CC BY
98
Заключение
Для условий пастбищных комплексов этот вопрос не теряет своей актуальности. При этом основным звеном в общем комплексе борьбы с мухами в месте содержания животных является строгое соблюдение сани-тарно-зоогигиенических требований для животноводческих помещений и обязательное создание необходимых условий для устранения возможности выплода мух. Систематическая обработка внутренних поверхностей животноводческих помещений синтетическими инсектицидами имеет большое значение в истреблении мух в имагинальной стадии.
Библиографический список
1. Попов В.Д., Максимов Д.А., Морозов Ю.Л. Технологическая модернизации — основа инновационного развития АПК Северо-Западного региона России // Сельскохозяйственные машины и технологии. — 2012. — № 4.
2. Мусин А.М. Энергетика и экология технологических процессов животноводческих ферм // Энергосберегающие технологии в сельском хозяйстве: тр. Междунар. науч.-техн. конф. — 1994. — Т. 81. — С. 36-37.
3. Шилин В.А., Герасимова О.А. Совершенствование содержаний животных на пастбищном комплексе // Кормопроизводство. — 2013. — № 1. — С. 8-10.
4. Вагин Б.И., Шилин В.А., Герасимова О.А. Экономическая модель функционирования пастбищных комплексов // Экономика сельского хозяйства России. — 2013. — № 9. — С. 40-48.
5. Рыбалова Т.А. Цена на молоко как определяющий фактор развития отрасли // Переработка молока. — 2013. — № 4. — С. 10-12.
6. Передвижной навес для животных: патент на изобретение 2525922 Рос. Федерация: А01К1/00 / В.А. Шилин, О.А. Герасимова; заявитель и патентообладатель Велико-
лукская гос. с.-х. академия. — № 2012107111/13; заявл. 27.02.2012; опубл. 20.08.2014, Бюл. № 23.
7. Шилин В.А. Герасимова О.А. Охлаждение молока на пастбищах // Сельский механизатор. — 2011. — № 5 — С. 27.
References
1. Popov V.D., Maksimov D.A., Moro-zov Yu.L. Tekhnologicheskaya modernizatsii — osnova innovatsionnogo razvitiya APK Severo-Zapadnogo regiona Rossii // Sel'skokho-zyaistvennye mashiny i tekhnologii. — 2012. — № 4.
2. Musin A.M. Energetika i ekologiya tekhnologicheskikh protsessov zhivotnovod-cheskikh ferm / Trudy mezhdunarodnoi nauch-no-tekhnicheskoi konferentsii Energosberegay-ushchie tekhnologii v sel'skom khozyaistve. — 1994. — T. 81. — S. 36-37.
3. Shilin V.A., Gerasimova O.A. Sover-shenstvovanie soderzhanii zhivotnykh na past-bishchnom komplekse // Kormoproizvodstvo. — 2013. — № 1. — S. 8-10.
4. Vagin B.I., Shilin V.A., Gerasimova O.A. Ekonomicheskaya model' funktsionirovaniya pastbishchnykh kompleksov // Ekonomika sel'skogo khozyaistva Rossii. — 2013. — № 9. — S. 40-48.
5. Rybalova T.A. Tsena na moloko kak opredelyayushchii faktor razvitiya otrasli // Pererabotka moloka. — 2013. — № 4. — S. 10-12.
6. Peredvizhnoi naves dlya zhivotnykh: patent na izobretenie 2525922 Ros. Federatsiya: A01K1/00 / V.A. Shilin, O.A. Gerasimova; zayavitel' i patentoobladatel' Velikolukskaya gos. s.-kh. akademiya. — № 2012107111/13; zayavl. 27.02.2012; opubl. 20.08.2014, Byul. № 23.
