CC BY
244
Химия растительного сырья. 2012. №2. С. 51-62.
Низкомолекулярные соединения
УДК 543.544:543.80:543.42:547.572.3:546.56
ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОВ СИНТЕЗА, СТРОЕНИЯ И СВОЙСТВ КОМПЛЕКСОВ ФЛАВОНОИДОВ С ИОНАМИ МЕТАЛЛОВ. СООБЩЕНИЕ 1. СИНТЕЗ И УСТАНОВЛЕНИЕ СТРОЕНИЯ КОМПЛЕКСОВ И СОЛЕЙ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА С ЦИНКОМ, МЕДЬЮ (II) И КАЛЬЦИЕМ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ
© Н.Н. Трофимова1, В.А. Бабкин1, Т.И. Вакульская1, Е.В. Чупарина2
1 Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения РАН, ул. Фаворского, 1, Иркутск, 664033 (Россия), e-mail: natrof@irioch.irk.ru 2Институт геохимии им. А.П. Виноградова Сибирского отделения РАН, ул. Фаворского, 1А, Иркутск, 664033 (Россия)
При взаимодействии дигидрокверцетина (+)-(3,5,7,3',4'-пентагидроксифлавонона) с ионами двухвалентных металлов Zn, Cu иСав водных растворах при pH 4-6 получены комплексные соединения и соли, структуры которых установлены на основании данных ИК-, УФ-, ЯМР спектроскопии, данных элементного рентгенофлуоресцентного и термогравиметрического анализа; с помощью электронной микроскопии исследована морфология поверхности и размеры их частиц. Монолигандные бицентрированные комплексы дигидрокверцетина с ионами цинка образуются при координации металла по 3',4'-дигидрокси- и 7-гидрокси-положениям флавононола при pH 6. Билигандные комплексы дигидрокверцетина с цинком формируются с участием катехольного фрагмента при pH 5. Монолигандные комплексы дигидрокверцетина с ионом меди (II) образуются при связывании по 3-0- и 4-С=0- или 5-0- и 4-С=0-положениям при pH 6. При взаимодействии дигидрокверцетина с СаС12 при pH 4-6 происходит соле образование по 7-ОН положению флавоноида.
Ключевые слова: дигидрокверцетин, комплексные соединения дигидрокверцетина с цинком, медью (II), соли дигидрокверцетина с цинком и кальцием, структура, аквакомплексы.
Работа выполнена при финансовой поддержке по проекту №21-11 Программы РАН «Фундаментальные науки - медицине» в 2009-2010 гг.
Введение
Реакции комплексообразования флавоноидов с ионами металлов лежат в основе многих аналитических методов определения флавоноидов и металлов в различных растительных объектах, биологических средах,
фармпрепаратах [1-5], а сами комплексные соедине-Трофимова Наталья Николаевна - старший научный ния да0 проявляют антиоксидангную и антиради-
сотрудник лаборатории химии древесины, кандидат
химических наук, e-mail: natrof@inbox.ru кальную активность in vitro и in vivo, превосходящую
Бабкин ВасилийАнатольевич - заведующий активность исходных флавоноидов [6-Ш].
лабораторией химии древесины, доктор химических Комплексообразование флавоноидов с ионами
металлов обусловлено выраженными электронно-донорными свойствами флавоноидов и их низким
наук, профессор, e-mail: babkin@irioch.irk.ru
Вакульская Тамара Ильинична - ведущий научный сотрудник лаборатории структурной химии, доктор химических наук, e-mail: vti@irioch.irk.ru восстановительным потенциалом (Е7), который для
Чупарина ЕленаВладимировна - старший научный большинства флавоноидов лежит в диапазоне 0,25-
сотрудник лаборатории рентгеновских методов анализа, 0,75 в [10]. Начальной стадией реакции комплексооб-
кандидатхимическихнаук, e-mail: lchup@igc.irk.ru
разования является электрофильная атака иона ме-
* Автор, с которым следует вести переписку.
талла на молекулу флавоноида, с образованием связи лиганда с металлом путем переноса электрона с й?-орби-тали металла на я:*-орбиталь флавонола. Структура образующегося комплексного соединения зависит от характера распределения электронной плотности в лиганде, в частности, от величины заряда на атомах кислорода, где электронная плотность максимальна. Например, в молекуле флавонола наибольший отрицательный заряд расположен на атоме кислорода карбонильной группы (-0,393), заряды на других атомах кислорода находятся в пределах от -0,212 до -0,246, поэтому для флавонола предпочтительна координация по атому кислорода карбонильной группы с образованием комплексов типа МЬ3 или МЬ5 (рис. 1) [11]. При взаимодействии морина с ионами Р1(11), Рс1(11), 2п(11) образуются комплексы со структурами типа МЬ26, которые становятся возможными из-за фиксации кольца В вследствие эффекта координации (рис. 1) [10].
Комплексные соединения флавоноидов с металлами могут отличаться координационным числом, в зависимости от степени валентности металла-комплексообразователя. При образовании двухлигандных комплексов для 5- и ^-элементов присоединение второго лиганда - депротонированного флавонола к центральному атому осуществляется при участии тех же реакционных центров, что и у первого лиганда. У _р-эле-ментов, предполагают авторы работы [11], комплексообразование может идти по смешанному типу, когда второй и/или последующий лиганд вступает в координацию по сайту связывания, отличающемуся от такового в первом лиганде, например, с образованием комплексного соединения типа Ь3МЬ5. Для комплекса квер-цетина с цинком или алюминием (III) показаны монолигандные бицентрованные комплексы, где в одном лиганде присутствуют два различных сайта связывания двух ионов металла - М2 Ь3, 3 4 [12, 13].
Таким образом, структуры и типы образующихся комплексных соединений зависят от особенностей пространственного и электронного строения органического лиганда и иона металла, состояния его электронных оболочек, от природы растворителя и условий проведения реакции (pH, температура и т.д.).
Важным фактором при формировании металлопроизводного флавоноида является pH реакционной среды [14, 15]. Для комплексообразования многих флавоноидов оптимально значение pH, равное 6 [6, 7]. Следует отметить, что в зависимости от pH раствора флавоноиды в реакциях с металлами могут реагировать по типу окисления-восстановления. Так, окисление кверцетина при взаимодействии с ионами Бе3+ происходит в кислой среде при pH 1-2, при взаимодействии с ионами Си2+ - в слабокислой среде при pH 4-5. В обоих случаях окисление кверцетина происходит с участием групп 3'-ОН и 4'-ОН [16].
