CC BY
23
AI
SSM
2. Ко-факторами формирования затяжного течения ВЭБ-инфекционного мононуклеоза являются наличие длительной лихорадки (более 14 дней), наличие неблагоприятного преморбидного фона, положительная индикация ДНК-ВЭБ на 3-4-й неделе болезни, незначительное повышение содержания ИЛ-1Р и ИНФ-у при первичном обследовании (менее двух норм) по сравнению со средними контрольными значениями.
3. У больных ВЭБ-инфекционным мононуклеозом с высоким риском формирования затяжного течения болезни при лечении амиксином отмечено существенное повышение содержания ИНФ-а. Это обосновывает его применение в комплексной терапии, направленной на предупреждение формирования затяжного течения и хронизации инфекции.
ЛИТЕРАТУРА
1. Катагадзе З.Г. Иммунодиагностика и иммунотерапия. Вест. РАМН. 2003. № 5. С. 19-22.
Katagadze Z.G. Immunodiagnostica i immunoterapiya. Vest. Ramn. 2003. № 5. S. 19-22.
2. Исаков В.А. Современные методы лечения герпетической инфекции. Terra Medica. 2005. № 3. С. 2-6.
Isakov V.A. Sovremennye metody lecheniya gerpeticheskoj infekcii. Terra Medica. 2005. № 3. S. 2-6.
3. Belyakov I.M., Isakov D., Zhu Q. A novel functional CTL avidity/activity to the site of mucosal immunization. J. Immunology. 2007. № 178. Vol. 11. P. 7211-7221.
4. Belyakov I.M., Kuznetsov V.A., Kelsall B. Impact of vaccine-induced mucosal CD8 CTLs of AIDS viral dissemination from mucosa. Blood. 2008. Vol. 8. P. 3258-3264.
5. Masopust D., Choo D., Vezyes V. Dinamic T-cell migration programmprovides resident memory within intestinal epithelium. J. Exp. Med. 2010. № 207. Vol. 3. P. 533-564.
6. Paludan S.R., Horan K.A. Recognitin of herpesviruses by the innate immune system. Nat. Rev. Immunol. 2011. № 11. Vol. 2. P. 143-154.
7. Wakim L.M., Woodward А., Bevan M.J. Mamory T-cell persisting within the brain after local infection show functional to their tissue of residence. Proc. Nat. Acad. Sci USA. 2010. № 107. P. 17872-17879.
8. West J., Gregory S.M., Sivaraman V. Of plasmocytoid dendritic cells by Kaposis sarcoma-assoiated herpesvirus. J. Virol. 2011. № 85. P. 895-904.
9. Barker P.E., Shipp М.А. Assignment of the gene for intercellular adhesion molecule-1 to proximal mouse chromosome 9. J.Immunol. 2008. № 9. P. 547.
10. Носик Н.Н., Стаханова В.М. Лабораторная диагностика вирусных инфекций. Клин. Микробиол. и антимикробная химиотерапия. 2007. № 2. С. 70-77.
Nosik N.N., Staxanova V.M. Laboratornaya diagnostika virusnyx infekcij. Klin. mikrobiologiya i antimikrobnaya himioterapiya. 2007. № 2. S. 70-77.
11. Тимченко В.Н., Чернова Т.М. Инфекционный мононуклеоз: проблемы диагностики и лечения. Terre Medica. 2006. № 1. С. 62-65.
Timchenko V.N., Chernova Т.М. Infekcionnyj mononukleos: problemy diag-nostiki i lecheniya. Terre Medica. 2006. № 1. S. 62-65.
12. Катагадзе З.Г., Заботина Т.Н., Короткова О.В. Современные возможности использования иммунологических показателей при иммунотерапии. Вест. Рос. онкол. науч. центра. 2005. № 1. С. 50-55.
Katagadze Z.G., Zabotina T.N., Korotkova O.V. Sovremennye vozmozhnosti ispol'zovaniya immunologicheskix pokazatelej pri immunoterapii. Vest. Pos. onkol. nauch. centra. 2005. № 1. S. 50-55.
13. Coen D.V. Anthiherpesvirus drugs: a promising spectrum of new drugs and drugs targets. Rewiews. 2003. Vol. 2. P. 278-288.
14. Barreiro O., Sala-Valdes М. Endothelial tetraspanin microdomians regulate leukocyte firm adhesion during extravasation. Blood. 2005. Vol. 105. № 7. P. 2852-2861.
