CC BY
27
ИММУНОЛОГИЯ
Финансирование. Исследование было поддержано грантом РНФ Соглашение № 16-15-00118.
ЛИТЕРАТУРА (п.п. 2—20 см. REFERENCES)
1. Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром. М.: Литтерра; 2004.
21. Созина А.В., Неустроева Ю.А., Тихомирова Т.А., Лапин С.В. Со-четанная встречаемость аутоантител у больных с диффузными болезнями соединительной ткани. Медицинская иммунология. 2007; 9(1): 69—76.
REFERENCES
1. Nasonov E.L. Antiphospholipid Syndrome [Antifosfolipidnyy sindrom]. Moscow: Litterra; 2004. (in Russian)
2. Miyakis S., Lockshin M.D., Atsumi T., Branch D.W., Brey R.L., Cer-vera R. et al. International consensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome (APS). J. Thromb. Haemost. 2006; 4(2): 295—488.
3. Barbhaiya M., Erkan D. Top 10 clinical research developments in antiphospholipid syndrome. Curr. Rheumatol. Rep. 2013; 15(10): 367.
4. Devreese K.M. Standardization of antiphospholipid antibody assays. Where do we stand? Lupus. 2012; 21(7): 718—2.
5. Urbanus R.T., de Groot P.G. Antiphospholipid antibodies—we are not quite there yet. Blood Rev. 2011; 25(2): 97—106.
6. De Groot P.G., Derksen R.H., de Laat B. Twenty-two years of failure to set up undisputed assays to detect patients with the antiphospho-lipid syndrome. Semin. Thromb. Hemost. 2008; 34(4): 347—55.
7. Pierangeli S.S., Favaloro E.J., Lakos G., Meroni P.L., Tincani A., Wong R.C. et al. Standards and reference materials for the anticardiolipin and anti-beta2 glycoprotein I assays: a report of recommendations from the APL Task Force at the 13th International Congress on Antiphospholipid Antibodies. Clin. Chim. Acta. 2012; 413(1-2): 358—60.
8. Ichikawa K., Khamashta M.A., Koike T., Matsuura E., Hughes G.R. Beta 2-Glycoprotein I reactivity of monoclonal anticardiolipin antibodies from patients with the antiphospholipid syndrome. Arthritis Rheum. 1994; 37(10): 1453—61.
9. Ichikawa K., Tsutsumi A., Atsumi T., Matsuura E., Kobayashi S., Hughes G.R. et al. A chimeric antibody with the human gamma1 constant region as a putative standard for assays to detect IgG beta2-glycoprotein I-dependent anticardioipin and anti-beta2-glycoprotein I antibodies. Arthritis Rheum. 1999; 42(11): 2461—70.
10. Egerer K., Roggenbuck D., Buttner T., Lehmann B., Kohn A., Von L.P. et al. Single-step autoantibody profiling in antiphospholipid syndrome
using a multi-line dot assay. Arthritis Res. Ther. 2011; 13(4): R118.
11. Tincani A., Filippini M., Scarsi M., Galli M., Meroni P.L. European attempts for the standardisation of the antiphospholipid antibodies. Lupus. 2009; 18(10): 913—9.
12. Tincani A., Allegri F., Balestrieri G., Reber G., Sanmarco M., Meroni P. et al. Minimal requirements for antiphospholipid antibodies ELISAs proposed by the European Forum on antiphospholipid antibodies. Thromb. Res. 2004; 114(5-6): 553—8.
13. Reber G., Tincani A., Sanmarco M., de Moerloose P., Boffa M.C. proposals for the measurement of anti-beta2-glycoprotein I antibodies. Standardization group of the European Forum on Antiphospholipid Antibodies. J. Thromb. Haemost. 2004; 2(10): 1860—2.
14. Wong R.C., Australasian aCL Working Party. Consensus guidelines for anticardiolipin antibody testing. Thromb. Res. 2004; 114(5—6): 559—71.
15. Devreese K.M., Pierangeli S.S., de Laat B., Tripodi A., Atsumi T., Ortel T.L. et al. Testing for antiphospholipid antibodies with solid phase assays: guidance from the SSC of the ISTH.J. Thromb. Haemost. 2014; 12(5): 792—5.
16. Covelli M., Lapadula G., Numo R. Immunoenzymatic test for the study of anti-cardiolipin antibodies. Evaluation of a commercial kit. Quad. Sclavo. Diagn. 1987; 23(4): 447—53.
17. Reber G., Boehlen F., de Moerloose P. Technical aspects in laboratory testing for antiphospholipid antibodies: is standardization an impossible dream? Semin. Thromb. Hemost. 2008; 34(4): 340—6.
18. Decavele A.S., Schouwers S., Devreese K.M. Evaluation of three commercial ELISA kits for anticardiolipin and anti-beta2-glycopro-tein I antibodies in the laboratory diagnosis of the antiphospholipid syndrome. Int. J. Lab. Hematol. 2011; 33(1): 97—108.