Установление структуры и стехиометрии комплексных соединений флавоноидов с металлами зачастую представляет собой сложную задачу, для решения которой необходимо привлечение данных различных методов анализа: УФ-у1б, ИК-, ЯМР :Н и ЯМР 13С спектроскопии - для диамагнитных и спектроскопии ЭПР - для парамагнитных образцов, РСА, флюоресцентной рентгеноскопии, циклической вольтампе-рометрии, термогравиметрии и некоторых других [7, 10]. Тем не менее нередко предполагаемая структура образующихся комплексов нуждается в дополнительной аргументации.
М+
М'
МЬ*
МЬ
НО
ОН О
МЬ
ОН
НО
Рис. 1. Некоторые возможные центры связывания флаванонолов с ионами металлов и обозначения типов комплексных соединений (металл-М, лиганд-Ь)
Работы, посвященные изучению реакций комплексообразования дигидрокверцетина - mpanc-2R,3R-
2,3-дигидро-2-(3,4-дигидроксифенил)-3,5,7-тригидрокси-4Н-1-бензопиран-4-она (1) с солями металлов немногочисленны, и, на наш взгляд, имеется серьезный пробел в однозначном доказательстве типов и структур образующихся соединений. Также представляет определенный интерес исследование устойчивости (термодинамической) комплексных соединений в зависимости от их структурных типов, а также выяснения вопроса о наличии корреляций биологическая активность - структура комплекса.
Цель данной работы - одностадийный синтез в водных растворах при pH 4-6 металлопроизводных флавононола дигидрокверцетина с солями цинка, меди (II), кальция и установление структуры и типов образующихся соединений.
Экспериментальная часть
Температуры плавления определяли на приборе Boetius. УФ-спектры получали на спектрометре PerkinElmer Lambda 35 UV/VIS, в кюветах /=1,0, 0,1 мм. Растворы приготовлены в концентрации 0.05 мг в 100 мл ДМСО и в этаноле. ИК-спектры записывали на приборе Bruker Vertex 70 в таблетке с KBr (2.5 мг/300 мг KBr). Спектры ЯМР 'Н и 13С образцов регистрировали на приборе Bruker DPX 400 с рабочей частотой 400 и 100 МГц, соответственно, спектры электронного парамагнитного резонанса - на ЭПР-спектрометре ELEXSYS E580 (Bruker) в непрерывном режиме при комнатной температуре. Рентгенофлуоресцентный анализ выполнен на рентгеновском спектрометре S4 Pioneer (Bruker AXS, Germany), рентгеновская трубка с Rh-анодом, напряжение 50 кВ, сила тока 40 мА. Излучатель к РФА прессовали в виде двухслойного диска из высушенного материала производных дигидрокверцетина на подложке из борной кислоты. Обработку результатов измерений выполняли, используя программное обеспечение спектрометра SPECTRA plus. Электронная микроскопия выполнена на приборах ТЭМ-200 и Quanta 5000 Центра коллективного пользования ИНЦ СО РАН (ЛИН СО РАН). рН-Метрию проводили на приборе Эксперт-001. Термограммы снимали на дериватографе Q-1500 (MOM, Венгрия), навеска образца 50 мг, скорость нагрева 10° /мин, чувствительность ДТА-1/10. Вещество сравнения для ДГА - Al2O3, атмосфера - воздух.
Для синтеза металлопроизводных на основе дигидрокверцетина в качестве исходных реагентов использовали дигидрокверцетин производства ИНПФ ООО «Химия древесины», выделяемый из древесины лиственницы по технологии [17] и водорастворимые соли - ZnCl2, ZnSO4-7H20, Zn(CH3COO)2, Cu(CH3C00)2, CaCl2, классификации х.ч.
Очистка дигидрокверцетина. (+)-Дигидрокверцетин 1 очищали перекристаллизацией из горячей воды, высушивали в сушильном шкафу при температуре 50 °С до влажности не более 7%, а затем при температуре 105 °С до постоянной массы. Его индивидуальность подтверждали соответствием т. пл. 238 °С с [18], а также данными ВЭЖХ (данные любезно предоставлены к.х.н. Л.А. Остроуховой). В УФ-спектре 1 имеются полосы поглощения при Xmin 247 нм, Xmax 292 нм, плечо 320-327 нм. По данным термогравиметрического анализа дигидрокверцетин представляет собой кристаллогидрат состава дигидрокверцетин: вода (1 : 2, мольное соотношение).
Условия синтезов комплексных соединений дигидрокверцетина с цинком и медью (II). Водные растворы эквимольных частей (+)-дигидрокверцетина и солей цинка и меди (1 : 1, 1 : 2, моль) нагревали при температуре кипения водяной бани в круглодонной колбе с обратным холодильником в течение 1 ч при контроле pH 5-6 раствора в начале и в конце реакции. После остывания раствора до комнатной температуры образовывался осадок, который отфильтровывали на стеклянном пористом фильтре под вакуумом, промывая сначала горячей водой, затем ацетоном для удаления следов исходного дигидрокверцетина. Осадок высушивали в сушильном шкафу при температуре 50 °С до влажности не более 7%, а затем при температуре 105 °С до постоянной массы. Получены соединения 2-8.
Соединение 2. Выход 79%, нерастворимо в воде, этаноле, ацетоне, растворимо в ДМСО. Т. пл. 237241 °С. Найдено, %: С 51,2; Н 5,3; Zn 18,6. Найдено по данным элементного РФА,%, Zn 19,12. Вычислено, %: С 49,3; Н 3,3; Zn 19,0; М 684. Брутто-формула Ci5H3i02iZn2, УФ-спектр (ДМСО, Xmax, нм): 291, 334 плечо, 386 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3418, 3254 (ОН), 1614 (-С=0), 1599, 1445 (-С=С- Ar), 1366, 1265 (-С-0-С-), 608, 619 (-0-М). ЯМР 1Н (400 МГц, ДМСО-dfe 5, м.д., J/Гц): 4,38 (1Н, д, JH3/H2=10,7 Гц, Н-3), 4,85 (1Н, д, JH3/H3=10,7 Гц, Н-2), 5,57 (с, ОН-3), 5,79 (1Н, уш.с, Н-8), 5,81 (1Н, уш.с, Н-6), 6,68 (2Н, с, Н-5', Н-6'),
6,79 (1Н, с, Н-2'), 9,04 (уш. с, ОН-3'), 11,78 (с, ОН-5). ЯМР 13С (100 МГц, flMCO-d6): 71,27 (С-3), 82,76 (С-2),
94.97 (С-8), 96,01 (С-6), 99,98 (С-4а), 115,25 (С-5'), 114,92 (С-2'), 119,26 (С-6'), 127,72 (С-1'), 144,71 (С-3'), 145,52 (С-4'), 162,26 (С-8а), 163,01 (С-5), 167,15 (С-7), 197,06 (С-4).