15. Степанова Е.В. Герпесвирусные заболевания и ВИЧ-инфекция. ВИЧ-инфекция и иммуносупрессия. 2009. № 2. С. 16-30.
Stepanova E.V. Gerpesvirusnyezabolevaniya iVICh-infekciya. VICh-infekciya i immunosupressiya. 2009. № 2. S. 16-30.
16. Menzel E.J. Enzyme and immunomodulatior. Rewiews. 2005. Vol. 5. P. 378-385.
17. Raborn G.W. Recberrent herpes simplex labialis: selested therapeutic options J. Can. Dental Association. 2003. Vol. 69. № 8. P. 498-502.
18. Braun R.E., Pinkert C.A. Infertility in male transgenic mice. Biol. Reprod. 2004. Vol. 43. P. 684-693.
19. Eggert-Kruse W., Reuland М. CMV-infection-Related to male and female infertility factor. Fertil. Steril. 2009. Vol. 91. P. 67-82. ПГЯ
УДК: 616.33-002.2-078
Код специальности ВАК: 03.02.03
использование нанотехнологии для разработки иммунохроматографической тест-системы, предназначенной для скрининга h. pylori-ассоциированных заболеваний
Н. В. Богачева1, Д. Н. Смирнова2, Е. П. Колеватых1,
1ФГБОУ ВО «Кировский государственный медицинский университет», 2ФГБОУ ВО «Вятский государственный университет», г. Киров
Богачева Наталья Викторовна - e-mail: bogacheva70@mail.ru
Дата поступления 29.08.2018
Введение. Медицина, биология и фармация стали важными прикладными направлениями реализации достижений нанотехнологии. Одним из таких направлений в медицине и биотехнологии является разработка диагностических иммунохроматографических тест-систем. Цель исследования: с использованием нанотехнологий разработать иммунохроматографическую тест-систему, предназначенную для скрининга пациентов с хеликобактериозом. Материалы и методы. Для разработки иммунохро-матографической тест-системы использовали синтезированные препараты наночастиц коллоидного золота, неспецифические иммунохимические компоненты и специфические моноклональные антитела отечественного производства. Для анализа результатов работы применяли электронную микроскопию, спектрофотометрию, методы иммунохимического анализа. Результаты и обсуждение. В работе с учетом оптимальных условий были разработаны различные варианты иммунохроматогра-фических тест-систем. Определен порог чувствительности разработанного перспективного образца тест-системы, возможность его использования для скрининга пациентов на наличие хеликобактерас-социированных заболеваний. Заключение. С использованием нанотехнологий разработан экспериментальный образец иммунохроматографической тест-системы, способный выявлять патогенный белок CagA H. pylori в выращенной культуре микроорганизма, в кале и содержимом зубодесневых карманов у серопозитивных по хеликобактериозу лиц.
Ключевые слова: нанотехнологии, наночастицы коллоидного золота, иммунохроматографические тест-системы, хеликобактериоз, H. pylori.
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Introduction. Medicine, biology and pharmacy have become important applications for the implementation of nanotechnology. One of such directions in medicine and biotechnology is the development of diagnostic im-munochromatographic test systems. Purpose of the study: using nanotechnology to develop an immuno-chromatographic test system designed for screening patients with Helicobacteriosis. Materials and methods. Synthetic preparations of colloidal gold nanoparticles, nonspecific immunochemical components and specific monoclonal antibodies of domestic production were used to develop the immunochromatographic test system. For the analysis of the results of work, electron microscopy, spectrophotometry, methods of immunochemical analysis. Results and discussion. In work, taking into account optimal conditions, various versions of immunochromatographic test systems were developed. The threshold of sensitivity of the developed prospective sample of the test system is determined, the possibility of its use for screening patients for the presence of Helicobacter-associated diseases. Conclusion. With the use of nanotechnology, an experimental sample of an immunochromatographic test system has been developed that can detect the pathogenic protein CagA H. pylori in the grown culture of the microorganism, in the feces and in the contents of the dentogingival pockets in seropositive Helicobacteriosis individuals.
Key words: nanotechnologies, colloidal gold nanoparticles, immunochromatographic
test systems, Helicobacteriosis, H. pylori.
Введение
Нанотехнологии с современной точки зрения это фундаментальные физико-химические и биологические исследования в области синтеза и свойств нанообъектов, разработка на этой основе наноматериалов и наноустройств и их применение в различных областях науки и техники [1].