19. Ieko M., Nakabayashi T., Tarumi T., Yoshida M., Naito S., Atsumi T. et al. Phosphatidylserine-dependent anti-prothrombin antibody as a new marker for the diagnosis of antiphospholipid syndrome. Rinsho Byori. 2006; 54(3): 256—62.
20. Atsumi T., Ieko M., Bertolaccini M.L., Ichikawa K., Tsutsumi A., Matsuura E. et al. Association of autoantibodies against the phos-phatidylserine-prothrombin complex with manifestations of the an-tiphospholipid syndrome and with the presence of lupus anticoagulant. Arthritis Rheum. 2000; 43(9): 1982—93.
21. Sozina A.V., Neustroeva Yu.A., Tikhomirova T.A., Lapin S.V. Coincidence of autoantibodies among patients with diffuse connective tissue disorders. Meditsinskaya immunologiya. 2007; 9(1): 69—76. (in Russian)
Поступила 27.06.16 Принята к печати 01.08.16
© КОЛЛЕКТИв АвТОРОв, 2017
УДК 616.24-007.272-092:612.6.02.017.1].613.6
Карзакова Л.М.1, Мучукова О.М.1, Борисова Л.в.2, Кудряшов С.И.1
ИССЛЕДОВАНИЕ HLA-АССОЦИАЦИЙ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ В УСЛОВИЯХ КРЕМНИЙОРГАНИЧЕСКОГО ПРОИЗВОДСТВА
1ФГБОУ вО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова» Минобрнауки России, 428015, г. Чебоксары; 2БУ «Республиканский эндокринологический диспансер» Минздрава Чувашии, 428009, г. Чебоксары
Цель работы — изучить ассоциации полиморфных аллельных генов HLA класса II — DRB1, DQA1 и DQB1 и их гаплоти-пических сочетаний с хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) у работников кремнийорганического производства в чувашской популяции. Проведено HLA-генотипирование 50 больных ХОБЛ и 38 здоровых работников кремний-органического производства, принадлежащих к чувашской этнической популяции. Генотипирование проводили по трем генам HLA: DRB1 (14 аллелей), DQA1 (8 аллелей) и DQB1 (11 аллелей) методом мультипраймерной полимеразной цепной реакции. Для типирования использовали наборы фирмы «ДНК-Технология» (Россия). Степень ассоциации HLA-аллелей и гаплотипов с развитием ХОБЛ в условиях кремнийорганического производства определяли по значению относительного риска (ОР). Обнаружены отрицательные ассоциации ХОБЛ с аллелями HLA-DRB1*01 (ОР = 0,021; p < 0,001); DQA1*0101 (ОР = 0,013; p < 0,001); DQB1*0501 (ОР = 0,021; p < 0,001) и гаплотипами DRB1*01-DQA1*0101 (ОР = 0,031; p < 0,01); DRB1*07-DQA1*0201 (ОР = 0,076; p < 0,01); DRB1*13-DQA1*0102 (ОР = 0,11; p < 0,05). Установлены HLA-маркеры устойчивости к развитию ХОБЛ в условиях кремнийорганического производства в чувашской популяции.
Для корреспонденции: Карзакова Луиза Михайловна, д-р мед.наук, зав.каф. госпитальной терапии с курсом клин.
иммунологии, e-mail: luizak58@mail.ru
IMMUNOLOGY
Ключевые слова: HLA-ассоциация заболеваний; хроническая обструктивная болезнь легких; чувашская популяция;
кремнийорганическое производство. Для цитирования: Карзакова Л.М., Мучукова О.М., Борисова Л.В., Кудряшов С.И. ИсследованиеHLA-ассоциаций хронической обструктивной болезни легких в условиях кремнийорганического производства. Клиническая лабораторная диагностика. 2017; 62 (1): 44-49. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-1-44-49
KarzakovaL.M.', Muchukova O.M.J, BorisovaL.V.2, KudriashovS.I.1
THE STUDY OF HLA-ASSOCIATIONS OF CHRONIC OBSTRUCTIVE DISEASE OF LUNGS IN CONDITIONS OF ORGANIC-SILICON MANUFACTURE
1The I.N. Ulianov ChuvashskiP state university of the Minobrnauka of Russia, 428015 Cheboksary1, Russia 2The RespublikanskiP endocrinology dispensary of the Minzdrav of Chuvashiia, 428009 Cheboksary1, Russia
The purpose of study is to examine associations of polymorphic allele genes HLA class II - DRB1, DQA1 and DQB1 and their haplotypic combinations with chronic obstructive disease of lungs in workers of organocilicic manufacture in Chuvash population. The HLA-genotyping was implemented to 50 patients with chronic obstructive disease of lungs and 38 healthy workers of organocilicic manufacture, belonging to Chuvash ethnic population. The genotyping was implemented on three genes HLA: DRB1 (14 alleles), DQA1 (8 alleles) and DQB1 (11 alleles) using multi-primary polymerase chain reaction technique. The typing was implemented using kits manufactured by "DNA-Technology" (Russia). The degree of association ofHLA-alleles and gaplotypes with development of chronic obstructive disease of lungs in conditions of organocilicic manufacture was determined by value of relative risk (rr). The study established negative associations of chronic obstructive disease of lungs with alleles HLA-DRB1*01 (rr=0.021; p<0.001); DQA1*0101 (rr=0.013; p<0.001); DQB1*0501 (rr=0.021; p<0.001) andgaplotypesDRB1*01-DQA1*0101 (rr=0.031; p<0.01); DRB1*07-DQA1*0201 (rr=0.076; p<0.01); BKM1*13-dQa1*0102 (rr=0.11; p<0.05). The HLA-markers of resistance to development of chronic obstructive disease of lungs in conditions of organocilicic manufacture in Chuvash population.
