CC BY
48
УДК 615.322: 615.071: 615.074
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСТРАГИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ РАЗЛИЧНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИРТА ЭТИЛОВОГО ДЛЯ ИЗОЛИРОВАНИЯ КОМПЛЕКСА ФЛАВОНОИДОВ ИЗ ШИШКОЯГОД JUNIPERUS COMMUNIS L. В РАМКАХ НАУЧНОГО НАПРАВЛЕНИЯ «ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ РЕМЕЙК»
RESEARCH OF THE EXTRACTION ABILITY OF ETHYL ALCOHOL DIFFERENT CONCENTRATIONS TO ISOLATE A COMPLEX OF FLAVONOIDS FROM JUNIPERUS COMMUNIS L. FRUITS UNDER THE SCIENTIFIC DIRECTION
«PHARMACEUTICAL REMAKE»
Д.И. Писарев 1, О.О. Новиков 1, И.В. Корниенко 1, А.Ю. Малютина 1, Е.Т. Жилякова 1, Б.В. Трифонов 1, М.Ю. Новикова 1, Л.В. Титарева 2, Н.Н. Шестопалова 1, И.В. Гурьев 1 D.I. Pisarev 1, O.O. Novikov 1, I.V. Kornienko 1, A.Y. Malyutina 1, E.T. Zhilyakova 1, B.V. Trifonov 1, M.Y. Novikova 1, L.V. Titareva 2, N.N. Shestopalova 1, I.V. Gurev 1
1) Белгородский государственный национальный исследовательский университет Россия, 308015, г. Белгород, ул. Победы, д.85
2) Курский государственный медицинский университет Россия, 305001, г. Курск, ул. Карла Маркса, д.3
Belgorod National Research University Russia, 308015, Belgorod, Pobedy St., 85
2 Kursk State Medical University Russia, 305001, Kursk, Karl Marx St., 3
E-mail: novikov@bsu.edu.ru, pisarev@bsu.edu.ru
Аннотация. Одним из растений, которое уже на протяжении долгого времени не попадает во внимание исследователей, является можжевельник обыкновенный - Juniperus communis L. Результаты изучение фармацевтического рынка фитопрепаратов, свидетельствуют об отсутствии лекарственных средств из указанного растения. J. communis L. позиционируется как эфиромасличное растение, однако в суммарном фармакологическом эффекте растения участвует полифенольный комплекс, который изучен недостаточно полно. В литературе также отсутствуют сведения об оптимальном растворителе, способном наиболее полно извлекать комплекс полифенольных соединений. В работе изучен химический состав плодов J. communis L. с помощью метода обращённо-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Установлено наличие 19 компонентов флавоноидной структуры. Основными компонентами являются гликозиды апигенина, скутелляреина и бифлавоноиды. Проведён сравнительный анализ экстрагирующей способности спирта для извлечения флавоноидов J. communis L. Установлено, что наиболее подходящим экстрагентом для флавоноидов плодов J. communis L. является спирт этиловый 95%.
Resume. One of the plants, which have for a long time does not get the attention of researchers is the common juniper - Juniperus communis L. The results of the study of the pharmaceutical market of herbal remedies, indicate the absence of drugs of said plant. J. communis L. positioned as aromatic plants, but in the overall pharmacological effects of the plants involved polyphenol complex that is not fully understood. The literature also lacks information about the optimal solvent capable of removing the most complete range of polyphenolic compounds. The chemical composition of the fruit J. communis L. converted via Method-phase high performance liquid chromatography. The presence of 19 components of the flavonoid structure. The main components are glycosides of apigenin, and skutellyareina biflavonoidy. The comparative analysis of the extraction ability of alcohol to extract flavonoids J. communis L. According to the research concluded that the most appropriate extractant for the fruits of flavonoids J. communis L. is 95% ethyl alcohol.
Ключевые слова: плоды можжевельника, флавоноиды, экстракция, обращённо-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография, фармацевтический ремейк.
Keywords: fructus Juniperi, flavonoids, extraction, converted-phase high performance liquid chromatography, pharmaceutical remake.
Введение
Под термином «Фармацевтический ремейк» предложено понимать комплекс традиционных и инновационных технологических, аналитических и фармакологических операций (моделей), приводящих к возрождению ранее известных и ныне не используемых лекарственных составов и форм [Новиков и др., 2014].