На сегодняшний день нанотехнологии прочно заняли свои позиции, привлекая большое внимание исследователей самых разных направлений своей увлекательностью, наукоемкостью, небывалыми возможностями. Медицина, биология и фармация стали важными прикладными направлениями реализации достижений нанотехнологии [2].
В медицине с использованием наночастиц и наносенсо-ров развивается ранняя и точная диагностика заболеваний. Одним из перспективных направлений диагностики, в частности, инфекционных заболеваний, является разработка иммунохроматографических тест-систем.
Иммунохроматографические тест-системы представляют собой мультимембранный композит с нанесенными на поверхность мембран иммунохимическими компонентами. В качестве метки наиболее часто в подобных тест-системах используют наночастицы золота, которые позволяют визуально детектировать результаты анализа [3]. Иммунохимические тесты сочетают в себе комплекс преимуществ перед другими методами диагностики - высокую чувствительность, простоту постановки, возможность проведения быстрого скрининга пациентов на предмет выявления у них возбудителей инфекционных заболеваний и назначения адекватной этиотропной терапии [4].
Одной из актуальных на сегодняшний день для медицины является проблема диагностики хеликобактериоза, на решение которой могут быть направлены возможности нанотехнологий.
В настоящее время хеликобактериоз является самой распространенной инфекцией человека. Установлено, что бактерия в 70-80% случаев является причиной развития хронического гастрита, в 50-60% - язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и желудка, более чем у 90% пациентов вызывает развитие MALT-лимфомы желудка [5-7]. Установлено, что инфицирование H. pylori является причиной как минимум 327 тыс. новых случаев рака желудка в год [8].
Все вышеперечисленное определяет целесообразность внедрения стратегии скрининга и контроля эрадикации H. pylori. На российском рынке на современном этапе раз-
вития диагностики хеликобактериоза существует два вида тест-систем - направленные на выявление антител и антигенов H. pylori. Наиболее распространены иммунохроматографические и иммуноферментные тест-системы, предназначенные для выявления антител к H. pylori в сыворотке крови пациентов. Однако с их помощью нельзя оценить эрадикацию микроорганизма. О положительном эффекте эрадикационной терапии при их применении можно судить лишь косвенно по снижению титров антител в сыворотке крови пациентов [9]. Примерами таких тест-систем являются «КреативМП-Н. ру!оп» (Россия), ImmunoComb (Израиль), Helicobacter pylori IgA/IgG ИФА тест-система (Финляндия). Иммунохроматографические тест-системы для обнаружения антигенов лишены данного недостатка, позволяют получить результаты анализа за 20-25 минут. Однако они предназначены исключительно для качественного определения антигена в биологическом материале (чаще всего в фекалиях). Примерами таких тест-систем являются CITO TEST H. pylori Ag (Украина), ImmunoCard STAT!®HpSA («Meridian Bioscience», Италия), «Хелико Стик» и «H. pylori тест» («Novamed», Израиль). Среди имеющихся недостатков у вышеперечисленных иммунохроматографических тест-систем следует отметить их направленность на выявление не самого микроорганизма, а фермента уреазы, который кроме H. pylori способен вырабатывать другие возбудители инфекционных заболеваний.
Наличие описанных выше недостатков у существующих иммунохроматографических тест-систем, а также отсутствие на рынке отечественного аналога, способного выявлять непосредственно антигены H. pylori, обосновали актуальность и цель исследования: с использованием нанотехнологий разработать иммунохроматографичес-кую тест-систему, предназначенную для скрининга пациентов с хеликобактериозом.
Материалы и методы
В работе использовали моноклональные антитела (МкАТ) («Биалекса», Россия); антивидовые антитела козы против IgG мыши («Биалекса», Россия); золотохлористово-дородную кислоту HAuCl4-3H20 («Sigma», США); деионизи-рованнную воду (ГОСТ 11.029.003-80); соляную кислоту (ГОСТ 3118-77); азотную кислоту (ГОСТ 4461-77); цитрат натрия 5,5-водный («Реахим», Россия); хлорид натрия («Реахим», Россия); карбонат калия («Реахим», Россия);
AI
SSM
гидрокарбонат натрия («Реахим», Россия); дигидрофос-фат калия («Panreac», Испания); гидрофосфат натрия («Sciphos», Китай); трис(гидроксиметил)аминометан («Sigma», США); трис гидрохлорид («Panreac», Испания); полиэтиленгликоль 40 000 («Sigma», США); бычий сывороточный альбумин («Диа-М», Германия); Tween-20 («AppliChem», Германия); сахарозу («Реахим», Россия).
