н., профессор;
Базарова Надежда Цыреновна - аспирант.
© СОСЕДОВА Л.М., МАРТЫНОВ А.М., КАПУСТИНА Е.А., ТИТОВ Е.А. - 2013 УДК 615.451.13:582.681.26
ИССЛЕДОВАНИЕ МУКОЛИТИЧЕСКИХ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СВОЙСТВ СПИРТОВОГО ЭКСТРАКТА ФИАЛКИ ОДНОЦВЕТКОВОЙ И ФИТОСБОРА
Лариса Михайловна Соседова1, Альберт Михайлович Мартынов2, Екатерина Александровна Капустина1, Евгений
Алексеевич Титов1
('Восточно-Сибирский научный центр экологии человека СО РАМН, Иркутск, директор - член-корр. РАМН, д.м.н., проф. В.С. Рукавишников, лаборатория токсикологии, зав. - д.м.н., проф. Л.М. Соседова; 2Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра фармации, зав. - д.ф.н., проф. Г.Н. Ковальская)
Резюме. В результате проведенных исследований по изучению муколитических свойств фитосбора и спирто-
вого экстракта фиалки одноцветковой на морских свинках установлено меньшее количество приступов кашля. Изучение противовоспалительных свойств данных препаратов выявило статистически значимое увеличение количества клеток эпителия и лейкоцитов в сравнении с контрольной группой, что указывает на наличие у изучаемых препаратов отхаркивающих свойств.
Ключевые слова: Viola uniflora, фитосбор, муколитические и противовоспалительные свойства
STUDYING OF MUCOLYTIC AND ANTIINFLAMMATORY CHARACTERISTICS OF HERBAL COLLECTION AND ALCOHOL EXTRACT OF UNIFLOROUS VIOLET
L.M. Sosedova1, A.M. Martynov2, E.A. Kapustina1, E.A. Titov1 ('Eastern - Siberian Scientific Center of Human Ecology SB RAMS, Irkutsk;
2Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education, Irkutsk, Russia)
Summary. The mucolytic features of herbal collection and alcohol extract of uniflorous violet have been studied using cavies. As a result, the small number of cough attacks was determined. When studying anti-inflammatory characteristics of these drugs it was revealed a statistically significant increase in epithelial cells and leukocytes in comparison with the control group. Thus, the drugs possess the expectorant effect.
Key words: Viola uniflora, herbal collection, mucolytic and anti-inflammatory characteristics.
Из многочисленных видов растений рода фиалка, произрастающих в РФ, разрешены к медицинскому применению только два: фиалка трехцветная - Viola tricolor L. и фиалка полевая - V. arvensis Murr. Остальные виды недостаточно изучены и используются только в народной медицине в качестве отхаркивающих, противовоспалительных, противоопухолевых, ранозаживляющих и других средств.
Ранее проведенными исследованиями в траве фиалки одноцветковой - Viola uniflora L. идентифицированы различные группы биологически активных веществ: флавоноиды, фенольные кислоты, кумарины, полисахариды, аминокислоты, а также макро- и микроэлементы [3,4]. Наличие указанных групп природных соединений и отсутствие сведений о фармакологических свойствах данного объекта послужило основанием для изучения муколитического и противовоспалительного действия на лабораторных животных препаратов травы фиалки одноцветковой - Viola uniflora L.
Целью исследований являлось определение параметров острой токсичности фитосбора, изучение муколитическо-го и противовоспалительного действия сбора и спиртового экстракта фиалки одноцветковой, разработанных на кафедре фармации Иркутской государственной медицинской академии последипломного образования.
Материалы и методы
Изучаемые образцы представлены спиртовым экстрактом фиалки одноцветной (образец № 1) и фитосбором (образец № 2), состоящим из травы фиалки одноцветковой, чабреца и корня солодки в соотношении 1:1:1. Приготовление водных извлечений исследуемых образцов производилось по следующей схеме. Настой из фитосбора (образец № 2) готовили в соответствии требованиями ГФ XI, ст. «Настои и отвары» [1]. Для этого приготовленный сбор помещали в стеклянную посуду, заливали дистиллированной водой комнатной температуры в соотношении 1:10 и помещали на кипящую водяную баню на 15 мин. при частом помешивании. Затем водное извлечение охлаждали 45 мин., фильтровали и доводили водой до первоначального объема. Сухой экстракт (образец № 1) растворяли в теплой воде при перемешивании. Растворы исследуемых образцов вводили внутрижелудочно дважды с интервалом 3 часа в объеме 2 мл в течение 5 дней.