Соединение 3. Выход 74%, нерастворимо в воде, этаноле, ацетоне, растворимо в ДМСО. Т. пл. 228230 “С. Найдено, %: С 61,2; Н 4,02; Zn 9,16. Найдено по данным элементного РФА, %: Zn 21,02. Вычислено, %: С 29,4; Н 5,07; Zn 21,24; М 612. Брутто-формула C15H31017Zn2,y®-cneKTp (ДМСО, Xmax, нм): 291, 333 плечо, 386 плечо. ИК-спекгр (KBr, v, см-1): 3391 (ОН), 1638, 1611 (-С=0), 1591, 1449 (-С=С- Ar), 642 (-0-М). ЯМР 1Н (400 МГц, ДМС0^6, 5, м.д., J/Гц): 4,47 (1Н, д, JH3/H2=11,1 Гц, Н-3), 4,95 (1Н, д, JH3/H3=11,1 Гц, Н-2), 5,69 (с, ОН-3), 5,84 (1Н, уш.с, Н-8), 5,89 (1Н, уш.с, Н-6), 6,74 (2Н, с, Н-5', Н-6'), 6,87 (1Н, с, Н-2'), 8,99 (уш.с, ОН-3'), 11,88 (с, ОН-5). ЯМР 13С (100 МГц, ДМС0^6): 71,27 (С-3), 82,76 (С-2), 94,97 (С-8), 96,01 (С-6),
99.98 (С-4а), 115,25 (С-5'), 114,92 (С-2'), 119,26 (С-6'), 127,72 (С-1'), 144,71 (С-3'), 145,52 (С-4'), 162,26 (С-8а), 163,01 (С-5), 167,15 (С-7), 197,06 (С-4).
Соединение 4. Выход 68%, нерастворимо в воде, этаноле, ацетоне, растворимо в ДМСО. Т. пл. 255260 “С (с разложением). Найдено, %: С 46,2; Н 3,63; Zn 7,0. Найдено по данным РФА, %: Zn 29,39. Вычислено, %: С 41,7; Н 2,3; Zn 30,1; М 432. Брутто-формула C15H1007Zn2. УФ-спектр (ДМСО, Xmax, нм): 291, 333 плечо, 386 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3577, 3420 (ОН), 1592, 1555 (-С=0 связан.), 1442, (-С=С- Ar), 612, 646 (-0-М). ЯМР 1Н (400 МГц, ДМСО-dfe 5, м.д., J/Гц): 4,46 (1Н, д, JH3/H2=10,8 Гц, Н-3), 4,95 (1Н, д, JH3/H3=10,8 Гц, Н-2), 5,73 (с, ОН-3), 5,83 (1Н, уш.с, Н-8), 5,88 (1Н, уш.с, Н-6), 6,73 (2Н, с, Н-5', Н-6'), 6,86 (1Н, с, Н-2'), 8,99 (уш. с, ОН-3'), 11,87 (с, ОН-5). ЯМР 13С (100 МГц, ДМС0^6): 71,01 (С-3), 82,53 (С-2), 94,57 (С-8), 95,62 (С-6), 99,88 (С-4а), 114,7 (С-2', 5'), 119,08 (С-6'), 127,48 (С-1'), 144,39 (С-3'), 145,20 (С-4'), 162,00 (С-8а), 162,75 (С-5), 166,41 (С-7), 196,95 (С-4).
Соединение 5. Выход 70%, нерастворимо в воде, этаноле, ацетоне, растворимо в ДМСО. Т. пл. 228230 “С. Найдено, %: С 54,3; Н 4,5; Zn 3,9. Найдено по данным РФА, %: Zn 8,8. Вычислено, %: С 48,3; Н 4,03; Zn 8,7; М 745. Брутто-формула C30H30018Zn. УФ-спектр (ДМСО, Xmax, нм): 291 , 334 плечо, 386 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3420 (ОН), 1633 (-С=0 своб.), 1617 (-С=0 связан.), 610, 646 (-0-М). ЯМР 1Н (400 МГц, ДМСО-de, 5, м.д., J/Гц): 4,43 (1Н, д, JH3/H2=11,2 Гц, Н-3), 4,89 (1Н, д, Jh3/h3=11,2 Гц, Н-2), 5,26 (с, ОН-3), 5,80 (1Н, уш.с, Н-8), 5,85 (1Н, уш.с, Н-6), 6,69 (2Н, с, Н-5', Н-6'), 6,82 (1Н, с, Н-2'), 11,75 (с, ОН-5). ЯМР 13С (100 МГц, flMCO-de): 71,01 (С-3), 82,53 (С-2), 94,57 (С-8), 95,62 (С-6), 99,88 (С-4а), 114,7 (С-2', С-5'), 119,08 (С-6'), 127,48 (С-1'), 144,39 (С-3'), 145,20 (С-4'), 162,00 (С-8а), 162,75 (С-5), 166,41 (С-7), 196,95 (С-4).
Соединение б. Выход 60%, растворимо в этаноле, ацетоне, ДМСО. Т. пл. 233-235 “С. Найдено, %: С 56,17; Н 4,9; Zn 6,0. Найдено по данным РФА, %: Zn 6,7. Вычислено, %: С 37,8; Н 5,7; Zn 6,8; М 952. Брутто-формула C30H54030Zn. УФ-спектр (этанол, Xmax, нм): 290, 337 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3387 (ОН), 1637, (-С=0 своб.), 1606 (-С=0 связ.), 1503, 1449 (-С=С- Ar), 642 (-0-М). ЯМР 1Н (400 МГц, ДМСО-dfe 5, м.д., J/Гц): 4,55 (1Н, д, JH3/H2=11,0 Гц, Н-3), 5,03 (1Н, д, JH3/H3=11,0 Гц, Н-2), 5,93 (с, ОН-3), 5,85 (1Н, уш.с, Н-8), 5,97 (1Н, уш.с, Н-6), 6,82 (2Н, с, Н-5', Н-6'), 6,94 (1Н, с, Н-2'), 9,00 (уш. с, ОН-3'), 11,95 (с, ОН-5). ЯМР 13С (100 МГц, flMCO-de): 71,48 (С-3), 82,99 (С-2), 95,10 (С-8), 96,12 (С-6), 100,23 (С-4а), 115,08 (С-5'), 115,21 (С-2'), 119,38 (С-6'), 127,96 (С-1'), 144,68 (С-3'), 145,70 (С-4'), 162,46 (С-8а), 163,24 (С-5), 167,25 (С-7), 197,37 (С-4).