Подавляющее количество лекарственных средств, применяющихся в современной медицине, приходится на соединения, изготавливаемые методами органического синтеза. Однако растения по-прежнему продолжают оставаться важнейшим источником сырья для получения лекарственных препаратов. Причем удельный вес фитопрепаратов составляет 25 - 30% от аптечного ассортимента. Количество растительных препаратов с каждым годом возрастает, что свидетельствует об их значительном спросе вследствие экономической и терапевтической целесообразности. В процесс создания новых лекарственных растительных средств вовлекается все большее количество растений, по причине появляющихся уточненных данных об их химическом составе и клинических данных. Растущая потребность в растительных препаратах, свидетельствует о необходимости поиска новых сырьевых источников или более подробном изучении ранее известных. Одним из растений, которое уже на протяжении долгого времени не попадает во внимание исследователей, является можжевельник обыкновенный - Juniperus communis L.
В доступных изданиях по фармакологии XIX века присутствуют подробные данные о самих растениях и нозологиях, при которых можно использовать можжевельники, а также информация о всевозможных экстемпоральных лекарственных формах на их основе. Так, в книге «Основы фармакологии и рецептуры» профессора Казанского университета И.М. Догеля (рис. 1) упоминаются водная вытяжка и наливка из плодов можжевельника обыкновенного [Догель 1900].
Рис. 1. Страницы книги И.М. Догеля «Основы фармакологии и рецептуры» 1900 года издания типографии Карла Риккера Fig. 1. Book pages I.M. Dogiel «Fundamentals of Pharmacology and recipes» 1900 edition printing Karl Ricker
В переводной книге «Фармакология и токсикология» авторского коллектива из Австрии под редакцией академика В.В. Пашутина (рис. 2) можжевельники обыкновенный рассмотрен очень подробно. Приведены известные на то время ботанические, фитохимические и исторические данные. Последние на наш взгляд, не соответствуют действительности, т.к. сказано, что в древности можжевельники не играли никакой роли как лекарственные растения [Пашутин и со-ав., 1995].
Из лекарственных средств в этой книге описаны сок (жидкий экстракт) можжевеловых ягод, можжевеловый спирт, можжевеловая мазь, масло можжевеловых ягод и пригорелое масло.
Рис. 2. Страницы книги «Фармакология и токсикология» под редакцией академика В.В. Пашутина
1995 года издания
Fig. 2. Book pages «Pharmacology and Toxicology» edited by academician V.V. Pashutina 1995 edition
В переводных с немецкого сочинениях доктора медицины Ацерсвальда «Целебные травы и растения» можжевельник называется дроздовым деревцом, венце-ягодной тростью и полевой ки-париссой (рис. 3). Здесь, как и в других источниках, дана информация о можжевельнике обыкновенном. Предлагаемые автором варианты применения растительного сырья ближе к народной рецептуре. Так, предлагается использовать в качестве мочегонного средства холодный чай из ягод можжевельника обыкновенного, а также морс и пиво [Ауэрсвальд 1910].
Рис. 3. Фрагменты книги Б. Ауэрсвальда «Целебные травы и растения» 1910 года издания, перевод с 5-го немецкого очень распространенного и улучшенного издания Fig. 3. Fragments B. Auerswald book « Healing herbs and plants»1910 edition, translated from the 5th German is very widespread and improved edition
Результаты изучение современного фармацевтического рынка фитопрепаратов, свидетельствуют об отсутствии лекарственных средств из J. communis L. Однако, разнообразный химический состав, широкий спектр фармакологических свойств свидетельствуют об актуальности таких исследований. Известно, что J. communis L. позиционируется как эфиромасличное растение, поскольку основным классом, ответственным за проявление фармакологического эффекта являются терпены, состав которых в растении изучен достаточно подробно [Писарев 2007, Соколов 2000]. Наряду с терпенами в суммарном фармакологическом эффекте растения участвует полифенольный комплекс [Писарев 2010]. Среди полифенолов J. communis L. характерно наличие достаточно редких групп: 6-оксифлавнонов и бифлавоноидов [Костюченко 1977, Клышев и соав., 1978]. Вместе с тем полифенольный комплекс данного объекта изучен в значительно меньшей степени, чем терпенов. В литературе также отсутствуют сведения об оптимальном растворителе, способном наиболее полно извлекать комплекс полифенольных соединений.
