CC BY
438
УДК: 616.1-773 Код специальности ВАК: 14.01.20
ИСКУССТВЕННАЯ КРОВЬ: СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ
Г.С. Столяров1, С.И. Чистяков1, Ю.Д. Бричкин2, А.Ю. Сморкалов2,
1 ФГБОУ ВО «Мордовский государственный университет», Медицинский институт, г. Саранск,
2 ГБУЗ НО «Специализированная кардиохирургическая клиническая больница»
Бричкин Юрий Дмитриевич - e-mail: freedoc@rambler.ru
С каждым годом растет потребность в гемотрансфузиях, а заготовка донорской крови оказывается все более проблематичной. Несмотря на проводимую в течение последнего десятилетия ограничительную тактику применения гемотрансфузий, в России сохраняется большой дефицит эритро-цитной взвеси. Становится все более очевидным, что решение проблемы лежит в концентрации научных и материальных усилий на создание искусственного заменителя крови - биосовместимой среды с приемлемой кислородтранспортной функцией. Существует два основных направления разработки искусственных переносчиков кислорода. Первое направление - создание препаратов на основе синтетических материалов, способных обратимо связываться и переносить молекулы кислорода. В основном это относится к препаратам на основе эмульсий полностью фторированных органических соединений. Второе направление - разработка различных модификаций биосовместимых сред на основе натурального или модифицированного гемоглобина человека и животных. Сегодня заготовка донорской крови многократно дешевле получения даже самого простого препарата инкапсулированного гемоглобина. Возможный путь решения заключается в создании компактных и мобильных систем для быстрой инкапсуляции растворов гемоглобина непосредственно перед инфузией, это поможет значительно снизить затраты на производство и даст толчок к развитию и внедрению новой методики экстренного кровезамещения.
Ключевые слова: эритроцитная взвесь, перфторан, инкапсулированный
гемоглобин, кровезамещение.
With every year the need for blood transfusion and blood banking is increasingly problematic. Despite in the last decades of the restrictive tactics of the use of blood transfusions, Russia remains a large deficit of erythrocyte suspension. It becomes increasingly obvious that the problem lies in the concentration of scientific and financial efforts on creating artificial substitutes of blood - biocompatible environment with acceptable oxygen-transport function. There are two main directions of development of artificial oxygen carriers. The first direction is to create drugs based on synthetic materials, capable reversible to contact and carry oxygen molecules. Mostly this applies to preparations based on emulsions are fully fluorinated organic compounds. The second direction - development of various modifications of biocompatible environments based on natural or modified hemoglobin of humans and animals. Today the harvesting of donated blood many times cheaper than getting even the most simple of the drug encapsulated hemoglobin. A possible solution is to create a compact and mobile system for rapid encapsulation of hemoglobin solutions just before infusion, it will help significantly reduce the cost of production and give impetus to the development and introduction of new methods of emergency blood transfusions.
Key words: erythrocyte suspension, perftoran, encapsulated hemoglobin, cruiseline.
Еще несколько лет назад идея создания кровезаменителей с кислородтранспортной функцией казалась интересной, но несвоевременной и поэтому неактуальной. В вопросах кровезамещения основные усилия были направлены на развитие донорства и совершенствование службы заготовки и хранения препаратов крови. В настоящий момент необходимость поиска заместителя красной крови стала реальностью. С каждым годом растет потребность в гемотрансфузиях, а заготовка донорской крови оказывается все более проблематичной. Ограниченная доступность препаратов крови обусловлена такими факторами, как высокая стоимость заготовки и скрининга, низкие сроки хранения, опасность переноса инфекции, аллергические реакции и проблемы, связанные с перекрестными типами крови [1, 2, 3, 4, 5].
Несмотря на проводимую в течение последнего десятилетия ограничительную тактику применения гемотрансфузий, только по официальным данным дефицит эритро-цитарной взвеси в РФ в 2012 г. составил 1,677 млн доз, хотя реальные цифры, скорее всего, значительно выше [6, 7].
По расчетам американских специалистов при общемировой потребности в 300 млн доз в год (0,05 доз в год на человека) и фактическом использовании 90 млн, ежегодный дефицит крови в мире составляет более 200 млн доз [8]. Особую проблему дефицит крови представляет в развивающихся странах, на что указывает, например, тот факт, что непосредственной причиной % материнских смертей в этих странах является невосполненная кровопотеря [9]. Что касается затрат, связанных с заготовкой, хранением и скринингом донорской крови, то следует отметить, что сегодня при стоимости одной дозы крови от 100 до 225 долл. США мировая потребность составляет от 30,0 до 67,5 млрд долл. в год.