Соединение 7. Выход 79%, нерастворимо в воде, этаноле, ацетоне, растворимо в ДМСО. Т. пл. 286 “С (с разложением). Найдено, %: С 44,2; Н 3,6; Cu 15,4. Найдено по данным РФА, %: Cu 15,2. Вычислено, %: 44,8; 3,7; 15,9; М 402. Брутто-формула C15H15011Cu. УФ-спектр (ДМСО, Xmax нм): 290, 382 плечо, 406 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3414 (ОН), 1617 (-С=0 связ.), 1585, 1447 (-С=С- Ar), 1371, 1265 (-С-0-С-), 605, 620(-0-М).
Соединение 8. Выход 73%, нерастворимо в воде, этаноле, ацетоне, растворимо в ДМСО. Т. пл. 290 “С (с разложением). Найдено, %: С 41,1; Н 4,3; Cu 14,4. Найдено по данным РФА, %: Cu 14,2. Вычислено, %: 41,0; 4,3; 14,6; М 402. Брутто-формула C15H19011Cu. УФ-спектр (ДМСО, Xmax нм): 290, 382 плечо, 406 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3413 (ОН), 1617 (-С=0 связ.), 1572, 1549 (-С=С- Ar), 1261 (-С-0-С-), 619 (-0-М).
Условия синтеза кальциевой соли дигидрокверцетина. Водные растворы эквимольных частей (+)-дигидрокверцетина и CaCl2 (1 : 1, 1 : 2, моль) в условиях синтеза, аналогичных условиям синтезов ком -плексов 2-8, при pH 4-6,
Соединение 9. Выход 85%. Осадок растворим в этаноле, ацетоне, ДМСО. Т. пл. 215 “С. Найдено, %: С 51,33; Н 4,4; Са 5,73, C30H30O18Ca. Найдено по данным РФА, %: Ca 5,5. Вычислено, %: С 50,7; Н 4,23; Са
5,63; М 710. Брутто-формула C30H30O18Ca. УФ-спектр (этанол, Xmax, нм): 216 плечо, 230 плечо, 290, 339 плечо. ИК-спектр (KBr, v, см-1): 3415 (ОН), 1640, 1615(-С=0), 1586, 1476 (-C=C-Ar), 1371, 1265 (-С-0-С-). ЯМР 1Н (400 МГц, ДМСО-dfe 5, м.д., J/Гц): 4,50 (1Н, д, JH3/H2=11,1 Гц, Н-3), 4,97 (1Н, д, JH3/h3=11,1 Гц, Н-2), 5,78 (с, ОН-3), 5,86 (1Н, уш.с, Н-8), 5,91 (1Н, уш.с, Н-6), 6,76 (2Н, с, Н-5', Н-6'), 6,89 (1Н, с, Н-2'), 9,07 (уш. с, ОН-3', ОН-4), 11,86 (с, ОН-5). ЯМР 13С (100 МГц, flMCO-d6): 71,84 (С-3), 83,34 (С-2), 95,30 (С-8), 96,34 (С-6), 100,74 (С-4а), 115,46 (С-5'), 115,58 (С-2'), 119,78 (С-6'), 128,31 (С-1'), 145,20 (С-3'), 146,02 (С-4'), 162,81 (С-8а), 163,58 (С-5), 167,06 (С-7), 197,86 (С-4).
Обсуждениерезультатов
На основе дигидрокверцетина (1) и водорастворимых солей ZnCl2, ZnSO4-7H20, Zn(CH3COO)2-2H20, Cu(CH3COO)2, CaCl2 синтезированы комплексные соединения дигидрокверцетина с ионами Zn2+, Cu2+, а также соль дигидрокверцетина с Са2+ (схема).
Все синтезы выполнены в одну стадию, в водных растворах, с количественными выходами продуктов 60-80%. Комплексные соединения дигидрокверцетина с металлами представляют собой нераствори-мые в воде и спиртах, но растворимые в диметилсульфоксиде порошкообразные вещества. Некоторые из них при нагревании выше 280 °С плавятся с разложением. Солевые продукты дигидрокверцетина с кальцием хорошо растворяются в спиртах и ацетоне, имеют четкие т. пл.
2. (H2O)n+m=14
3. (H2O)n+m=10
4. (H2O)n+m=Q
6. (H2O)n=16
Синтез комплексных соединений и соли дигидрокверцетина
В УФ-спектрах комплексных соединений дигидрокверцетина с 2п2+ 2-6, снятых в ДМСО, кроме полосы поглощения с максимумом при 291 нм наблюдается появление небольших перегибов при 334 и 386 нм. В УФ-спектрах производных дигидрокверцетина с Си2+ 7 и 8 также присутствуют перегибы, но они смещены в еще более длинноволновую область - при 382 и 406 нм. В работе [19] в ИК-спектрах комплексных соединений дигидрокверцетина с медью приведены полосы поглощений при 780 нм, которые отсутствуют в УФ-спектрах комплексных соединений 7 и 8. В целом в УФ-спектры комплексных соединений 2-8 практически не отличаются от спектра исходного дигидрокверцетина, за исключением перегибов, проявляющихся в более длинноволновой области спектра и указывающих, что ион металла включается в систему флавоноида [1, 15].
В ИК-спектрах комплексов дигидрокверцетина с ионами металлов о координации флавоноида с ионом металла могут свидетельствовать следующие данные. Связывание металла с лигандом характеризуется появлением полосы поглощения при 605-645 см-1, обусловленной валентными колебаниями связи V (М-О) [13]. Для всех комплексов отмечено появление полос V (М-О) в диапазоне 603-622 см-1, что говорит о присутствии металла в составе комплексного соединения.
Кроме того, в ИК-спектрах комплексных соединений информативными являются положения полос поглощения карбонильной и гидроксильных групп. По литературным данным [1], для свободной карбонильной группы в молекуле флавоноида характерно положение полосы поглощения при у(С=0)св - 16581682 см-1, и в случае ее связывания - смещение на ~30-50 см-1 в область низких частот.
Поглощению свободных гидроксильных групп в ИК-спектре флавоноидов соответствует широкая интенсивная полоса в области 3500-3550 см-1, поглощению гидроксильных групп, связанных внутримолекулярными водородными связями - полоса в области 3400-3406 см-1, а межмолекулярными водородными связями - полоса при 3250 см-1.
В ИК-спектрах комплексов дигидрокверцетина с цинком присутствуют полосы при 1633-1640 см-1, характерные для положения свободной карбонильной группы. Это указывает на то, что кислородный атом карбонильной группы не участвует в стабилизации координационной связи иона цинка с атомами кислорода в 3-ОН или 5-ОН группах. В спектрах комплексов 2, 3, 5 и 6 полосы поглощения свободных гидроксильных групп значительно смещены в область более низких частот, что свидетельствует о наличии меж-молекулярных водородных связей, что наряду с интенсивной полосой поглощения при 3250 см-1 указывает на присутствие в молекуле координационной воды. В ИК-спектре безводного продукта 4 полоса поглощения гидроксильной группы проявляется при 1593 см-1.
