CC BY
74
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФИТОКОМПЛЕКСА КАК ДОПОЛНИТЕЛЬНОГО КОМПОНЕНТА В ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
Т.Г. Разина, Е.П. Зуева, С.В. Корепанов, С.Г. Крылова,
Е.Н. Амосова, К.А. Лопатина
ГУ «НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН»
На животных с перевиваемыми опухолями обнаружена ингибиция роста аденокарциномы Эрлиха, показана возможность повышения эффективности цитостатической терапии карциномы легких Льюис и аденокарциномы Эрлиха фитосбором (укроп, толокнянка), применяемым совместно с экстрактом элеутерококка; отмечено уменьшение выраженности лейкоцитоза.
Ключевые слова: перевиваемые опухоли, циклофосфан, фитосбор.
PHYTOTHERAPY AS AN ADDITIONAL COMPONENT IN CANCER TREATMENT T.G. Razina, E.P. Zyeva, S.V Korepanov, S.G. Krylova, E.N. Amosova, K.A. Lopatina Pharmacology Research Institute, Tomsk
Phytotherapy with fennel and bearberry together with eleutherokokk extract was shown to result in the increase in cytostatic therapy efficacy and decrease in the level of leukocytes for mice with inoculated Ehrlich’s adenocarcinoma and Lewis’s lung carcinoma.
Key words: inoculated tumors, cyclophosphane, phytotherapy.
Актуальной проблемой в онкогинекологии остается улучшение результатов терапии рака шейки матки, основными методами лечения которого являются химио- и лучевая терапия [8].
Проведенные в последние десятилетия исследования по планированию лечения и оптимальному распределению доз значительно снизили процент ранних и поздних осложнений, связанных с токсическим влиянием на организм ионизирующего излучения и цитостатиков. В то же время не менее четверти пациенток имеют в той или иной степени выраженные лучевые реакции во время облучения или в первые 1-2 мес после него, а также поздние лучевые осложнения, которые составляют не менее 5-6 % и зачастую лимитируют дальнейшее лечение онкологических больных [2, 4, 5, 7, 9]. Для профилактики и лечения лучевых циститов предложен сбор из листьев толокнянки и семян укропа. Дополнительно в качестве мягкого иммуномодулятора рекомендован аптечный экстракт элеутерококка.
Цель настоящей работы - изучение влияния данного фитокомплекса на рост и развитие опухолевого процесса, возможности снижения токсического действия циклофосфана при их совместном применении.
Материал и методы
Эксперименты проведены на 74 беспородных мышах-самках с аденокарциномой Эрлиха (АКЭ) и 81 мыши-самке линии С57В1/6 с карциномой легких Льюис (3LL) и меланомой В-16 (В-16) массой 20 г в возрасте 3 мес, содержащихся на обычном режиме вивария. Перевивку опухолей проводили согласно общепринятым методикам [11].
Лечение фитосбором (укроп, толокнянка) начинали через 24 ч после перевивки АКЭ, с 7-х сут после трансплантации 3LL и В-16, продолжая в течение 8, 11 и 12 сут соответственно. Фитосбор вводили зондом в желудок в дистиллированной воде: мышам с АКЭ в дозах 100, 200 и 300 мг/кг; мышам с 3LL и В-16 - в дозе 100 мг/кг. Экстракт элеутерококка вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг. Для проведения цитостатической терапии использовали цикло-фосфан (ЦФ), выпускаемый промышленностью (ОАО «Биохимик», г. Саранск) в виде стерильного порошка, помещенного в герметически укупоренные флаконы по 0,2 г, мышам с АКЭ вводили через 72 ч после перевивки однократно внутримышечно в дозе 150 мг/кг, мышам с 3LL и В-16 - на 13-14-е сут после трансплантации опухолей однократно внутрибрюшинно
в дозе 125 мг/кг. Контрольные мыши получали эквиобъемные количества растворителя в дни введения препаратов.
В конце экспериментов мышей умерщвляли, соблюдая «Правила работы с лабораторными животными». Определяли объем и массу первичной опухоли, массу легких с метастазами, подсчитывали количество и площадь метастазов в легких, вычисляли торможение роста опухоли (ТРО, %), частоту метастазирования, индекс ингибирования метастазирования (ИИМ, %) [1, 11]. Кроме того, на 3-и сут после введения ЦФ проводили подсчет количества лейкоцитов в периферической крови мышей. Результаты обрабатывали с применением непараметрических критериев Вилкоксона-Манна-Уитни и точного метода Фишера [6].