До разработки надежных скрининговых процедур частота заражения гепатитом С и ВИЧ при гемотрансфузиях была 1 : 11 и 1 : 2500 соответственно [10]. Сейчас в развитых странах эти соотношения выглядят как 1 : 1 000 000 и 1 : 676 000 [11, 12]. Однако высокая стоимость скрининга делает его недоступным для многих бедных стран и, как следствие, около 6 млн доз крови ежегодно не тестируется
на ВИЧ, гепатиты и сифилис [5]. Более того, даже полностью тестированная кровь потенциально опасна и риск возникновения осложнений, безусловно, присутствует при каждом переливании. По данным S.E. Hill (2001) установлено иммунодепрессивное действие гемотрансфузий на организм реципиента [13]. Они нередко приводят к различным нарушениям гомеостаза и метаболизма, наиболее частые из которых - гиперкалиемия, гипокальциемия и алкалоз [14].
В последние годы мы наблюдаем отчаянные попытки выправить сложившуюся ситуацию действиями административного характера, что в основном относится к мероприятиям, направленным на снижение трансфузи-онной нагрузки на душу населения. Так, все чаще пересматриваются критерии показаний к гемотрансфузиям [15], что вызывает много вопросов и возражений. Профилактика состояний, требующих экстренного кровеза-мещения, и кровосберегающие медицинские технологии также не успевают покрывать растущую потребность в препаратах крови [16]. Становится все более очевидным, что решение проблемы лежит в другой плоскости, а именно в концентрации научных и материальных усилий на создании искусственного заменителя крови - биосовместимой среды с приемлемой кисло-родтранспортной функцией.
Существует два основных направления разработки искусственных переносчиков кислорода. Первое направление - создание препаратов на основе синтетических материалов, способных обратимо связываться и переносить молекулы кислорода. В основном это относится к препаратам на основе эмульсий полностью фторированных органических соединений. Наиболее известный из них -отечественный препарат «Перфторан», который давно занял свою нишу на фармакологическом рынке противошоковых сред [17].
Суммарная частота побочных эффектов применения пер-фторана за весь период исследований, с 1984 по 1994 г., составила около 8%. В течение 3-5 лет были прослежены 389 больных: каких-либо нарушений функций органов и систем, связанных с инфузией перфторана, обнаружено не было [18].
Согласно мнению разработчиков перфторана (Маев-ский, Иваницкий, Исламов и соавт., 2006), вероятность побочных эффектов его использования составляет около 4%; причём, по их оценке, эти эффекты часто возникают из-за нарушений условий хранения препарата [18].
Один из разработчиков перфторана, д. б. н. С.И. Воробьёв с соавт. в статье (прислана в журнал в 2006 г., опубликована в 2009 г.) о создании ими в Лаборатории ПФОС (ООО, РАЕН) улучшенной, по их словам, версии перфторана сообщил, что частота побочных реакций выпускаемого ОАО НПФ «Перфторан» препарата, составляя 20-30%, могла колебаться в зависимости от года и серии его выпуска в диапазоне от 10 до 50% [19].
В 2004 г. была опубликована серия статей о результатах клинического применения перфторана:
• при политравме, где ведущим поражением являлась тяжёлая ЧМТ, - д. м. н. Л.В. Усенко и соавт. отметили сокращение продолжительности коматозного состояния на двое суток и снижение инвалидизации (n«300) [20];
• при коррекции приобретённых пороков сердца - д. м. н. В.Б. Максименко и соавт. избежали появления острых ишемических нарушений миокарда в послеоперационном периоде (n=23) [21];
• при эндоскопическом лечении резистентных форм язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки -д. м. н. Э.В. Луцевич и соавт. зафиксировали значительное сокращение сроков эпителизации язв (n=97) [22];
• при тяжёлых формах острого вирусного гепатита B -д. м. н. А.Ю. Ковеленов и соавт. зарегистрировали снижение вероятности появления острой печёночной недостаточности с 17,9 до 3,0% и сокращение продолжительности интоксикации с 13,7 до 9,5 суток (n=79) [23];
• при острых гастродуоденальных язвенных кровотечениях - к. м. н. М.А. Евсеев установил ослабление угрозы рецидива и ускорение в среднем на 5-6 суток формирования красного рубца на месте язвенного дефекта (n=25) [11];
• при нейротрофических язвах стоп у больных лепрой -д. м. н. А.А. Ющенко и соавт. выявили сокращение сроков лечения и добились заживления язв, не поддающихся терапии другими методами (n=17) [13];
• при шоке после тяжёлой термотоксической травмы -врачу высшей категории Е.М. Альтшулеру и соавт. удалось значительно усилить противошоковый эффект стандартного комплекса лечения (n=5) [17];
• при критических состояниях различного генеза (ЧМТ, отравление опиоидами и др.) - к. м. н. Г.С. Кичев и соавт. зафиксировали уменьшение летальности на 14,3% (n=59) [1].
Большое количество исследований показало положительное влияние перфторана на мембрану эритроцитов [24]. Доказано, что использование перфторана в остром периоде травмы не приводит к увеличению концентрации свободного гемоглобина, гемолитической активности сыворотки крови и количества высокостойких эритроцитов, что свидетельствует о его гемопротекторном действии [25].
Свое применение перфторан нашел и в военной медицине. Приказом начальника ГВМУ № 341 от 26 июня 1998 г. перфторан был принят на снабжение медицинской службы Вооружённых сил РФ.