Значения химических сдвигов сигналов атомов водорода и углерода в ЯМР ’Ни 13С спектрах соединений 2-6 при сопоставлении их с таковыми для дигидрокверцетина [18] свидетельствуют о нативности структуры исходного флавоноида. Это подтверждает, что при данных условиях протекает только реакция комплексообразования, исключая протекание других процессов, таких как окисление, рацемизация и т.д.
Наиболее существенными для определения положения, по которому осуществляется связывание иона металла с кислородным атомом гидроксильной группы флавоноидного лиганда, являются сигналы протонов гидроксильных групп в спектрах ЯМР :Н металлокомплексов.
В спектрах ЯМР :Н продуктов 2, 3 и 4 отсутствует сигнал при 5 10,2-10,7 м.д., принадлежащий протону от 7-ОН группы, а в спектрах комплексов 5 и 6 неразрешенный сигнал в виде уширенного синглета в области 9.0-9.3 м.д., принадлежащий протонам 3'-, 4'-ОН групп в кольце В, претерпевает изменения, выражающиеся в уменьшении площади сигнала по сравнению с его площадью в спектре дигидрокверцетина, за счет депротонирования одной из рассматриваемых гидроксильных групп, предпочтительно являющейся, по литературным данным, 4'-ОН группой [7].
Стехиометрический состав комплексных соединений был определен на основании содержания цинка, углерода и водорода, выявленных с помощью элементного и рентгенофлуоресцентного анализов (РФА). Запись рентгеновского спектра образцов показала наличие в них пиков основных линий 2п и отсутствие каких-либо линий других элементов. По программе количественного анализа произведен расчет содержания цинка. Определение количества связанной воды в составе комплексного соединения произведено на основании термогравиметрии по убыли массы образца при его нагревании в интервале температур от 25 до 650 °С.
Таким образом, на основании приведенных выше данных установлены структуры аквакомплексных соединений монолигандного бицентрированного типа (7-О2п,4'-О2п-Ь)-(Н2О)м для комплекса 2 (здесь и далее Ь - лиганд-депротонированный дигидрокверцетин) и (7-О2п,4'-О2п-Ь)-(Н2О)10 для комплекса 3 и аквакомплексов билигандного типа (4'-О-Ь)2п(4'-О-Ь)-(Н2О)4 для 5 и (7-О-Ь)2п(4'-О-Ь)-(Н2О)16 комплек-
сов 6. Продукту взаимодействия дигидрокверцетина и ацетата цинка 4 соответствует состав комплекса и молекулярная масса монолигандного безводного комплекса типа (7-О2п,4 '-О2п-Ь). Монолигандные ком -плексы дигидрокверцетина с цинком представляют собой двухкоординированные соединения, в которых одним из центров связывания является катехольный фрагмент кольца В, а вторым центром связывания -кислород гидроксильной группы в 7 положении кольца А. В случае формирования билигандных комплексов дигидрокверцетина с цинком участвуют те же центры связывания без участия атомов кислорода гидроксильных групп в положениях 3 и 5 (схема).
Как было сказано выше, при образовании того или иного типа комплексного соединения дигидрокверцетина с цинком в данных условиях реакции (водные растворы, температура, природа соли) важную роль играет pH среды. Выяснено, что при взаимодействии дигидрокверцетина с хлоридом и сульфатом цинка в водном растворе при pH 5 происходит образование билигандых комплексов, а при значении pH раствора, равном 6, с этими же солями образуются монолигандные комплексы.
Комплексы дигидрокверцетина с медью 7 и 8 получены при pH 6 в виде нерастворимых в воде и в спиртах осадков темного цвета. В УФ-спектрах этих соединений, снятых в ДМСО, кроме полосы поглощения с ^тах 290 нм имеется небольшое плечо при 406 нм. Комплексы в твердом виде обнаруживают парамагнетизм. В спектре ЭПР комплекса 7 имеется характерный сигнал (рис. 2а), соответствующий аксиаль-но-симметричному окружению центрального иона двухвалентной меди с параметрами Гамильтониана gn = 2,2565, g± = 2,0609. В параллельной ориентации проявляется сверхтонкая структура от Си2+ АСи=162
в. Электронная конфигурация 3ё9 (основное состояние 2Б). Отношение g, ,/А, , составляет 127, что попадает в диапазон значений 113-150, определенных для квадратно-плоскостной геометрии [20]. Совокупность этих данных свидетельствует об образовании комплекса, в котором Си2+ включен в координационную сферу М-Ь в качестве центрального иона, во вторую координационную сферу возможно включение молекул воды.
В спектре ЭПР комплекса дигидрокверцетина с медью 8 (рис. 26) обнаруживается аксиальносимметричный сигнал с параметрами Гамильтониана g|| = 2,1985, g^ = 2,0580. Уменьшение величин g-фaктopoв и отсутствие сверхтонкой структуры в параллельной ориентации и сужение сигнала, свидетельствующее об увеличении времени спин-решеточной релаксации по сравнению с таковыми для образца
7, указывает на наличие ковалентного связывания центрального иона меди с лигандами [21].
В ИК-спектрах обоих комплексов дигидрокверцетина с Си2+ положение полосы поглощения свобод -ной карбонильной группы при 1617 см-1 свидетельствует о металлосвязывании флавоноида в бензохромо -новом фрагменте, равновероятно по положениям 3-0-4-С=0 или 5-0-4-С=0 (схема). Таким образом, на основании вышеперечисленных данных, а также данных элементного и РФА анализов комплексам 7 и 8, синтезированным на основе дигидрокверцетина и ацетата меди, приписаны структуры (3 или 5)-ОСи-Ь)- (Н2О)2 и (3 или 5)-ОСи-Ь)(Н2О)4 соответственно (схема).
Продукт реакции дигидрокверцетина с хлоридом кальция представляет собой кальциевую соль, образование которой происходит с участием кислородного атома в 7-положении кольца А (схема, 9). Отсутствие в спектре ЯМР 1Н продукта 9 сигнала протона в области при 8 10,24 м.д. и наличие в ИК-спектре полосы поглощения в области 1640 см-1 свободной карбонильной группы указывает на то, что депротонирование дигидрокверцетина осуществляется за счет гидроксильной группы в 7 положении.
