CC BY
21
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОАМИНОВ В СТРУКТУРАХ МОЗЖЕЧКА НА РАЗНЫХ СРОКАХ ПОСЛЕ СМЕРТИ
© Ефремова О.А.*, Любовцева Л.А., Шептухина А.И., Кашкиров В.В.
Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова, г. Чебоксары
Проведено люминесцентно-гистохимическое исследование мозжечка, изъятого через разные сроки после установления смерти животных. Люминесцирующие структуры в коре мозжечка обнаружены на уровне ганглионарного и зернистого слоев. В этих структурах были выявлены нейроамины.
Ключевые слова: мозжечок, люминесцентно-гистохимическое исследование, гранулярно-люминесцирующие клетки (ГЛК).
Введение
По данным литературы наиболее чувствительными клетками являются нервные клетки головного мозга при любых стрессовых ситуациях, в том числе и после гибели человека [4].
Анализ экспериментального материала убеждает в том, что восстановление функций центральной нервной системы у оживленных животных происходит в следующей последовательности: сначала восстанавливается функция продолговатого и спинного мозга, затем среднего, промежуточного и, наконец, мозжечка и коры больших полушарий. В процессах умирания организма и при его оживлении и возвращении всех его функций к нормальному состоянию, главную, ведущую роль играет центральная нервная система [1].
Проблема оживления человека и животных после прекращения сердцебиения и дыхания представляет большой теоретический и практический интерес [2, 3]. Установлено, что после наступления смерти организма как целого, отдельные ткани и органы в течение некоторого времени остаются еще жизнеспособными.
Цель исследования - выявить постмортальные особенности локализации нейроаминов в биоаминсодержащих клетках мозжечка.
Методика исследования
Был исследован мозжечок 10 крыс-самцов. Мозжечок изымали под глубоким эфирным наркозом через 5, 10, 15 мин после смерти животных. Время наступления смерти считалось с момента остановки дыхания.
Свежезамороженные криостатные срезы органов толщиной 15 мкм исследовались люминесцентно-гистохимическими методами:
* Доцент кафедры Цитологии эмбриологии, гистологии, кандидат медицинских наук.
- Фалька-Хилларпа (1969) для выявления моноаминов: катехолами-нов и серотонина.
- Для идентификации гистаминсодержащих структур мозжечка ставили реакцию по Кроссу и соавт. (1971).
- С целью определения влияния вегетативной нервной системы в процессе умирания определяли серотониновый индекс.
- Метод спектрофлуориметрии использовался для идентификации количественного содержания нейроаминов в тканевых структурах мозжечка.
- Статистическую значимость данных оценивали по ^критерию Стью-дента.
Результаты исследования
При исследовании мозжечка на гистамин, изъятого через 5 мин после установления смерти животного, клетки выявлялись в молекулярном, ганг-лионарном и зернистом слоях. В молекулярном слое определялись единичные, тускло люминесцирующие клетки (табл. 2).
На уровне ганглионарного слоя чётко выявлялась цепочка клеток крупных размеров различной формы, в том числе и вытянутой грушевидной. Клетки люминесцировали ярким желтоватым свечением. В некоторых из них просматривались по 2-3 крупные разнокалиберные гранулы, которые мы отнесли к ГЛК (рис. 1). Средние числовые показатели клеток этого слоя составили 6 ± 0,26 на поле зрения.
а
ш
Рис. 1. Локализация гистамина в структурах мозжечка. а. гранулярная люминесцирующая клетка. Метод Кросса. ЛЮМАМ - 4. Об. 40. Гомаль 1,7
Наряду с крупными клетками в этом слое встречались мелкие пылевидные гранулы, люминесцирующие тускло желтоватым свечением. Мы пред-
полагаем, что это дегранулированные нервные клетки. Нами выявлено, что содержание гистамина в клетках этого слоя составило 2,3 у.е. (табл. 1). В зернистом слое выявлялись мелкие округлые клетки, люминесцирующие желтоватым свечением. Их число составило 11 ± 0,03 на поле зрения.
При исследовании мозжечка на гистамин, изъятого через 10 мин. после смерти животного, на препарате выявлялась цепочка клеток в основном округлой формы, люминесцирующих уже тусклым желтоватым свечением. Нами установлено, что содержание гистамина в этих клетках составило 1,2 у.е. и уменьшилось в 1,9 (р < 0,05) раз по сравнению с цитоструктурами мозжечка изъятого через 5 мин после смерти (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 4 ± 0,11 и уменьшилось в 1,5 раза.
При исследовании мозжечка на гистамин изъятого через 15 мин после смерти животного выявлялась едва различимая цепочка из мелких клеток, люминесцирующих очень тусклым желтоватым свечением. Нами выявлено, что содержание гистамина в этих клетках составило 1,8 у.е. и имело тенденцию к увеличению в единичных клетках по сравнению с предыдущим сроком (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 2 ± 0,08 и уменьшилось в 2 раза по сравнению с предыдущим сроком.
При исследовании мозжечка на гистамин изъятого через 20 мин после смерти животного люминесцирующие структуры не определялись.
При исследовании мозжечка на КА и серотонин, изъятого через 5 мин после смерти клетки также выявлялись в молекулярном, ганглионарном и зернистом слоях (табл. 2).
На препарате, на уровне ганглионарного слоя также выявлялась цепочка клеток округлой формы, люминесцирующих ярким желтоватым свечением. В цитоплазме некоторых из них просматривались по 2-4 крупные разнокалиберные гранулы. Мы также предполагаем, что это ГЛК. Средние числовые показатели клеток этого слоя составили 8 ± 0,56 на поле зрения.