Однако, несмотря на доказанную высокую эффективность препарата, он остается дорогостоящим. Кроме того, изготовитель перфторана в г. Пущино Московской области - ОАО НПФ «Перфторан» - прекратил свое существование в мае 2015 года. ООО «Гротекс» в октябре 2015 года получил исключительную лицензию на патент РФ № 2206319 «Эмульсия перфторорганических соединений для медицинских целей, способ ее приготовления и способы лечения и профилактики заболеваний с ее использованием», а в марте 2016 года приобрел права на товарные знаки «перфторан» и «голубая кровь», однако производство данного препарата еще не начато.
Второе направление - разработка различных модификаций биосовместимых сред на основе натурального или модифицированного гемоглобина человека и животных.
Попытки трансфузий растворов свободного гемоглобина с целью транспорта кислорода проводятся с середины прошлого столетия. Однако такие отрицательные эффекты внутрисосудистого введения свободного гемоглобина, как системная артериальная гипертензия и повреждение
почек, являются серьезным препятствием к его клиническому применению [26]. В связи с этим были предложены различные способы модификации гемоглобина, конъюгации его молекул между собой (полигемоглобин), с альбумином, полимерами и т. д., а также разработан ряд методов инкапсуляции натурального или модифицированного гемоглобина - искусственные эритроциты, гемосомы, инкапсулированный в липосомы гемоглобин ^ЕН) и т. п. [27]. Последнее, на наш взгляд, выглядит наиболее перспективным. Структура таких препаратов подобна эритроцитам. Гемоглобин помещают внутрь пузырьковых нано-размерных образований с полупроницаемой оболочкой, защищающих эндотелий и компоненты крови от прямого контакта с потенциально токсичными тетрамерами гемоглобина [1]. Кроме того, инкапсуляция позволяет относительно свободно изменять физико-химические свойства гемоглобина и увеличивает время его внутрисосудистой циркуляции [1, 28]. Увеличение продолжительности циркуляции связывают с меньшей активностью клеток рети-кулоэндотелиальной системы в отношении инкапсулированных форм гемоглобина. Модификация поверхности везикул удлиняет время персистенции и улучшает коллоидную стабильность дисперсии [29, 30]. Также показана возможность инкапсуляции вместе с гемоглобином компонентов естественной антиоксидантной системы - ката-лазы, супероксиддисмутазы (СОД) и др., что тормозит процессы перекисного окисления и, следовательно, снижает скорость образования метгемоглобина [31, 32, 33].
В качестве мембранного материала используются био-деградируемые полимеры (нанокапсулы) и естественные фосфолипиды (липосомы) [1, 28]. Мембраны таких «эритроцитов» не содержат антигенов, что делает их универсальными переносчиками кислорода для всех групп крови.
В сравнении с липосомами полимерные нанокапсулы прочнее и имеют более пористую структуру, и значит, на их синтез требуется меньше материала. Однако белки и небольшие гидрофильные молекулы могут проникать через такую мембрану, изменяя свойства гемоглобина. В большей степени это относится к ионам хлора, всегда присутствующим в плазме в избытке и вызывающим окисление гемоглобина [23, 22, 34]. Напротив, способность гидрофобной стенки липосом пропускать заряженные молекулы крайне низка [35]. Установлено, что липосомы избирательно проницаемы только для воды и неполярных молекул, например кислорода. Диаметр липосом легко модифицируется. Целесообразно создание гемосом с диаметром более 100 нм, такой размер препятствовал бы их фильтрации в капиллярах и почечных канальцах [28]. В экспериментальных исследованиях установлено, что гемосомы с диаметром 250 нм легко проходят через искусственные капилляры с диаметром 3 мкм, что делает их более предпочтительными переносчиками кислорода, в отличие от эритроцитов, в условиях блокады микроциркуляции [36]. Это было подтверждено в дальнейших экспериментах на животных. По сравнению с натуральными эритроцитами, кристаллоидами, простыми липосомами и модифицированным гемоглобином, введение суспензии гемосом ограничивает зону индуцированного инфаркта мозга [37] и способствует более быстрому заживлению хирургических ран после гастроинтестинальных вмешательств у крыс [38].
Серьезными недостатками простых гемосом являются короткий период внутрисосудистой циркуляции, равный 12-18 ч [39, 30] и агрегация гемосом, ведущая к ухудшению реологических свойств дисперсии при хранении [29]. В качестве решения данной проблемы предложена методика встраивания в фосфолипидный бислой липосом молекул водорастворимого биополимера - полиэтиленгликоля (PEG) [1, 40, 28]. Такие липосомы получили название пеги-лированные, или стелс-липосомы (от англ. stealth - невидимый). Интересно, что пегилирование не только привело к увеличению времени внутрисосудистой жизни и стабильности дисперсии липосом при хранении, но и значительно улучшило биосовместимость липосомальной стенки [41, 40, 30, 36]. В дальнейшем проводился детальный поиск оптимальных соотношений количества и размера встраиваемых в липидную стенку молекул полиэтиленгли-коля [21, 42]. Например, при массовой доле PEG в структуре мембраны в 10% и размерах молекул 5000 Da в эксперименте на животных удалось увеличить время циркуляции «гемосом» до 36 ч и практически полностью исключить активирование плазменных каскадов протеолиза, в том числе белков системы комплемента, участвующим, как известно, в процессах анафилаксии [43, 30].
