CC BY
12
ИССЛЕДОВАНИЕ БАКТЕРИЦИДНОГО ЭФФЕКТА ОЗОНИРОВАННОГО РЫБЬЕГО ЖИРА
А.А. Стручков, Н.А. Белянина, О.Е. Жильцова, О.В. Ковалишена, С.П.Перетягин
ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Минздрава России, Нижний Новгород ООО «Отри», Нижний Новгород
Ассоциация Российских озонотерапевтов, Нижний Новгород
Abstract
The results of the bactericidal properties of ozonized fish oil (ORF) are presented. The working solution was an oil composition containing ORF and intended for further use in dental, dermatological and cosmetic practice. Evaluation of the effectiveness of the composition was carried out on strains of microorganisms of the genus Candida, Streptococcus, etc., isolated from wound discharge and sputum.
Key words: fish oil, ozone, infection, wound treatment, bactericidal effect, dentistry, dermatology, cosmetics
Представлены результаты бактерицидных свойств озонированного рыбьего жира (ОРЖ). Рабочим раствором являлась масляная композиция, содержащая ОРЖ, и предполагающая дальнейшее использование в стоматологической, дерматологической и косметологической практике. Оценку эффективности композиции проводили на штаммах микроорганизмов рода Candida, Streptococcus и др., выделенных из раневого отделяемого и мокроты.
Ключевые слова: рыбий жир, озон, инфекция, лечение ран, бактерицидное действие, стоматология, дерматология, косметика.
Большинство микроорганизмов, с которыми приходиться сталкиваться в практической медицине, существуют в виде специальных биологических структур - биопленок, которые значительно повышающих жизненный потенциал этого сообщества. Микробиота такой биопленки очень устойчива к различным воздействиям, таким как УФО, антибиотикотерапия, факторы иммунной защиты. Следствием этого являются и затруднение репаративных функций, и формирование устойчивых штаммов патогенной флоры. Все это требует поиска новых средств воздействия и одним из выходов представляется применение активных форм кислорода, обладающих противовоспалительными и антибактериальными свойствами. Достаточно активно для разрушения биопленки в ротовой полости используется озонотерапия [Saini R.; Dimitrios Iliadis, Brian J. Millar.; C.A. da Silva et al.,], однако она ограничивается лишь применением газообразного озона или озонированной воды (физиологического раствора). К минусам использования озонирования водных растворов относиться короткое время существования в них озона, поэтому наиболее практичным
способом является применение озонированных растительных и животных масел, которые сохраняют свои свойства более длительный период.
Стандартом озонированного масла до сих пор считается очищенное оливковое масло [З. Риллинг], однако оказалось, что животные жиры наиболее предпочтительны для медицинского применения.
Выбор рыбьего жира обусловлен его особенностями, к которым можно отнести технические преимущества переработки и возможность получения достаточно больших партий однородного по составу и качеству сырья. На практике озонирование рыбьего жира оказалось технически более простым и доступным, озонированный жир дольше оставался стабильным и лучше усваивался тканями.
Озонирование масел ведет к образованию сложного и гетерогенного каскада компонентов. При озонировании жирные кислоты растительных и животных жиров окисляются с формированием озонидов и озоноидов. Именно эти соединения содержат активный синглетный кислород, обеспечивающий терапевтические эффекты. Одним из таких эффектов и является воздействие на микрофлору. Бактерицидный эффект озонированных жиров и масел широко применяется в хирургии, травматологии, косметологии, при лечении ран. Описано применение озонированного оливкового масла для санации ран и стимуляции репаративных процессов в стоматологии [Фазылова с соавт., Ахметова Д.М.].
Целью данного исследования являлось изучение бактерицидного эффекта озонированного рыбьего жира (ОРЖ), представленного в виде масляного раствора.
Материалы и методы
Экспериментальные исследования in vitro проводили на базе отдела лабораторных исследований ФГБОУ ВО "ПИМУ" Минздрава России. Композиция, содержащая озонированный рыбий жир, масляный компонент в качестве основы и тимол в качестве отдушки, предоставлена ООО «Отри» (г. Нижний Новгород). Для удобства дозирования композиция предоставлена в виде спрея.