В слабокислой среде при pH 4 при взаимодействии дигидрокверцетина со всеми использовавшимися в синтезах солями цинка идет солеобразование по 7-ОН кольца А, что следует из анализа УФ-, ИК- и ЯМР спектров продуктов. При pH реакционной среды 8-9 дигидрокверцетин с ацетатом цинка в мольном соотношении 1 : 2 окисляется до кверцетина с образованием смеси комплексных соединений дигидрокверцетина и кверцетина с цинком. Это наглядно демонстрирует УФ-спектр продукта данной реакции, где наряду с основным максимумом для дигидрокверцетина при 291 нм появляется новая полоса поглощения при 387 нм, принадлежащая кверцетину [1].
Все комплексные соединения дигидрокверцетина с цинком, медью и кальцием, за исключением одного безводного комплекса 4, равно как и солевые формы дигидрокверцетина, характеризуются различным содержанием кристаллизационной воды. Это можно объяснить тем, что сам исходный дигидрокверцетин, как и многие другие флавоноиды, в кристаллическом состоянии образует многочисленные гидраты и в водных растворах существует в гидратированной форме. Наличие различных гидратированных форм дигидрокверцетина обусловливает и аномалии значений т.пл., [а]с20, а также рентгеноструктурных характеристик, УФ-спектров дигидрокверцетина [22]. Рентгеноструктурным исследованием индивидуального (+)-дигидро-кверцетина показано, что дигидрокверцетин кристаллизуется в хиральной пространственной группе С2 с двумя независимыми молекулами в ячейке и пятью молекулами воды, состава 2С15Н1207-5Н20, при этом массовая доля воды составляет 12,9%, мольная - 71% [23]. Молекулы дигидрокверцетина в кристалле объединены друг с другом и с гидратными молекулами воды межмолекулярными водородными связями в упорядоченный трехмерный ансамбль, с каналами во внутреннем пространстве ансамбля. Кристаллизационная вода удаляется из дигидрокверцетина только при температурах, близких к его температуре плавления (246±1 °С).
Для подтверждения присутствия кристаллогидратной воды в составе комплексных соединений были изучены термограммы дигидрокверцетина и его металлопроизводных. ДСК-термограмма образца исходного дигидрокверцетина (рис. 3а) содержит эндотермический пик, регистрируемый в области температур 210-241 °С, связанный с плавлением образца и происходящий с поглощением теплоты. При этом наблюдается 10%-ная потеря массы образца. Это свидетельствует о содержании в исходном дигидрокверцетине кристаллогидратной воды, прочно связанной с функциональными группами [24], по элиминированию которой определено мольное соотношение воды к дигидрокверцетину как 2 : 1.
Аналогичным образом было определено количественное содержание связанной воды в составе мо-но- и билигандного комплексов 2 и 5 (рис. 26 и в).
С помощью данных просвечивающей и сканирующей электронной микроскопии с зондовым рентгеновским анализом элементов было подтверждено, что синтезированные комплексы дигидрокверцетина с ионами металлов - цинка и меди - представляют собой индивидуальные вещества. Исследование морфологии поверхности веществ по данным сканирующей электронной микроскопии показало, что частицы образца 2 имеют сферическую форму и размеры от 1 до 3 цм (рис. 4). Для частиц безводного комплекса 4 показана также сферическая форма частиц, которые в основном распределены по размерам от 0,8-1,29 и
1,3-1,8 цш - 28 и 36% соответственно (рис. 5). Частицы комплексного соединения 7 имеют форму палочек или трубочек, и более мелкие размеры - в поперечнике от 290 до 370 нм, в длину - приблизительно 2-4 цм (рис. 6). Данные рентгенограмм, полученные сканированием с площади поверхности образца, однозначно свидетельствуют о содержании в составе исследованных комплексов цинка и меди (рис. 4 и 6).
Температура,°С
Температура,°С
Рис. 3. Термограммы и ДСК-термограммы дигидрокверцетина (а), комплекса 2 (б) и комплекса 5 (в)
Рис. 4. Данные сканирующей электронной микроскопии для комплекса 2: а - размеры частиц, увеличение *10000 раз; б - рентгенограмма элементного состава 2
Р аспре деление частиц комплекса IV по размерам
40 п------------------------------------------------------------------
35--------------------------------------------------------------------
30--------------------------------------------------------------------
25------------------------------------------------- -------------
20------------------------------------------------- ------------------
15---------------------——------------ -------- --------------—
10----------------------------------- ------------- -------------
0 ^—------—т—-------—т—-----—т—-------—т—-----1—
0 -0,39 0,4-0,79 0,8-1.29 1,3-1,79 1,8-2,29
Рис. 5. Данные просвечивающей электронной микроскопии для комплекса 4: а - размеры частиц; б - гистограмма распределения частиц комплекса 4 по размерам, цш
а
Рис. 6. Данные сканирующей электронной микроскопии для комплекса 6: а - размеры частиц, увеличение *10000 раз; б - рентгенограмма элементного состава
а
Выводы
При взаимодействии флавононола дигидрокверцетина с солями цинка и меди (7пС12, 7п804-7Н20, 7п(СНзС00Н)2-2Н20, Си(СНзС00Н)2) в водной среде прирН 5-6 получены моно- и билигандные безводные
и аквакомплексные соединения. Структуры полученных соединений установлены на основании данных ИК-, УФ- и ЯМР-спектроскопии, данных элементного, рентгенофлуоресцентного и термогравиметрического анализов. Морфология поверхности, виды и размеры частиц комплексных соединениях выявлены с помощью электронной сканирующей микроскопии. Установлено, что образование координационной связи ме^ду ионами металла и флавоноидом происходит с участием атомов кислорода гидроксильных групп в различных положениях. Образование комплексных соединений дигидрокверцетина с цинком, в зависимости от использовавшейся соли цинка приводит к формированию 7-0- и/или 4'-О- или 3 '-О-центров связывания, а при образовании комплексных соединений с медью задействуются 3-0- и 4-С=0- или 5-0- и 4-С=0-положения в молекуле дигидрокверцетина. При взаимодействии ДКВ с СаС12 происходит солеобразование флавоноида по 7-ОН. Реакции комплексообразования в водной среде чрезвычайно чувствительны к pH, что обусловливает различные варианты связывания иона металла с депротонированным флавоноидом.
Список литературы
1. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The systematic identification of flavonoids. Engl. Berlin; New York, 1970. 354 p.
2. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. М., 1977. 239 с.
3. Satterfield М., Brodbelt J.S. Enhanced detection of flavonoids by metal complexation and electrospray ionization mass spectrometry // Anal. Chem. 2000. Vol. 72, N24. Pp. 5898-5906.