Keywords: HLA-association of diseases; chronic obstructive disease of lungs; Chuvash population; organocilicic manufacture
For citation: Karzakova L.M., Muchukova O.M., Borisova L.V, Kudriashov S.I. The study of HLA-associations of chronic obstructive disease of lungs in conditions of organic-silicon manufacture. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics) 2017; 62 (1): 44-49. (in Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2017-62-1-44-49 For correspondence: Karzakova L.M., doctor of medical sciences, head of the chair of hospital therapy with course of clinical immunology. e-mail: luizak58@mail.ru
Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests. Acknowledgment. The study had no sponsor support
Received 15.06.2016 Accepted 28.06.2016
Введение. О возможности развития патологии бронхиального дерева, связанной с воздействием вредных производственных факторов, известно на протяжении нескольких столетий [3]. В настоящее время известны две нозологические формы профессионального поражения воздухоносных путей легких — профессиональный бронхит и хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) профессиональной этиологии [13]. В соответствии с программным документом экспертов глобальной инициативы по борьбе с ХОБЛ — Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD), «ХОБЛ — болезненное состояние, характеризующееся не полностью обратимой бронхиальной обструкцией» [16]. Обструкция прогрессирует и является следствием атипичной воспалительной реакции легких на раздражающие частицы и газы. Главным фактором риска в 80—90% случаев ХОБЛ выступает курение. Существенная часть (4,5—24,6%) случаев ХОБЛ может быть связана с производственной деятельностью человека [7, 14]. Среди основных факторов риска профессиональной природы наиболее агрессивными считаются кадмий и кремний [1]. Кремнийорганические соединения вызывали в эксперименте повреждение слизистой оболочки бронхиального дерева, эмфизематозное расширение просветов альвеол с истончением межальвеолярных перегородок [4]. В связи с этим наше внимание привлекли высокие показатели заболеваемости ХОБЛ, рост заболеваемости с временной утратой трудоспособности по болезням органов дыхания у работников цеха по производству кремнийорганических соединений ПАО «Химпром», г. Новочебоксарск Чувашской Республики [11].
Вместе с тем не у всех курящих и не у всех работников, подвергающихся вредному воздействию промышленных аэрозолей, развивается бронхиальная обструкция [16]. Сле-
довательно, в формировании ХОБЛ участвуют внутренние индивидуальные факторы. Предполагается наличие группы генов восприимчивости к ХОБЛ, включающей гены фактора некроза опухоли альфа, трансформирующего фактор роста бета1 [12]. На роль генов, определяющих предрасположенность индивида к развитию ХОБЛ, могут претендовать и аллели генов системы гистосовместимости человека — HLA (human leukocyte antigens) [21]. HLA-гены класса II, чрезвычайно важные для развития иммунного ответа, рассматриваются в качестве маркеров целого ряда заболеваний, в патогенезе которых участвуют иммунологические механизмы [17, 18, 20]. Известны единичные работы, посвященные изучению ассоциации генов HLA с ХОБЛ [2, 6]. В чувашской популяции выявлена связь ХОБЛ с HLA-аллелями DRB 1*11, DQB 1*0301 [6]. В русской популяции населения Ульяновской области России данное заболевание было ассоциировано с аллелями DQB1*0201, DQA1*0101 [2]. Противоречивость приведенных данных может быть связана с этническими особенностями HLA-профиля обследуемых и разнородностью состава обследованных групп, обусловленных различиями в этиопатогенетических механизмах развития ХОБЛ.
Целью настоящего исследования явилось определение роли генов HLA (класс II) в развитии ХОБЛ в условиях крем-нийорганического производства в чувашской популяции.
Материал и методы. Обследованы 88 работников цеха кремнийорганического производства (ПАО «Химпром», г Новочебоксарск, Россия). Обследуемую когорту разделили на две группы. Первую группу составили больные ХОБЛ в стадии ремиссии — 50 человек (в том числе 20 мужчин и 30 женщин в возрасте 28—66 лет), у которых симптомы заболевания в виде кашля и одышки развились в течение 3—5 лет после начала работы на химкомбинате. ХОБЛ диагностировали в
ИММУНОЛОГИЯ
соответствии с диагностическими критериями GOLD [16]. Длительность заболевания — 12,3 ± 2,4 года. Вторую группу составили 38 человек (22 мужчины и 16 женщин в возрасте 32—64 лет), работающих и живущих в тех же условиях на протяжении 15—30 лет и не имеющих заболеваний, связанных с профессиональной деятельностью. Эта группа работников, устойчивых к развитию ХОБЛ, условно названа группой «резистентных» к заболеванию. Сформированные группы были однородны по половому, возрастному составу, продолжительности работы на химическом производстве, стажу курения. Средний возраст группы больных ХОБЛ составил 45,4 ± 2,3 года, лиц группы «резистентных» — 43,5 ± 2,1 года. В обеих группах преобладали лица мужского пола, составляющие 66,0 ± 6,7% в первой группе и 68,4 ± 7,5% — во второй. В первой группе доля курящих равнялась 22,0 ± 5,8%, во второй — 21,0 ± 6,6%. С целью исключения этнических различий в обследуемые группы отбирались лишь коренные жители Чувашии, предки которых как минимум в трех последних поколениях принадлежали к чувашской этнической популяции.