Все растворы готовили на деионизированной воде.
Мультимембранный комплекс был разработан на основе мембран фирмы «MDI» (Индия).
При разработке иммунохроматографической тест-системы было использовано следующее оборудование: весы электронные аналитические «Adventurer» («OHAUS», США); электронный трансмиссионный микроскоп «JEM-2100» («Jeol», Япония); спектрофотометр сканирующий «СПЕКС ССП-705-4» (ЗАО «Спектроскопические системы», Россия); центрифуга лабораторная «Centrifuge 5415 R» («Eppendorf», Германия); центрифуга-вортекс «Микроспин» («Biosan», Латвия); термостат «ТСО-1/80» («СПУ», Россия); магнитная мешалка («Heidolph», Германия); резак для бумаги («Rahmenlos® Katze Geschenk Shirt», США); рН-метр «рН-410» («Аквилон», Россия); система для получения деионизированной воды «Arium 611 UF» («Sartorius», Германия).
Для оценки чувствительности были использованы культуры H. pylori из коллекции культур кафедры микробиологии ФГБОУ ВО «Вятский государственный университет».
Культуры H. pylori выращивали на селективной питательной среде - колумбийском кровяном агаре с антибиотиками амфотерицином и ванкомицином в анаэро-стате при температуре 37°С в течение 3-5 суток. Принадлежность культур к H. pylori подтверждена бактериологическим и биохимическим методами, методом ПЦР при использовании коммерческих тест-систем «Хеликопол VA», «Хеликопол CA», «Хеликопол IA», «Хеликопол BA» (Россия), «ДНК-технологии» (Россия), методом иммуно-хроматографии при использовании коммерческой тест-системы «NovaMed» (Израиль).
Для оценки специфичности использовали культуру Proteus vulgaris из коллекции культур кафедры микробиологии ФГБОУ ВО «Вятский государственный университет». Культуру выращивали на мясопептонном агаре в термостате при температуре 37°С в течение суток. Принадлежность культуры к P. vulgaris была подтверждена биохимическими и микробиологическими методами.
Оптическую концентрацию микробных клеток в суспензиях определяли с использованием отраслевого стандарта мутности ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ РФ (ОСО 42-28-85П).
Биологическую концентрацию клеток в агаровой культуре H. pylori определяли, используя для расчета формулу:
М = (а*10")/У,
где
М - количество клеток в 1 см3 исследуемого субстрата, м.к.-см-3;
а - среднее число колоний при высеве из данного разведения, шт;
10 - коэффициент разведения;
n - порядковый номер разведения, из которого сделан высев;
V - объем суспензии, взятой для посева, см-3.
Погрешность измерения рассчитывали по формуле [6]:
I95 = 2<(а/г),
где
а - среднее число колоний, выросших на чашках Петри, шт;
r - число повторностей высева;
2 - постоянный коэффициент.
Результаты и их обсуждение
Работа по созданию иммунохроматографической тест-системы для диагностики антигена патогенности Cag A H. pylori была проведена на основании обобщенных данных [10] по выбору оптимальных условий, используемых при разработке высокоспецифичных и высокочувствительных иммунохроматографических тест-систем для диагностики возбудителей инфекционных заболеваний.
Для этого на первом этапе было синтезировано 12 серий препарата наночастиц коллоидного золота (НчКЗ), отличающихся друг от друга диаметром и формой частиц, а также их однородностью. По результатам электронной микроскопии и спектрофотомерии наиболее кондиционными оказались наночастицы серий препарата № 10 и № 12, которые обладали также оптимальной адсорбционной способностью, определенной при постановке «золотого числа» - минимальное количество антител, необходимых для защиты коллоидного раствора от его агрегации при добавлении 10% раствора натрия хлорида. Они и были рекомендованы для дальнейшей разработки имму-нохроматографической тест-системы, предназначенной для диагностики хеликобактериоза.
Далее, используя НчКЗ серий № 10 и № 12, получили несколько вариантов конъюгатов с моноклональными антителами к антигену Cag A H. pylori (МкАТ-1811 и МкАТ-387). При этом применили наиболее хорошо зарекомендовавшие себя при разработке и анализе иммунохроматографических тест-систем два буферных раствора -0,025 М ФСБ и 0,025 М СББ. В результате было получено восемь вариантов конъюгатов, представленных в таблице 1.
РИС. 1.
Результаты электронной микроскопии серий препарата НчКЗ № 10
(размер частиц - 26-30 нм).
