CC BY
29
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ГОЛОГРАФИЧЕСКИХ НЕЭНЕРГОИНФОРМАЦИОННЫХ КОПИЙ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ НА КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУРАХ, КОНТАМИНИРОВАННЫХ МИКОПЛАЗМОЙ
Лопатина О.А., Данлыбаева Г.А., Подчерняева Р.Я., Егорочкин И.В.,
Гринкевич О.М., Селиванова Т.К., Бакланова О.В ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН
Одной из важных проблем в клеточной биологии является вопрос контаминации клеток микоплазмой и, исходя из этого, поиск способов деконтаминации от них. Известно, что для проведения биотехнологических исследований с целью получения разных медикобиологических препаратов (диагностических тест-систем и вакцин) необходимо применение клеточных линий свободных от микоплазмы. На протяжении ряда лет нами проводились исследования по применению различных химиопрепаратов [1, 4], а также биоэнергетических воздействий [5, 6], для освобождения клеточных линий от микоплазм. Однако, длительное применение антимикоплазменных препаратов приводит к повреждению клеток, нарушая их метаболизм и соответственно, измененяя чувствительность вирусов.
В ранее проведенной нами работе было установлено, что применение голографических энергоинформационных копий (ГИК) не вызывало необратимых изменений в клетках, частично подавляя рост микоплазм, а также наблюдалось подавление репродукции вирусов гриппа А [7, 8]. С этой целью проведены работы по изучению голографических энергоинформационных копий (ГИК).
В настоящей работе были использованы различные ГИК, являющиеся непосредственными энергоинформационными копиями микоплазм:
- прямые копии с культуры Mycoplasma hominis (№ 55, 274, ПЛ5);
- инверсно-оптическая копия (№ 550);
- инверсно-инактивированные с помощью аппарата БРТ (№ 108);
- нозод (№115 - препарат из убитой инактивированной неинфекционной культуры Mycoplasma hominis). Работу проводили с перевиваемыми культурами клеток, контаминированными микоплазмой hominis: клетки мозга хорька (Mpf), 2 линии гепатокарциномы человека (CH5 и Lunet), диплоидные клетки лёгкого эмбриона человека (ЛЭЧ).
Ростовую активность клеток изучали посредством определения индекса пролиферации (ИП), который определяли как отношение числа выросших клеток к числу посеянных. Жизнеспособность клеток (в %) определяли по окрашиванию клеток 0,4%-м раствором трипанового синего и подсчитывали число живых неокрашенных клеток в камере Горяева. Морфологию клеточных культур изучали с помощью окраски препаратов гематоксилин-эозином. Наличие микоплазмы определяли с помощью окраски клеток ДНК-специфичным флюорохромом - оливомицином с последующим исследованием препаратов в люминисцентном микроскопе и методом ОТ-ПЦР, применяя праймеры для обнаружения ДНК Му coplasma hominis [9].
Клеточные культуры обрабатывали ГИК трёхкратно сразу после пересева и ежедневно с интервалом в 24 часа. ГИК располагали над пробирками с клеточным монослоем, и последовательно обрабатывали с помощью лазерного луча (25 импульсов), а затем - воздействием инфракрасного света в течение 30 сек, так чтобы, лучи отражались от зеркала, расположенного под пробирками, усиливая воздействие на клетки при обратном отражении.
В проведенных экспериментах использовали прямые голограммы №274 и ПЛ5, при которых отмечалось снижение ростовой активности клеточных линий. При этом индекс пролиферации (ИП) в клеточных линиях СН5 и Lunet составил 0,7-0,8 и оказался ниже, чем в контроле (0,7-1,0 соответственно). При обработке инверсной ГИК (№ 550) этих культур индекс пролиферации (ИП) был выше (1,0—1,2), а при воздействии нозода ИП составлял (1,7-2,0), т.е. был в 2 раза выше, чем в контроле [1, 4]. Показатели индекса пролиферации клеточной культуры ЛЭЧ при применении ГИК № 550 также был выше по сравнению с контролем (и составляла 1,9).
