CC BY
90
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 616.24-006.61-078.33-091.8
Д.С. Кобяков1, Е.Ю. Бычкова2, А.М. Авдалян2, И.П. Бобров3, С.А. Лазарев2, Н.М. Круглова2, Е.Л. Лушникова4, А.Ф. Лазарев2, Л.М. Непомнящих4
ИССЛЕДОВАНИЕ АКТИВНОСТИ ТОПОИЗОМЕРАЗЫ На ВО ВЗАИМОСВЯЗИ С КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ПАРАМЕТРАМИ И ПРОЛИФЕРАЦИЕЙ (ПО ВЫЯВЛЕНИЮ АРГИРОФИЛЬНЫХ БЕЛКОВ ЯДРЫШКООБРАЗУЮЩИХ РАЙОНОВ И АНТИГЕНА KI-67) ПРИ ПЛОСКОКЛЕТОЧНОМ РАКЕ ЛЕГКОГО
'Муниципальное бюджетное лечебно-профилактическое учреждение «Когалымская городская больница», 628481, г. Ко-галым; 2Алтайский филиал ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН, 656049, г. Барнаул; 3ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет», 656038, г. Барнаул; 4ФГБУ «Научно-исследовательский институт региональной патологии и патоморфологии» СО РАМН, 630117, г. Новосибирск
Исследованы топоизомераза IIa (TopoIIa), аргирофильные белки, ассоциированные с ядрышкообразующими районами (Ag-ЯОР-белки) и антиген Ki-67 в плоскоклеточном раке легкого. Определяли опухоли с низким и высоким содержанием ТороПа, Ag-ЯОР-белков и Ki-67. Содержание ТороПа имело связь с клинико-морфо-логическими параметрами (показателем Т, наибольшим размером опухоли, стадией и дифференцировкой) и маркерами пролиферации (Ag-ЯОР-белками, Ki-67). Выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого с низким содержанием ТороПа лучше по сравнению с высоким содержанием ТороПа. Выживаемость больных зависит от взаимного содержания ТороПа и клинико-морфологических параметров (показатель N и стадия заболевания), маркеров пролиферации (Ag-ЯОР-белков). Содержание ТороПа и Ag-ЯОР-белков являются независимыми факторами прогноза. Взаимное исследование ТороПа с клинико-морфологическими параметрами и содержанием Ag-ЯОР-белков имеет прогностическое значение при плоскоклеточном раке легкого.
Ключевые слова: топоизомераза Па; аргирофильные белки ядрышкообразующих районов; Ki-67; плоскоклеточный рак легкого.
RESEARCH OF TOPOISOMERASE IIA ACTIVITY IN CONJUNCTION WITH CLINICAL AND MORPHOLOGICAL PARAMETERS AND PROLIFERATION (TO IDENTIFY ARGYROPHILIC PROTEINS OF NUCLEOLAR ORGANIZER REGIONS AND ANTIGEN KI-67) IN SQUAMOUS CELL CARCINOMA OF THE LUNG D.S. Kobyakov', E. Yu. Bychkova2, A.M. Avdalyan2, I.P. Bobrov3, S. A. Lazarev2, N.M. Kruglova2, E.L. Lushnikova4, A.F. Lazarev2, L.M. Nepomnyashchikh4
"Kogalym City Hospital, 628481, Kogalym, Russian Federation; 2Altai branch N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center under the Russian Academy of Medical Sciences, 656049, Barnaul, Russian Federation; 3Altai Medical University, 656038, Barnaul, Russian Federation; 4Scientific Research Institute of Regional Pathology and Pathomorphology of the Siberia Region under the Russian Academy of Medical Sciences, 630117, Novosibirsk, Russian Federation
Topoisomerase Па (TopoIM), argyrophilic proteins associated with nucleolar organizer regions (Ag-NOR) and antigen Ki-67 in squamous cell carcinoma of the lung were investigated. Defined Tumors with low and high Topol.1а, Ag-NOR and Ki-67 were defined. Topol1а had a relationship with clinical and morphological parameters (value T, greatest dimension, stage of disease and tumor differentiation) and proliferation markers (Ag-NOR, Ki-67). Survival ofpatients with squamous cell carcinoma of the lung with low content of TopoIM is better as compared with high content of TopoIM. Survival ofpatients depends on the mutual content of TopoIM and clinical and morphological parameters (value N, stage of disease), proliferation markers (Ag-NOR). TopoIM and Ag-NOR are independent prognostic factors. Mutual research of TopoIM with clinical and morphological parameters and Ag-NOR has prognostic value in squamous cell carcinoma of the lung.