Результаты и обсуждение
В эксперименте на беспородных мышах-самках обнаружено, что введение ЦФ в применяемом режиме достоверно не влияло на объем АКЭ. В то же время добавление в схему
цитостатического лечения фитосбора в дозе 100 мг/кг и экстракта элеутерококка вызывало торможение роста АКЭ на 34 %, объем опухолевых клеток при этом статистически значимо уменьшался по сравнению с группой мышей, получавших только химиотерапию. Применение фитосбора в других изучаемых дозах совместно с экстрактом элеутерококка не влияло на эффективность цитостатика. Изолированное назначение животным фитосбора в дозе 100 мг/кг и экстракта элеутерококка (ЭЭ) привело к достоверному уменьшению объема опухолевых клеток в 1,4 раза (ТРО=29 %) по сравнению с контрольными значениями (табл. 1).
Введение ЦФ мышам-самкам линии С57ВL/6 с 3LL вызывало торможение роста опухоли: масса основного опухолевого узла оказалась в 1,4 раза меньше контрольного уровня. Под влиянием цитостатика наблюдалась существенная ингибиция и процесса диссеминации опухоли: частота метастазирования снизилась со 100 % в контроле до 50 % в группе цитостатического лечения; количество метастазов уменьшилось в
Таблица 1
Влияние фитосбора (укроп, толокнянка) и экстракта элеутерококка на развитие АКЭ у беспородных мышей-самок и эффективность лечения ЦФ
Группа наблюдения (количество животных) Доза/ интервал (ч) х число введений Объем асцита (Х±т), Мл Объем опухолевых клеток (Х±т), мл Торможение или стимуляция (+) роста опухоли, %
1. Контроль (9) - 3,94 ± 0,37 1,14 ± 0,13 -
2. Циклофосфан (10) 150 мг/кг х 1 4,34±0,36 1,08 ± 0,12 5
3. Фитосбор + ЭЭ (8) 100 мг/кг/24 х l 5 мл/кг/24 х l 3,99 ± 0,25 0,81 ± 0,07 1-3, р<0,05 29
4. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (8) 150 мг/кг х 1 100 мг/кг /24 х l 5 мл/кг/24 х l 3,39 ± 0,34 1-4 (р<0,01) 0,75 ± 0,08 1-4, р<0,05 2-4, р<0,05 34
5. Фитосбор + ЭЭ (10) 200 мг/кг/24 х l 5 мл/кг/24 х l 4,36 ± 0,39 0,99 ± 0,11 13
6. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (9) 150 мг/кг х 1 200 мг/кг /24 х l 5 мл/кг/24 х l 4,11 ± 0,35 1,28 ± 0,09 +12
7. Фитосбор + ЭЭ (10) 300 мг/кг/24 х l 5 мл/кг/24 х l 4,32 ± 0,17 1,20 ± 0,08 +5
8. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (10) 150 мг/кг х 1 300 мг/кг /24 х l 5 мл/кг/24 х l 3,60 ± 0,23 2-8, р<0,05 1,01 ± 0,08 11
Примечание: перед уровнем значимости р - номера сравниваемых групп.
3,1 раза, а их площадь - в 5,8 раза по сравнению с контрольными данными (р<0,01 ), индекс ингибирования метастазирования составил 84 % (табл. 2).
Применение растительного сбора и экстракта элеутерококка в сочетании с ЦФ значительно повысило эффективность лечения (табл. 2). Так, масса опухоли у мышей с 3LL, получавших комбинированную терапию, уменьшилась в 1,9 раза (р<0,01) по сравнению с этим показателем у леченных одним ЦФ животных. Еще более существенным оказалось влияние комбинированного лечения на процесс диссеминации: частота метастазирования составила 10 % против 50 % (р<0,001), многократно снизилось количество метастазов, их площадь уменьшилась в 13,4 раза (р<0,001) по сравнению с группой животных, получавших химиотерапию, индекс ингибирования метастазирования оказался наивысшим и составил 99,9 % (метастазы в легких отмечены лишь у 1 мыши этой группы). Введение фитосбора и экстракта элеутерококка без цитостатического воздействия мышам-самкам линии C57BL/6 с 3LL достоверно не влияло на рост опухоли и метастазов (табл. 2).
На 3-и сут после введения цитостатика количество лейкоцитов в периферической крови животных уменьшилось в 7,2 раза по сравнению с контролем (р<0,01). Совместное назначение фитосбора и экстракта элеутерококка с ЦФ не меняло токсического влияния последнего на клетки белой крови (табл. 3). В то же время при изолированном назначении фитосбора и экстракта элеутерококка мышам с 3LL обнаружено уменьшение выраженности лейкоцитоза, имеющего место при развитии опухоли: количество клеток белой крови снизилось в 1,3 раза (р<0,01) и приблизилось к норме (табл. 3).