HLA-генотипирование аллелей II класса проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) согласно методике производителя в ДНК, полученной из ядерных клеток периферической крови (ПК), с использованием наборов реагентов НПФ «ДНК-Технология» (Москва). Типировали по 14 аллелям DRB1, 8 аллелям DQA1 и 11 аллелям DQB1-локусов. Параллельно с иммуногенетическими исследованиями проводили иммунофенотипирование мононуклеарных клеток ПК обследуемых методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител CD3, CD4, CD8, CD20, CD25, CD71, CD95 («Сорбент», Москва), определение концентрации сывороточных IgM, IgG, IgA по Манчи-ни, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000), изучение фагоцитарной активности нейтрофилов в латекс-тесте согласно стандартным методикам [10]. Статистическую обработку проводили с помощью программы Statistica 10.0. Частоту аллелей и гаплотипов (Н) вычисляли по формулам, предложенным Р. Mattiuz и соавт. [19]. Силу ассоциации анализируемых признаков определяли с помощью величины относительного риска (ОР), которую высчитывали по модифицированной формуле J. Haldane для малых выборок [8]. Достоверность ассоциации, а также разницы в частоте распространения аллелей в группах обследованных оценивали с помощью четырехпольной таблицы сопряженности с поправкой Йетса на непрерывность вариации (%2) и точному двухстороннему тесту Фишера (модуль Nonparametrics/Distrib.). Коррекцию p (pc) проводили путем умножения величины p на число исследованных HLA-аллелей [8]. При изучении количественных показателей CD3, CD4, CD8, CD20, CD25, CD71, CD95-лимфоцитов, IgM, IgG, IgA, ЦИК учитывалось их распределение. Если оно приближалось к нормальному, то данные представляли в виде M ± SD (где М — среднее арифметическое, SD — среднее квадратичное отклонение), при этом достоверность различия количественных показателей определяли с помощью t-параметрического критерия Стью-дента (p). Если распределение отличалось от нормального, то данные представляли в виде Ме {Р10; Р90}, где Ме — медиана, Р — нижний и Р90 — верхний перцентили, и при сравнении двух независимых выборок использовали непараметрический критерий Манна—Уитни [9].
Результаты и обсуждение. Анализ частот обнаруженных аллелей HLA класса II в обследованных группах выявил отсутствие у больных ХОБЛ аллелей DRB1*01, DQA1*0101 и DQB1*0501. При этом все три данных аллеля являлись наиболее часто встречающимися HLA-специфичностями у представителей группы «резистентных» работников крем-нийорганического производства (табл. 1).
Выраженность ассоциации аллелей НЪА с развитием ХОБЛ определялась по значению ОР. Значения ОР, превышающие 1, свидетельствуют о положительной ассоциации аллеля с развитием рассматриваемого заболевания; значения ОР меньше 1 указывают на ассоциацию вариантов НЪА-генов с устойчивостью к развитию заболевания. У больных ХОБЛ установлены отрицательные (ОР < 1) связи НЪА-генов ОКВ1*01, DQА1*0101 и DQB1*0501 с развитием заболевания. Более наглядными являются реципрокные значения, представляющие собой величины, обратные ОР (1/ОР), которые показывают, во сколько раз меньше риск развития заболевания у лиц, имеющих в своем генотипе конкретный аллель, чем у лиц
Таблица 1
Частоты распределения аллелей НЬА класса II среди больных ХОБЛ и устойчивых к развитию ХОБЛ работников кремнийор-ганического производства,%
HLA-аллель Больные ХОБЛ (n = 50) Устойчивые к ХОБЛ (n = 38) Р
DRB1*01 0 15,8 < 0,001
*15(02) 14,0 5,3 NS
*16(02) 6,0 10,5 NS
*17(03) 6,0 13,2 NS
*18(03) 0 0 NS
*04 12,0 7,9 NS
*11(05) 26,0 7,9 NS
*12(05) 6,0 2,6 NS
*13(06) 10,0 6,6 NS
*14(06) 0 5,3 NS
*07 2,0 13,1 NS
*08 2,0 5,3 NS
*09 16,0 6,1 NS
*10 0 0 NS
DQA1*0101 0 21,0 < 0,001
*0102 18,0 18,4 NS
*0103 12,0 5,3 NS
*0201 2,0 13,1 NS
*0301 28,0 13,1 NS
*0401 2,0 5,3 NS
*0501 38,0 23,7 NS
*0601 0 0 NS
DQB1*0201 6,0 23,7 NS
*0301 34,0 15,8 NS
*0302 4,0 0 NS
*0303 22,0 7,9 NS
*0305 2,0 2,6 NS
*0401/0402 2,0 5,3 NS
*0501 0 15,8 < 0,01
*0502/0504 6,0 15,8 NS
*0503 0 0 NS
*0601 6,0 2,6 NS
*0602-8 18,0 10,5 NS
П р и м е ч а н и е. NS — различие статистически недостоверно (Р > 0,05).