Исследование представленных образцов проводилось на самцах морских свинок массой 350 г. Для проведения исследований противовоспалительных и муколитических свойств изучаемых образцов морские свинки были поделены на 4 группы по 6 особей в каждой.
1 группа - контроль - животные получали внутрижелу-дочно в том же режиме чистую воду.
2 группа - производилось моделирование воспалительного процесса в бронхолегочной системе и приступов кашля.
3 группа - моделирование воспалительного процесса в бронхолегочной системе и приступов кашля с последующим введением образца № 2 в течение 5 дней.
4 группа - моделирование воспалительного процесса в бронхолегочной системе и приступов кашля с последующим введением образца № 1 в течение 5 дней.
Эксперименты выполнялись с соблюдением принципов гуманного обращения с экспериментальными животными в соответствии с «Правилами по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных целей» (Европейская конвенция, Страсбург, 1986) и «Правилами лабораторной практики» (Приказ Минздравсоцразвития РФ № 708 н от 23.08.2010 г.). Содержание, уход и кормление животных регламентировались санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально - биологических клиник (вивариев). Умерщвление животных проводилось методом декапитации в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными приказом Минздрава СССР от 12.08.1977 г.
По окончании исследования изучали количество приступов кашля, индуцированного лимонной кислотой у леченных и не леченных животных. Моделирование воспалительного процесса в бронхолегочной системе у морских свинок осуществляли путем двукратного пребывания животных в атмосфере, обогащенной хлором, по 2 часа ежедневно. В последующем у леченных и не леченных животных изучали мазки-отпечатки верхних дыхательных путей с окраской препаратов методом Романовского-Гимза. Гистологическое исследование тканей легкого проводилось при окраске препаратов гематоксилин-эозином [2].
Исследование острой токсичности травяного сбора проводили при внутрижелудочном введении белым крысам-самцам водного извлечения, полученного в соотношении 1:1,5. Приготовленный настой вводили внутрижелудочно дважды с интервалом 3 часа по 5 мл. Группа состояла из 8 животных. Контрольным животным (6 животных) вводили дистиллированную воду по аналогичной схеме.
Полученные материалы исследований обрабатывали с использованием методов непараметрической статистики (U-критерий Манна-Уитни) с применением пакета прикладных программ Statistica for Windows 5.5. Нулевые гипотезы об отсутствии различий между группами отвергали при достигнутом уровне значимости соответствующего статистического критерия р<0,05 [5].
Результаты и обсуждение
При изучении острой токсичности водного извлечения фитосбора поведение, внешний вид животных, состояние кожи и шерстяных покровов, а также аппетит у белых крыс не отличался от контрольных животных. Во все сроки наблюдения (2 недели) гибели животных не отмечалось. При макроскопическом обследовании на вскрытии животных не выявлено видимых изменений внутренних органов. Легкие розового цвета, кровоизлияний не обнаружено, печень и селезенка не увеличены, вздутие кишечника и желудка не наблюдалось. Дальнейшие исследования провести не удалось в связи с невозможностью достичь смертельных концентраций из-за трудности приготовления больших концентраций сбора.
В целом, на основании анализа полученных данных можно сделать вывод о том, что в указанной дозировке настой
травяного сбора не обладает острой токсичностью при вну-трижелудочном введении, LD50 не выявлена.
Исследование муколитической активности фитосбора и спиртового экстракта фиалки одноцветковой производилось с помощью моделирования кашля у животных, индуцированного лимонной кислотой. Предварительно производилось тестирование морских свинок на переносимость лимонной кислоты в течение 5 мин распылением аэрозоля 40% водного раствора лимонной кислоты. Затем в течение 5 дней особи получали внутрижелудочно исследуемые образцы. На
5 день морские свинки подвергались воздействию лимонной кислоты в течение 30 мин, затем подсчитывалось количество приступов кашля у животных. Полученные результаты выразили в процентах от не леченого контроля (группа 2), который принимался за 100% [6].