Key words: topoisomerase Па; argyrophilic proteins of nucleolar organizer regions; Ki-67; squamous cell carcinoma of the lung.
Рак легкого занимает ведущее место в заболеваемости и смертности среди злокачественных новообразований. В группе немелкоклеточного рака легкого наибольшая часть представлена плоскоклеточным раком (практически 75%). Вместе с тем результаты лечения и выживаемости таких больных далеки от желаемых. В связи с чем ведется поиск клинико-морфологических и биомолекулярных параметров, связанных с про-
гнозом у больных плоскоклеточным раком легкого.
В схемы химиотерапии плоскоклеточного рака легкого включены препараты антрациклинового ряда, ингибирующие фермент топоизомеразу 11а (ТороПа), степень активности которой определя-
Для корреспонденции: Кобяков Дмитрий Сергеевич — канд. мед. наук, зав. патологоанатомическим отд-нием; 628481, Тюменская область, Ханты-Мансийский автономный округ-Югра, г. Когалым, ул. Молодежная, 19; e-mail: dskob@yandex.ru.
ет чувствительность опухоли к данным препаратам. ТороПа — белок с ферментативной активностью, участвующий в топологической сборке ДНК во время транскрипции, конденсации и сегрегации хромосом. Пик его экспрессии находится в S-, G2-, М-фазах клеточного цикла, в связи с чем маркер коррелирует с пролиферативной активностью [1].
Для оценки пролиферативной активности общепризнанным и доступным является иммуногистохи-мическое определение уровня антигена Ю-67. Антиген Ю-67 выявляется в клетках в поздние G1-, S-,
G2-, М-фазы, однако функциональное значение этого ядерного белка в процессе пролиферации до конца не известно. В многочисленных исследованиях показана связь этого маркера с прогнозом опухоли [1, 2].
В настоящее время исследование аргирофильных белков, ассоциированных с ядрышкообразующими районами (Ag-ЯОР-белков) является общепризнанным маркером скорости клеточного цикла. До 75% окрашивания Ag-ЯОР-белков составляют два главных аргирофильных белка С23 (нуклеолин) и В23 (нуклеофозмин), играющих важнейшую роль в синтезе рибосомальной РНК. Эти белки выявляются в ядрах клеток во все фазы клеточного цикла, количественно увеличиваясь в 1,5—3 раза в S- и G2-фазы [3]. Показана обратная зависимость между количественным содержанием Ag-ЯОР-белков и длительностью клеточного цикла [4], временем удвоения опухоли [5], в том числе и при плоскоклеточном раке легкого [6].
Анализ существующей литературы показал противоречивый характер связи антигена ТороИа с кли-нико-морфологическими параметрами, антигеном Ki-67, Ag-ЯОР-белками и выживаемостью больных злокачественными опухолями [2, 7—12]. Кроме того, отсутствуют работы, уточняющие взаимную связь антигена ТороИа с клинико-морфологически-ми параметрами, антигеном Ki-67, Ag-ЯОР-белками и прогнозом при плоскоклеточном раке легкого.
Исходя из вышеизложенного, целью работы стало исследование антигена ТороПа во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами, антигеном Ki-67, Ag-ЯОР-белками и 5-летней выживаемостью при плоскоклеточном раке легкого.
