CC BY
40
2. Полисахариды выделены по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс - 10,20%, пектиновые вещества - 8,26%, гемицеллюлоза А - 25,97%, гемицеллюлоза Б -6,84%. Изучен их моносахаридный состав.
3. В траве горлюхи ястребинковой идентифицировано 16 аминокислот, среди которых 7 незаменимых. Доминирующими аминокислотами травы горлюхи ястребинковой являются аспарагиновая и глутаминовая кислоты.
Сведения об авторах статьи:
Бубенчикова Валентина Николаевна - д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармакогнозии и ботаники ФГБОУ ВО КГМУ Минздрава России. Адрес: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3. E-mail: bubenhikova.ksmu@yandex.ru. Степнова Ирина Владимировна - генеральный директор испытательного центра «Фармоборона». Адрес: 141074, Московская обл., г. Королев, ул. Гагарина, 46а. E-mail: bubenhikova.ksmu@yandex.ru.
Воробьева Екатерина Александровна - студентка 4 курса ФГБОУ ВО КГМУ Минздрава России. Адрес: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
ЛИТЕРАТУРА
1. Иллюстрированный определитель растений Средней России. - Т. 3: Покрытосеменные (двудомные: раздельнолепестные) / И.А. Губанов, К.В. Киселева, В.С. Новиков, В.Н. Тихомиров. - М.: Товарищество научных изданий КМК, 2004. - 520 с.
2. Дикорастущие полезные растения России / под ред. А.Л Буданцева, С.П. Лесиовской. - СПб., 2001. - 663 с.
3. Растительные ресурсы России: дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. - Т. 5. Семейство Asteraceae (Compositae). Часть 2 роды Echinops - Youngia / отв. ред. А.Л. Буданцева. - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2013. - 312. с.
4. Бубенчиков, Р.А. Исследование полисахаридного комплекса травы герани сибирской (Geranium sibiricum L.) / Р.А. Бубенчиков, Т.А. Позднякова // Научные ведомости БелГУ. - 2012. - Вып. 20/1, № 22 (141). - С. 140-141.
5. Бубенчикова, В.Н. Аминокислотный, жирно-кислотный и полисахаридный состав травы тимьяна Палласа (Thymus рallasianus L.) / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак // Химия растительного сырья. - 2014. - N° 3. - С. 191-194.
6. Олешко, Г.И. Разработка унифицированной методики количественного определения суммы свободных аминокислот в лекарственном растительном сырье и экстракционных препаратах / Г.И. Олешко, Е.В. Зорина, М.Д. Решетникова // Фармация. -2011. - № 3. - С. 14-17.
УДК 615.322.07:[582.678.2:581.45] © Коллектив авторов, 2016
Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина, С.В. Чуйкин, Е.Г. Егорова ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЕНСИТОМЕТРИИ В КАЧЕСТВЕННОМ АНАЛИЗЕ ФЛАВОНОИДОВ ЛИСТЬЕВ ЛИМОННИКА КИТАЙСКОГО
ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа
В статье рассмотрены вопросы изучения качественного состава флавоноидов листьев лимонника китайского, выращенного в условиях Республики Башкортостан. В последнее время наряду с общепринятыми методами (спектрофотомерия, высокоэффективная жидкостная хроматография) в практику широко внедряется метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии, или хроматоденситометрии, который позволяет качественно и количественно оценить содержание действующих веществ в изучаемых объектах. Нами подобраны оптимальные условия денситометрического исследования изучаемого сырья: соотношение сырье - экстрагент и концентрация этилового спирта для получения извлечения, система растворителей, марка хроматографических пластинок, время насыщения хроматографической камеры.
Наилучшее разделение пятен наблюдалось при использовании извлечения, полученного экстракцией 70% этиловым спиртом в соотношении 1:5, системы растворителей этилацетат - метанол - вода (77:15:8). По площади и высоте пиков денситограммы было установлено, что доминирующим веществом является кверцетин.
Ключевые слова: листья лимонника китайского, флавоноиды, хроматографический анализ, денситометрия.