Учитывая вышесказанное, целью настоящего исследования явилось изучение химического состава полифенолов плодов J. communis L. и подбор оптимального экстрагента для их извлечения в развитие научного направления «Фармацевтический ремейк».
Материалы и методы
В качестве объекта исследования использованы воздушно-сухие плоды J. communis L. Подготовку образцов для анализа проводили следующим образом. По 1,0 г измельчённых, воздушно-сухих плодов J. communis L. помещали в 3 плоскодонные колбы вместимостью 100 мл, в каждую добавляли по 25 мл спирта этилового в разных концентрациях: 95%, 70%, 40% и экстрагировали на ультразвуковой водяной бане при температуре 80°С в течении 2-х часов. Полученные извлечения фильтровали через бумажные фильтры в мерные колбы объёмами по 100 мл и операцию экстракции повторяли еще 3 раза, каждый раз фильтруя извлечения в мерные колбы. Полученные таким образом 95%, 70% и 40% извлечения далее хроматографировали.
Хроматографические исследования проводили на хроматографическом приборе фирмы «Agilent Technologies 1200 Infinity» производства США c автоматическим пробоотборником Agilent 1200, вакуумным микродегазатором, градиентным насосом и термостатом той же серии. Электронные спектры поглощения регистрировали с помощью спектрофотометрического детектора с диодной матрицей серии Agilent 1200 (диапазон длин волн от 190 до 950 нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; объемом 13 мкл), шаг сканирования - 2 нм.
Для регистрации и обработки спектральных данных и хроматограмм использовали программное обеспечение «Agilent Chem Station».
Для приготовления подвижных фаз использовали следующие растворители: воду сверхчистую (для жидкостной хроматографии), спирт этиловый (по ГОСТ Р 51652), кислоту муравьиную (квалификация х.ч. по ГОСТ 61).
Эффективность колонки определяли вычислением числа теоретических тарелок N. Чем выше эффективность, тем больше эта величина и меньше расширение пика первоначально узкой полосы по мере продвижения ее через колонку, тем уже пик на выходе из колонки. В качестве оптимального критерия эффективности колонки использована величина - не менее 5000. Расчет числа теоретических тарелок проводили по формуле 1:
N = 5.545 х )2, (1)
Jo.5
где t - время удерживания определяемого вещества мм; JJ05 - ширина на половине высоты пика, мм.
Основным критерием оценки адекватного разделения соседних пиков служил коэффициент разделения Rs, который должен быть не менее 1,5 согласно Европейской Фармакопее [European Pharmacopoeia 2014]. При этом пики должны быть разделены по базовой линии. Коэффициент разделения пиков Rs вычисляли по формуле 2:
D й1
Rs = -, (2)
^0,5(1) + ^0,5(2)
где А/ - расстояние между вершинами двух соседних пиков мм; Jo 5(1)' Jo 5(2) - ширина на половине высоты пиков двух компонентов мм.
Форму хроматографического пика, характеризующую перегрузку хроматографической колонки, определяли путём расчёта коэффициента асимметрии пика (Т/) по формуле 3:
„ _ ^0,05 (3)
где ^0,05 - ширина пика на высоте 5.0% от базовой линии (мм); f - расстояние от начала пика на высоте 5.0% от базовой линии до перпендикуляра, проведенного из его вершины (мм). Оптимальной величиной коэффициента асимметрии Т/ принят показатель - менее 2. Суммы полифенольных комплексов и антоцианов подвергали хроматографическому разделению в следующих условиях:
- подвижная фаза: 1.0% водный раствор кислоты муравьиной (А) - спирт этиловый 95% (Б) в градиентном режиме элюирования;
- колонка: Ascentis express C18 2.7цм*100 мм*4.6мм.
- скорость подвижной фазы - 0.5 мл/мин;
- температура колонки +35 оС;
- объём вводимой пробы 1 д1.
Состав подвижной фазы программировали в условиях, указанных в табл. 1.