В настоящее время рядом исследователей продолжается поиск оптимальной рецептуры состава липосомальной оболочки. Так, благодаря своему удобству, традиционным способом включения PEG в стенку липосомы является его сшивка с фосфатидилэтаноламином. Это объясняет его большое процентное содержание в составе липидной стенки стелс-липосом. Однако при внутрисосудистом введении в большой дозе (например, при лечении массивной кровопотери) фосфатидилэтаноламин может оказаться токсичным для организма [24, 44]. Сообщается об использовании гексадецилкарбамоилметилгексадекано-ата (HDAS) в качестве потенциального заменителя фосфа-тидилэтаноламина [45]. Экспериментальное исследование на животных показало, что включение в структуру липосомальной стенки 20% HDAS не ухудшает кинетику и не приводит к анафилаксии даже при многократном введении LEH в больших дозах.
Несмотря на ощутимый прогресс, основной проблемой разработки кровезаменителя выступает даже не сама оболочка, а в большей степени внутреннее содержимое везикулы. Проблема обусловлена сложностью длительного поддержания молекул гемоглобина в стабильном физиологическом состоянии. Известно, что независимо от внешних условий железо гемоглобина постоянно окисляется, превращаясь из двухвалентной в трехвалентную форму (метгемоглобин). Метгемогло-бин не участвует в транспорте кислорода, поэтому в нормальных эритроцитах постоянно идет процесс восстановления образующегося метгемоглобина в гемоглобин, что обеспечивается физиологическими механизмами при участии ферментов НАДН- и НАДФН-метгемоглобинредуктаз [46]. Нормальная работа этих механизмов неразрывно связана с метаболическими процессами живого организма. Вне организма наблюдается быстрое накопление метгемоглобина и гемолиз, что в значительной степени ограничивает сроки хранения консервированных эритроцитов. Изучение
метгемоглобинообразования в суспензии LEH показало, что при 37°С более половины всего гемоглобина окисляется в течение 24 ч.
С целью улучшения стабильности гемоглобина предлагалось абсорбировать его на кварцевых(кремниевых) наночастицах (liposome-encapsulated hemoglobin/silica nanoparticle - LEHSN) [19]. Сообщалось о снижении скорости метгемоглобинообразования в присутствии ката-лазы и микстуры, состоящей из в-NAD, глюкозы, адени-на, инозина, MgCl2, KCl, KH2PO4 и Na2HPO4 до 14% [47]. Изучалось антиоксидантное действие конъюгации гемоглобина с компонентами естественной системы антиоксидации (СОД, каталазой) [18] и альбумином [20]. Также представляет интерес идея снижения оксидативной деградации использованием метиленового синего и его функциональных аналогов в качестве переносчика электронов от НАДФН циркулирующих в кровотоке эритроцитов к гемоглобину LEH [48]. Описаны и еще более сложные варианты модификации содержимого везикул, повышающие их антиоксидантную устойчивость и улучшающие газотранспортные свойства среды. Так, стараниями канадских исследователей создана экспериментальная среда в составе инкапсулированного в стелс-липосомы гемоглобина, сшитого с молекулами PEG, полимером из молекул лактата (PLA), каталазы, СОД и карбангидразы [49].
Кроме указанной проблемы есть и другие, решение которых еще не найдено, например часто высокие и потому неприемлемые для внутрисосудистого введения в больших дозах значения осмолярности и вязкости разрабатываемых сред, малоизученное взаимодействие с NO -естественным метаболическим регулятором сосудистого тонуса - и др. [50].
При всем разнообразии предложенных решений на сегодня ни одна из указанных моделей полностью не решает всех обозначенных проблем, в том числе окислительной деградации. Кроме того, несмотря на удовлетворительные, казалось бы, результаты экспериментов последних лет, усложнение процедуры синтеза многократно увеличивает стоимость препарата, что делает его недоступным для массового производства.
В 2007 г. появилось сообщение о проведении доклинических испытаний двух готовых форм препаратов: Hb-vesicles (Waseda University) и Neo Red Cells (Terumo Corporation) [51]. С 2007 по 2012 г. опубликовано несколько обнадеживающих статей, посвященных изучению некоторых свойств Hb-vesicles, в том числе при экспериментальной модели геморрагического шока [52, 25, 53]. Однако, несмотря на то, что приемлемый заменитель донорской крови еще не анонсирован, на общедоступных электронных ресурсах в сети Интернет можно найти множество позитивных статей об экспериментальном применении различных вариантов LEH в качестве терапевтических кислородтранспортных средств, например, при различных вариантах локальной ишемии [37, 54].