4. Viswanathan Palaniswamy, Sriram Venkataraman, Yogeeswaran Ganesa. Sensitive spectrophotometric assay for 3-hydroxy-substituted flavonoids, based on their binding with molybdenum, antimony, or bismuth // J. Agr. and Food Chem. 2000. Vol. 48, N7. Pp. 2802-2806.
5. Davis B.D., Brodbelt J.S. Determination of the glycosylation site of flavonoid monoglucosides by metal complexation and tandem mass spectrometry // J. Amer. Soc. Mass Spectrom. 2004. Vol. 15, N9. Pp. 1287-1299.
6. De Souza Rubens F.V., De Giovani Wagner F. Synthesis, electrochemical, spectral, and antioxidant properties of complexes of flavonoids with metal ions // Synth. and React. Inorg. and Metal-Org. Chem. 2003. Vol. 33, N7. Pp. 1125-1144.
7. Malesev D., Kuntic V. Investigation of metal-flavonoid chelates and the determination of flavonoids via flavonoid complexing reactions (rewiew) // J. Serb. Chem. Soc. 2007. Vol. 72, N10. Pp. 921-939.
8. Afanas'ev I.B., Ostrakhovitch E.A., Mikhal'chik E.V., Ibragimova G.A., Korkina L.G. Enhancement of antioxidant and anti-inflammatory activities of bioflavonoid rutin by complexation with transition metals // Biochemical Pharmacology. 2001. Vol. 61, N6. Pp. 677-684.
9. Kostyuk V.A., Potapovich A.I., Vladykovskaya E.N., Korkina L.G., Afanas'ev I.B. Influence of metal ions on flavonoid protection against asbestos-induced cell injury // Arch. Biochem. And Biophys. 2001. Vol. 385, N1. Pp. 129-37.
10. Костюк B.A., Потапович А.И. Биорадикалы и биоантиоксиданты. Минск, 2004. 174 c.
11. Рошаль А.Д., Сахно Т.В. Теоретический анализ структуры комплексов 5-гидроксифлавонолов с ионами металлов и производными бора // Вестник Харьковского национального университета. Химия. 2001. Т. 532, вып. 7. С. 123-129.
12. De Souza Rubens F.V., De Giovani Wagner F. Antioxidant properties of complexes of flavonoids with metal ions // Redox Report. 2004. Vol. 9, N2. Pp. 97-104.
13. De Souza Rubens F.V., De Giovani Wagner F. Synthesis, spectral and electrochemical properties of Al(III) and Zn(II) complexes with flavonoids // Specrtochimica Acta. Part A. 2005. Vol. 61, N9. Pp. 1985-1990.
14. Markovic J.M.D., Markovic Z.S., Brdaric T.P., Filipovic N.D. Comparative spectroscopic and mechanistic study of chelation of fisetin with iron in aqueous buffered solutions. Implifications on in vitro antioxidant activity // Dalton trans. 2011. N40. Pp. 4560-4571.
15. Ochocki J., Kasprzak M., Checinska L., Erxleben A., Zuner E., Szmigiero L., Garza-Ortiz A., Reedijk J. Synthesis, single-crystal and solution structure analysis and in vitro cytotoxic activity of two novel complexes of ruthenium(II) with in situ formed flavanone-based ligands // Dalton trans. 2010. N39. Pp. 9711-9718.
16. Копач М., Копач С., Скуба Э. Исследование окислительно-восстановительных реакций кверцетина и кверце-тин-5{'}-сульфоновой кислоты с ионами Fe 3+, Cu 2+ и CH2O2 // Журнал общей химии. 2004. T. 74, №6. С. 1035-1038.
17. Патент 2158598 (РФ). Способ получения дигидрокверцетина / В.А. Бабкин, Л.А. Остроухова, Д.В. Бабкин, Ю.А. Малков // БИ. 2000. № 31.
18. Тюкавкина Н.А., Чертков В.А., Баженов Б.Н., Белобородов В.Л., Селиванова И.А., Саватеев А.М. Физикохимическая характеристика дигидрокверцетина как стандартного образца // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. Фитофарм - 2006: мат. X междунар. съезда. СПб., 2006. С. 338.
19. Мельникова Н.Б., Иоффе И.Д., Царева Л.А. Взаимодействие биофлавоноидов с ацетатом меди(П) в водном растворе // Химия природных соединений. 2002. №1. С. 26-31.
20. Gonzalez-Alvarez M., Alzuet G., Borras J., Macyas B., del Olmo M., Liu-Gonzalez M., Sanz F. Nuclease activity of [Cu(sulfathiazolato)2benzimidazole)2]2MeOH. Synthesis, properties and crystal structure // Journal of Inorganic Biochemistry. 2002. Vol. 89. Pp. 29-35.
21. ИнгрэмД. Электронный парамагнитный резонанс в биологии. М., 1972. 296 с.
22. Зенкевич И.Г., Ещенко Ю.А., Макаров В.Г., Колесник Ю.А., Шматков Д.А., Тихонов В.П., Ташлицкий В.М. Сравнительная характеристика свойств и стереоизомерия дигидрокверцетина // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. Фитофарм-2006: матер. X междунар. съезда. СПб., 2006. С. 93-109.
23. Селиванова И.А. Тюкавкина Н.А., Колесник Ю.А., Нестеров В.Н., Кулешов Л.Н., Хуторянский В.А., Баженов Б.Н., Сайботалов М.Ю. Исследование кристаллической структуры дигидрокверцетина // Химикофармацевтический журнал. 1999. Т. 33, №4. С. 51-53.
24. Вязникова М.Ю., Николаева С.С., Быков В.А., Яковлева Л.В., Руленко И.А., Тюкавкина Н.А., Колесник Ю.А. Исследование состояния воды в стандартном образце дигидрокверцетина и в новом фитопрепарате дикверти-не // Химико-фармацевтический журнал. 1997. Т. 31, №2. С. 42-45.
Поступило в редакцию 12 июля 2011 г.