Таблица 2
Частота НЬА-ассоциаций у больных ХОБЛ и у устойчивых к ХОБЛ работников кремнийорганического производства
Н1А-аллель Частота Н1А-аллеля,% ОР 1/ОР Рс
Больные ХОБЛ Устойчивые к ХОБЛ
DRB1*01 0 15,8 0,021 47,6 0,0001
ЭдА1*0101 0 21,0 0,013 76,9 0,0001
эдв1*0501 0 15,8 0,021 47,6 0,0001
без этого аллеля. Наличие у работников кремнийорганического производства в генотипе аллелей ВКВ1*01, DQA1*0101 и DQB1*0501 снижает риск возникновения ХОБЛ в 47,6; 76,9 и 47,6 раза соответственно (табл. 2).
Для анализа генетической структуры популяции большее значение, по сравнению с отдельными аллелями, имеют устойчивые гаплотипические сочетания, которым свойственно достоверное положительное неравновесное сцепление [5]. Из парных сочетаний аллелей локусов НЪА^КВ1 и НЪА-DQA1, имеющих статистически значимое положительное сцепление, гаплотипы НЬА^КВ1*01^А1*0101, НЪА-DRB1*07-DQA1*0201, НЬА^КВ1*13^А1*0102, НЪА-DRB1*14-DQA1*0101, НLA-DRB1*15-QA1*0103 и DRB1*17-DQA1*0501 определялись лишь в группе резистентных лиц и не обнаружены у больных ХОБЛ (табл. 3). Два гаплотипиче-ских сочетания: Н1А-ЭГВ 1*11^А1*0501 и НLA-DRB 1*15-DQA1*0102 не выявлялись у устойчивых к развитию ХОБЛ работников, но встречались у больных ХОБЛ.
Анализ аллельных сочетаний локусов DRB1 и DQB1 показал, что для больных ХОБЛ характерно присутствие гапло-типа DRB1*15-DQB1*0601, в то время как у резистентных к заболеванию лиц специфичным был гаплотип DRB1*14-DQB1*0502-04. Среди аллелей локусов DQA1 и DQB1 не было выявлено ни одного статистически достоверного га-плотипического сочетания ни в группе больных, ни в группе устойчивых к развитию заболевания лиц.
В результате изучения степени ассоциации Н1А-гаплотипов с развитием ХОБЛ с использованием показателя ОР установлено, что из перечисленного выше ряда гапло-типических сочетаний лишь три гаплотипа — DRB1*01-DQA1*0101, DRB1*07-DQA1*0201 и DRB1*13-DQA1*0102 — имели статистически значимую ассоциацию с ХОБЛ (табл. 4), причем все связи имели обратный характер. Следовательно, наличие данных гаплотипов в генотипе работников кремнийорганического производства обеспечивает устойчивость к развитию ХОБЛ.
По мнению Ж Bodmer и J. Bodmer [15], проявление неравновесного сцепления в популяции обусловлено действием естественного отбора. Неравновесное сцепление обеспечивает наиболее благоприятное взаимоотношение с окружающей средой. Видимо, присутствие в геноме у представителей чувашской популяции гаплотипов DRB1*01-DQA1*0101, DRB 1*07-DQA1*0201 и DRB 1*13-DQA1*0102 обеспечивает резистентность к отрицательным факторам внешней среды и обусловливает устойчивость к развитию ХОБЛ в условиях кремнийорганического производства, а также, возможно, в условиях воздействия и других факторов, способных вызывать развитие данного заболевания (курение, выхлопные газы автотранспорта, химические поллютанты и др.). Данные гаплотипы можно рассматривать как протективные маркеры заболевания.
Вероятно, гаплотипы устойчивости к ХОБЛ обеспечивают оптимальное функционирование иммунной системы, выполняя регулирующую функцию в отношении иммунного ответа.