Материал и методы
исследованы 111 операционных материалов плоскоклеточного рака легкого, удаленных за период 2007—2009 гг. в Алтайском краевом онкологическом диспансере (случаи с М1 и множественными опухолями исключены из исследования). Средний возраст пациентов составил 59 лет (от 40 до 75 лет); 106 (95%) мужчин и 5 (5%) женщин. Выполнена лобэктомия 67 (60%) пациентам и пневмонэктомия 44 (40%) пациентам. Пред- и постоперационная химиотерапия не проводились. Патогистологическая характеристика опухолей определена согласно классификации TNM 7-го пересмотра [13] и представлена в табл. 1.
Кусочки ткани фиксировали 18—24 ч в 10% нейтральном забуференном формалине. После стандартной проводки операционного материала готовили гистологические срезы толщиной 4 мкм. Препараты окрашивали гематоксилином и эозином, ШИК-реактивом/альциановым синим, по Крейбер-гу. Иммуногистохимическим методом определяли ТороИа (клон JS5B4), антиген Ki-67 (клон MIB-1), цитокератины High Molecular Weight (клон 34PE12) в автоматическом стейнере Ventana XT. Определяли индекс метки (ИМ) ТороПа и Ki-67 — количество положительно окрашенных клеток от общего количества подсчитанных клеток (в процентах). В каждом случае исследовали 1000 клеток в 5—7 полях зрения, при увеличении в 400 раз.
Для изучения Ag-ЯОР-белков срезы окрашивали азотнокислым серебром по одностадийной методике
Таблица 1
ТороПа в плоскоклеточном раке легкого
Характери- Количество случаев ИМ ТороИа
стика абс. %
Первичная опухоль
Т 1 22 20 21 (16— -26) 1- 2 (p = 0,9)
Т 2 71 64 22 (14— -30) 2— 3 (p = 0,01)
Т 3 18 16 26 (22— -35) 1— -3 (p = 0,02)
Наибольший размер
< 3 см 40 36 19 (15— -25) 4— -5 (p = 0,02)
> 3 см 71 64 24 (17— 31)
Лимфатические узлы
N 0 72 65 21 (16— -29) 6— -7 (p = 0,2)
N 1 27 24 23 (14— -33) 7— 8 (p = 0,8)
N 2 10 9 25 (22— -27) 6— 8 (p = 0,2)
N 3 2 2 27 (25— 28)
Стадия
I 55 50 20 (14— -27) 10— -11 (p = 0,2)
II 37 33 23 (17— -32)11— -12 (p = 0,2)
III 19 17 26 (22— -28) 10— -12 (p = 0,008)
Дифференцировка
высокая 35 31 19 (15— -26) 13— -14 (р = 0,2)
умеренная 52 47 23 (18— -28) 14— -15 (р = 0,2)
низкая 24 22 26 (21— -35) 13— -15 (р = 0,01)
ИП Ag-ЯОР-белков
низкий 58 52 20 (16— -26) 16— -17 (р = 0,02)
высокий 53 48 25 (18— 31)
ИМ Ki-67
низкий 50 45 20 (14— -24) 18— -19 (р < 0,001)
высокий 61 55 25 (18— 32)
[14]. Перед окрашиванием срезы автоклавировали при 120°С 20 мин в 0,01 М цитратном буфере (рН 6,0) [14]. Докрашивание ядер не проводили, срезы заключали в канадский бальзам. В каждом случае определяли площадь Ag-ЯОР-белков (в мкм2) в ядрах 100—120 случайно выбранных клеток с 10— 15 цифровых изображений, полученных с соответствующих полей зрения микроскопа при увеличении в 1000 раз (объектив ><100, 1.25, oil). Компьютерный анализ изображений проводили в программе ImageJ 1.42. Для исключения ошибки измерений гранулы размером менее 0,1 мкм2 исключены из анализа. В качестве внутреннего контроля окрашивания использовали площадь Ag-ЯОР-белков в ядрах малых лимфоцитов [15]. Находили индекс площади (ИП) Ag-ЯОР-белков — частное от деления площадей Ag-ЯОР-белков в клетке опухоли и малом лимфоците.