7. Shilin V.A. Gerasimova O.A. Okhlazhde-nie moloka na pastbishchakh // Sel'skii mek-hanizator. — 2011. — № 5 — S. 27.
+ + +
УДК 632.3 О.В. Астафьева, Д.Д. Вилкова, Ю.В. Батаева, Д.К. Магзанова, М.А. Егоров O.V. Astafyeva, D.D. Vilkova, Yu.V. Batayeva, D.K. Magzanova, M.A. Yegorov
ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ СВОЙСТВ СТИМУЛЯТОРА РОСТА РАСТЕНИЙ «ЭПИН-ЭКСТРА» С ЦЕЛЬЮ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКОЛОГИЧЕСКИ ЧИСТОЙ ПРОДУКЦИИ
THE STUDY OF ANTIBACTERIAL PROPERTIES OF EPIN-EXTRA PLANT GROWTH STIMULATOR
TO OBTAIN ECOLOGICALLY CLEAN PRODUCTS
Ключевые слова: фитогормоны, эпибрассино- Keywords: phytohormones, epibrassinolide, Ep-
лид, эпин-экстра, стимулятор роста, антибакте- in-Extra, growth stimulator, antibacretial activity, риальная активность, Escherichia coli, Bacillus Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus
subtilis, Staphylococcus aureus, Bacillus megaterium. aureus, Bacillus megaterium.
Исследовано влияние стимулятора роста растений «Эпин-экстра» на основе гормона растений брассиностероида на некоторые виды бактерий. В качестве тест-объектов были выбраны условно-патогенные штаммы бактерий — Bacillus subtilis, Escheriсhia coli, Staphylocoсcus aureus, а также выделенная из почвы Bacillus megaterium. Исследовали разные концентрации препарата, полученные при разведении маточного раствора с концентрацией 1 мг/мл активного вещества. Использовали микробиологические методы, а именно метод диффузии препарата в питательную среду для изучения действия препарата на рост и развитие бактерий. Измеряли диаметр задержки роста бактерий на третий и пятый дни роста бактерий. Полученные данные показали, что препарат стероидного фитогормона эпибрассинолида «Эпин-экстра» обладает антибактериальным действием. Наиболее оптимальным для использования в качестве антибактериального препарата является раствор эпибрассинолида концентрацией 10-5 мг/мл. Также было замечено, что некоторые концентрации исследуемого препарата (10-3 и 10-7 мг/мл), наоборот, способствуют более интенсивному росту бактерий и могут быть в дальнейшем применены как стимуляторы роста некоторых видов полезных бактерий. Например, данный препарат в определенных концентрациях можно рекомендовать для стимуляции роста бактерии B. megateri-um, которую используют в качестве стимулятора роста растений. На основании полученных результатов можно сделать вывод, что используемый как стимулятор роста растений «Эпин-экстра» обладает в определенных концентрациях антибактериальным действием и может заменять некоторые антибиотические препараты. Таким образом, можно позволить обойтись без обработки семян
и растений химическими препаратами и получать экологически чистую продукцию.
The research evaluates the influence of Epin-Extra plant growth stimulator based on brassinosteroid plant hormone on certain bacteria. The test objects were potentially pathogenic strains of bacteria Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Bacillus megaterium extracted from soil. Different concentrations of the product obtained by dilution of the mother liquor with a concentration of 1 mg ml of active material were tested. The microbiological methods, namely the method of product diffusion into the medium, were used to study the effect of the product on the growth and development of bacteria. The diameter of delayed growth of bacteria on the third and fifth days of bacterial growth was measured. The findings showed that the product of a steroid phytohormone epibrassinolide Epin-Extra and has an antibacterial effect. The most effective antibacterial product is the epibrassinolide solution in a concentration of 10-5 mg ml. On the contrary it was also found that some concentrations of the product (10-3 and 10-7 mg ml) promote more intensive growth of bacteria and may be used in future as growth stimulators for some species of beneficial bacteria. For example, the product of certain concentrations may be advised to stimulate the growth of bacteria B. megaterium which is used as a plant growth stimulator. Based on the obtained results it may be concluded that Epin-Extra used as a plant growth stimulator in certain concentrations has an antibacterial effect and may replace some antibiotic substances. This may help to avoid chemical treatment of seeds and plants in order to obtain ecologically clean products.
Астафьева Оксана Витальевна, к.б.н., доцент, каф. биотехнологии и биоэкологии, Астраханский государственный университет. Е-mail: [email protected]. Вилкова Дарья Дмитриевна, магистрат, Астраханский государственный университет. E-mail: [email protected].