В этом же слое выявлялись мелкие распавшиеся клетки, люминесцирующие тусклым свечением. Содержание КА в клетках этого слоя составило 1,4 у.е., а содержание серотонина - 1,3 у.е. (табл. 1). В зернистом слое также выявлялись мелкие округлые клетки, люминесцирующие желтоватым свечением. Их число составило 8 ± 0,29 на поле зрения.
При исследовании мозжечка на КА и серотонин, изъятого через 10 мин после смерти животного выявлялись различной формы дегранулировавшие клетки, люминесцирующие также ярким желтоватым свечением. Более мелкие клетки с пылевидными гранулами, люминесцировали тусклым желтоватым свечением. Содержание КА в клетках этого слоя составило 1,3 у.е., а содержание серотонина - 1,2 у.е. (табл. 1). Число люминесцирующих клеток составило 6 ± 0,34 и уменьшилось в 1,3 раза по сравнению с предыдущим сроком.
Таким образом, содержание КА и С по сравнению с цитоструктурами мозжечка изъятого через 5 мин после смерти не изменилось (р < 0,05).
При обработке препаратов на КА и серотонин через 15 мин после гибели крысы выявлялись одиночные крупные клетки, некоторые из них имели хлопьевидную форму и тускло люминесцировали. Число люминесцирую-щих клеток составило 3 ± 0,53 и уменьшилось в 2 раза по сравнению с предыдущим сроком. Содержание КА в этих клетках соответствовало 3,8 у.е., увеличилось в 2,9 раза (р < 0,05) по сравнению с цитоструктурами мозжечка изъятого через 10 мин, а содержание серотонина - 3,5 и возросло в 2,7 раза (р < 0,05) (табл. 1).
При исследовании мозжечка на КА и серотонин, изъятого через 20 мин после смерти животного выявлялись едва различимые распавшиеся клетки, люминесцирующие очень тусклым желтоватым свечением. Нами выявлено, что содержание КА в этих клетках составило 3,9 у.е., а содержание серотонина 3,7 и осталось практически без изменений по сравнению с предыдущим сроком (табл. 1).
Таблица 1
Интенсивность люминесценции биогенных аминов в структурах мозжечка (у.е.)
№ Структуры Гистамин Серотонин Катехоламины
1 5 мин 2,3 ± 0,5 1,3 ± 0,01* 1,4 ± 1,2*
2 10 мин 1,2 ± 0,1 1,2 ± 0,02* 1,3 ± 0,03*
3 15 мин 1,8 ± 0,02 3,5 ± 1,0* 3,8 ± 1,2*
4 20 мин - 3,7 ± 0,5 3,9 ± 0,3
Примечание: Г - гистамин, СТ - серотонин, КА - катехоламины;
Р < 0,05* - по сравнению с контрольной группой.
Таблица 2
Содержание люминесцирующих структур в мозжечке
Структуры Количество клеток, шт.
Молекуля рный слой Ганглионарный слой Зернистый слой
Метод Кросса Метод Фалька Метод Кросса Метод Фалька Метод Кросса Метод Фалька
5 мин 2 ± 0,17 1 ± 0,46 6 ± 0,26 8 ± 0,56 11 ± 0,03 8 ± 0,29
10 мин - - 4 ± 0,11 6 ± 0,34 6 ± 0,21 -
15 мин - 2 ± 0,08 3 ± 0,53 - -
20 мин - - Тени клеток - -
Установлено, что серотониновый индекс в наблюдаемых структурах мозжечка на сроке извлечения через 5, 10, 15, 20 мин после смерти составил 0,9. Таким образом, нами было установлено, что на всех сроках в люминес-цирующих клетках преобладали катехоламины над серотонином, из чего следует, что вегетативная нервная система реагирует на умирание организма, хотя в ней происходит истощение нейроаминов.
Выводы
1. Установлено, что содержание гистамина в цитоструктурах мозжечка постепенно снижается, а к 20 мин после смерти животных не определяются люминесцирующие структуры.
2. Выявлено, что содержание КА и СТ в отдельных клетках мозжечка со срока 15 мин увеличивается в 3 раза после смерти.
3. В цитоструктурах мозжечка серотониновый индекс на всех сроках извлечения после смерти был ниже 1.
Список литературы:
1. Гурвич А.М. Стойкие вегетативные состояния и смерть мозга // Биомедицинская этика / Под ред. академика РАМН В.И. Покровского. - М.: Медицина, 1997. - С. 189-197.
2. Попова Л.М. Смерть мозга при неврологических заболеваниях / Л.М. Попова, И.В. Мусатова, Н.И. Левченко // Анестезиология и реаниматология. - 1980. - № 5.
3. Уолкер А.Э. Смерть мозга / Пер. с англ.; под ред. проф. А.М. Гурвича. -М.: Медицина, 1988.
4. Kwon W.Y. Niacin Suppresses the Mitogen-Activated Protein Kinase Pathway and Attenuates Brain Injury After Cardiac Arrest in Rats / W.Y Kwon, GJ. Suh, K.S. Kim, H.J. Lee, K.Y. Jeong, Y.H. Kwak, K. Kim // Crit Care Med. -2013. - May 2.
ОЦЕНКА СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ
© Николаева Е.М.*, Павлова О.Ю.*
Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова, г. Чебоксары
Оценка стоматологического статуса проводилась у 3 групп пациентов: 1 - контрольная группа без соматических заболеваний, 2 - с гепатитом токсического генеза, 3 - циррозом печени токсического генеза. Проведено исследование упрощенного гигиенического индекса OHI-s (Green, Vermillion, 1964), гингивального индекса Лоэ и Сильнес (GI Loe, Silness,1967), индекса КПУ, pH смешанной слюны.
По данным полученных результатов было определено, что у пациентов с циррозом и гепатитом токсического генеза по индексу Грина-Вер-
* Студент кафедры Госпитальной терапии N° 2.
♦