E.Kh. Galiakhmetova, N.V. Kudashkina, S.V. Chuikin, E.G. Egorova THE USE OF DENSITOMETRY IN THE QUALITATIVE ANALYSIS OF FLAVONOIDS OF SCHISANDRA CHINENSIS LEAVES
The article considers the issues of studying the qualitative composition of flavonoids of the leaves of schisandra chinensis grown in the Republic of Bashkortostan. In recent years, along with the conventional methods (spectrophotometry, high performance liquid chromatography) in practice is widely implemented method of high performance thin layer chromatography or chro-matogramme, which allows to quantitatively assess the content of active substances in the studied objects. We have determined the optimum conditions for the densitometry of the studied materials: the concentration of ethanol, ratio of raw material and extractant, the solvent system, chromatographic grade records, the time of saturation of the chromatographic chamber.
The best separation was observed when using 70% of ethanol, ratio of raw material and extractant 1:5, solvent system ethyl ace-tate-methanol-water (77:15:8). Area and height of the peaks showed that the dominant ingredient is quercetin.
Key words: leaves of Schisandra chinese, flavonoids, chromatographic analysis densitometry.
В последние годы лимонник китайский вызывает интерес многих ученых. Ведутся многочисленные исследования по изучению химического состава различных органов этого
растения. В литературных источниках преимущественно иностранных авторов большое внимание уделяется расширению фармакологических свойств лимонника китайского бла-
годаря возможности использования неофици-нальных видов сырья (листьев и коры, заготавливаемой от стеблей, корней, корневищ) для приготовления различных лекарственных форм, а также выделения индивидуальных биологически активных соединений (схи-зандрин, у-схизандрин, гомизин А и др.) [2,4].
Фенольные соединения (простые фенолы, флавоноиды, дубильные вещества, кума-рины, лигнаны и др.) обладают широким спектром фармакологической активности: желчегонной, антибактериальной, противовоспалительной, спазмолитической, диуретической, антикоагулянтной, антиоксидантной, адаптогенной, тонизирующей и др. [3]. Учитывая, что этот класс соединений в листьях лимонника китайского почти не изучен, исследование флавоноидов в сырье, выращенном в условиях Республики Башкортостан, является актуальным.
В последнее время в практику широко внедряется метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии или хроматоденси-тометрии, который позволяет качественно и количественно оценить содержание действующих веществ в изучаемых объектах [1,5].
Таким образом, целью наших исследований явилось изучение денситометрическим методом флавоноидов листьев лимонника китайского, выращенного в условиях Республики Башкортостан.
Материал и методы
Объектом исследования явились листья лимонника китайского (Schisandra chinensis БаШ.), интродуцированного на территории Республики Башкортостан. Сырье было собрано в период вегетации в 2013-2015 гг., высушено воздушно-теневым способом и хранилось в соответствии с требованиями нормативной документации (ОФС.1.1.0011.15) при комнатной температуре в сухом и хорошо вентилируемом помещении без попадания прямых солнечных лучей.
Для обнаружения флавоноидов в листьях лимонника китайского использовали метод восходящей хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ). ТСХ проводили на пластинках "Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ" и "Силуфол иУ-254" в стандартных условиях. Для разделения суммы флавоноидов использовали следующие системы растворителей: хлороформ -этиловый спирт (9:1), этилацетат - уксусная кислота (8:2), бензол - уксусная кислота (5:2), этилацетат - муравьиная кислота - вода (70:15:17), этилацетат - муравьиная кислота -вода (30:55:15), этилацетат - муравьиная кислота - вода (20:65:15), этилацетат - муравьи-
ная кислота - ледяная уксусная кислота - вода (100:11:11:26), этилацетат - муравьиная кислота (15:35), этилацетат - метанол - вода (77:15:8) [3,5].
Вещества детектировали просмотром хроматограмм в УФ-свете при длине волны 254 и 365нм с использованием денситометра марки SORBFIL КС 4.00.000, оснащенного видеокамерой Sony DCR-CX190E (ООО Имид, Россия).
Идентификацию проводили сравнением параметров хроматографического поведения полученных зон адсорбции исследуемых извлечений и аутентичных образцов флавонои-дов (кверцетин, рутин, гиперозид, лютеолин и др.). Хроматограммы проявляли 3% раствором алюминия хлорида и парами аммиака.
Сумму флавоноидов для хроматографи-ческих исследований получали экстракцией спиртом этиловым различной концентрации (50%, 60%, 70%, 80%, 95%). Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Точную навеску сырья (около 10,0 г, 5,0 г, 2,5 г, 1,0 г) помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл и добавляли 50 мл спирта этилового (50%, 60%, 70%, 80%, 95%). Получали соотношение 1:5, 1:10, 1:20, 1:50. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на водяной бане в течение 30 минут. Извлечение искусственно охлаждали, фильтровали, избегая попадания частиц на фильтр, отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата. После чего извлечение сгущали в сушильном шкафу при температуре 100-105°С.