Батаева Юлия Викторовна, к.б.н., с.н.с., лаб. биотехнологии, Астраханский государственный университет. Е-mail: [email protected]. Магзанова Дамеля Кажигалиевна, к.б.н., с.н.с., лаб. биотехнологии, Астраханский государственный университет. Е-mail: [email protected]. Егоров Михаил Алексеевич, д.б.н., проф., зав. каф. биотехнологии и биоэкологии, Астраханский государственный университет. Е-mail: [email protected].
Astafyeva Oksana Vitalyevna, Cand. Bio. Sci., Assoc. Prof., Chair of Biotechnology and Bioecology, Astrakhan State University. Е-mail: [email protected]. Vilkova Darya Dmitriyevna, master's degree student, Astrakhan State University. E-mail: easy_breath@mail .ru.
Batayeva Yuliya Viktorovna, Cand. Bio. Sci., Senior Staff Scientist, Lab. of Biotechnology, Astrakhan State University. E-mail: [email protected]. Magzanova Damelya Kazhigaliyevna, Cand. Bio. Sci., Senior Staff Scientist, Lab. of Biotechnology, Astrakhan State University. Е-mail: [email protected].
Yegorov Mikhail Alekseyevich, Dr. Bio. Sci., Prof., Head, Chair of Biotechnology and Bioecology, Astrakhan State University. E-mail: egorovs.mail@ gmail.com.
Введение
В настоящее время актуальным вопросом сельского хозяйства является получение экологически чистой продукции. Для защиты семян и растений от фитопатогенов они обрабатываются различными антибиотиками, как правило, являющимися химически синтезированными. Данные вещества могут накапливаться как в растениях, так и в почве. Также со временем бактерии становятся резистент-
ными к данным видам препаратов. Поэтому остается актуальным поиск новых противо-микробных и противовирусных веществ.
Известно, что вещества, содержащиеся в самих растениях, обладают широким спектром биологической активности, что изучается и применяется в различных отраслях народного хозяйства и промышленности. Одними из природных компонентов, представляющих интерес для агропромышленности,
являются стероидные гормоны растений, а именно, сравнительно молодой класс — брас-синостероиды. По своему химическому строению брассиностероиды являются поли-оксистероидами, в структурном отношении особенно близки к экдизонам, являющимся гормонами линьки и метаморфоза насекомых. Обширные исследования в течение последних двух десятилетий показали, что брас-сины необходимы для нормального развития растения и регулирования целого ряда физиологических процессов, таких как рост корней, сосудистая дифференциация, эпина-стия листьев и репродуктивное развитие [1-3]. Исследован потенциал брассиностерои-дов для повышения устойчивости растений к болезням [4]. В результате обработки 24-эпибрассинолидом растений ячменя значительно снизилась болезнь листьев, индуцированная смешанной грибковой инфекцией, наряду с увеличением урожайности [5]. Проведены исследования влияния эпибрассиноли-да на позвоночных животных [6].
Исследования, касающиеся влияния эпиб-рассинолида на микроорганизмы в лабораторных условиях, малочисленны. Roth и со-авт. [7] обнаружили, что обработка низкой концентрацией брассиносодержащим экстрактом семян Lychnis Viscaria L. привела к повышению устойчивости табака, огурцов и томатов к вирусным или грибковым патогенам (вирус табачной мозаики, Sphaerotheca fuliginea, Botrytis Ые^а). Nakashita и др. [8] показали, что устойчивость при систематической обработки брассиностероидами табака возникала по механизму, отличному от известных. Z. Zhu [9] с соавторами изучали фунгицидное действие брассиностероидов по отношению к Penicillium expansum.
Целью работы является исследование эффектов влияния стимулятора роста «Эпин-экстра» на основе эпибрассинолида на развитие и рост некоторых групп бактерий.
Материалы и методы
Препарат «Эпин-экстра» был предоставлен некоммерческим научно-производственным партнерством НЭСТ-М (г. Москва).
В качестве тест-объектов были выбраны условно-патогенные штаммы бактерий — Bacillus subtilis ВКПМ В-1919, Escherihia coli СК ВКПМ В-1911, Staphylocoсcus aureus ВКПМ В-1899, полученные из ФГУП Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (г. Москва). Также использовали культуру Bacillus megaterium Q57-31, выделенную из ризосферы бобовых растений в лаборатории биотехнологии АГУ [10].