Статистический анализ полученных данных осуществляли в программе Statistica 6.0. Так как распределение ИМ ТороПа и Ki-67 было непараметрическим, то меру центральной тенденции представляли в виде медианы, а меру рассеяния в виде интерквар-тильного интервала. Распределение ИП Ag-ЯОР-белков было параметрическим, поэтому меру центральной тенденции представляли в виде среднего
•» * г \
4V
4»
<j ■
•> У'
fr*
• i'l
¿Г
•V«"»
♦г
■Л.
* * т
V ?«v" *
w # Z * > • „ «« •
/ e *
Л* #
4\i » <
. О
& *.
» <*<« «
h
>
> ^
Л 'с *."
V
•А
л • *
t .
V" .
У "
i> > I w
"j. '"■У .... *> ■•v. 'Л
Л' v? * ч
m
i
К
m
4 <
« *>
Рис. 1. Умерено дифференцированный плоскоклеточный рак легкого (а) с высоким содержанием ТороПа (б), Ag-ЯОР-белков (в) и К-67 (г). а — окраска гематоксилином и эозином, ><200; б, г — иммуногистохимический метод, ><400; в — окраска азотнокислым серебром, ><1000.
значения, а меру рассеяния в виде стандартного отклонения. При проверке статистических гипотез применяли непараметрические методы: и-тест Манна—Уитни, коэффициент корреляции рангов Спир-мена (г). Определяли общую скорректированную выживаемость больных за 5-летний период после операции, использовали метод Каплана—Мейера, логарифмический ранговый тест, регрессионную модель Кокса. Достоверность полученных критериев оценивали при р < 0,05.
Результаты и обсуждение
Результат иммуногистохимической окраски ТороПа и Ю-67 определялся в виде окрашивания ядер клеток коричневого цвета, от светлого до темного оттенка в зависимости от фазы клеточного цикла с пиком экспрессии в G2 и М (рис. 1, б, г). Результат окраски срезов азотнокислым серебром определялся в виде округлых гранул черного цвета (Ag-ЯОР-белки), расположенных на фоне коричневого ядрышка или бледно-желтого ядра (рис. 1, в).
ИМ ТороПа в плоскоклеточном раке легкого составил 22% (16—28%). Данное значение считали пороговым; соответственно, случаи с ИМ ТороПа 22% и более считались с высоким ИМ ТороПа (+Торо11а), до 22% — с низким (-ТороПа). ИМ Ю-67 в плоскоклеточном раке легкого составил 30% (23-45%). Данное значение считали пороговым, что согласуется с данными литературы [7]. Соответственно, случаи с ИМ Ю-67 30% и более считались с высоким ИМ
Ki-67 (+Ki-67), до 30% — с низким (-Ki-67). Индекс площади Ag-ЯОР-белков в плоскоклеточном раке легкого составил 6,98 ± 1,48. По аналогии с оценкой ИМ ТороПа и Ki-67, случаи с ИП Ag-ЯОР-белков 6,98 и более считались с высоким ИП Ag-ЯОР-белков ^Ag-ЯОР), до 6,98 — с низким (-Ag-ЯОР).
Результаты определения ТороПа в эпителиальных клетках плоскоклеточного рака легкого в связи с морфологическими параметрами опухоли, а также результаты сравнения между этими группами представлены в табл. 1.