На линию страта хроматографической пластинки размером 15^6, активированной при температуре 100С в течение 1 часа микрокапилляром наносили 0,002 мл исследуемого извлечения.
Пластинку помещали в камеру (предварительное насыщение не менее 2 часов) со смесью растворителей и хроматографировали восходящим способом. После прохождения фронтом растворителей 12 см пластинку вынимали из камеры, просушивали на воздухе в течение 5 минут и просматривали в УФ-свете.
Результаты и обсуждение
В ходе проведенных исследований установлено, что наилучшее разделение пятен происходило при анализе извлечения, полученного 70% спиртом этиловым в соотношении 1:5. Оптимальным условием хроматогра-фирования было использование пластинок "Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ" в системе растворителей этилацетат - метанол - вода (77:15:8) при температуре 23-25°С и времени насыще-
ния хроматографической камеры 2 часа.
На хроматограмме наблюдали 7 зон адсорбции. По хроматографическому поведению и в сравнении со свидетелями установлено присутствие в сырье флавоноидов квер-цетина (Rf около 0,97), имеющего ярко-желтую флюоресценцию и рутина около 0,40), имеющего желтую флюоресценцию в УФ-свете.
Далее в анализируемой пробе нами было определено количественное соотношение индивидуальных веществ, которое устанавливали по площади и высоте пиков на денсито-грамме. Так, согласно полученным данным доминирующими соединениями в пробе являются вещества с ^ 0,59; 0,63 (не были идентифицированы) и 0,97 (идентифицирован как кверцетин) (рис. 1, см. таблицу).
10 500 10 000 9 500 9 ООО
8 500
9 000 7 500 7 000 6 500
£ 6 000 8 5 500 £ 5 00C 4 500 4 000 3 500 3 000 2 500 2 000 1 500 1 000 500 0
0Л 0.1 0 2 0.3 0 4 05 0 6 0.7 0.8 0.9 1.0
Rf
-Трек 1 — Трек 2 — Трек 3
Рис. 1. Денситограмма извлечения из листьев лимонника китайского и стандартных образцов при 365 нм (синяя линия - извлечение, зеленая - рутин, фиолетовая - кверцетин)
Таблица
Хроматографические характеристики зон адсорбции_
Rf Площадь пика (S) Высота пика (H) Описание
0,15 42460 2114 Не идентифицировано
0,23 66664 2045 «»
0,32 74893 4181 «»
0,40 115472 3089 Рутин
0,59 407341 7542 Не идентифицировано
0,63 406429 5798 «»
0,97 207239 6543 Кверцетин
Выводы
1. Подобраны оптимальные условия хроматографического исследования листьев лимонника китайского. Наилучшее разделение пятен наблюдали при использовании извлечения, полученного 70% этиловым спиртом в соотношении 1:5, системы растворителей этилацетат - метанол - вода (77:15:8),
хроматографических пластинок марки «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ», времени насыщения хроматографической камеры 2 часа.
2. Установлено, что доминирующим флавоноидом является кверцетин, что обуславливает целесообразность стандартизации листьев лимонника китайского по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин.
Сведения об авторах статьи: Галиахметова Эльвира Халитовна - к.фарм.н., доцент кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: Galiahmetova.elvi@yandex.ru. Кудашкина Наталья Владимировна - д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: phytoart@mail.ru. Чуйкин Сергей Васильевич - д.м.н., профессор, зав. кафедрой стоматологии детского возраста и ортодонтии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
Егорова Елена Гертрудовна - к.м.н., доцент кафедры стоматологии детского возраста и ортодонтии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кормишин, В.А. Денситометрическое определение некоторых наркотических средств и психотропных веществ в химико-токсикологических исследованиях: автореферат диссер. ... к-та фармац. наук. - Самара, 2014. - 24 с.
2. Куркин, В.А. Лимонник китайский: итоги и перспективы создания лекарственных средств: монография / В.А Куркин, Ф.Ш. Сатдарова. - Самара: ООО «Офорт»; ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2010. - 139 с.
3. Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин [и др.]. - Новосибирск: Академическое изд-во "Гео", 2007. - 232 с.