Таблица 1 Table. 1
Условия градиентного элюирования флавоноидов плодов J. communis L. Terms gradient elution flavonoids fruits J. communis L.
Время, мин А,% Б,%
0 90 10
10 80 20
20 70 30
30 50 50
40 10 90
Детектирование осуществляли при длинах волн: 230, 260, 325, 340 и 350 нм.
Идентификацию компонентов осуществляли по совпадению времён удерживания анализируемых веществ со СО зафиксированных в аналогичных условиях эксперимента и по результатам диодно-матричного детектирования.
Относительное содержание индивидуальных флавоноидов определяли как отношение площади хроматографического пика и суммы площадей пиков всех идентифицированных флавоноидов по формуле 4:
„ Si х 100 (4)
Л1 =
X s
где Б1 - среднее значение площади пика компонента на хроматограммах суммы; - среднее значение суммы всех площадей пиков на хроматограммах.
Результаты и их обсуждение
Хроматограмма 95% спиртового извлечения из плодов J. communis L. представлена на рис. 4.
Рис. 4. Хроматограмма 95% этанольного извлечения из плодов J. communis L. (детекция диодно-матричная при X= 340 нм) Fig. 4. Chromatogram 95% ethanolic extract of the fruits of J. communis L. (diode array detection at X = 340 nm)
Эффективность хроматографической системы оценивали по критериям, результаты расчёта которых приведены в табл. 2.
Таблица 2 Table. 2
Показатели пригодности хроматографической системы для определения Indicators of system suitability for determining
tR S N Rs Tf Wb
14.476 836.5 226751 >1.5 0.647 0.1216
15.616 149.8 300754 >1.5 0.834 0.1139
16.476 148.5 273145 >1.5 0.809 0.1261
17.681 336.7 250524 >1.5 1.039 0.1413
18.785 403.9 288887 >1.5 0.885 0.1398
19.806 59 344897 >1.5 0.701 0.1349
20.368 191.5 356247 >1.5 0.922 0.1365
21.781 1292.6 429760 >1.5 0.727 0.1329
22.203 458.5 140425 >1.5 0.953 0.237
25.456 65.3 779905 >1.5 0.858 0.1153
27.897 524.8 1160153 >1.5 0.713 0.1036
28.355 188 967655 >1.5 0.756 0.1153
30.771 865.2 1296438 >1.5 0.636 0.1081
31.495 605 1281188 >1.5 0.599 0.1113
32.179 84.6 1543638 >1.5 0.956 0.1036
34.152 848.6 1866174 >1.5 0.722 0.1005
34.926 1190.1 2131050 >1.5 0.676 0.0957
35.605 103.8 2300439 >1.5 0.622 0.0939
36.388 841.3 2680605 >1.5 0.649 0.0889
Примечание:
tR - абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок,
Rs - коэффициент разделения пиков, Tf - коэффициент асимметрии, Wb - ширина пика на базовой линии
Как показывают данные, приведенные в табл. 2, основные критерии (N>5000, Rs >1.5, Tf <2) соответствуют требованиям пригодности. Поэтому использованная хроматографическая система может считаться эффективной для определения флавоноидов в 95% спиртовом извлечении из плодов J. communis L.
Результаты хроматографирования 70% этанольного извлечения из плодов J. communis L. представлены на рис. 5.
Рис. 5. Хроматограмма 70% этанольного извлечения из плодов J. communis L. (детекция диодно-матричная при X= 340 нм) Fig. 5. Chromatogram 70% ethanolic extract of the fruits of J. communis L. (diode array detection at X = 340 nm)
Результаты расчёта критериев проверки пригодности использованной хроматографической системы приведены в табл. 3.