Таблица 1
Количество приступов кашля у морских свинок
Группы Количество приступов кашля р
2 группа (воспаление) 15
3 группа (воспаление + образец №2) 8,3 0,004
4 группа (воспаление + образец №1) 12,3 0,26
Анализ результатов исследования муколитических свойств образцов выявил наиболее выраженное положительное воздействие на уменьшение кашлевых толчков у образца № 2 (табл. 1). Так, количество приступов кашля у животных 3 группы составило 55 %, при р=0,004. Количество приступов кашля у особей 4 группы - 82%, при р=0,26.
Таблица 2
Количество клеток в верхних дыхательных путях.
Группы животных Клетки
Эпителиоциты Лейкоциты
2 группа (воспаление) 43,5(31-70)* 4(2-8)*
3 группа (воспаление + образец № 2) 53(43-76)** 6,5(3-11)**
4 группа (воспаление + образец № 1) 53(38-75)** 6(2-13)**
1 группа контроль 17(10-27) 2(0-4)
Примечание: * - отличия статистически значимы при сравнении с контролем; ** - отличия статистически значимы при сравнении со 2 группой.
Исследование противовоспалительных свойств фитосбора и спиртового экстракта фиалки одноцветковой осуществлялось у морских свинок на модели воспалительного процесса в бронхолегочной системе, которые в течение 5 дней получали внутрижелудочно исследуемые образцы.
При изучении мазков-отпечатков тканей верхних дыхательных путей (табл. 2) обнаружено, что на течение воспалительного процесса повлияло применение исследуемых
Рис. 2. Группа 3 (воспаление + образец № 2). Незначительный экссудат в просвете альвеол (1). Окраска гематоксилин-эозином. Ув Х 400.
это может быть обусловлено восстановительным процессом, протекающим в слизистых оболочках бронхоальвеолярного тракта, связанным с обновлением эпителиальных клеток. В свою очередь достоверно значимое повышение популяции лейкоцитов в мазках-отпечатках свидетельствует об активации защитных клеточных механизмов.
При гистологическом исследовании легочной ткани морских свинок при моделировании воспалительного бронхолегочного процесса во всех изучаемых опытных группах выявлены утолщенные альвеолярные перегородки, пропитанные инфильтратом, в просвете альвеол встречался экссудат. Очаги инфильтрации располагались как по периферии сосудов, так и в толще ткани. Очагов фиброза стенок альвеол не отмечено.
Вместе с тем в препаратах, полученных от особей группы №3 (воспаление + образец № 2), обнаружено наименее выраженное утолщение стенки альвеол, больший их просвет и незначительное количество экссудата в альвеолах
Рис. 1. Группа 2 (воспаление). Утолщение перегородок. Очаги инфильтрации в отечной ткани (1). Экссудат в альвеолах (2). Окраска гематоксилин-эозином. Ув Х 200.
образцов. Как видно из представленных данных, количество лейкоцитов и эпителиоцитов статистически значимо отличалось от таковых показателей в группе №2. По нашему мнению
I * 2
Рис. 3. Группа 4 (воспаление + образец № 1). Образование обширных очагов инфильтрации (1). Экссудат в просвете альвеол (2). Окраска гематоксилин-эозином. Ув Х 200.
при сравнении с группами №2 и №4. Данный факт может свидетельствовать о положительном эффекте воздействия образца препарата №2 на восстановительные процессы в легочной ткани.
Таким образом, изучение противовоспалительных свойств фитосбора и спиртового экстракта фиалки одноцветковой выявило статистически значимое увеличение количества клеток эпителия и лейкоцитов при сравнении с результатами, полученными у не леченых особей группы №2,
что может косвенно указывать на противовоспалительное действие изучаемых образцов. При гистологическом исследовании легочных тканей морских свинок выявлен положительный эффект фитосбора на течение воспалительного процесса в бронхолегочной системе.
Анализ результатов исследования муколитических свойств фитосбора и спиртового экстракта фиалки одно-
цветковой показал меньшее количество приступов кашля при применении растительного сбора.
При исследовании острой токсичности травяного сбора выявлено, что данный настой в соотношении 1:1,5 с водой не обладает острой токсичностью при внутрижелудочном введении белым крысам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственная фармакопея СССР. - Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - XI изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.
2. Коржевский Д.Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов. - СПб.: Кроф, 2005. - 48 с.
3. Мартынов А.М., Чупарина Е.В. Содержание и состав полисахаридных комплексов, макро- и микроэлементов Viola uniflora (Violaceae) // Растительные ресурсы. - 2009. - Т.
45. Вып. 4. - С.67-73.