В эксперименте на мышах-самках линии С57ВL/6 с В-16 ЦФ в указанном режиме достоверно тормозил рост опухоли: масса основного опухолевого узла оказалась в 1,8 раза меньше контрольного уровня. Под действием цитостатика в 4,6 раза уменьшилось количество и в 5,8 раза - площадь метастазов в легких, однако наблюдаемые изменения носили характер тенденции (табл. 4). В результате изолированного использования фитосбора и экстракта элеутерококка отмечалась тенденция к уменьшению количества метастазов в легких (в 1,8 раза), при
Таблица 2
Влияние фитосбора (укроп, толокнянка) и экстракта элеутерококка на развитие 3LL у мышей-самок линии С57ВУ6 и эффективность лечения ЦФ
Группа наблюдения, доза препарата (количество животных) Масса опухоли (X±m), г Торможение или стимуляция (+) роста опухоли, % Частота метастази-рования, % Количество метастазов на 1 мышь (X±m) Площадь метастазов на 1 мышь (X±m), мм2 Масса легких (X±m), мг ИИМ, %
1. Контроль (11) 4,85 ± 0,33 - 100 21,09 ± 3,45 12,54 ± 3,77 202,64 ± 5,98 -
2. ЦФ 125 мг/кг х 1 (10) 3,35 ± 0,11 1-2, р<0,01 31 50 1-2, р<0,001 6,70 ± 3,34 1-2, р<0,01 2,15 ± 1,15 1-2, р<0,01 200,10 ± 4,82 84
3. Фитосбор 100 мг/кг х 12 + ЭЭ 5 мл/кг х 12 (10) 5,21 ± 0,19 +т 100 30,30 ± 3,15 22,30 ±5,75 226,20 ± 17,53 +44
4. ЦФ + фитосбор 100 мг/кг х 12 + ЭЭ 5 мл/кг х 12 (10) 1,l5 ± 0,20 2-4, р<0,01 64 10 2-4, р<0,001 0,30 ± 0,30 2-4, р<0,01 0,16 ± 0,16 1-4, р<0,01 231,70 ± 3,91 99,9
Примечание: перед уровнем значимости р - номера сравниваемых групп. СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2007. №4 (24)
Таблица 3
Количество лейкоцитов в периферической крови мышей линии С57ВL/6 с 3LL после терапии ЦФ и фитосбором в сочетании с экстрактом элеутерококка
Группа наблюдения (количество животных) Количество лейкоцитов на 3-и сут носле введения ЦФ (X±m), Г/л
1. Контроль (6) 15,97 ± 0,70
2. ЦФ (6) 2,23 ± 0,17; 1-2, р<0,01
3. Фитосбор + ЭЭ (6) 12,50 ± 0,65; 1-3, р<0,01
4. ЦФ + Фитосбор + ЭЭ (6) 2,53 ± 0,07; 1-4, р<0,01
Примечание: перед уровнем значимости р - номера сравниваемых групп.
Таблица 4
Влияние фитосбора и экстракта элеутерококка на развитие меланомы В-16 у мышей-самок линии С57ВЬ/6 и эффективность лечения ЦФ
Группа наблюдения, доза препарата (количество животных) Масса опухоли (X±m), г Торможение роста опухоли, % Частота метастази-рования, % Количество метастазов на 1 мышь (X±m) Площадь метастазов на 1 мышь (X±m), мм2 Масса легких (X±m), мг ИИМ, %
1. Контроль (10) 5,80 ± 0,40 - 60 3,10 ± 1,01 0,29 ± 0,10 177,60 ± 6,97 -
2. ЦФ 125 мг/кг х 1 (12) 3,25 ± 0,18 1-2, р<0,01 44 33 0,67 ± 0,33 0,05 ± 0,02 184,17 ± 2,86 88
3. Фитосбор 100 мг/кг + ЭЭ 5 мл/кг х 11 (8) 5,50 ± 0,23 5 75 1,75 ± 0,70 0,99 ± 0,91 161,00 ± 5,48 29
4. ЦФ + фитосбор 100 мг/кг + ЭЭ 5 мл/кг х 11 (10) 3,72 ± 0,36 1-4, р<0,01 36 50 3,00 ± 1,65 0,28 ± 0,16 187,33 ± 14,81 19
Примечание: перед уровнем значимости р - номера сравниваемых групп.
этом индекс ингибирования метастазирования в этой группе мышей составил 29 % (табл. 4). Использование растительного сбора и экстракта элеутерококка в сочетании с ЦФ значимо не изменяло эффективности противоопухолевой терапии.