Таблица 3 Table. 3
Показатели пригодности хроматографической системы для определения Indicators of system suitability for determining
tR S N Rs Tf Wb
14.496 1091.4 214376 >1.5 0.619 0.125
15.631 169.8 290020 >1.5 0.818 0.1161
16.467 187.3 266887 >1.5 0.726 0.1275
17.646 353.9 274585 >1.5 0.856 0.1347
18.352 2524.1 321327 >1.5 0.707 0.1295
18.753 298.7 313366 >1.5 0.926 0.134
19.698 62.6 374806 >1.5 0.688 0.1287
20.085 93.7 492325 >1.5 1.038 0.1145
20.267 171.5 382962 >1.5 0.934 0.131
21.562 1360.7 432145 >1.5 0.741 0.1312
28.107 112.8 1114422 >1.5 1.053 0.1065
30.369 454.2 1399072 >1.5 0.676 0.1027
31.060 302.1 1323352 >1.5 0.629 0.108
31.750 47.8 1612900 >1.5 0.806 0.1
33.673 432.5 1778446 >1.5 0.756 0.101
34.474 542.1 1967869 >1.5 0.701 0.0983
35.225 51.1 2478425 >1.5 0.818 0.0895
36.010 365.9 2660999 - 0.698 0.0883
Примечание: - абсолютное время удерживания, 3 - площадь пика, N - число теоретических тарелок, - коэффициент разделения пиков, Т5 - коэффициент асимметрии, Шь - ширина пика на базовой линии
Как свидетельствуют данные табл. 3, рассчитанные критерии пригодности хроматографической системы укладываются в допустимые пределы, что доказывает её пригодность для определения флавоноидов в 70% извлечении из плодов J. communis L.
Хроматограмма 40% спиртового извлечения из плодов J. communis L. представлена на рис. 6.
Рис. 6. Хроматограмма 40% этанольного извлечения из плодов J. communis L. (детекция диодно-матричная при X= 340 нм) Fig. 6. Chromatogram 40% ethanolic extract of the fruits of J. communis L. (diode array detection at X = 340 nm)
Эффективность хроматографической системы оценивали по критериям, результаты расчёта которых приведены в табл. 4.
Таблица 4 Table. 4
Показатели пригодности хроматографической системы для определения Indicators of system suitability for determining
tR S N Rs Tf Wb
14.462 1204.72 214512 >1.5 0.615 0.1249
15.600 181.5 281549 >1.5 0.81 0.1176
16.441 134.4 261513 >1.5 0.722 0.1286
17.622 376.5 271415 >1.5 0.884 0.1353
18.335 2705.9 318269 >1.5 0.706 0.13
18.740 403.1 323465 >1.5 0.923 0.1318
20.089 98.0 482358 >1.5 1.022 0.1157
20.277 189.8 389260 >1.5 0.917 0.13
21.596 1375.4 437502 >1.5 0.747 0.1306
22.046 381.8 229940 >1.5 0.983 0.1839
24.102 60.83 375637 >1.5 0.66 0.1573
27.566 231.1 1166315 >1.5 0.741 0.1021
28.114 81.55 1100463 >1.5 0.978 0.1072
30.385 222.9 1425420 >1.5 0.693 0.1018
31.076 95.3 1453626 >1.5 0.763 0.1031
31.759 15.94 19448816 >1.5 0.776 0.091
33.695 121.2 1816564 >1.5 0.76 0.1007
34.50 89.3 1904400 >1.5 0.663 0.1007
Примечание:
- абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок, Rs - коэффициент разделения пиков, Т5 - коэффициент асимметрии, Шь - ширина пика на базовой линии
Из представленных данных табл. 4 следует, что критерии пригодности (N>5000, Rs >1.5, Tf <2) не выходят за пределы допустимых значений, следовательно, хроматографическая система пригодна для анализа флавоноидов в 40% извлечении из плодов J. communis L.
В результате хроматографирования 95% спиртового извлечения из плодов J. communis L. было установлено, что его флавоноидный состав представлен разными группами: бифлавоноиды, 6-оксифлавоны, флавоны, флавонолы. Необходимо было определить при какой длине волны диодно-матричного детектирования оценивать удельный вес каждой группы флавоноидов. В результате изучения спектров поглощения этих соединений было установлено, что для всех перечисленных групп флавоноидов существует общая полоса поглощения, по которой можно оценить их содержание на хроматограмме, лежащая в максимуме поглощения при X = 340 нм, как показано на рис. 7.