4. Рыжов, В.М. Изучение подходов вторичной переработки плодоножек лимонника китайского [Электронный ресурс] / В.М. Рыжов, О.Г. Алексеева // Известия Самарского научного центра Российской академии наук - 2013. - № 3-6. URL: http://www.ssc.smr.ru/media/journals/izvestia/2013/2013_3_1933_1936.pdf
5. Тонкослойная хроматография в анализе флавоноидов растительных объектов / А.А. Мальцева [и др.] // Фармация. - 2013. -№ 1. - С.13-16.
УДК 615.322
© Е.В. Красюк, К.А. Пупыкина, 2016
Е.В. Красюк, К.А. Пупыкина КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ И РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В ВИДАХ МОНАРДЫ, ИНТРОДУЦИРУЕМЫХ В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН
ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа
В статье представлены результаты изучения качественного и количественного состава флавоноидов в различных видах монарды, интродуцируемой в Республики Башкортостан.
В результате хроматографического анализа водно-спиртовых растворов травы монарды обнаружены лютеолин, нарин-генин, лютеолин-7-глюкозид, гиперозид, рутин, катехин, галловая и хлорогеновая кислоты. Подобраны оптимальные условия для количественного определения флавоноидов изучаемого растения: концентрация этилового спирта, соотношение сырья и экстрагента, время экстракции, степень измельченности и концентрация комплексообразующей добавки. Наилучшим экстрагентом для монарды трубчатой является спирт этиловый в концентрации 50%, для монарды двойчатой - 40%, для монарды гибридной - 40%, для монарды лимонной - 70%, оптимальное время экстракции 30 минут, степень измель-ченности 1 мм. Установлено, что доминирующим веществом является лютеолин, на который и вели пересчет.
Ключееые слова: монарда трубчатая, монарда двойчатая, монарда гибридная, монарда лимонная, монарда Рассела, лю-теолин, тонкослойная хроматография, дифференциальная спектрофотометрия.
E.V. Krasyuk, K.A. Pupykina QUALITATIVE ANALYSIS AND DEVELOPMENT OF METHODS OF QUANTIFICATION OF FLAVONOIDS IN MONARDA SPECIES INTRODUCED IN THE REPUBLIC OF BASHKORTOSTAN
The article presents the results of the study of qualitative and quantitative composition of flavonoids in various species of Mo-narda, introduced in the Republic of Bashkortostan.
Chromatography of Monarda herb water-alcohol solution revealed the presence of luteolin, naringenin, luteolin-7-glucosid, hyperoside, rutin, catechin, gallic and chlorogenic acids. Optimal conditions for the quantification of flavonoids in the studied plants have been determined: the concentration of the ethyl alcohol, the ratio of raw material and extracting agent, extraction time, the degree of grinding and concentration of complexing additives. The best extractant for Monarda fistulosa is ethyl alcohol in a concentration of 50%, for Monarda didyma - 40%, for Monarda hybrid - 40%, for Monarda citriodora - 70%, the optimum extraction time is 30 minutes, fineness - 1 mm. It was found that the dominant material is luteolin, which was used as equivalent.
Key words: Monarda fistulosa, Monarda didyma, Monarda hybrid, Monarda citriodora, Monarda Russell, luteolin, thin layer chromatography, differential spectrophotometry.
Флавоноиды являются ценными группами биологически активных веществ (БАВ), так как обладают различными видами фармакологической активности (антиоксидантной, капилляроукрепляющей и др.), влияют на периферическое кровообращение, способствуют нормализации липидного состава крови, повышают абсорбцию витамина С в тонком кишечнике [1].
Монарда - перспективное эфиромас-личное растение семейства губоцветных (Lamiaceae), которое содержит разнообразные группы биологически активных веществ: фла-воноиды, антоцианы, каротиноиды, витамины В1, В2, аскорбиновую кислоту, горечи, дубильные вещества, большое количество эфирных масел (около 2,4% из расчета на сухой вес). В эфирном масле монарды идентифици-
ровано около сорока компонентов, основной из них - тимол (50-60%) [2, 3, 4].
Целью работы являются изучение качественного состава и разработка методики количественного определения флавоноидов в различных видах монарды методом дифференциальной спектрофотометрии.
Материал и методы
В качестве объектов исследования использовали образцы сырья интродуцируемых видов монарды: монарда трубчатая (Monarda fistulosa L.), монарда двойчатая (Monarda didyma L.), монарда гибридная (Monarda hybrida hort.), монарда лимонная (Monarda citriodora) и монарда Рассела (Monarda russeliana), выращенные в Ботаническом саду-институте Уфимского научного центра Российской академии наук.