Таким образом, в экспериментах на мышах с перевиваемыми опухолями не выявлено стимулирующего влияния фитосбора и экстракта элеутерококка на развитие бластом. Более того, на беспородных мышах-самках с АКЭ обнаружена
ингибиция роста опухоли под влиянием испытуемых растительных средств. Особое внимание следует обратить на способность фитосбора в сочетании с экстрактом элеутерококка повышать противоопухолевый и противометастати-ческий эффект ЦФ (АКЭ, 3LL). Положительным моментом является выявленная способность растительных средств уменьшать выраженность лейкоцитоза, сопровождающего развитие опухоли, нормализуя количество лейкоцитов в периферической крови животных.
В основе механизма противоопухолевого действия фитосбора может лежать диуретическая активность укропа и толокнянки. Одним из патогенетических звеньев развития неопластического процесса является высокое содержание воды, ионов натрия, нередко и калия в опухоли, необходимых ей для усиленного роста [10]. Уменьшение поступления в клетки этих ведущих составных частей биосинтетических процессов ухудшает условия их существования, снижает потенциальные возможности прогрессивного развития новообразования. Снижение интенсивности поступления натрия и воды в опухолевые клетки, вероятно, достигнуто применением фитосбора, содержащего в своем составе растения с мочегонными свойствами, удаляющими из организма и опухоли электролиты, в первую очередь ионы натрия и воду. На этом же фоне происходит усиление эффективности цитостатической терапии, так как при использовании лекарственных растений с диуретическим действием нарушается водно-натриевый баланс опухолевой ткани в связи с усилением диуреза и натриуреза, что ухудшает условия существования опухолевых клеток и способствует более эффективному цитотоксическому действию применяемых антибластомных средств.
Учитывая тот факт, что химио- и лучевая терапии являются стрессорным воздействием на организм, приводящим к иммунодепрессии, введение в схему лечения экстракта элеутерококка, обладающего антистрессорной, иммуномодулирующей активностью, также вносит вклад в обнаруженные эффекты. Это предположение подтверждают сведения литературы о способности экстракта элеутерококка усиливать антиметастатическое и противоопухолевое действие цитостатиков тиофосфамида, допана и сарколизина, а также повышать эффективность хирургического и лучевого лечения больных раком желудка [3]. Установлено, что данный адаптоген неспецифически стимулирует общую резистентность организма, поддерживая
на высоком уровне показатели иммунитета. B связи с вышеизложенным нам представляется перспективным использование фитосбора и экстракта элеутерококка в комплексном лечении злокачественных новообразований.
Выводы
1. B эксперименте на беспородных мышах обнаружена способность фитосбора, вводимого совместно с экстрактом элеутерококка, ингибировать рост аденокарциномы Эрлиха.
2. На животных с аденокарциномой Эрлиха и карциномой легких Льюис выявлено повышение эффективности лечения циклофосфаном фитосбором и экстрактом элеутерококка.
3. На мышах с карциномой легких Льюис фитосбор и экстракт элеутерококка снижали выраженность лейкоцитоза в периферической крови.
ЛИТЕРАТУРА
1. Архипов С.А., Юнкер ВМ. Изменение интенсивности метастазирования в легкие перевиваемых опухолей мышей в зависимости от величины перевивочной дозы опухолевых клеток // Исследование по индукции и метастазированию опухолей у экспериментальных животных. Новосибирск, 1984. С. 14-32.
2. БардычевИ.С., ЦыбА.Ф. Местные лучевые повреждения. М.: Медицина, 1985. С. 19-67, 193-206, 209-221.
3. Гольдберг Е.Д., Зуева Е.П. Препараты из лекарственных растений в комплексной терапии злокачественных новообразований. Томск: Изд-во Том. ун-та, 2000. 129 с.
4. Канн Д.В., Пронин В.И. Урологические осложнения при лечении онкологических заболеваний органов таза. М.: Медицина, 1988. С. 111-139.
5. КиселеваЕ.С., ГолдобенкоЕ.В., Канаев С.В. и др. Лучевая терапия злокачественных опухолей. М.: Медицина, 1996. С. 449-45l.
6. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Bысшая школа, 1980. 293 с.
Т. Марьина Л.А., Чеходанский В.Н., НечушкинМ.И., Киселева М.В. Рак шейки и тела матки, лучевая терапия. М. : Издательский центр «Bентана-Граф», 2004. 237 с.
8. Новикова Е.Г., Антипов В.А. Рак шейки матки: Избранные лекции по клинической онкологии / Под ред. B.n. Чиссова, С.Л. Дарьяловой. М., 2000, 736 с.
9. Павлов А. С., Костромина К.Н. Рак шейки матки. М.: Медицина, 1983. С. 117-130.
10. ПашинскийВ.Г., ЯременкоК.В. Проблемы онкологической фармакотерапии. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1983. 204 с.
11. Софьина З.П., Сыркин А.Б., Голдин А., Кляйн А. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США. М.: Медицина, 1980. 296 с.
Поступила 9.07.07