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Для дальнейшего получения конъюгата были выбраны два варианта комбинации НчКЗ и антител: 2.1-конъюгат НчКЗ № 10 с МкАТ-1811 и 2.3 конъюгат НчКЗ № 10 с МкАТ-387. В обоих случаях для получения конечной концентрации антител в конъюгате 20 мкг*см-3 их предварительно разводили на 0,025 М Трис-буфере. По результатам спектро-фотометрии данные варианты показали наибольшее увеличение оптической плотности конъюгата и длины волны максимума пика поглощения по сравнению с исходными спектрофотометрическими показателями НчКЗ серии препарата № 10.
Для получения значения оптической плотности 2,0, которое считается оптимальным при разработке иммунох-роматографической тест-системы [10], конъюгаты разводили стабилизирующим буфером относительно их исходной оптической плотности 5,120 (конъюгат вариант 2.1) и 4,280 (конъюгат вариант 2.3) соответственно в 2,56 и 2,14 раза.
Готовые растворы конъюгата методом пропитывания наносили на мембраны для конъюгата, при этом соблюдали плотность нанесения 30 мкл на 1 см2. Готовые конъюгаты сушили на воздухе при комнатной температуре в течение суток.
Для получения иммунохроматографического композита последовательно на нитроцеллюлозную мембрану наклеивали мембраны для конъюгата, для образца и для адсорбента. Затем полученный мультимембранный композит нарезали при помощи резака на отдельные полоски шириной 3,5-4,0 мм.
Для аналитической зоны использовали МкАТ-1811, МкАТ-387 и ПкАТ. Учитывая данные [10], для аналитической зоны использовали тот же буфер, который был применен для приготовления конъюгата - 0,025 М Трис-буфер. Варианты комбинаций антител в конъюгате и аналитической зоне, использованные в работе для разработки иммунохромато-графической тест-системы, представлены в таблице 2.
МкАТ наносили в выбранных концентрациях (таблица 2) на нарезанные полоски мультимембранного композита вручную, используя наконечник и микропипеточный дозатор. В контрольную зону также микропипеточным дозатором наносили нтивидовые антитела козы против иммуноглобулинов мыши в одной концентрации - 10 мг-см-3. Тест-системы высушивали при комнатной температуре в течение суток.
Таким образом, было изготовлено 12 вариантов имму-нохроматографических тест-систем. Все экспериментальные образцы были протестированы с музейным штаммом H. pylori 11б, цельную культуру которого, смытую с селективной питательной среды, предварительно перед исследованием разводили 0,025 М ФСБ с добавлением Tween-20 в конечной концентрации 0,05 % в соотношении 1:1.
По результатам исследования оптимальным оказались варианты № 7-9 (МкАТ-387 с НчКЗ в конъюгате и МкАТ-1811 в аналитической зоне), которые обеспечивали появление окрашивания точки в зоне нанесения аналитических антител, с максимальной яркостью точки при тестировании суспензии культуры H. pylori 11б с вариантом № 9. Остальные варианты оказались неспецифичными. При тестировании иммунохроматографических тест-систем №№ 1-6 и №№ 10-12 с буфером разгона без культуры они
показали положительный результат окрашивания точки в аналитической зоне, чего не должно быть при наличии специфичности тест-системы.
Далее была собрана иммунохроматографическая тест-система в варианте № 9 и определен порог чувствительности ее в отношении культуры H. ру1оп. Для этого использовали ряд последовательных разведений культуры -1-1010 м.к.-см-3; 5-109 м.к.-см-3; 2,5-109 м.к.-см-3; 1,25-109 м.к.-см-3. Появление окрашенной (розовой) точки в контрольной зоне указывало на корректность проведенного исследования. Порог чувствительности тест-системы, о чем свидетельствовало появление розовой точки в аналитической зоне, по результатам проведенных исследований составил 2,5-109 м.к.-см-3.
Кроме этого, на следующем этапе работы был определен порог чувствительности тест-системы по биологической концентрации, т. е. по отношению к живым микробным клеткам, содержавшимся в агаровой суспензии. Его значение составило (1,7±4,8)-108 КОЕ*см-3. Более высокая чувствительность анализа, рассчитанная по биологической концентрации в сравнении с таковой, определенной по оптической концентрации микроорганизмов, возможно, связана с тем, что белок CagA имеет внутриклеточную локализацию.