IMMUNOLOGY
Таблица 3
Частота НЬА-^плотипов со статистически значимой и положительной величиной неравновесного сцепления у работников кремнийорганического производства
Н1А-гаплотип Больные ХОБЛ Устойчивые к ХОБЛ
DRB1*01-DQA1*0101 — 1315
1728***
DRB1*04-DQA1*0301 1185 957
1835** 1115**
DRB1*07-DQA1*0201 — 1216
1416***
DRB1*08-DQA1*0401 206 512
211* 541**
DRB1*09-DQA1*0301 1891 707
2929*** 823*
DRB 1*11-DQA1*0501 1769 —
3876**
DRB1*12-DQA1*0501 — —
DRB 1*13-DQA 1*0102 — 654
823*
DRB 1*13-DQA 1*0103 775 496
871*** 541*
DRB1*14-DQA1*0101 — 848
1115*
DRB 1*15-DQA 1*0102 984 —
1316**
DRB 1*15-DQA 1*0103 — 512
541**
DRB 1*16-DQA 1*0102 511 1125
646* 1416**
DRB1*17-DQA1*0501 — 1254
1728**
DRB 1*08-DQB 1*0401-02 206 512
211* 541**
DRB 1*09-DQB 1*0303 1804 496
2362*** 541*
DRB 1*11-DQB 1*0301 1744 681
3230*** 823*
DRB 1*13-DQB 1*0602-08 711 732
871** 823**
DRB 1*14-DQB 1*0502-04 — 922
1115**
DRB 1*15-DQB 1*0601 544 —
646*
DRB 1*15-DQB 1*0602-08 1034 481
1324** 541*
DRB 1*16-DQB 1*0502-04 604 922
646*** 1115**
Примечание. Верхняя строка в каждой ячейке таблицы — частота гаплотипа (Н х 10 000), нижняя строка — величина неравновесного сцепления (Э х 10 000).
* — р < 0,05; ** — р < 0,01; *** — р < 0,001 — достоверность по двухстороннему точному методу Фишера для четырехпольных таблиц.
ИММУНОЛОГИЯ
Таблица 4
Статистически значимые ассоциации гаплотипических сочетаний с ХОБЛ у работников кремнийорганического производства
HLA-гаплотип ОР 1/ОР Р
DRB1*01-DQA1*0101 0,031 32,2 0,0018
DRB1*07-DQA1*0201 0,076 13,1 0,0035
DRB 1*13-DQA 1*0102 0,11 9,09 0,039
Таблица 6
Статистически значимые различия иммунологических показателей у больных ХОБЛ и здоровых работников кремнийорга-нического производства (М ± SD)
Поиск механизмов иммунорегуляторной роли Н1А-молекул поставил задачу изучения ассоциаций Н1А-гаплотипов с иммунологическими параметрами, отражающими функционирование различных звеньев иммунной системы у здоровых людей. Для решения этой задачи исследуемая когорта здоровых работников была разделена на подгруппы в зависимости от наличия и отсутствия в генотипе обследуемого рассматриваемого гаплотипа, и для каждой подгруппы были определены медиана и перцентильные значения иммунологического показателя в пределах Р —Р (табл. 5).
Маркер устойчивости к ХОБЛ-гаплотип DRB1*01-ВрА1*0101 имел наибольшее влияние на иммунологические параметры: его наличие в генотипе здоровых лиц определяло более высокие уровни содержания клеток с хелперным фенотипом (СБ4), преобладание экспрессии на мононуклеарных клетках активационных маркеров позитивной активации СБ25 (рецепторов цитокина с регулирующей Т-клеточной функцией — интерлейкина-2) над маркером негативной активации — СБ95 (Fas-рецептором апоптоза). Другой гаплотип — DRB1*13-DQA1*0102 определял низкий уровень экспрессии рецептора активационно-го апоптоза. Гаплотипическое сочетание аллелей DRB1*07 и DQB1*0201 отрицательно влияло на число эозинофиль-ных клеток в ПК. Таким образом, влияние гаплотипических маркеров устойчивости к развитию ХОБЛ на функционирование иммунной системы сводится к их стимулирующему влиянию на количественные и активационные показатели клеточного звена адаптивного иммунитета. В связи с полученными данными значительный интерес представляет сравнение показателей функционирования различных звеньев иммунной системы больных ХОБЛ и устойчивых к развитию заболевания работников кремнийорганического производства (табл. 6).