При изучении антимикробных свойства исследуемой композиции использовали 18-24 часовые культуры госпитальной микрофлоры, выделенные из раневого отделяемого и мокроты больных. С целью стандартизации условий
эксперимента готовили суспензию мутностью 0,5 по МакФарланду
g
(1,5x10 КОЕ/мл). Высевание культур проводили на чашках стерильным ватным тампоном на стерильные плотные питательные среды Кровяной агар и ХХА (хромогенный агар для грибов рода Candida). Результаты оценивали через 24 часа культивирования в термостате при 37оС (для грибов время культивирования составило 48 часов)
Нанесение композиции, содержащей ОРЖ, производилось двумя путями. В первом случае композиция наносилась однократным нажатием на дозатор спрея, чашка Петри располагалась строго горизонтально, распылитель направлен вертикально вниз. Во втором случае нанесение производилось дозирующим устройством с объемом дозирования 10 мкл.
Рис. 1. Внесение композиции содержащей ОРЖ на чашку Петри.
Общий вид флакона и распылителя и вид сверху
Результаты исследования
Первый этап экспериментального исследования заключался в оценке антимикробных свойств композиции, содержащей ОРЖ, и оценке количества активных форм кислорода (АФК), которое должна содержать композиция ОРЖ, для предотвращения роста патогенной микрофлоры.
Количество АФК определяется значениями пероксидного числа (PV) ОРЖ, и выражается в ммоль/кг или мг/кг.
Для исследования была предоставлена композиция, содержащая ОРЖ с количеством АФК 2500мг/кг. Средний объем дозирования из распылительной насадки спрея 0,1г содержит 0,25мг АФК. Исходя из этого, в 10мкл количество АФК равно 0,025мг.
Таблица 1. Влияние композиции с ОРЖ, на рост и развитие микрофлоры, _выделенной из мокроты_
№ п/п Микроорганизмы / штамм № 0,25 мг АФК 0,025 мг АФК Контро ль №1 Контрол ь №2
1 Candida glabrata/432 - - + +
2 Candida krusei/432 - - + +
3 Candida albicans/439 - неполный лизис + +
4 S. aureus/416 - неполный лизис +* +*
5 Streptococcus oralis/436 - - + +
6 Streptococcus sanguis/416 - - + +
7 Neisseria flavescens/434 - - + +
« - » - отрицательная динамика роста; « + » положительная динамика роста; * - культура госпитальной микрофлоры, выделялась из раневого отделяемого штамм № 1478)
Candida glabrata
Streptococcus sanguis
Neisseria flavescens
Рис. 2. Влияние композиции с ОРЖ (слева) и контрольных образцов (справа) на рост и развитие некоторых штаммов микроорганизмов
а). Candida albicans
W
ч""7Ч\ -
в) Streptococcus sanguis
б) Candida krusei
г) Streptococcus oralis
Рис. 3. Рост и развитие некоторых штаммов микроорганизмов под действием композиции с ОРЖ Влияние композиции с ОРЖ (слева) и контрольных
образцов (справа)
С целью исключения влияния на результаты бактерицидности основы композиции проводили дополнительное исследование контрольных образцов. В качестве контроля использовали масляный компонент основы композиции (контроль №1) и масляный раствор тимола (контроль №2). Исследование тимола в качестве контроля обосновано его возможностью в определенных концентрациях проявлять бактерицидное действие.
Результаты проведенного исследования представлены в таблице 1 и рисунке 2.
Таким образом, полученные данные показывают бактерицидное действие исследуемой композиции ОРЖ на все виды флоры, задействованные в эксперименте в диапазоне концентраций АФК от 0,25 до 0,025 мг. Неозонированные вспомогательные компоненты бактерицидным эффектом не обладают.