"[•AM. 30371 ав-7 m Al. -)Rei=M.2$1 SÎ0.75S al JUMIPEP«.D ■&AM. 18225 №3 mAU.-)RtM8J071 S 13.9» oi JUNIPER45.D "MM.22.091 йвЛ mAl. -)Rsf=i1-45l 422.805 ■jiJUNIPEP'W.D
Рис. 7. Электронные спектры поглощения основных представителей флавоноидов
плодов J. communis L. Fig. 7. Electronic absorption spectra of the main representatives of the fruits of flavonoids
J. communis L.
В результате хроматографирования спиртовых извлечений из плодов J. communis L. установлено, что доминирующими группами флавоноидов являются гликозиды апигенина, бифлавоноиды и гликозиды скутелляреина. В небольшом количестве встречаются гликозиды кверцетина и лютеолина. По количеству компонентов в каждой группе флавоноидов оказалось следующим: 4 бифлавоноида, 3 гликозида скутелляреина, 2 гликозида кверцетина, 2 гликозида лютеолина и 9 гликозидов апигенина.
Компонентный состав флавоноидов плодов J. communis L. представлен в табл. 5.
Таблица 5 Table. 5
Компонентный состав полифенолов плодов J. communis L.
Component composition of fruit polyphenols J. communis L.
Время удерживания, мин УФ-спектр, идентифицированные компоненты Суммарная площадь пиков в 95% извлечении Суммарная площадь пиков в 70% извлечении Суммарная площадь пиков в 40% извлечении
14.476 -18.785 •О®, 14.441 (64.3 HAI - ) RB=14.2B1 814.781 tfjLNFER20D 2203Ю2В02В0Э11Э203Ю3Ш3Ш rr Бифлавоноиды 3686.7 4101.5 4446.0
15.616 -17.681 ,0 "DAD, 15568 (138 nAI - ) FRf=15475 & 1ВЭ01 oMUIFERHD 150.0 208.4 241.0
Гликозиды кверцетина
19.806 -22.203 ,00 *DAD1,21.748 (117 nA, - ) Rf21.115 822915 (JUIFERBD 220 240 2В02В0;00;20Э40ЭВ0ЭВ0 rr Гликозиды скутелляреина 2147.2 2143.0 2134.0
20.368 272.75 229.0 288.0
*
220 240 2В02В0Э003203Ю::60:В0 г Гликозиды лютеолина
27.897 -36.388 120 1С0 BD ВО 40 20 "CAD, 34.1« (134 nAI, - ) №34015 &Э4.7В of JLNFBR20D 5249.0 2623.0 677.0
Гликозиды апигенина
Процентное распределение флавоноидов в 95% извлечении представлено на рис. 8.
Рис. 8. Процентное распределение флавоноидов J. communis L. в 95% этанольном извлечении Fig. 8. Percentage distribution of flavonoids J. communis L. in 95% ethanol-extraction
На рис. 8 видно, что основной удельный вес флавоноидов плодов J. communis L. приходится на гликозиды апигенина (45.7%) и в меньшей степени на бифлавоноиды (32.0%).
В 70% спиртовом извлечении из плодов J. communis L. процентное распределение флавоноидов составило следующие результаты, как это представлено на рис. 9.
Гликозиды апигенина, 28.3%
Гликозиды лютеолина, 2.5%
Гликозиды кверцетина, 2.3%
Бифлавоноиды, 44.3%
Гликозиды скутелляреина, 22.5%
Рис. 9. Процентное распределение флавоноидов J. communis L. в 70% этанольном извлечении Fig. 9. Percentage distribution of flavonoids J. communis L. in 70% ethanol-extraction
В 70% этанольном извлечении наибольший удельный вес флавоноидов приходился на бифлавоноиды (57%).
Общее процентное распределение флавоноидов в 40% этанольном извлечении из плодов J. communis L. показано на рис. 10.
Гликозиды
_, кверцетина, 3.1%
Гликозиды
апигенина, 8.7%_
Гликозиды лютеолина, 3.7%
Гликозиды скутелляреина, 27.4%
Бифлавоноиды, 57%
Рис. 10. Процентное распределение флавоноидов в плодах J. communis L. в 40% этанольном извлечении Fig. 10. Percentage distribution of flavonoids J. communis L. in 40% ethanol-extraction
Данные, представленные на рис. 10, свидетельствуют о наилучшей экстрагирующей способности 40% этанола в отношении бифлавоноидов и гликозидов скутелляреина, но малопригодной для извлечения гликозидов апигенина.