Исследовали разные концентрации эпиб-рассинолида, полученные при разведении маточного раствора с концентрацией 1 мг/мл активного вещества [11, 12]. Антибактериальную активность препарата в различных концентрациях определяли методом диффузии в агар.
На поверхность застывшей питательной среды в чашке Петри наносили 1 мл исследуемой культуры (стомиллионной суспензии из агаровой культуры), равномерно распределяли по поверхности среды. После посева чашки подсушивали в термостате 10-15 мин. В застывшей среде (РПА или в бобовом агаре), засеянной сплошным газоном культуры тест-микроорганизмов, стерильной стеклянной трубочкой с внешним диаметром 8 мм с резиновой грушей вырезали лунки для каждой выбранной концентрации препарата «Эпин-экстра». Далее в эти лунки, соблюдая правила стерильности, вносили препарат по 20 мкл в каждую. Посевы инкубировали при температуре оптимальной для тест-микроорганизмов (в данном случае при 37°С). Чашки Петри ставили в термостат при 37°С для инкубации [13].
Оценку диаметра зоны задержки роста колоний бактериальных клеток проводили в чашках Петри с РПА и бобовым агаром на третий и пятый дни эксперимента.
Результаты экспериментов обрабатывали общепринятыми методами математической статистики [14] в виде таблиц с помощью программы Microsoft Excel, Статистика, использовали текстовый редактор Microsoft Word.
Результаты и их обсуждение
Определяли диаметр зоны задержки роста (ДЗЗР, мм) в методе диффузии в агар (табл., рис.).
Результаты оценки активности исследуемого биопрепарата показали, что на третий день эксперимента для каждого вида бактерий разные концентрации препарата показали различную степень антибактериальной активности в отношении некоторых видов бактерий. Для E. сoli и B. megaterium концентрация 10-5 мг/л оказала выраженное подавляющее их рост действие. На B. subtilus и S. aureus более активно действует маточный раствор эпибрассинолида.
Данные, полученные на пятый день эксперимента, незначительно, но отличаются. Для исследуемых бактериальных тест-культур концентрация эпибрассинолида 10-5 мг/мл является наиболее универсальной и оказывает ингибирующее воздействие на все выбранные виды бактерий, но выраженное в разной степени.
Таблица
Сравнительное влияние некоторых концентраций эпибрассинолида на различные виды бактерий
ДЗЗР, мм
Исследуе- 3-й день 5-й день
концентрации, мг/мл
культуры 10-3 10-5 10-6 10-7 маточный раствор контроль 10-3 10-5 10-6 10-7 маточный раствор контроль
ДЗЗР, мм
E. coli 0,0 20,0± 2,6" 0,0 8,3±0,33" 0,0 0,0 7,5± 0,5" 23,0± 2,8" 10,0±0,6" 8,5± 0,3" 13,5±1,5" 0,0
B. subtilus 14,0±0,9" 8,5± 0,5" 9,0± 2,0" 0,0 17± 1,0" 0,0 8,5± 0,5" 10,5±0,25" 0,0 0,0 8,5±0,5" 0,0
S. aureus 9,0± 2,0 11,3±1,5 11,25±2,49 12,5±2,3 21,5±2,5 0,0 9,0±0,8 16,0± 1,3 10,0±1,2 10± 1,2 14±2,5 0,0
B. megateri um 0,0 10,1±1,3" 8,3±0,7" 0,0 7,5± 0,43" 0,0 0,0 10,1±1,3" 8,3±0,7" 0,0 7,5± 0,43" 0,0
Примечание * Разница с контролем достоверна при р<0,05; ДЗЗР — диаметр зоны задержки роста.
Рис. Влияние препарата «.Эпин-экстра» на бактериальные штаммы
Таким образом, в ходе эксперимента было выявлено, что исследуемый биопрепарат обладал антибактериальными свойствами. Следует отметить, что применение эпибрассинолида в практических целях будет более эффективным, если использовать для различных видов бактерий на ранних стадиях их развития наиболее активные для каждой культуры концентрации.
Согласно полученным данным, наиболее оптимальным для использования в качестве антибактериального препарата является раствор эпибрассинолида с концентрацией 10-5 мг/мл. Также было замечено, что некоторые концентрации исследуемого препарата (10-3 и 10-7 мг/мл), наоборот, способствуют более интенсивному росту бактерий и могут быть в дальнейшем применены как стимуляторы роста некоторых видов бактерий.