Отмечалось последовательное увеличение ИМ ТороПа в плоскоклеточном раке легкого в группах Т1, Т2, Т3, однако статистически значимое различие получено только между Т3 и Т1, Т2. Также отмечалось достоверное отличие ИМ ТороПа между опухолями до 3 см и более 3 см. ИМ ТороПа возрастал в группах N0, N1, N2, N3 (показатель N), однако, статистически значимого различия не было получено. Достоверное отличие ИМ ТороПа получено между I и III стадией заболевания, высоко- и низкодиффе-ренцированной опухолью. Статистически значимые различия ИМ ТороПа получены в группах с низким и высоким ИП Ag-ЯОР-белков и ИМ Ki-67. ИМ ТороПа в плоскоклеточном раке легкого имел слабую корреляцию с показателем Т (r = 0,20; р = 0,04), наибольшим размером опухоли (r = 0,23; р = 0,02), стадией (r = 0,24; р = 0,01), ИП Ag-ЯОР-белков (r = 0,23; р = 0,02) и умеренную корреляцию с ИМ Ki-67 (r = 0,39; р < 0,001). Таким образом, возрастание ак-
г.
-ТороИа
р<0,001
+ТороИа
400 800
1200 1600 2000 б
-Ад-ЯОР
р<0,001
+Ад-ЯОР
-АЬ—АА-------А
400 800 1200 1600 2000
р<0,001
-Ад-ЯОР
+Ад-ЯОР
400
800
1200 1600
2000
Рис. 2. Графики выживаемости по Каплану—Мейеру больных плоскоклеточным раком легкого.
а — с низким и высоким содержанием ТороИа; б — с низким содержанием ТороПа и низким/высоким содержанием Ag-ЯОР-белков; в — с высоким содержанием ТороПа и низким/высоким содержанием Ag-ЯОР-белков. По оси абсцисс — время жизни (в днях), по оси ординат — доля выживших больных.
тивности ТороПа в процессе роста, при увеличении стадии заболевания и снижении дифференцировки плоскоклеточного рака легкого связано, вероятно, с увеличением пролиферативной активности опухоли и изменением функциональных процессов мутированной ДНК. Найденная нами корреляция ИМ ТороПа с активностью ядрышковых организаторов и в большей степени с антигеном Ю-67 подтверждает
значимость исследования ТороПа в качестве маркера пролиферативной активности опухоли.
Общая скорректированная выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого за 5-летний период после операции составила 49,0 ± 5,0%. Выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого имела статистически значимое различие в зависимости от содержания ТороПа: с -ТороПа 5-летняя выживаемость составила 74,8 ± 6,6%, с +Торо11а — 24,8 ± 6,6% (рис. 2, а).
В плоскоклеточном раке легкого с -ТороПа и +Торо11а выживаемость больных имела статистически значимые различия в зависимости от клини-ко-морфологических параметров — показателя N и стадии заболевания (табл. 2). На выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого с -ТороПа и +Торо11а оказывала влияние активность ядрышко-вых организаторов в клетках опухоли — в одной и той же группе выживаемость выше при низком ИП Ag-ЯОР-белков (см. табл. 2, рис. 2, б, в), что является отражением связи активности ядрышковых организаторов с продолжительностью клеточного цикла. Выживаемость больных с -ТороПа и +Торо11а не имела статистически значимых различий в зависимости от ИМ Ю-67. Таким образом, выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого зависит как от содержания ТороПа, так и от клинико-морфо-логических параметров по системе ТКМ (показателя N стадии заболевания) и ИП Ag-ЯОР-белков.
При проведении одномерного регрессионного анализа содержание ТороПа в плоскоклеточном раке легкого имело влияние на выживаемость больных (X2 = 27,2; в = 1,59, стандартная ошибка 0,34, р < 0,001). При проведении многомерного регрессионного анализа только содержание ТороПа (х2 = 61,4; в = 1,0, стандартная ошибка 0,38,р < 0,01) и ИП Ag-ЯОР-белков (х2 = 61,4; в = 1,31, стандартная ошибка 0,33, р < 0,001) влияли на выживаемость больных.