Эти разработки заслуживают большого внимания, так как открывают новое перспективное направление в медицине. Вместе с тем такой результат не вполне оправдывает затраченные усилия многих специалистов в течение долгих лет. Очевидно, что на сегодня заготовка до-
норской крови многократно дешевле получения даже самого простого препарата инкапсулированного гемоглобина. Хотя эксперименты продолжаются, надо признать, что пока решение проблемы глобального дефицита крови не найдено. Причин можно назвать несколько, но одна из них, на наш взгляд, лежит на поверхности. Как ни банально это звучит, она заключается в попытке решить проблему только методами физико-химического синтеза, т. е. искусственно воссоздать кислородтран-спортную среду, максимально приближенную по основным параметрам к взвеси эритроцитов и при этом соизмеримую по себестоимости с оригиналом, что, скорее всего, невозможно. Думается, обозначенная проблема междисциплинарная и такой узкий подход не способствует достижению основной цели. Один из возможных путей нам видится в параллельном с поиском «оптимальной» среды создании компактных и мобильных систем для быстрой инкапсуляции растворов гемоглобина непосредственно перед инфузией. Исключение из поставленных задач решения вопроса консервирования и хранения препарата (и окислительной деградации) поможет значительно снизить затраты на производство и даст толчок к развитию и внедрению новой методики экстренного кровезамещения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кичев Г.С., Веремеенко С.Н., Озерова И.В. и др. Опыт применения перфто-рана в лечении критических состояний различного генеза. Mедлайн.Pу. 2004. Т. 5. С.175-177.
Kichev G.S., Veremeenko S.N., Ozerova I.V. i dr. Opyt primeneniya perftorana v lechenii kriticheskih sostoyanij razlichnogo geneza. Medlajn. Ru. 2004. T. 5. S. 175-177.
2. Кровосберегающие технологии в акушерской практике (утв. Рос. общ. акушеров-гинекологов 15 мая 2014 г.). Клинические рекомендации (протокол лечения) [Электронный ресурс]: [письмо M-ва здравоохранения РФ от 27 мая 2014 г. № 15-4/10/2-3798] // ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова Mинздрава России». M. 2000-2014. - Режим доступа: http://www.ncagip.ru/upload/ obrazovanie/krove_tex_2014.pdf.
Krovosberegayushchie tekhnologii v akusherskoj praktike (utv. Ros. obsh. akusherov-ginekologov 15 maya 2014 g.). Klinicheskie rekomendacii (protokol lecheniya) [EHlektronnyj resurs]: [pis'mo M-va zdravoohraneniya RF ot 27 maya 2014 g. № 15-4/10/2-3798] // FGBU «Nauchnyj centr akusherstva, ginekologii i perinatologii imeni akademika V.I. Kulakova Minzdrava Rossii». M. 2000-2014. - Rezhim dostupa: http://www.ncagip.ru/ upload/obrazovanie/krove_tex_2014.pdf.
3. MDH. Minnesota Department of Health [Electronic recource] / MDH. 2015. Mode of access: www.health.state.mn.us.
4. Takeoka S., Sakai H., Kose T. et al. Methemoglobin formation in hemoglobin vesicles and reduction by encapsulated thiols. Bioconjugate Chem. 1997. № 8. Р. 539-544.
5. Bhadra D., Bhadra S., Jain P. et al. Pegnology: a Review of PEG-ylated systems. Pharmazie. 2002. № 57. P. 5-29.
6. Багненко С.Ф.,Сорока В.В., Нохрин С.П. и др. Применение перфтора-на в лечении больных с критической ишемией нижних конечностей. Mед-лайн.Ру. 2005. Т. 6. С. 683-693.
Bagnenko S.F., Soroka V.V., Nohrin S.P. i dr. Primenenie perftorana v lechenii bol'nyh s kriticheskoj ishemiej nizhnih konechnostej. Medlajn.Ru. 2005. T. 6. S. 683-693.
7. Воробьёв С.И.,Иваницкий Г.Р., Мороз В.В. и др. Газотранспортные препараты на основе перфторуглеродных эмульсий (обзор). Вестник интенсивной терапии. 1996. № 2-3. С. 15-21.
Vorob'yovS.I., Ivanickij G.R., Moroz V.V. idr. Gazotransportnyepreparaty na osnove perftoruglerodnyh ehmul'sij (obzor). Vestnik intensivnoj terapii. 1996. № 2-3. S. 15-21.
8. Palmer A.F., Intaglietta М. Blood substitutes. Ann. Rev. Biomed. Eng. 2014. № 16. Р. 77-101.
9. Arifin D.R., Palmer A.F. Determination of size distribution and encapsulation efficiencies of liposomes encapsulated hemoglobin by asymmetric flow field - flow fractionation and multi-angle light scattering. Biotech. Prog. 2003. № 19. Р. 1798-1811.
10. Alayash A.I. Oxygen therapeutics: can we tame haemoglobin? Nature. 2004. № 3. Р. 152-159.
11. Евсеев М.А. Возможности прогнозирования и предупреждения рецидива острых гастродуоденальных язвенных кровотечений. Медлайн.Ру. 2004. Т. 5. С. 90-94.