4. Мартынов А.М., Собенин А.М. Полифенольные соединения и аминокислоты надземной части Viola uniflora // Растительные ресурсы. - 2011. - Т. 47. Вып. 2. - С.118-122.
5. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA.
- М.: Медиа Сфера, 2002. - 312 с.
6. Руководство по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У Хабриева. -2-изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - 832 с.
Информация об авторах: Соседова Лариса Михайловна - д.м.н., профессор, заведующий лабораторией, e-mail: tox_lab@mail.ru; Мартынов Альберт Михайлович - к.ф.н., доцент кафедры, 664049, г. Иркутск, м-н Юбилейный, 100, ГБОУ ДПО ИГМАПО, кафедра фармации, тел. (3952) 46-53-26, e-mail: martinov_irk@mail.ru;
Капустина Елена Александровна - к.м.н., научный сотрудник лаборатории;
Титов Евгений Алексеевич - к.б.н., научный сотрудник
© ХОБРАКОВА В.Б., НИКОЛАЕВ С.М. - 2013 УДК: 615.322
ВЛИЯНИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ЭКСТРАКТА «ФИТОУРОСЕПТ» НА ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ
Валентина Бимбаевна Хобракова1, Сергей Матвеевич Николаев1-2 ('Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов; 2Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра клинической фармакологии, зав. - д.м.н., проф. Н.В. Верлан)
Резюме. Установлена иммуномодулирующая активность комплексного растительного средства - сухого экстракта «Фитоуросепт» в реакции пролиферации Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей в экспериментах in vitro. Показано, что испытуемое средство в концентрации 4,0 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов.
Ключевые слова: сухой экстракт «Фитоуросепт», иммуномодулятор, пролиферация, Т-лимфоцит, В-лимфоцит, митоген.
THE INFLUENCE OF THE PLANT EXTRACT “PHYTOUROSEPT" ON THE Т- AND В-LYMPHOCYTE PROLIFERATIVE ACTIVITY
V.B. Khobrakova1, S.M. Nikolaev1,2 ('Institute of General and Experimental Biology of SD RAS, Ulan-Ude;
2Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education, Irkutsk, Russia)
Summary. The immunomodulating activity of the complex plant extract “Phytourosept” in the reaction of proliferation of T- and В-lymphocytes obtained from mouse spleen has been established in experiments in vitro. It has been shown that the dry extract “Phytourosept” in the concentration of 4,0 mkg/ml stimulates proliferative activity of T- and В-lymphocytes.
Key words: the dry extract “Phytourosept”, immunomodulator, proliferation, Т-lymphocyte, В-lymphocyte, mitogen.
В настоящее время лечение заболеваний, в патогенез которых вовлекается иммунная система, остается сложной задачей. Применяемые методы терапии либо недостаточно эффективны, либо сопровождаются развитием тяжелых побочных реакций. Использование препаратов природного происхождения представляется перспективным направлением дальнейшего развития и совершенствования методов иммунокоррекции и иммунореабилитации. В последние годы значительно возрос интерес к средствам из лекарственных растений, для большинства из которых характерно отсутствие выраженных побочных эффектов и низкая токсичность благодаря содержанию в них комплекса биологически активных веществ [1,2,3]. Многокомпонентные растительные сборы привлекают внимание гармоничным сочетанием биологически активных веществ, широким спектром их фармакологического действия. Объектом настоящего исследования явился сухой полиэкстракт «Фитоуросепт» (условное название) (зарегистрирован как БАД к пище «Арура-Тан №4»), пред-
ставляющий собой сухой экстракт из травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.), листьев толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.), брусники обыкновенной (Vaccinium vitis-idaea L.), крапивы двудомной (Urtica dioica L.) и цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.) в соотношении 3,0:2,0:2,0:1,5:1,5 масс. частей. В состав полиэкстракта входит сумма экстрактивных веществ, представленных комплексом веществ полифенольной природы (флаво-ноиды: апигенин, лютеолин, кверцитин, рутин, гиперозид, мирицетин; фенолкарбоновые кислоты: хлорогеновая, галловая; фенологликозид арбутин). Содержание флавоноидов в пересчете на гиперозид - не менее 2%, фенологликозидов в пересчете на арбутин - не менее 12%.
Целью настоящего исследования явилось определение влияния сухого полиэкстракта «Иммунополифит» на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro.