Для оценки специфичности разработанного с помощью нанотехнологий образца тест-системы использовали буфер разгона с культурой P. vulgaris. Данный микроорганизм также является возбудителем заболеваний желудочно-кишечного тракта и присутствует в кишечнике здорового человека и многих животных. Для тестирования
ТАБЛИЦА 1.
Варианты конъюгатов моноклональных антител с сериями препаратов НчКЗ № 10 и № 12
Варианты конъюгатов (номер конъюгата), приготовленных на 0,025 М ...
Сукцинатно-боратном буфере ТРИС-буфере
МкАТ-1811 + КЗ № 10 (1.1) МкАТ-1811 + КЗ № 10 (2.1)
МкАТ-1811 + КЗ № 12 (1.2) МкАТ-1811 + КЗ № 12 (2.2)
МкАТ-387 + КЗ № 10 (1.3) МкАТ-387 + КЗ № 10 (2.3)
МкАТ-387 + КЗ № 12 (1.4) МкАТ-387 + КЗ № 12 (2.4)
ТАБЛИЦА 2.
Варианты иммунохроматографических тест-систем
Вариант иммунохрома-тографической тест-системы Вариант конъюгата Аналитическая зона
Вид антител Концентрация антител, мг*см-3
1 2.1 МкАТ387 4,0
2 2.1 МкАТ 387 8,0
3 2.1 МкАТ387 12,0
4 2.1 ПкАТ 4,0
5 2.1 ПкАТ 8,0
6 2.1 ПкАТ 12,0
7 2.3 МкАТ1811 4,0
8 2.3 МкАТ 1811 8,0
9 2.3 МкАТ1811 12,0
10 2.3 ПкАТ 4,0
11 2.3 ПкАТ 8,0
12 2.3 ПкАТ 12,0
AI
SSM
использовали разведения на буфере разгона соответствующей культуры: 1-1010, 5^109, 2>109 м.к/см-3.
При тестировании гетерологичной культуры P. vulgaris в исследуемых концентрациях, а также при тестировании буфера разгона окрашивания аналитической зоны не наблюдалось (рис. 2), что свидетельствовало о специфичности разработанного образца иммунохроматографиче-ской тест-системы.
Кроме этого, оценили возможность использования для тестирования не только выращенной чистой культуры, но и кала, а также содержимого зубодесневых карманов. Для этого биологический материал брали от серопозитивных по отношению к H. pylori лиц.
С этой целью предварительно у 20 добровольцев, с которыми заранее было подписано добровольное соглашение на участие в исследовании, из локтевой вены провели забор крови. Для тестирования сыворотки крови на наличие антител к белку CagA H. pylori использовали ком-мерческийо набор для ДОТ-анализа «Хелико-экспресс» («ВЕКТОР-БЕСТ», Россия).
У пяти серопозитивных доноров были протестированы образцы кала на наличие белка CagA H. pylori. В качестве отрицательного контроля использовали буфер разгона.
По результатам тестирования на разработанных иммунох-роматографических тест-системах для скрининга хелико-бактериоза в двух из пяти образцах был обнаружен белок CagA H. pylori (рис. 3).
На основании научных данных, представленных в работах [10-12], параллельно с тестированием кала у серопозитивных по белку cagA лиц проводили тестирование содержимого зубодесневых карманов. Забор биологического материала из зубодесневых карманов осуществляли стерильными штифтами. Отобранный материал ресуспен-дировали в 1,5 см3 буфера разгона, полученную суспензию центрифугировали при 2000 об.-мин-1 в течение 20 мин для осаждения биологического материала, а затем полученный осадок ресуспендировали в 0,15 см3 буфера разгона. Подготовленный таким образом материал тестировали на наличие белка CagA H. pylori, используя разработанную иммунохроматографическую тест-систему. Для подтверждения результатов использовали бактериологический метод - биологический материал сеяли на селективную питательную среду.
По результатам исследования пяти образцов содержимого зубодесневых карманов положительная реакция выявлена двумя указанными методами у тех же добровольцев, у которых положительный результат иммунохромато-графического анализа был получен при тестировании кала.
Выводы
1. С использованием нанотехнологий разработан экспериментальный образец иммунохроматографической тест-системы, основными компонентами которого являются наночастицы коллоидного золота и специфические моноклональные антитела отечественного производства.
2. Экспериментально доказана способность иммунохроматографической тест-системы выявлять белок CagA H. pylori в выращенной культуре микроорганизма, в кале и содержимом зубодесневых карманов у серопозитивных по хеликобактериозу лиц.
