CC BY
25
В.М. Коробко, Н.Б. Мельникова
ИССЛЕДОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА НИТРОКСИД-ГЕНЕРИРУЮЩЕГО ПРОТИВООЖОГОВОГО ПОРОШКА
ФГБОУ ВО «Нижегородская государственная медицинская академия» Минздрава России, Нижний Новгород, Россия
На основе УФ-спектральных исследований показано, что в водном растворе, содержащем 5-нитрофурал, натрия аскорбат и цитохром с, образуются нитрозильные комплексы, аналогичные комплексам NO с цитохромом с. Предложен состав противоожогового порошка: 5-нитрофурал; cyt с; АА или NaAsc; цинка оксид; крахмал картофельный, удовлетворяющий требованиям ГФ 12 ч.2 по: сыпучести, насыпной массе, степени измельчения порошка. Эффективность препарата доказана в эксперименте на крысах на модели ожоговой раны.
Ключевые слова: нитроксид-генерирующий порошок, лечение ожогов
It has been shown by using UV-vis spectra, that nitrosyl complexes of cytochrome c similar complexes of NO with cytochrome c were formed in an aqueous solution, when 5- nitrofural and sodium ascorbate were added. A powder formulation containing: 5-nitrofural; cytochrome c; ascorbic acid or sodium ascorbate, zinc oxide, potato starch, was developed. The powder required by Russian State Pharmacopeia by: flowability, bulk weight, fineness of the powder. Pharmacological activity of drug was demonstrated in experiments with rats by using a model of burn wound.
Key words: nitroxide-generating powder, burn treatment
Введение. В настоящее время интерес вызывают лекарственные средства (ЛС), содержащие в своем составе NO-донирующий фрагмент, способный высвобождать NO под действием железосодержащих металлопротеинов. Цитохром с, обладающий антиоксидантными и антигипоксантными свойствами и способный образовывать нитрозильные комплексы с монооксидом азота, является перспективным компонентом для создания ранозаживляющих препаратов на основе нитритов, нитратов и других нитроксид-генерирующих соединений.
Ранее, в работах Григорьева и Арзамасцева продемонстрирована возможность генерации NO из нитрофуранов в присутствии калия феррицианида и аскорбиновой кислоты [1,2].
В настоящей работе изучены свойства и фармакологическая активность противоожогового порошка с NO-донирующим компонентом из класса 5-нитрофуранов и цитохромом с.
Материалы и методы исследования. «Цитохром с» (из сердца лошади) (>95%, lot STBB7839V, «Fluka» (USA) «Sigma-Aldrich»), нитрофурал (>97%, «Aldrich» (USA) «Sigma-Aldrich», Product Number: 59870), натрия аскорбат (>99%, lot BCBJ1585V, «Fluka» (USA), «Sigma-Aldrich»), набор для определения метаболитов NO (Nitrite/Nitrate assay kit colorimetric) lot BCBQ 5244V, (Japan) «Sigma», Product Number 23479, оксид цинка (ГОСТ 10262-73), крахмал (>95%, , «Fluka» (USA) «Sigma-Aldrich», Product Number: 9005-25-8).
Электронные спектры поглощения были получены на приборе «Bioline Specord S-100» (Analytik Jena, Germany) в области 190-600 нм.
Медико-биологические исследования. Фармакологическую активность композиции исследовали в соответствии с руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (А.Н. Миронов, 2012) на крысах-самцах линии Вистар массой (M±s) 200±2,6 г. Контактный термический ожог нанесен под наркозом (площадь - 20% поверхности тела). После моделирования термической травмы животным основной группы в течение 10 дней на раневую поверхность наносили ранозаживляющий препарат.
Результаты работы и их обсуждение. UV-Vis анализом показано, что при взаимодействии 5-нитрофурала, нитроксолина, метронидазола, а также натрия нитрита NaNO2 с cyt с (cyt с3+) в присутствии избытка аскорбиновой кислоты (АА) или натрия аскорбата (NaAsc) в растворе образуются комплексы cyt с2+ с нитропрепаратами, аналогично нитрозильным комплексам монооксида азота с cyt с (рис. 1).
Рис. 1. Электронные спектры реакционных смесей, содержащей растворы 1-10-5 М cyt с и 540-4 М NaAsc;
а) с концентрацией 5-нитрофурала (М): 1 - С=0; 2 - С=3 •lO-5; 3 - С=6-10-5.
X, нм
Комплексообразование cyt c2+ с нитропрепаратами и затем с NO в реакционной смеси в течение первых 10 минут было подтверждено определением общей концентрации [NOX], которая равна 15±5,4 цМ при C5-NO2Ф = 30 цМ и 22±5,8 цМ при C5-NO2Ф = 60 цМ, соответственно.
Эти результаты позволили нам предложить ЛФ, содержащую нитропрепараты и cyt с в виде порошка для лечения ожогов следующего состава (масс. %): 5-нитрофурал 0,5-5,0; cyt с 0,05-0,1; АА или NaAsc 0,1-1,0; цинка оксид 0,1-1,0; крахмал картофельный до 100 г. Показано, что порошок удовлетворяет требованиям ГФ 12 ч.2 по: сыпучести - от 3,93 до 4,05 г/с; насыпной массе - 0,885-0,890 г/см3; степени измельчения порошка, определенного по ситовому анализу (очень мелкий порошок -96% массы порошка проходит через сито номер 125 и 38% массы порошка проходит через сито номер 90).
Заживление ожоговых ран при лечении предлагаемого препарата на 3, 7, 10-е сутки происходило быстрее, чем при лечении мази с 5-ЫФ2Ф. Наибольшее различие наблюдалось на 3-й и 7-й день: площадь ожоговой раны на 3-й день сократилась от 94% (контроль) до 83% (порошок); на 7-й день - от 80% (контроль) до 69% (порошок). Было установлено, что предлагаемый препарат обеспечивает увеличение показателя микроциркуляции (ПМ) в околораневой зоне как на третьи, так и на десятые сутки послеожогового периода по сравнению с контрольной группой [3].
Заключение. Таким образом, нами обоснован состав ранозаживляющего препарата, способного в присутствии АА или NaAsc генерировать NO in situ, на основе нитропрепарата и cyt с. В эксперименте на крысах на модели ожоговой раны установлен вазодилатирующий эффект порошка с 5-ЫФ2Ф, cyt с, NaAsc, цинка оксидом и крахмалом стерильным на раннем этапе заживления.
Список литературы:
1. Граник, В.Г. Метаболизм экзогенных соединений. Лекарственные средства и другие ксенобиотики. М.: Вузовская книга, 2006. - 528 с.
2. Григорьев, Н.Б. Генерация оксида азота при восстановлении антибактериальных препаратов нитрофуранового ряда / Н.Б. Григорьев, Г.В.Чечекин, А.П.Арзамазцев, В.И. Левина, В.Г.Граник // Химия гетероцикл. соед. - 1999. - №7. - С. 902-906.
3. Лекарственное средство для лечения поражений мягких тканей организма: заяв. №2015132729 (05.08.2015) / Мельникова Н.Б., Коробко В.М.; уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 27.10.15).