На основании полученных результатов об экстрагирующей способности спиртов различной крепости для извлечения флавоноидов можно сделать следующий вывод. Выход разных групп флавоноидов в спирты различной концентрации оказался неравномерным. Более разбавленный спирт этиловый 40% концентрации лучше извлекает гликозиды скутелляреина, поскольку агликон скутелляреин по сравнению с другими флавоноидами J. communis L. более насыщен гидроксильными группами, а, следовательно, полярнее. Гликозиды апигенина лучше переходят в более крепкий 95% спирт, так как агликон апигенин включает меньше гидроксильных групп. Экстрагируемость бифлавоноидов при уменьшении крепости спирта возрастает. Более равномерно все группы флавоноидов J. communis L. экстрагируются спиртом этиловым 70% концентрации (рис. 11).
а я к ян и на п ft л
I Si
Л о
« ю
I Щ
я § ом да ои арг
но он то
лп л о п лф хр
95 70 40 Концентрация спирта,%
Бифлавоноиды Гликозиды скутелляреина I Гликозиды апигенина
Рис. 11. Степень извлечения групп флавоноидов плодов J. communis L. спиртами различной крепости Fig. 11. The recovery group of flavonoids fruits J. communis L. alcohols of varying strength
Однако следует заметить, что суммарный выход флавоноидов оказался наиболее высоким при экстракции 95% спиртом, тогда как наименее эффективным растворителем был 40% спирт этиловый (рис. 12).
и W
о ® £
16 =г 4 5
о о ¡г
с; X л
с о а
к л m л с; g
X а л Р
л m о
¡? О а
2С X
> л
и X
J 9246 7786
70% Ц 40% | Концентрация спирта этилового
Рис. 12. Суммарный выход флавоноидов при экстракции плодов J. communis L. спиртами различной крепости Fig. 12. The total yield of flavonoids in the extraction of fruit J. communis L. alcohols of varying strength
На приведенном рисунке видно, что выход флавоноидов при извлечении 95%-ным спиртом в 1.5 раза выше, чем спиртом этиловым 40% концентрации.
Заключение
Путь введения в оффицинальную рецептуру лекарственных форм на основе биологически активных соединений ранее известных в официальной и народной медицине лекарственных растений предоставляет в распоряжение разработчиков практически неограниченные возможности. Данный путь расширения номенклатуры лекарственных средств выглядит рациональным и малозатратным, т.к. нет необходимости заниматься полномасштабным научным поиском.
Все представленные в данной статье и иные исторические источники рассматривали данный наиболее используемый медициной вид можжевельника - можжевельник обыкновенный - с позиций лекарствоведения значительно шире, нежели это принято сегодня. Причем существующие прописи не оставляют место сомнениям на счет полагаемых фармакологических
эффектов. Данные умозаключения дают основу для более широкого изучения можжевельника обыкновенного и всего рода Junirerus с позиций фармакологии, фармацевтической технологии и фитохимического анализа.
Приведенные материалы о химии можжевельника обыкновенного дают дополнительный инструментарий для реализации дальнейших целевых научных исследований:
1. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращённо-фазном варианте изучен химический состав плодов J. communis L. Установлено, что плоды содержат около 19 компонентов флавоноидной структуры, причём доминирующими являются гликозиды апигенина, скутелляреина и бифлавоноиды. В небольшом количестве встречаются гликозиды кверцетина и лютеолина. Разнообразие компонентов в каждой группе оказалось следующим: 4 бифлавоноида, 3 гликозида скутелляреина, 2 гликозида кверцетина, 2 гликозида лютеолина и 8 гликозидов апигенина.
2. Сравнивая экстрагирующую способность спиртов разной концентрации, оказалось, что спирт этиловый 95% - наиболее полно извлекает гликозиды апигенина. Спирт этиловый 40% концентрации, лучше извлекает гликозиды скутелляреина. Бифлавоноиды лучше переходят в разбавленный спирт. Равномерный выход всех групп флавоноидов наблюдается при экстракции спиртом этиловым 70% концентрации.
3. Наибольший суммарный выход флавоноидов наблюдается при экстракции 95% спиртом этиловым. Учитывая все вышеизложенное можно утверждать, что наиболее подходящим экстрагентом для флавоноидов плодов J. communis L. является спирт этиловый 95%.