3. Показана возможность использования разработанной тест-системы для скрининга хеликобактериоза на этапах назначения и контроля антибактериальной терапии у пациентов по результатам исследования на патогенные антигены H. pylori кала и содержимого зубодесневых карманов пациентов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Суздалев И.П. Нанотехнология: пути развития и перспективы. Вестник Российского фонда фундаментальных исследований. 2006. № 6. С. 29-48.
Suzdalev I.P. Nanotexnologiya: puti razvitiya i perspektivy. Vestnik Ros-sijskogo fonda fundamental'nyx issledovanij. 2006. № 6. S. 29-48.
2. Демина Н.Б., Скатков С.А. Фармацевтическая нанотехнология: развитие технологических дисциплин в высшем фармацевтическом образовании. Фармация. 2009. С. 46-50.
Demina N.B., Skatkov S.А. Farmacevticheskaya nanotexnologiya: razvi-tie texnologicheskix disciplin v vysshem farmacevticheskom obrazovanii. Farmaciya. 2009. S. 46-50.
3. Мокрецова И.М., Богачева Н.В. Обоснование способов получения основных компонентов иммунохроматографической тест-системы. APRIORI. Серия: Естественные и технические науки. 2014. № 5. С. 9.
Mokrecova I.M., Bogacheva N.V. Obosnovanie sposobov polucheniya os-novnyx komponentov immunoxromatograficheskoj test-sistemy. APRIORI. Seriya: Estestvennye i texnicheskie nauki. 2014. № 5. S. 9.
I'i4i ILtypU /Mi. ijArtf.fj» fiyfxrfi 1! L.ll-ll!. >1 : jrjllll ,| 1 II 1 "iM ffljw Я WHILKUrtfWI" - F '
i ■ 110й = ■ iV l.s-io' ijUxiO' LS* 10" 1- W
■ - -
L
ПрНЫЕЧЭНН! 1 . ■ -irrtiiriu» ни -ыъчшнгсты икрдевд ВДЧУЧПТГЧдачЛ5PÜM 7. neraLbl( «иаягм4(С1ва ыяш
РИС. 2.
Проверка чувствительности и специфичности иммунохроматографической тест-системы с гетерологичной культурой P. vulgaris.
hOJi r|v:iL i Vf***1 lliPNNfl Дздор №
Ii 7 1J N)
I +■+ -
.1 fl Pl 1 1 Л l j 1
1 kpaU^uiuli 1 <JU'!IC!dL 1Ш : Hl l L\" J Ell.....4M« "■Ч'Ч'М L (jl ниш i м'ищ^ЩД KW
1 Ц1ШЛ1131Г1
РИС. 3.
Оценка работоспособности иммунохроматографической тест-системы при исследовании биологического материала (кала) на предмет наличия антигена Н. ру1оп\
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
4. Пивень Н.В., Бураковский А.И. Современные модификации иммуно-химических диагностикумов: экспресс-методы. Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2012. № 3. С. 6-12.
Piven' N.V., BurakovskijA.I. Sovremennye modifikaciiimmunoximicheskix diagnostikumov: ekspress-metody. Immunopatologiya, allergologiya, infek-tologiya. 2012. № 3. S. 6-12.
5. Белоусов Ю.В. Helicobacter pylori ассоциированные заболевания в свете Маастрихта IV. 2012. № 4 (44). С. 138-141.
Belousov Yu.V. Helicobacter pylori associirovannye zabolevaniya v svete Maastrixta IV. 2012. № 4 (44). S. 138-141.
6. Косталанова Ю.В. Хронический H. Pylori-ассоциированный гастрит и MALT-лимфома желудка: клинико-диагностические особенности: авто-реф. дис. ... канд. мед. наук. Самара. 2017. 25 с.
Kostalanova Yu.V. Xronicheskij H. Pylori-associirovannyj gastrit i MALT-limfoma zheludka: kliniko-diagnosticheskie osobennosti: avtoref. dis. ... kand. med. nauk. Samara. 2017. 25 s.
7. Ford A.C., Axon A.T. Epidemiology of Helicobacter pylori infection and public health implications. Helicobacter. 2010. 15 (Suppl. 1). Р.1-6.
8. Сеньчукова М.А., Стадников А.А. О роли бактерий в этиологии и патогенезе злокачественных новообразований. Сибирский онкологический журнал. 2009. № 2 (32). С. 79-85.
Sen'chukova M.A., Stadnikov A.A. O rolibakterij v etiologii ipatogeneze zlokachestvennyx novoobrazovanij. Sibirskij onkologicheskij zhurnal. 2009. № 2 (32). S. 79-85.