Таблица 2. Сравнение бактерицидного эффекта композиции с ОРЖ, водного _раствора хлоргексидина и мази «Левометил»_
№п/п Микроорганизмы / № штамма 0,025 мг АФК Хлоргексидин «Левометил»
1 Candida glabrata / 432 - - -
2 Candida krusei / 432 - - -
3 Candida albicans / 439 - - +
4 S. aureus / 416 - - -
5 Streptococcus oralis / 436 - - -
6 Streptococcus sanguis / 416 - - -
7 Neisseria flavescens / 434 - - -
« - » - отрицательная динамика роста; « + » положительная динамика роста. Культуры госпитальной микрофлоры, выделялись из мокроты.
Вторым этапом исследования являлась оценка бактерицидного эффекта композиции, содержащей ОРЖ, по сравнению с мазью «Левометил» и хлоргексидином. Для этого на чашку Петри наносили 10мкл композиции ОРЖ, 25мкл водного раствора хлоргексидина в концентрации 1:3000 и точечно с помощью стерильного ватного тампона наносили мазь «Левометил». Результаты полученных исследований приведены в таблице 2 и рисунке 3.
Исходя из результатов проведенного эксперимента, можно сделать вывод о сопоставимости по силе бактерицидного эффекта композиции, содержащей ОРЖ, с бактерицидным эффектом водного раствора хлоргексидина и мази «Левометил».
Заключение
Таким образом, проведенное пилотное исследование бактерицидных свойств композиции, содержащей ОРЖ, дает теоретическое обоснование возможности применения данной композиции, как средства местного применения, обладающего бактерицидным эффектом. Это может быть использовано при создании стоматологических средств гигиены полости рта, гинекологических гигиенических средств, применяющихся не только в стационаре, но и амбулаторно, для профилактики инфекционных заболеваний, вызванных патогенной микрофлорой.
Список литературы
1. Ахметова Д.М. Озонированное масло в комплексной терапии хронических воспалительных заболеваний пародонта: Дисс. ... канд. мед. наук. Казань, 2008. - 113 с.
2. Масленников О.В., Конторщикова К.Н. Руководство по озонотерапии. Н. Новгород: Изд-во «Вектор ТиС», 2005. - 272 с.
3. Медицинский озон в лечении акушерско-гинекологической патологии: пособие для врачей. Н.Новгород: Изд-во Нижегородской государственной медицинской академии, 2001. - 16 с.
4. Микитин И.Л., Карапетян Г.Э., Винник Ю.С., Якимов С.В., Кириченко А.К. Лечение длительно незаживающих ран методом озонотерапии и низкочастотным ультразвуком. Издательство: Издательский дом Академии Естествознания. 2017
5. Риллинг З., Фибан Р. Практика озонокислородной терапии. 3-е изд. Изд-во мед. лит. Эвальда Фишера.
6. Фазылова Ю.В., Рувинская Г.Р., Ковязина С.Б. Эффективность озонотерапии в лечении поражений слизистой ротовой полости // Современные проблемы науки и образования. 2013. №6. URL: https://science-еducation.ru/ru/article/view?id=11740.
7. Щетинин С.А. Механизмы и практическое использование бактерицидных эффектов озона и озонированных масел // Терапевт. 2020. №6.
8. da Silva C.A., Pereira T.S., Quirino E.C.S., Ibiapina I.M.P., Fernandes A.U.R. Analysis of the effectiveness of ozone therapy in the treatment of peri-implantitis: a scoping review // Research, Society and Development. 2021. Vol. 10, No. 1. p. e30210111465. DOI: https://doi.org/10.33448/rsd-v10i1.11465
9. Iliadis D., Millar B.J. Ozone and its use in periodontal treatment // Open Journal of Stomatology. 2013. Vol. 3, No. 2. P. 197-202. DOI: 10.4236/ojst.2013.32034
10. Saini R. Ozone therapy in dentistry: A strategic review // Journal of Natural Science, Biology and Medicine. 2011. N2. P. 151-153. DOI: 10.4103/0976-9668.92318