Список литературы References
Ауэрсвальд Б. Целебные травы и растения. 1910. М., Науч.-психол. кн-во. 251.
Aujersval'd B. Celebnye travy i rastenija [Herbs and plants.] 1910. M., Nauch.-psihol. kn-vo. 251. (in
Russian)
Догель И.М. 1900. Основы фармакологиии и рецептуры. Издание типографии Карла Риккера. 417. Dogel' I.M. 1900. Osnovy farmakologiii i receptury [Fundamentals of Pharmacology and recipes] Izdanie ti-pografii Karla Rikkera. 417. (in Russian)
Клышев Л.К., Бандюкова В.А., Алюкина Л.С. 1978. Флавоноиды растений: распространение, физико-химические свойства, методы исследования. Алма-Ата, Наука, 220.
Klyshev L.K., Bandjukova V.A., Aljukina L.S. 1978. Flavonoidy rastenij: rasprostranenie, fiziko-himicheskie svojstva, metody issledovanija [Flavonoids plants: distribution, physico-chemical properties, methods of research]. Alma-Ata, Nauka, 220. (in Russian)
Костюченко О.И. 1977. 6-оксифлавоны в растительном мире. Растительные ресурсы. 13 (2): 403-417. Kostjuchenko O.I. 1977. 6-oksiflavony v rastitel'nom mire [6-oxidyflavones in the plant world]. Rastitel'nye resursy. 13 (2): 403-417. (in Russian)
Новиков О.О., Писарев Д.И., Жилякова Е.Т. 2014. Можжевельник: фитохимия и фармакология рода Juniperus L. М., РАМН. 178.
Novikov O.O., Pisarev D.I., Zhiljakova E.T. 2014. Mozhzhevel'nik: fitohimija i farmakologija roda Juniperus [Juniper: Phytochemistry and pharmacology genus Juniperus] L. M., RAMN. 178. (in Russian)
Писарев Д.И. 2007. Обзор современного состояния исследований в области систематики, химии и фармакологии рода Juniperus L. Современные проблемы фитодизайна: материалы международной научно-практической конференции (Белгород, 28-31 мая 2007 г.). Белгород, Изд-во БелГУ. 296-304. (in Russian)
Pisarev D.I. 2007. Obzor sovremennogo sostojanija issledovanij v oblasti sistematiki, himii i farmakologii roda Juniperus L. [Review of the current state of research in the field of taxonomy, chemistry and pharmacology of genus Juniperus L.]Sovremennye problemy fitodizajna: materialy mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konfer-encii (Belgorod, 28-31 maja 2007 g.). Belgorod, Izd-vo BelGU. 296-304. (in Russian)
Писарев Д.И., Новиков О.О., Новикова М.Ю., Жилякова Е.Т. 2010. Изучение флавоноидного состава шишкоягод можжевельника длиннохвойного. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 150 (12): 657-660.
Pisarev D.I., Novikov O.O., Novikova M.Ju., Zhiljakova E.T. 2010. Izuchenie flavonoidnogo sostava shish-kojagod mozhzhevel'nika dlinnohvojnogo [Study of the flavonoid composition shishkoyagody of juniper dlinnohvoynogo]. Bjulleten' jeksperimental'noj biologii i mediciny. 150 (12): 657-660. (in Russian)
Соколов С.Я. 2000. Фитотерапия и фитофармакология. М., Мед. информ. Агентство. 976. Sokolov S.Ja. 2000. Fitoterapija i fitofarmakologija [Phytotherapy and phytopharmacology]. M., Med. inform. Agentstvo. 976. (in Russian)
Фармакология и токсикология. 1865. Под ред. Б.А. Окса и В.В. Пашутина. СПб., Типография инженера Г.А. Бернштейна. 916.
Farmakologija i toksikologija [Pharmacology and Toxicology]. 1865. Pod red. B.A. Oksa i V.V. Pashutina. SPb., Tipografija inzhenera G.A. Bernshtejna. 916. (in Russian.
European Pharmacopoeia. 2014. European Directorate for Quality of Medicines and Health care. Strasbourg, Council of Europe. 2 vol., 8th ed.