9. Лазебник Л.Б., Васильев Ю.В., Щербаков П.Л. Helicobacter pylori: распространенность, диагностика, лечение Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2010. № 2. С.3-7.
Lazebnik L.B., Vasil'ev Yu.V., Shherbakov P.L. Helicobacter pylori: raspros-tranennost', diagnostika, lechenie Eksperimental'naya i klinicheskaya gas-troenterologiya. 2010. № 2. S. 3-7.
10. Смирнова Д.Н., Крупина К.А., Богачева Н.В., Дармов И.В. Сравнительная оценка компонентов иммунохроматографических тест-систем, используемых для их разработки. Клиническая лабораторная диагностика. 2017. Т. 62. № 1. С. 30-34.
Smirnova D.N., Krupina K.A., Bogacheva N.V., Darmov I.V. Sravnitel'naya ocenka komponentov immunoxromatograficheskix test-sistem, ispol'zue-myx dlya ix razrabotki. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2017. Т. 62. № 1. S. 30-34. \
УДК: 616.5-002.3:615.28 Код специальности ВАК: 14.02.02
клинические результаты лечения гнойных ран кожи и мягких тканей антисептиком «изофурал» (раствор)
Г. П. Гидирим1, И. В. Присэкару1, Г. В. Богян2, Н. А. Главан2,
1Государственный медицинский и фармацевтический университет им. Николае Тестемицану Республики Молдова, г. Кишинев, 2Институт скорой медицинской помощи Республики Молдова, г. Кишинев
Присэкару Ион Виорелович - e-mail: ionprisacaru@gmail.com
Дата поступления 19.02.2018
Введение. Гнойные инфекции представляют актуальную проблему для отделений хирургического профиля. Проблема возрастает в связи с увеличением резистентности возбудителей к антибиотикам, в связи с чем важным вопросом становится разработка новых антибактериальные препаратов, включая антисептики для местного лечения. Цель иследования: расширение возможности лечения гнойных ран с использованием новых антисептиков и сокращение применения антибиотиков. Материалы и методы. В исследование выключены 52 пациента с гнойными ранами, из которых 63,46% - лица мужского пола и 36,54% - женского пола; средний возраст - 50,980±4,714 года. При лечении гнойных ран использован антисептический препарат «Изофурал» 0,05%: в 80% случаев -с одновременным назначением антибиотиков, в 20% - без назначения антибиотиков. Критерии клинического наблюдения: продолжительность местной и общей температуры, гиперемия, отечность, местная боль, гнойные выделения, заживление раны, наличие побочных реакции. Результаты. Продемонстрирован терапевтический эффект местного лечения гнойно-воспалительных ран антисептиком «Изофурал» 0,05% в условиях одновременного применения и неприменения антибиотиков. Разница полученных результатов лечения является незначительной, 7,395±0,940 дня и 7,100±0,359 дня, соответственно, при t=0,495; p>0,05.
Ключевые слова: гнойно-воспалительная инфекция, антисептики, антибиотики.
Introduction. Purulent infections present an actual problem for surgical wards. The problem is high due to the increased resistance of pathogens to antibiotics. Thus, this lead to the necessity to develop new antibacterial drugs, including antiseptics for the topical treatment and it becomes an important issue of the day. Purpose of the syudy. To expand the treatment possibilities in purulent wounds by using of new antiseptics and to reduce the use of antibiotics. Materials and methods. The study included 52 patients with purulent wounds. 63,46% of patients were males and 36.54% of patients were females. The average age was 50,980±4,714. For treatment of purulent wounds was used antiseptic preparation Isofural of 0,05%. Simultaneous, Isofural of 0,05% with antibiotics was administrated in 80% of cases in the treatment of purulent wounds, and Isofural of 0,05% without administration of antibiotics was in 20% of cases. Criteria for the clinical observation: the duration of local and general temperature, hyperemia, swelling, local pain, purulent elimination, wound healing and the presence of adverse reactions. Results. The therapeutic effect of local treatment of the antiseptic Isofural of 0,05% on purulent wounds was demonstrated, including during the simultaneous administration with or without use of antibiotics. The difference in the treatment results is insignificant. In the group of patients that received Isofural of 0,05% with antibiotics it was 7,395±0,940 days and in the group that received Isofural of 0,05% without use of antibiotics 7,100±0,359 days at t=0,495; p>0,05.
Key words: purulent-inflammatory infection, antiseptics, antibiotics.