Иммунный статус у больных ХОБЛ отличался низкими уровнями содержания в ПК лимфоцитов, связанных с клеточным механизмом адаптивного иммунитета — СБ3+-, СБ4+- и СБ8+-клеток. Наблюдался дисбаланс экспрессии
Таблица 5
Связь показателей иммунного статуса с НLА-гаплотипами устойчивости к ХОБЛ в чувашской популяции
Иммунологический показатель Больные ХОБЛ (n = 50) Устойчивые к ХОБЛ (n = 38)
CD3+-клетки,% 42,3 ± 9,3*** 52,6 ± 6,2
CD3+-клетки, абс. 830,6 ± 217,6*** 1016,3 ± 266,5
CD4+-клетки,% 22,6 ± 4,9*** 32,2 ± 4,8
CD4+-клетки, абс. 438,1 ± 199,2*** 610,1 ± 222,3
CD8+-клетки,% 21,3 ± 6,1* 23,6 ± 5,0
CD4+/CD8+ 1,2 ± 0,4*** 1,4 ± 0,4
CD25+-клетки,% 4,1 ± 0,9* 4,5 ± 0,6
CD71+-клетки,% 3,8 ± 0,8*** 4,4 ± 0,7
CD95+-клетки,% 19,8 ± 5,9*** 11,2 ± 3,8
ЦИК, усл. ед. 17,9 ± 10,7** 13,0 ± 5,8
IgA, г/л 3,4 ± 1,6*** 2,6 ± 1,1
HLA-гаплотип Показатель иммун- Значение показателя Ме {Р10; Р90} p
ного статуса в присутствии гаплотипа в отсутствие гаплотипа
DRB1*01-DQA1*0101 CD4+-клетки,% 34,5 {33; 42} 31 {24; 35} 0,002
CD25+-клетки,% 6 {4; 8} 4 {3; 5} 0,045
CD95+-клетки,% 8,5{4; 14} 11{8; 19} 0,013
CD95+-клетки, абс. 140 {80; 280} 200 {130; 350} 0,011
DRB 1*13-DQA 1*0102 CD95+-клетки,% 8{7; 9} 11{8; 19} 0,035
DRB1*07-DQA1*0201 Эозинофилы,% 2 {1; 2} 3 {1; 4} 0,006
активационных маркеров на клетках: число мононуклеаров, несущих маркеры положительной активации СБ25 и СБ71, оказалось меньше, чем в группе резистентных лиц, а число клеток, имеющих маркер негативной активации — Fas-рецептор апоптоза, напротив, увеличено. У больных уровни ЦИК и в сыворотке крови были выше, чем у здоровых, что может являться свидетельством активации на системном уровне гуморального звена адаптивного иммунного ответа. Характер изменений в функционировании иммунной системы у больных ХОБЛ в целом противоположен сдвигам в иммунологических параметрах, обусловленных регулирующим влиянием на них гаплотипических маркеров устойчивости к ХОБЛ. Следовательно, обнаруженные в настоящем исследовании Н1А-сцепленные генетические факторы устойчивости к развитию ХОБЛ опосредованы, возможно, Н1А-ассоциированной устойчивостью факторов иммунной защиты организма человека к отрицательному влиянию на них химических факторов.
Заключение. В генотипе работников кремнийоргани-ческого производства выявлены маркеры устойчивости к развитию ХОБЛ — Н1А-аллели DRB1*01, БдА1*0101 и БрВ1*0501 и гаплотипические сочетания Н1А—DRB1*01-БдА1*0101, DRB1*07-DQA1*0201 и DRB1*13-DQA1*0102. Протективные Н1А-маркеры ХОБЛ ассоциированы с более высокими показателями клеточного механизма адаптивного иммунитета, находящимися под Н1А-сцепленным генетическим контролем.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
ЛИТЕРАТУРА (п.п. 13—21 см. REFERENCES)
Примечание. Здесь и в табл. 6: абс. — абсолютное значение содержания клеток (•109/л).
1. Айсанов З.Р., Кокосов А.Н., Овчаренко С.И., Хмелькова Н.Г., Цой А.Н., Чучалин А.Г. и др. Хронические обструктивные болезни легких. Федеральная программа. Русский медицинский журнал. 2001; 9(1): 9—33.
2. Брыляева Е.В., Крюков Н.Н., Жестков А.В. Иммуногенетические исследования хронической обструктивной болезни легких. Практическая медицина. 2011; 51(3): 55—7.
3. Дементьев Е.М. Фабрика, что она дает населению и что она у него берет. 2-е изд. М.: Издательство Товарищества И.Д. Сытина; 1897.
4. Диденко М.Н., Стежка В.А. Влияние наночастиц аморфного высокодисперсного кремнезема на морфологическую структуру внутренних органов крыс. Бiотехнологiя. 2009; 2(1): 80—6.
5. Зарецкая Ю.М., Абрамов В.Ю. Новые антигены тканевой совместимости человека. М.: Медицина; 1986.
6. Карзакова Л.М., Ухтерова Н.Д., Борисова Л.В., Сунгоркина Е.П., Мучукова О.М., Сунгоркина Т.М. Роль иммунологических и им-муногенетических факторов в развитии хронической обструк-тивной болезни легких. Здравоохранение Чувашии. 2008; (2): 45—51.
7. Мазитова Н.Н. Профессиональные факторы риска хронической обструктивной болезни легких: результаты когортного исследования. Казанский медицинский журнал. 2011; 92(4): 537—41.
8. Певницкий Л.А. Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеваниями. Вестник Академии медицинских наук СССР. 1988; (7): 48—51.
9. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. М.: Медицина; 2000.
10. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.: Издательство ВНИРО; 1995.
11. Шевницина О.Ю. Иммунно-физиологическая реакция организма человека в условиях кремнийорганического производства: Дисс. ... канд. мед. наук. Чебоксары; 2004.
12. Янбаева Д.Г., Байнак О.Ф., Корытина Г.Ф., Зигидуллин Ш.З., Викторова Т.В. Полиморфные варианты генов провоспалитель-ных цитокинов как маркеры предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких. Пульмонология. 2004; (5): 17—22.