Evseev M.A. Vozmozhnosti prognozirovaniya i preduprezhdeniya recidiva ostryh gastroduodenal'nyh yazvennyh krovotechenij. Medlajn.Ru. 2004. T. 5. S. 90-94.
12. Chang T.M.S. Future prospects for artificial blood. Trends Biotechnol. 1999. № 17. P. 61-67.
13. Ющенко А.А., Урляпова Н.Г., Савин Л.А. Лечение нейротрофических язв стоп у больных лепрой с использованием эмульсии перфторан. Медлайн.Ру. 2004. Т. 5. С. 100-101.
Yushchenko A.A., Urlyapova N.G., Savin L.A. Lechenie nejrotroficheskih yazvstop u bol'nyh leproj s ispol'zovaniem ehmul'siiperftoran. Medlajn.Ru. 2004. T. 5. S. 100-101.
14. Klein H.G. Blood substitutes: how close to a solution? Oncology. 2002. № 16. Р. 147-151.
15. Воробьёв С.И. Коллоидно-химические характеристики перфторуглеродных эмульсий. Химико-фармацевтический журнал. 2007. Т. 41. № 11. С. 46-51.
Vorob'yov S.I. Kolloidno-himicheskie harakteristiki perftoruglerodnyh ehmul'sij. Himiko-farmacevticheskij zhurnal. 2007. T. 41. № 11. S. 46-51.
16. Багненко С.Ф.,Шлык И.В., Батоцыренов Б.В. и др. Фармакоэкономи-ческая оценка применения лекарственного средства перфторан в клинической практике. Вестник службы крови России. 2005. № 2 (июнь). С. 49-55.
BagnenkoS.F.,SHIykI.V.,BatocyrenovB.V. idr. Farmakoehkonomicheskaya ocenka primeneniya lekarstvennogo sredstva perftoran v klinicheskoj praktike. Vestnik sluzhby krovi Rossii. 2005. № 2 (iyun'). S. 49-55.
17. Альтшулер Е.М.,Погорелов Е.А., Шрайнер С.В. и др. Применение перфторана в комплексной терапии шока при термотоксической травме. Медлайн.Ру. 2004. Т. 5. С. 165-166.
Al'tshuler E.M., Pogorelov E.A., SHrajner S.V. i dr. Primenenie perftorana v kompleksnoj terapiishoka pri termotoksicheskoj travme. Medlajn. Ru. 2004. T. 5. S. 165-166.
18. Мороз В.В., Крылов Н.Л., Иваницкий Г.Р. и др. Применение перфторана в клинической медицине. Альтернативы переливанию крови в хирургии: мат-лы симпозиума / под ред. В.А. Гологорский. Анестезиология и реаниматология. 1999. Вып. прилож. С. 126-135.
Moroz V.V., Krylov N.L., Ivanickij G.R. i dr. Primenenie perftorana v klinicheskoj medicine. Al'ternativy perelivaniyu krovi v hirurgii: Mat-ly simpoziuma /pod red. V. A. Gologorskij. Anesteziologiya i reanimatologiya. 1999. Vyp. prilozh. S. 126-135.
19. Воробьев С.И. Перфторуглеродная кровезамещающая эмульсия перфторан: хронология создания. Вестн. РАЕН. 2007. Т. 7. № 1. С. 98-108.
Vorob'ev S.I. Perftoruglerodnaya krovezameshchayushchaya ehmul'siya perftoran: hronologiya sozdaniya. Vestn. RAEN. 2007. T. 7. № 1. S. 98-108.
20. Усенко Л.В., Криштафор А.А. Внутривенный, эндотрахеальный и эн-теральный пути введения перфторана: клинические эффекты применения у больных в критическом состоянии. Медлайн. Ру. 2004. Т. 5. С. 77-79.
Usenko L.V., Krishtafor A.A. Vnutrivennyj, ehndotraheal'nyj i ehnteral'nyj puti vvedeniya perftorana: klinicheskie ehffekty primeneniya u bol'nyh v kriticheskom sostoyanii Medlajn.Ru. 2004. T. 5. S. 77-79.
21. Максименко В.Б., Лоскутов О.А., Дружина А.Н. и др. Опыт использования кристаллоидной кислородсодержащей фармакохолодовой кардио-плегии с добавлением перфторана при хирургической коррекции пороков сердца. Медлайн.Ру. 2004. Т. 5. С. 80-82.
Maksimenko V.B., Loskutov O.A., Druzhina A.N. i dr. Opyt ispol'zovaniya kristalloidnoj kislorodsoderzhashchej farmakoholodovoj kardioplegii s do-bavleniem perftorana pri hirurgicheskoj korrekcii porokov serdca. Medlajn. Ru. 2004. T. 5. S. 80-82.
22. Луцевич Э.В., Праздников Э.Н., Кузин А.В. и др. Комплексное лечение хронических гастродуоденальных язв с применением перфторана. Медлайн.Ру. 2004. Т. 5. С. 83, 84.