В нашем исследовании найдена корреляция ТороПа с ИМ Ю-67 в плоскоклеточном раке легкого, что согласуется с данными исследований рака легко-
Таблица 2
Общая 5-летняя скорректированная выживаемость больных в зависимости от содержания ТороПа и клинико-морфологиче-ских параметров, ИП Ag-ЯОР-белков, ИМ Ш-67 в плоскоклеточном раке легкого (логарифмический ранговый тест)
Характеристика -TopoIIa +TopoIIa
n выживаемость, % Р n выживаемость, % р
Лимфатические узлы
N 0 39 83,9 ± 6,6
N 1—3 11 25,8 ± 15,6 Стадия
I 33 82,5 ± 7,5
II—III 17 47,6 ± 13,3 ИП Ag-ЯОР-белков
низкий 34 86,2 ± 6,8 высокий 16 37,2 ± 13,7
< 0,01
0,02
33 28
22
39
35,8 ± 10,5 9,0 ± 5,7
35,0 ± 14,1 14,5 ± 7,0
< 0,001
0,02
< 0,001 24 41,4 ± 13,2 < 0,001 37 12,3 ± 5,6
Примечание.« — количество случаев.
го [8]. Также найдена умеренная корреляция Торо11а с содержанием Ag-ЯОР-белков. Таким образом, Торо11а является маркером пролиферативной активности при плоскоклеточном раке легкого.
Содержание Торо11а в плоскоклеточном раке легкого взаимосвязано с показателем Т, наибольшим размером опухоли, стадией и дифференцировкой. Взаимосвязь Торо11а с клинико-морфологическими параметрами также показана в исследовании плоскоклеточного рака гортани [16]. Однако Н. Erguden и соавт. [10] не нашли связи между содержанием Торо11а и клинико-морфологическими параметрами при раке легкого.
Выживаемостьбольныхплоскоклеточнымраком легкого с -Торо11а достоверно выше по сравнению с опухолями с +Торо11а. Такая взаимосвязь содержания Торо11а с выживаемостью больных прослежена и в других исследованиях на материале рака легкого и гортани [8, 9, 16]. Однако в исследовании Н. Erguden и соавт. [10] не найдено связи выживаемости больных раком легкого и Торо11а.
Выживаемость больных в группах -Торо11а и +Торо11а зависит также от клинико-морфологиче-ских параметров по системе ТКМ (показателя N и стадии заболевания) и от активности ядрышковых организаторов. Таким образом, для получения более точных актуа-риальных кривых выживания больных плоскоклеточным раком легкого необходимо данные исследования Торо11а соотносить с клинико-морфо-логическими параметрами и другими методами исследования пролиферации (исследование активности Ag-ЯОР-белков).
При проведении регрессионного анализа содержание Торо11а и Ag-ЯОР-белков являются независимыми факторами прогноза в плоскоклеточном раке легкого. §. Yan и соавт. [8] при исследовании рака легкого также показали, что содержание Торо11а является независимым фактором прогноза. Вероятно, высокое содержание Торо11а отражает высокий пролиферативный потенциал опухоли и нарушения в топологической сборке мутированной ДНК.
Таким образом, определение содержания Торо11а во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами и содержанием Ag-ЯОР-белков имеет прогностическое значение при плоскоклеточном раке легкого.
Выводы
1. В плоскоклеточном раке легкого содержание Торо11а имело связь с клинико-морфологическими параметрами (показателем Т, наибольшим размером опухоли, стадией и дифференцировкой) и маркерами пролиферации (Ag-ЯОР-белки, Ю-67).
2. Выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого с низким содержанием Торо11а лучше по сравнению с высоким содержанием Торо11а.
3. Выживаемость больных плоскоклеточным раком легкого зависит от взаимного содержания Торо11а и клинико-морфологических параметров (показатель N и стадия заболевания), маркеров пролиферации (Ag-ЯОР-белков).
4. Содержание Торо11а и Ag-ЯОР-белков в плоскоклеточном раке легкого являются независимыми факторами прогноза.