REFERENCES
1. Aysanov Z.R., Kokosov A.N., Ovcharenko S.I., Khmel'kova N.G., Tsoy A.N., Chuchalin A.G. et al. Chronic obstructive pulmonary diseases. Federal program. Russkiy meditsinskiy zhurnal. 2001; 9(1): 9—33. (in Russian)
2. Brylyaeva E.V., Kryukov N.N., Zhestkov A.V. Immunogenetic researches of a chronic obstructive pulmonary disease. Prakticheskaya meditsina. 2011; 51(3): 55—7. (in Russian)
3. Dement'ev E.M. Factory: What it Gives to the Population and what it Takes from Last [Fabrika, chto ona daet naseleniyu i chto ona u nego beret]. 2nd ed. Moscow: Izdatel'stvo Tovarishchestva I.D. Sy-tina; 1897. (in Russian)
4. Didenko M.N., Stezhka V.A. Influence of nanoparticles of amorphous high-disperse silicon dioxide on morphological structure of internals of rats. Biotekhnologiya (Ukrainian). 2009; 2(1): 80—6. (in Russian)
5. Zaretskaya Yu.M., Abramov V.Yu. New Antigenes of Tissue Compatibility of the Person [Novye antigeny tkanevoy sovmestimosti cheloveka]. Moscow: Meditsina; 1986. (in Russian)
6. Karzakova L.M., Ukhterova N.D., Borisova L.V., Sungorkina E.P., Muchukova O.M., Sungorkina T.M. Role of immunological and immu-nogenetic factors in development of a chronic obstructive pulmonary disease. Zdravookhranenie Chuvashii. 2008; (2): 45—51. (in Russian)
IMMUNOLOGY
7. Mazitova N.N. Occupational risk factors of chronic obstructive pulmonary disease: results of cohort study. Kazanskiy meditsinskiy zhurnal. 2011; 92(4): 537—41. (in Russian)
8. Pevnitskiy L.A. Statistical evaluation of HLA antigens associations with diseases. VestnikAkademii meditsinskikh nauk SSSR. 1988; (7): 48—51. (in Russian)
9. Platonov A.E. Statistical Analysis in Biology and Medicine: Challenges, Terminology, Logic, Computer Methods [Statistiches-kiy analiz v meditsine i biologii: zadachi, terminologiya, logika, komp'yuternye metody]. Moscow: Meditsina; 2000. (in Russian)
10. Khaitov R.M., Pinegin B.V., Istamov Kh.I. Ecological Immunology [Ekologicheskaya immunologiya]. Moscow: Izdatel'stvo VNIRO; 1995. (in Russian)
11. Shevnitsina O.Yu. Immune and Physiological Reaction of a Human Body in the Conditions of Silicon-organic Production: Diss. Cheboksary; 2004. (in Russian)
12. Yanbaeva D.G., Baynak O.F., Korytina G.F., Zigidullin Sh.Z., Vikto-rova T.V. Polymorphic variants of genes of proinflammatory cytok-ines as markers of susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease. Pul'monologiya. 2004; (5): 17—22. (in Russian)
13. Ameille J., Dalphin J.C., Descatha A., Pairon J.C. Occupational chronic obstructive pulmonary disease: a poorly understood disease. Rev. Mal. Respir. 2006; 23(4 Supp.l): 119—30.
14. Bergdahl I.A., Toren K., Eriksson K., Hedlund U., Nilsson T., Flodin R. et al. Increased mortality in COPD among construction workers exposed to inorganic dust. Eur. Respir. J. 2004; 23(3): 402—6.
15. Bodmer W.F., Bodmer J.G. Evolution and function of the HLA system. Brit. Med. Bull. 1978; 34(3): 309—16.
16. Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease. Available at: http://www.goldcopd. org/uploads/users/files/ G0LD_Report_2015_Apr2.pdf. (accessed 2 April 2015)
17. Kuranov A.B., Kozhamkulov u.A., Vavilov M.N., Belova E.S., Bis-milda V.L., Alenova A.H. et al. HLA-class II alleles in patients with drug-resistant pulmonary tuberculosis in Kazakhstan. Tissue Antigens. 2014; 83(2): 106—12.
18. Lenz T.L., Deutsch A.J., Han B., Hu X., Okada Y., Eyre S. et al. Widespread non-additive and interaction effects within HLA loci modulate the risk of autoimmune diseases. Nat. Genet. 2015; 47(9): 1085—90.
19. Mattiuz P.L., Ihde D., Piazza A., Ceppellini R., Bodmer W.F. New approaches to the population genetic and segregation analysis of the HLA system. In: Terasaky P.I., ed. Histocompatibility Testing. Mun-skaard Copenhagen; 1970: 193—205.
20. Okada Y., Han B., Tsoi L.C., Stuart P.E., Ellinghaus E., Tejasvi T. et al. Fine mapping major histocompatibility complex associations in psoriasis and its clinical subtypes. Am. J. Hum. Genet. 2014; 95(2): 162—72.
21. Wain L.V., Shrine N., Miller S., Jackson V.E., Ntalla I., Soler Artigas M. et al. Novel insights into the genetics of smoking behaviour, lung function, and chronic obstructive pulmonary disease (uK BiLEVE): a genetic association study in UK Biobank. Lancet Respir. Med. 2015; 3(10): 769—81.
Поступила 15.06.16 Принята к печати 28.06.16