Lucevich E.V., Prazdnikov E.N., Kuzin A.V. i dr. Kompleksnoe lechenie hronicheskih gastroduodenal'nyh yazv s primeneniem perftorana. Medlajn. Ru. 2004. T. 5. S. 83-84.
23. Ковеленов А.Ю., Лобзин Ю.В., Светлов В.Н. Новые возможности клинического применения перфторорганических соединений. Эффективность перфторана в терапии тяжелых форм вирусных гепатитов. Медлайн. Ру. 2004. Т. 5. С. 86-88.
Kovelenov A.Yu, Lobzin Yu.V., Svetlov V.N. Novye vozmozhnosti klinicheskogo primeneniya perftororganicheskih soedinenij. EHffektivnost' perftorana v terapii tyazhelyh form virusnyh gepatitov. Medlajn.Ru. 2004. T. 5. S. 86-88.
24. Мороз В.В., Новодержкина И.С., Антошина Е.М., Афанасьев А.В. Влияние перфторана на морфологию эритроцита при острой кровопотере. 2011. Т. VII. № 1.
Moroz V.V., Novoderzhkina I.S., Antoshina E.M., Afanas'ev A.V. Vliyanie perftorana na morfologiyu ehritrocita pri ostroj krovopotere. 2011. T. VII. № 1.
25. Мороз В.В., Молчанова Л.В., Герасимов Л.В., Остапченко Д.А. и др. Влияние перфторана на гемореологию и гемолиз у больных с тяжелой травмой и кровопотерей. Общая реаниматология. 2006. № 2 (1). С. 5-11. D0I:10.153 6 0/1813-9779-2 0 0 6-1-5-11.
Moroz V.V., Molchanova L.V., Gerasimov L.V., Ostapchenko D.A. i dr. Vliyanie perftorana na gemoreologiyu i gemoliz u bol'nyh s tyazheloj trav-moj i krovopoterej. Obshchaya reanimatologiya. 2006. № 2 (1). S. 5-11. D0I:10.15360/1813-9779-2006-1-5-11.
26. Awasthi V., Yadav V.R., Goins B. et al. Modulation of oxidative stability of haemoglobin inside liposome-encapsulated haemoglobin. J. Microencapsul. 2013. № 30 (5). Р. 471-478.
27. Kettisen K., Bblow L., Sakai H. Potential electron mediators to extract electron energies of RBC glycolysis for prolonged in vivo functional lifetime of hemoglobin vesicles. Bioconjug Chem. 2015. № 26 (4). Р. 746-754.
28. Okamoto Y., Kawaguchi A., Kise Y. et al. Liposome-encapsulated hemoglobin accelerates gastric wound healing in the rat. Tokai J. Exp. Clin. Med. 2009. Vol. 34. № 3. P. 99-105.
29. Sakai H., Sou K., Horinouchi H. et al. Hemoglobin-vesicle, a cellular artificial oxygen carrier that fulfils the physiological roles of the red blood cell structure. Adv. Exp. Med. Biol. 2010. № 662. Р. 433-438.
30. Hill S.E. Oxygen therapeutics - current concepts. Can. J. Anesth. 2001. № 48. Р. 32-40.
31. Chonn A., Semple S.C., Cullis P.R. Association of blood proteins with large unilamellar liposomes in vivo - relation to circulation lifetime. J. Biol. Chem. 1992. № 267. Р. 18759-18765.
32. Farmer M.C., Gaber B.P. Liposome-encapsulated hemoglobin as an artificial oxygen - carrying system. Methods Enzymol. 1987. № 149. Р. 184-200.
33. Kjellstrom B.T. Blood subtitutes: where do we stand today? J. Intern. Med. 2003. № 253. Р. 495-497.
34. Wright R.O., Magnani B., Shannon M.W. et al. N-acetylcysteine reduces meth-emoglobin in vitro. Ann. of Emergency Med. 1996. № 28. P. 499-503.
35. AABB. Advancing transfusion and cellular therapies worldwide [Electronic recource] / AABB. 2016. Mode of access: www.aabb.org.
36. Moghimi S.M., Hamad I., Andresen T.L. et al. Methylation of the phosphate oxygen moiety of phospholipid-methoxy (polyethylene glycol) conjugate prevents PEGylated liposome-mediated complement activation and anaphyla-toxin production. FASEB J. 2006. № 20. Р. 2591-2593.
37. Chang T.M.S. A new red blood cell substitute. Crit. Care Med. 2004. № 32. P. 612-613.
38. Tsuchida E., Sou K., Nakagawa A. et al. Artificial oxygen carriers, hemoglobin vesicles and albumin-hemes, based on bioconjugate chemistry. Bioconjug. Chem. 2009. № 20 (8). Р. 1419-1440.
39. Об утверждении правил клинического использования донорской крови и (или) ее компонентов: приказ М-ва здравоохранения РФ от 2 апр. 2013 г. № 183н. Рос. газета. 2013. 28 авг.