Заключение
В результате проведенных исследований была выявлена антибактериальная активность стимулятора роста растений «Эпин-экстра». Причем разные концентрации данного препарата обладали различной степенью активности в отношении некоторых видов бактерий. На основании полученных данных можно сделать вывод, что препарат «Эпин-экстра»
является не только стимулятором роста, но и может заменять некоторые антибиотические препараты, дает возможность обойтись без обработки семян и растений химическими препаратами и получать экологически чистую продукцию.
Библиографический список
1. Brosa C. Biological effects of brassinoster-oids // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. - 1999. - Vol. 34 (5). - P. 339-358.
2. Sasse J.M. Physiological actions of brassi-nosteroids: an update // J. Plant Growth Reg-ul. - 2003. - Vol. 22 (4). - P. 276-288.
3. Калимуллина И. Влияние Эпина-Экстра на урожай с/х культур // НЭСТ-М, публикации, 2014. - Режим доступа: http://www.nest-m.ru/index.php/publikatsii/ stati-o-preparatakh/regulyatory-rosta/epin-ekstra/404-vliyanie-epina-ekstra-na-urozhaj-s-kh-kultur.html.
4. Борисова Т. Новая парадигма для производителей сельскохозяйственной продукции // НЭСТ-М, публикации, 2013. Режим доступа: http://www.nest-m.ru/index.php/ publikatsii/stati-o-preparatakh/ 177-novaya-paradigma-dlya-proizvoditelej-selskokhozyajstvennoj-produktsii.html.
5. Pshenichnaya L.A., Khripach V.A., Voly-netz A.P., Prokkhorchik R.A., Manzheleso-va N.E., Morozik G.V. Brassinosteroids and resistance of barley plants to leaf diseases / In: Parfenov, V.I. (Ed.), Problems of Experimental Botany. - Minsk: Byelorussian Science, 1997. -P. 210-217.
6. Egorov M.A. The influence of phytogor-mone epibrassinolid on the vertebral animals in the early ontogenesis / Biotechnology Titles: Biotechnology and agriculture and the food industry. - USA, New York State: Nova science publishers, Inc., 2004. - P. 65-67.
7. Roth U., Friebe A., Schnabl H. Resistance induction in plants by a brassinosteroid-containing extract of Lychnis Viscaria L. // Zeitschrift fur Naturforschung - J. Biosci. -2000. - Vol. 55. - P. 552-559.
8. Nakashita H., Yasuda M., Nitta T., Asa-mi T., Fujioka S., Arai Y., Sekimata K., Ta-katsuto S., Yamaguchi I., Yoshida S. Brassino-steroid functions in a broad range of disease
resistance in tobacco and rice // Plant J. — 2003. — Vol. 33 (5). - P. 887-898.
9. Zhu Z., Zhang Z., Qin G.,Tian S. Effects of brassinosteroids on postharvest disease and senescence of jujube fruit in storage // Post-harvest Biology and Technology. — 2010. — Vol. 56 (2010). — P. 50-55.
10. Чан Минь Куан, Егоров М.А., Бата-ева Ю.В. Ростстимулирующий эффект штамма Bacillus megaterium в вегетационном опыте // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. — 2012. — № 3 (89). — С. 46-49.
11. Егоров М.А. Физиологические особенности действия фитогормона эпибрассинолида на организм животных в раннем онтогенезе. — Астрахань: Изд-кий дом «Астраханский университет», 2007. — 248 с.
12. Egorov M.A. Antioxidant Action of Biologically Active Substance of Brassinosteroids Class — Phytohormone Epibrassinolide / Biotechnology in Medicine, Foodstuffs, Biocataly-sis, Environment and Biogeotechnology. — USA, New York State: Nova science publishers, Inc., 2010. — P. 23-31.
13. Дзержинская И.С. Методы выделения, исследования и определения антибиотической активности микроорганизмов, обладающих антагонистическими свойствами: методические указания к практическим работам по дисциплине «Антибиотики» для студентов специальности 012400 «Микробиология». — Астрахань: Изд-во АГТУ, 2005. — С. 54-64.
14. Лакин Г.Ф. Биометрия: учебное пособие для биол. спец. вузов. — 4-е изд., пе-рераб. и доп. — М.: Высшая школа, 1990. — 352 с.