Trofimova N.N.1*, Babkin V.A.1, Vakul'skaya T.I.1, Chuparina E.V.2 THE STUDY OF SYNTHESIS, STRUCTURE AND PROPERTIES OF FLAVONOID COMPLEXES WITH METAL IONS. 1. SYNTHESIS AND STRUCTURE ELUCIDATION OF COMPLEXES AND SALTS OF DIHYDROQUERCETIN WITH ZINC, CUPPER (II) AND CALCIUM IN AQUEOUS SOLUTIONS
1A.E. Favorsky Irkutsk Institute of Chemistry, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences. Favorsky Str., 1, Irkutsk, 664033 (Russia), e-mail: natrof@irioch.irk.ru
2A.P. Vinogradov Institute of Geochemistry, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences. 1A Favorsky Str., Irkutsk, 664033 (Russia)
Flavonoid complexes and salts were synthesized by the interaction of dihydroquercetin (+)-(3,5,7,3',4'-penta-hydroxyflavone) with bivalent metal ions Zn, Cu and Ca in aqueous solutions at pH 5-6. Structures of the complexes were established by IR, UV, NMR techniques, as well as the data of element roentgen-fluorescent and term gravimetric analyses. The morphology of square and size of parts were investigated by electron microscopy method. Monoligand bimetal-nuclear dihydroquercetin complexes with zinc ions were formed with participation of the 3',4'-dihydroxy- and 7-OH groups of flavonoid as chelating sites in aqueous solutions at pH 6. Biligand complexes of dihydroquercetin with zinc ions were formed involving the catehol fragment in the bonding metal at pH 5. Monoligand complexes were formed due to the interaction of the 3-0- n 4-C=0-or 5-0- and 4-C=0-sites of dihydroquercetin with cupper (II) ion at pH 6. The 7-OH dihydroquercetin salt formation occured when dihydroquercetin reacted with CaCl2 in aqueous solution at pH 4-6.
Keywords: dihydroquercetin, complexes of dihydroquercetin with zinc, cupper (II) ions, salts of dihydroquercetin with zinc and calcium ions, structures, aquacomplexes.
Referenses
1. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The systematic identification of flavonoids. Engl. Berlin; New York, 1970. 354 p.
2. Blazhei A., Shutyi L. Fenol'nye soedineniia rastitel'nogo proiskhozhdeniia. [Phenolic compounds of plant origin]. Moscow, 1977. 239 p. (in Russ.).
3. Satterfield M., Brodbelt J.S. Anal. Chem., 2000, vol. 72, no. 24, pp. 5898-5906.
* Corresponding author.
4. Viswanathan Palaniswamy, Sriram Venkataraman, Yogeeswaran Ganesa. J. Agr. and Food Chem., 2000, vol. 4S, no 7, pp. 2S02-2S06.
5. Davis B.D., Brodbelt J.S. J. Amer. Soc. Mass Spectrom., 2004, vol. 15, no. 9, pp. 12S7-1299.
6. De Souza Rubens F.V., De Giovani Wagner F. Synth. and React. Inorg. and Metal-Org. Chem., 2003, vol. 33, no. 7, pp. 1125-1144.
7. Malesev D., KunticV. J. Serb. Chem. Soc., 2007, vol. 72, no. 10, pp. 921-939.
S. Afanas'ev I.B., 0strakhovitch E.A., Mikhal'chik E.V., Ibragimova G.A., Korkina L.G. Biochemical Pharmacology, 2001, vol. 61, no. 6, pp. 677-6S4.
9. Kostyuk V.A., Potapovich A.I., Vladykovskaya E.N., Korkina L.G., Afanas'ev I.B. Arch. Biochem. And Biophys., 2001, vol. 3S5, no. 1, pp. 129-37.
10. Kostiuk V.A., Potapovich A.I. Bioradikaly i bioantioksidanty. [Bioradicals and bioantioxidants]. Minsk, 2004, 174 p.
11. Roshal' A.D., Sakhno T.V. Vestnik Khar'kovskogo natsional'nogo universiteta. Khimiia, 2001, vol. 532, no. 7, pp. 123-129.
12. De Souza Rubens F.V., De Giovani Wagner F. Redox Report., 2004, vol. 9, no. 2, pp. 97-104.
13. De Souza Rubens F.V., De Giovani Wagner F. Specrtochimica Acta. Part A., 2005, vol. 61, no. 9, pp. 19S5-1990.
14. Markovic J.M.D., Markovic Z.S., Brdaric T.P., Filipovic N.D. Dalton trans., 2011, no. 40, pp. 4560-4571.
15. 0chocki J., Kasprzak M., Checinska L., Erxleben A., Zuner E., Szmigiero L., Garza-0rtiz A., Reedijk J. Dalton trans., 2010, no. 39, pp. 9711-971S.
16. Kopach M., Kopach S., Skuba E. Zhurnal obshchei khimii, 2004, vol. 74, no. 6, pp. 1035-103S. (in Russ.).
17. Patent 215S59S (Russia). V.A. Babkin, L.A. 0stroukhova, D.V. Babkin, Iu.A. Malkov. 2000. (in Russ.).
1S. Tiukavkina N.A., Chertkov V.A., Bazhenov B.N., Beloborodov V.L., Selivanova I.A., Savateev A.M. Aktual'nye problemy sozdaniia novykh lekarstvennykh preparatov prirodnogo proiskhozhdeniia. Fitofarm - 2006: mater. Xmezhdunar. s"ezda. [Actual problems of new drugs of natural origin. Phytopharm - 2006: proc. X Int. Symp.]. St.Peterburg, 2006, p. 33S. (in Russ.).
19. Mel'nikova N.B., Ioffe I.D., Tsareva L.A. Khimiiaprirodnykh soedinenii, 2002, no. 1, pp. 26-31. (in Russ.).
20. Gonzalez-Alvarez M., Alzuet G., Borras J., Macyas B., del 0lmo M., Liu-Gonzalez M., Sanz F. Journal of Inorganic Biochemistry, 2002, vol. S9, pp. 29-35.
21. Ingrem D. Elektronnyi paramagnitnyi rezonans v biologii. [Electron Paramagnetic Resonance in Biology]. Moscow, 1972, 296 p.
22. Zenkevich I.G., Eshchenko Iu.A., Makarov V.G., Kolesnik Iu.A., Shmatkov D.A., Tikhonov V.P., Tashlitskii V.M. Aktual'nye problemy sozda-niia novykh lekarstvennykh preparatov prirodnogo proiskhozhdeniia. Fitofarm - 2006: mater. X mezhdunar. s"ezda. [Actual problems of new drugs of natural origin. Phytopharm - 2006: proc. X Int. Symp.]. St. Peterburg, 2006, pp. 93-109. (in Russ.).
23. Selivanova I.A. Tiukavkina N.A., Kolesnik Iu.A., Nesterov V.N., Kuleshov L.N., Khutorianskii V.A., Bazhenov B.N., Saibotalov M.Iu. Khimiko-farmatsevticheskii zhurnal, 1999, vol. 33, no. 4, pp. 51-53. (in Russ.).
24. Viaznikova M.Iu., Nikolaeva S.S., Bykov V.A., Iakovleva L.V., Rulenko I.A., Tiukavkina N.A., Kolesnik Iu.A. Khimiko-farmatsevticheskii zhurnal, 1997, vol. 31, no. 2, pp. 42-45. (in Russ.).
Received July 12, 2011