Ob utverzhdenii pravil klinicheskogo ispol'zovaniya donorskoj krovi i (ili) ee komponentov: prikaz M-va zdravoohraneniya RF ot 2 apr. 2013 g. № 183n Ros. gazeta. 2013. 28 avg.
40. Hosaka H., Haruki R., Yamada K. et al. Hemoglobin-albumin cluster incorporating a Pt nanoparticle: artificial O2 carrier with antioxidant activities [Electronic resource]. PLOS One. San Francisco, 2014. Mode of access: http:// journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0110541.
41. Жибурт Е.Б., Шестаков Е.А. Доказательная трансфузиология. Ч. 1. О правилах назначения компонентов крови. Здравоохранение. 2007. № 11. С. 31-37.
Zhiburt E.B., Shestakov E.A. Dokazatel'naya transfuziologiya. CH. 1. O pravilah naznacheniya komponentov krovi. Zdravoohranenie. 2007. № 11. S. 31-37.
42. Gao W., Bian Y., Chang T.M. Novel nanodimension artificial red blood cells that act as O2 and CO2 carrier with enhanced antioxidant activity: PLA-PEG nanoencapsulated PolySFHb-superoxide dismutase-catalase-carbonic anhydrase. Artificial Cells, Nanomedicine and Biotechnology. 2013. Vol. 41. iss. 4. Р. 232-239.
43. Seishi Y., Horinouchi H., Sakai H. et al. Effect of the cellular-type artificial oxygen carrier hemoglobin vesicle as a resuscitative fluid for prehospital treatment: experiments in a rat uncontrolled hemorrhagic shock model. Shock. 2012. № 38. P. 153-158.
44. D'Agnillo F., Chang T.M. Polyhemoglobin-superoxide dismutase-catalase as a blood substitute with antioxidant properties. Nat. Biotechnol. 1998. № 16 (7). Р. 667-671.
45. Israelachvili J.N. Intermolecular and Surface Forces. San Diego: Academic Press, 2011. 710 p.
46. Воробьёв С.И., Иваницкий Г.Р., Ладилов Ю.В. и др. Модификация мембран клеток перфторуглеродами как возможный механизм уменьшения степени ишемического повреждения миокарда. ДАН СССР. 1988. Т. 299. № 1. С. 228-230.
Vorob'yov S.I., Ivanickij G.R., Ladilov Yu.V. i dr. Modifikaciya membran kletok perftoruglerodami kak vozmozhnyj mekhanizm umen'sheniya stepeni ishemicheskogo povrezhdeniya miokarda. DAN SSSR. 1988. T. 299. № 1. S. 228-230.
47. Bastiat G., Oliger P., Karlsson G. et al. Development of non-phospholipid liposomes containing a high cholesterol concentration. Langmuir. 2007. № 23. P. 7695-7699.
48. Ishida T., Maeda R., Ichihara M. et al. Accelerated clearance of PEGylated liposomes in rats after repeated injections. J. Contr. Release. 2003. № 88. Р. 35-42.
49. Liu M., Gan L., Chen L. et al. A novel liposome-encapsulated hemoglobin / silica nanoparticle as an oxygen carrier. Int. J. Pharm. 2012. № 427. Р. 354-357.
50. Sakai H., Seishi Y., Obata Y. et al. Fluid resuscitation with artificial oxygen carriers in hemorrhaged rats: profiles of hemoglobin-vesicle degradation and hematopoiesis for 14 days. Shock. 2009. № 31 (2). Р. 192-200.
51. Kawaguchi A.T., Fukumoto D., Haida M. et al. Liposome-encapsulated hemoglobin reduces the size of cerebral infarction in the rat: evaluation with photochemically induced thrombosis of the middle cerebral artery. Stroke Research Today. 2007. № 38. Р. 1626-1632.
52. Коленов С.А., Овчаров С.Э., Кузин А.В. и др. Использование перфто-рана и димексида в комплексном лечении трофических язв нижних конечностей у больных сахарным диабетом. Медлайн.Ру. 2004. Т. 5. С. 102-103.
Kolenov S.A., Ovcharov S.E., Kuzin A.V. i dr. Ispol'zovanie perftorana i dimeksida v kompleksnom lechenii troficheskih yazv nizhnih konechnostej u bol'nyh saharnym diabetom. Medlajn.Ru. 2004. T. 5. S. 102-103.
53. Топтунов А.Ф., Петрова Н.Э. Гемоглобины: эволюция, распространение и гетерогенность. Успехи биол. химии. 2001. Т. 41. С. 199-228.
Toptunov A.F., Petrova N.E. Gemoglobiny: ehvolyuciya, rasprostranenie i geterogennost'. Uspekhi biol. himii. 2001. T. 41. S. 199-228.
54. Moghimi S.M., Szebeni J. Stealth liposomes and long circulating nanoparticles: critical issues in pharmacokinetics, opsonization and protein-binding properties. Prog. Lipid. Res. 2003. № 42. Р. 463-478.
