CC BY
96
УДК 543.51.615.32
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ РЕЗВЕРАТРОЛА В ОБЪЕКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
О.О. НОВИКОВ Д.И. ПИСАРЕВ М.Ю. НОВИКОВА Г.В. ВАСИЛЬЕВ ОА ВАНХИН
В статье представлены результаты разработки методики обнаружения резвератрола в объектах растительного происхождения с помощью хромато-масс-спектрометрии. Метод имеет такие преимущества, как экспрессность определения, отсутствие или минимальная пробоподготовка.
Белгородский государственный национальный исследовательский университет
Ключевые слова: резвератрол, хромато-масс-спектрометрия.
Большинство из химических соединений винограда и вина обладают определенной биологической и фармакологической активностью, например, содержащиеся в красном вине полифенолы (флаваноиды: катехины, антоцианы, лейкоантоцианидины, флавоны, флавонолы и др.) в целом значительно снижают вероятность тромбообразования. Кроме того, у них зарегистрировано выраженное антиоксидантное действие [1].
Однако обилие флавоноидов в красном вине не полностью объясняет факт так называемого «французского парадокса», т. к. существуют продукты с большим содержанием природных антиоксидантов (в т. ч. флавоноидов).
В начале 90-х появился термин «французский парадокс» в связи с тем, что во Франции, где население отдает предпочтение продуктам с высоким содержанием жиров, уровень сердечно-сосудистых заболеваний намного ниже, чем в других развитых странах. В результате длительных исследований было установлено, что благотворное влияние на сердечно-сосудистую систему человека оказывает красное вино, а именно в первую очередь резвератрол.
Резвератрол - фитоалексин полифенольной природы, обладающий широким спектром биологической активности. Для него, как и многих полифенолов природного происхождения (флавоноиды, антоцианы и др.), характерно ярко выраженное антиоксидантное действие, а также противоопухолевая, антиатерогенная и другие виды активности [2-6].
Резвератрол содержится в некоторых растительных объектах, в частности: кожуре винограда, арахисе, хмеле. Для идентификации резвератрола в данных объектах используют разнообразные методы. Основными их недостатками являются длительная сложная пробоподготовка, сложное аппаратурное оформление, большая продолжительность определения. Поэтому разработка оптимальных методов идентификации резвератрола в объектах растительного происхождения является актуальной проблемой.
В связи с этим целью настоящего исследования явилась разработка оптимального метода идентификации резвератрола в объектах растительного происхождения.
Для определения содержания транс-резвератрола в объектах растительного происхождения использовали пищевой концентрат полифенолов винограда - «Эноант». «Эноант» использовали в чистом виде, без разведений. Обнаружение проводили с помощью обращенно-фазной высокоэффективной хроматографии на приборе Agilent Technologies 1260 Infinity в изократическом режиме.
Условия хроматографического разделения: объем вводимой пробы - 3 ц1, колонка: ZORBAX Eclipse XDB - C18 600 Bar 2.1x100 мм, 1,8 Мм, подвижная фаза - 15% раствор уксусной кислоты в спирте этиловом 96% - ацетонитрил = 90 - 10, скорость подачи подвижной фазы - 0,150 см3/мин, температура колонки - 25 °С.
Детекция осуществлялась с помощью диодно-матричной лампы: X = 220 - 600 нм, регистрацию сигналов проводили при длине волны X = 307 нм.
Также использован масс-спектрометрический детектор. Ионизация осуществлялась комбинированным использованием электроспрейной и химической ионизации при атмосферном давлении - ESI+APCI в режиме селективного сканирования.
Таким образом, в эноанте найден 41 компонент (рис. 1), среди которых транс-резвератол (время удерживания 5.412.) (рис. 2), подлинность которого устанавливали по физико-химическим характеристикам, а именно он имеет характерный максимум поглощения при X = 307 и пик молекулярного иона m/z = 228. Концентрация резвератрола на хроматограмме 0,65%.
Рис. 1. Хроматограмма пищевого концентрата полифенолов винограда «Эноант»
Рис. 2. Масс- и УФ-спектры резвератрола
Таким образом, в ходе исследования подобраны условия для обнаружения транс-резвератрола в объектах растительного происхождения с помощью хромато-масс-спектрометрии. Метод имеет такие преимущества, как экспрессность определения (время анализа 10 - 12 минут), отсутствие или минимальная пробоподготовка. Также для целей идентификации резвератрола не требуется использование стандартного образца, поскольку определяемые константы в методе хромато-масс-спектрометрии - УФ- и масс-спектры позволяют надёжно охарактеризовать подлинность вещества.
Работа выполнена в рамках реализации федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 - 2013 гг.,
государственный контракт № П425 от 12 мая 2010 г. «Разработка методик выделения и определения полифенольнъх соединений классов фитоалексинов, каротиноидов и антоцианов и технологии создания лекарственных форм на их основе».
Литература
1. Кишковский, З.Н. Химия вина / З.Н. Кишковский, И.М. Скуршин. - М.: Пищевая промышленность, 1976. - 312 с.
2. Bradamante, S. Cardiovascular protective effects of resveratrol / S. Bradamante, L. Barenghi,
A. Villa // Cardiovasc. Drug, Rev. - 2004. - Vol.22(3). - P. 169-188.
3. Dong, H.H. New progression in the study of protective properties of resveratrol in anticardiovascular disease / H.H.Dong, H.L. Ren //Bratisl. Lek. Listy. - 2004. - Vol.105(5-6). - P. 225-229.
4. Olas, В. Resveratrol protects against peroxynitrite-induced thiol oxidation in blood platelets /
B. Olas, P. Nowak, B. Wachowicz// Cell. Mol. Biol. Lett. - 2004. - Vol.9(4A). - P. 577-587.
5. Olas, В. Resveratrol reduces oxidative stress induced by platinum compounds in blood platelets / B. Olas, B. Wachowicz// Gen. Physiol. Biophys. - 2004. - Vol. 23(3). - P. 315-326.
6. Onuki, J. Inhibition of 5-aminolevulinic acid-induced DNA damage by melatonin, N-acetyl-N-formyl-5-methoxykynuramine, quercetin or resveratrol / J. Onuki, E.A. Almeida, M.H. Medeiros // J. Pineal Res. - 2005. - Vol. 38(2). - P. 107-115.
USE OF CHROMATO-MASS SPECTROMETRY IN FINDING OF RESVERATROL IN OBJECTS OF VEGETABLE ORIGIN
The paper presents results of development of detection techniques of resveratrol in objects of vegetable origin by means of chromato-mass spectrometry. The method has the advantages, rapid determination, no or minimal sample preparation
O.O. NOVIKOV D.I. PISAREV M.YU. NOVIKOVA G.V. VASILEV O.A. VANKHIN
Belgorod National Research University e-mail: [email protected]
Keywords: resveratrol, chromato-mass spectrometry