References
1. Brosa C. Biological effects of brassinoster-oids // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. — 1999. — Vol. 34 (5). — P. 339-358.
2. Sasse J.M. Physiological actions of brassi-nosteroids: an update // J. Plant Growth Reg-ul. — 2003. — Vol. 22 (4). — P. 276-288.
3. Kalimullina I. Vliyanie Epina-Ekstra na urozhai s.-kh. kul'tur // NEST-M, publikatsii, 2014. — Rezhim dostupa: http://www.nest-m.ru/index.php/publikatsii/stati-o-preparatakh/regulyatory-rosta/epin-ekstra/404-vliyanie-epina-ekstra-na-urozhaj-s-kh-kultur.html.
4. Borisova T. Novaya paradigma dlya pro-izvoditelei sel'skokhozyaistvennoi produktsii // NEST-M, publikatsii, 2013. Rezhim dostupa: http://www.nest-m.ru/index.php/publikatsii/ stati-o-preparatakh/177-novaya-paradigma-dlya-proizvoditelej-selskokhozyajstvennoj-produktsii.html .
5. Pshenichnaya L.A., Khripach V.A., Voly-netz A.P., Prokkhorchik R.A., Manzhelesova N.E., Morozik G.V. Brassinosteroids and resistance of barley plants to leaf diseases / In: Parfenov, V.I. (Ed.), Problems of Experimental Botany. — Minsk: Byelorussian Science, 1997. — P. 210-217.
6. Egorov M.A. The influence of phytogor-mone epibrassinolid on the vertebral animals in the early ontogenesis / Biotechnology Titles: Biotechnology and agriculture and the food industry. — USA, New York State: Nova Science Publishers, Inc., 2004. — P. 65-67.
7. Roth U., Friebe A., Schnabl H. Resistance induction in plants by a brassinosteroid-containing extract of Lychnis Viscaria L. // Zeitschrift fur Naturforschung — J. Biosci. — 2000. — Vol. 55. — P. 552-559.
8. Nakashita H., Yasuda M., Nitta T., Asami T., Fujioka S., Arai Y., Sekimata K., Takatsuto S., Yamaguchi I., Yoshida S. Brassinosteroid functions in a broad range of disease resistance in tobacco and rice // Plant J. — 2003. — Vol. 33 (5). - P. 887-898.
9. Zhu Z., Zhang Z., Qin G.,Tian S. Effects of brassinosteroids on postharvest disease and senescence of jujube fruit in storage // Post-harvest Biology and Technology. — 2010. — Vol. 56 (2010). — P. 50-55.
10. Chan Min' Kuan, Egorov M.A., Bata-eva Yu.V. Roststimuliruyushchii effekt shtamma Basillus megaterium v vegetatsionnom opyte // Vestnik Altaiskogo gosudarstvennogo agrar-nogo universiteta. — 2012. — № 3 (89). — S. 46-49.
11. Egorov M.A. Fiziologicheskie osoben-nosti deistviya fitogormona epibrassinolida na organizm zhivotnykh v rannem ontogeneze. — Astrakhan': Izdatel'skii dom «Astrakhanskii uni-versitet», 2007. — 248 s.
12. Egorov M.A. Antioxidant Action of Biologically Active Substance of Brassinosteroids Class — Phytohormone Epibrassinolide / Biotechnology in Medicine, Foodstuffs, Biocataly-sis, Environment and Biogeotechnology. — USA, New York State: Nova Science Publishers, Inc., 2010. — P. 23-31.
13. Dzerzhinskaya I.S. Metody vydeleniya, issledovaniya i opredeleniya antibioticheskoi ak-tivnosti mikroorganizmov, obladayushchikh an-tagonisticheskimi svoistvami: Metodicheskie ukazaniya k prakticheskim rabotam po distsipline Antibiotiki dlya studentov spetsial'nosti 012400 «Mikrobiologiya». — Astrakhan': Izd-vo AGTU, 2005. — S. 54-64.
14. Lakin G.F. Biometriya. Uchebnoe posobie dlya biol. spets. vuzov, 4-e izd., pere-rab. i dop. — M.: Vysshaya shkola, 1990. — 352 s.
+ + +