ЛНТЕРАТУРА (REFERENCES)
1. Beresford M.J., Wilson G.D., Makris A. Measuring proliferation in breast cancer: practicalities and applications. Breast Cancer Res. 2006; 8 (6): 216.
2. Martin B., Paesmans M., Mascaux C., Berghmans T., Lothaire P., Meert A.P. et al. Ki-67 expression and patients survival in lung cancer: systematic review of the literature with meta-analysis. Br. J. Cancer. 2004; 91 (12): 2018—25.
3. Sirri V., Roussel P., Hernandez-Verdun D. The AgNOR proteins: qualitative and quantitative changes during the cell cycle. Micron. 2000; 31 (2): 121—6.
4. Canet V., Montmasson M.P., Usson Y., Giroud F., Brugal G. Correlation between silver-stained nucleolar organizer region area and cell cycle time. Cytometry. 2001; 43 (2): 110—6.
5. Derenzini M., Sirri V., Trere D., Ochs R. The quantity of nucleolar proteins nucleolin and protein B23 is related to cell doubling time in human cancer cells. Lab. Invest. 1995; 73 (4): 497—502.
6. Abe S., Sukoh N., Ogura S., Kunikane H., Watanabe N., Nakajima I. et al. Nucleolar organiser regions as a marker of growth rate in squamous cell carcinoma of the lung. Thorax. 1992; 47 (10): 778—80.
7. Jakobsen J.N., Sorensen J.B. Clinical impact of Ki-67 labeling index in non-small cell lung cancer. Lung Cancer. 2013; 79 (1): 1—7.
8. Yan S., Shun-Chang J., Li C., Jie L., Ya-Li L., Ling-Xiong W. Topoisomerase II alpha expression and the benefit of adjuvant chemotherapy for postoperative patients with non-small cell lung cancer. BMC Cancer. 2010; 10: 621—30.
9. Dingemans A.C., van Ark-Otte J., Span S., Scagliotti G.V., van der Valk P., Postmus P.E. et al. Topoisomerase Ilalpha and other drug resistance markers in advanced non-small cell lung cancer. Lung Cancer. 2001; 32 (2): 117—28.
10. Erguden H.C., Koksal D., Demirag F., Bayiz H., Mutluay N., Berktas B. et al. The association of topoisomerase 2a expression with prognosis in surgically resected non-small cell lung cancer (NSCLC) patients. J. Thorac. Dis. 2012; 4 (4): 352—7.
11. Antonangelo L., Bernardi F. D., Capelozzi V.L., Takagaki T.Y., Younes R.N., Yagi N. et al. Morphometric evaluation of argyrophilic nucleolar organizer region is useful in predicting long-term survival in squamous cell carcinoma of the lung. Chest. 1997; 111 (1): 110—4.
12. Bernardi F.D., Antonangelo L., Beyruti R., Takagaki T., Saldiva P.H., Capelozzi V.L. A prognostic model of survival in surgically resected squamous cell carcinoma of the lung using clinical, pathologic, and biologic markers. Mod. Pathol. 1997; 10 (10): 992—1000.
13. Sobin L., Gospodarowicz M., Wittekind C. eds. TNM classification of malignant tumours. 7th ed. Oxford: Wiley— Blackwell, 2009: 138—46.
14. Trere D. AgNOR staining and quantification. Micron. 2000; 31 (2): 127—31.
15. Derenzini M., Trere D. Standardization of interphase Ag-NOR measurement by means of an automated image analysis system using lymphocytes as an internal control. J. Pathol. 1991; 165 (4): 337—42.
16. Shvero J., Koren R., Shvili I., Yaniv E., Sadov R., Hadar T. Expression of human DNA Topoisomerase II-alpha in squamous cell carcinoma of the larynx and its correlation with clinicopatho-logic variables. Am. J. Clin. Pathol. 2008; 130 (6): 934—9.
Поступила 16.01.14 Received 16.01.14