Морфологические исследования показали, что при применении прямых ГИК чаще встречаются патологические митозы и апоптоз. При воздействии инверсной голограммы и нозода наблюдается более полный монослой с активным делением клеток, реже отмечалось наличие апоптоза и морфологические изменения клеток и их ядер. Воздействия прямых ГИК не снижало жизнеспособность клеточных линий СН5 и Lunet (72%, 45%) и приближалось к контролю (70%, 47% соответственно). При воздействии инверсных ГИК жизнеспособность клеточных линий СН5 и Lunet была выше (76%, 96%), так же как и при воздействии нозода - 61% и 78% соответственно). Влияние ГИК на контаминацию микоплазмой hominis показало, что в клеточных линиях СН5, Lunet, Mpf, ЛЭЧ прямые голограммы не оказывают, а в отдельных случаях даже усиливают рост микоплазм, что приводит к снижению ростовой активности клеток. Применение инверсной голограммы или нозода приводило к подавлению микоплазм (+) по сравненю с контролем (++++). Однако, полностью деконтаминация не была достигнута. При этом в этих культурах морфология клеток была значительно лучше.
Проведенные исследования ГИК свидетельствуют о разном воздействии на культуры клеток, контамированные микоплазмами. В отдельных случаях наблюдается снижение ростовой активности за счет усиления роста в них микоплазм (прямые голограммы), в других подавляется рост микоплазм и тем самым, повышается активность пролиферации и жизнеспособность клеток (нозод и инверсные ГИК).
Таким образом, наиболее перспективными ГИК для деконтаминации от микоплазм является нозод и инверсная голограмма. С нашей точки зрения необходимо провести дополнительные исследования, возможно при более длительной экспозиции с голограммами и на протяжении большего количества пассажей клеточных линий.
Материалы IX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва
ЛИТЕРАТУРА
1. Ночевный В.Т., Подчерняева Р.Я., Михайлова Г.Р. // Цитология. 2001. Т. 43. № 4. С. 374.
2. Михайлова Г.Р., Хижнякова Т.М., Подчерняева Р.Я., Гринкевич О.М. Тезисы Всероссийской научнопрактической конференции «Медицинская микробиология - XXI век». Саратов, 2004. № 1. С. 157-158.
3. Михайлова Г.Р., Хижнякова Т.М., Подчерняева Р.Я., Гринкевич О.М., Алипер Т.И. Инф. бюллетень Клеточные культуры. 2005. С. 41-45.
4. Михайлова Г.Р., Хижнякова Т.М., Подчерняева Р.Я. // Ветеринарная патология. 2005. № 1. С. 48-52.
5. Подчерняева Р.Я., Данлыбаева Г.А., Хижнякова Т.М., Михайлова Г.Р., Осипова О.В. // Ветеринарная патология. 2003. № 1. С. 56-57.
6. Хижнякова Т.М., Михайлова Г.Р., Подчерняева Р.Я., Калинин В.Н., Кутовой А.И., Макаров О.К. // Цитология. 2001. Т. 43. № 9. С. 900.
7. Данлыбаева Г.А., Егорочкин И.В., Исаева Е.И., Михайлова Г.Р., Подчерняева Р.Я. Сб. материалов XII международной конференции «Теоретические и клинические аспекты применения биорезонансной и мультирезонанс-ной терапии. Ч. 2. М., 2006. С. 364-368.
8. Данлыбаева Г.А., Егорочкин И.В., Исаева Е.И и др. // Рефлексотерапия. 2007. № 3(21). С. 20-23.
9. Михайлова Г.Р., Подчерняева Р.Я., Данлыбаева Г.А., Селиванова Т.К., Гребенникова Т.В., Гринкевич О.М. Материалы IX съезда Всероссиского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., 2007. С. 238.
10. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2007. Т. 9. № 4.
11. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2006. Т. 8. № 4.
12. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2005. Т. 7. № 4.
13. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2004. Т. 6. № 4.
14. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2003. Т. 5. № 4.
15. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2002. Т. 4. № 4.
16. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2001. Т. 3. № 4.
17. Журнал научных статей. Здоровье и образование в XXI веке. 2000. Т. 2. № 4.
18. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2007. Т. 9. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
19. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2006. Т. 8. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
20. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2005. Т. 7. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
21. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2004. Т. 6. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
22. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2003. Т. 5. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
23. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2002. Т. 4. № 12. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
24. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2001. Т. 3. № 1. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
25. Электронный научно-образовательный вестник «Здоровье и образование в XXI веке». 2000. Т. 2. № 1. URL: http ://e-pubmed. org/isu. html.
МатериалыIIX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва
