CC BY
22
УДК 616.61-006.04-018.53-076.5
ИНТРАТУМОРАЛЬНЫЕ ТУЧНЫЕ КЛЕТКИ ПРИ ПОЧЕЧНО-КЛЕТОЧНОМ РАКЕ: КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СОПОСТАВЛЕНИЯ
1 Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул
2 Алтайский филиал РОНЦ им. Н.Н. Блохина Минздрава России, г. Барнаул
Бобров И.П.1, Черданцева Т.М.1, Крючкова Н.Г.1, Лепилов А.В.1, Лазарев А.Ф.2, Авдалян А.М.2, Климачев В.В.1, Климачев И.В.1, Мяделец М.Н.1, Казарцев А.В.1
Результаты исследования, представленные в данной статье, показывают взаимосвязь интрамуральных стромальных тучных клеток в опухоли с некоторыми важнейшими прогностическими клинико-ана-томическими факторами развития почечно-клеточного рака. Авторами представлено доказательство возможности использования фактора числа интрамуральных стромальных тучных клеток в опухоли в качества дополнительного для прогностической оценки развития заболевания и метастазирования опухоли. Выявлена и доказана взаимосвязь между данным фактором и 5-летней послеоперационной выживаемости больных при почечно-клеточном раке.
Ключевые слова; интрамуральные тучные клетки, почечно-клеточный рак, онкология, факторы риска.
The results of the study presented in this article show the interrelation of intramural stromal mast cells in tumors with some of the most important prognostic clinico-anatomical factors in the development of renal cell carcinoma. The authors demonstrate the possibility of using the factor of the number of intramural stromal mast cells in the tumor as an additional one for prognostic evaluation of the development of the disease and metastasis of the tumor. The relationship between this factor and the 5-year postoperative survival of patients with renal cell carcinoma has been identified and proven.
Key words; intramural mast cells, renal cell carcinoma, oncology, risk factors.
Интерес к изучению микроокружения клеток злокачественных новообразований и в том числе к стромальным интратуморальных тучным клеткам (ТК) сохраняется на протяжении последних десятилетий [1-6].
ТК присутствуют в нормальной и патологически измененной почке [7-8]. Имеется небольшое количество работ, посвященных исследованию прогностического значения ТК при почечно-клеточном раке (ПКР). По данным Tune B. и соавт. [9], содержание интратумораль-ных ТК было значительно выше при раке почки (РП), чем в нормальной почечной ткани, что, по заключению данных авторов, объясняется их участием в туморогенезе. Но в то же время авторами не было найдено взаимосвязей между числом ТК в опухоли и важными факторами прогноза ПРК: клинической стадией, размером опухолевого узла, градацией по Fuhrman, но количество ТК значительно возрастало в светло-клеточных карциномах. Более высокое число интратуморальных ТК в светлоклеточных карциномах авторы объясняют значительной метаболической потребностью клеток данного гистологического варианта РП. Аналогичные данные получили и другие авторы [10]. В то же время Guldur M.E. и соавт. [11] нашли значимые взаимосвязи между числом ТК в опухоли и стадией, градацией по Fuhrman, размером и гистологическим типом опухоли.
Таким образом, работы, посвященные изучению прогностического значения исследования интратуморальных стромальных ТК при ПКР, немногочисленны и противоречивы, и поэтому данный компонент микроокружения опухоли нуждается в дальнейшем изучении.
Целью данной работы явилось исследование интратуморальных стромальных ТК при ПКР, поиск взаимосвязей с важными клини-ко-анатомическими факторами прогноза и послеоперационной выживаемостью больных.
Материал и методы
Изучен операционный материал 63 больных ПКР. Средний возраст пациентов составил 58,2±1,2 лет. Мужчин было 34 (54%), женщин -29 (46%). Во всех наблюдениях ПКР был классифицирован в соответствии с классификацией ВОЗ 2004 г. По гистологическому строению опухоли были представлены следующим образом: светлоклеточный рак - 48; зернистоклеточный рак - 4; папиллярный рак - 5; хромофобный рак - 3, и веретеноклеточный (саркоматоид-ный) рак - 3.
Степень распространенности опухолевого процесса оценивалась в соответствии с TNM классификацией злокачественных опухолей (TNM Classification of Malignant Tumors, edited by Sobin L.H., 2002) [12]. Среди наших больных I клинической стадии (T1N0M0) соответствовали 47 (74,6%) наблюдений; II стадии (T2N0M0) - 3
(4,8%) наблюдение; III стадии (T1N1M0, T2N1M0, T3N0M0, T3N1M0) - 8 (12,7%) и IV стадии (T4N0M0, T4N1M0, TлюбаяN2M1, ТлюбаяШю-баяМ1) - 5 (7,9%). Степень злокачественности опухолевых клеток оценивали по Fuhrman S.A. и соавт. (1982) [13]. Степени анаплазии G1 соответствовали 31 опухоли (49,2%), степени анапла-зии G2 - 14 (22,2%) опухолей, степени анаплазии G3 - 13 (20,6%), и степени анаплазии G4 - 5 (8%).
Карцином с регионарными и отдаленными метастазами было 11 (17,5%), локализованных опухолей - 52 (82,5%).
Средний размер опухолевого узла составил 7,1±0,3 см.
Контролем служила ткань почек, забранная из максимально удаленных от опухоли участков, без выраженных явлений воспаления и склероза.
Материал фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине на протяжении 1224 часов. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином и на кислые мукополисахариды коллоидным железом по Гале. ТК выявляли иммуногистохимическим методом с помощью моноклональных антител С-kit (CD117) (клон А4052, разведение 1:200, DAKO) по рекомендованному производителем протоколу. Высчитывали среднее количество ТК в трех полях зрения при увеличении микроскопа х 400.
Сведения о выживаемости больных получали по данным регистра злокачественных заболеваний и амбулаторных карт (за 2010-2016 гг.). Статистическую обработку материала проводили при помощи статистического пакета Statistica 10.0. При нормальном распределении данных при проверке статистических гипотез применяли методы параметрической статистики (t-test Стьюдента), а если полученные данные не соответствовали критериям нормального распределения (критерий Шапиро-Уилка W = 0,89, p <0,01), то применяли тест Колмогорова-Смирнова или U-тест Манна-Уитни. Данные считали достоверными при р < 0,05. Построение кривых выживаемости проводили по методу Kaplan-Meier, достоверность различий показателей выживаемости оценивали с помощью log-rank теста.
Результаты и обсуждение
Результаты проведенного исследования показали, что в неизмененной ткани почки ТК располагались поодиночке или группами. Они имели круглую, овальную или отросчатую форму и располагались преимущественно в ин-терстициальной ткани, около сосудов и между канальцами. В среднем число ТК в ткани почки составило 2,3±0,2 в трех полях зрения при увеличении микроскопа х 400.
Среди всех больных ПКР вне зависимости от пола, возраста, гистологического типа и других клинико-морфологических показателей разброс средних значений плотности распределения ТК колебался от 0 до 10. Среднее значение плотности распределения ТК при ПКР составило 2,5±0,2.
Сопоставление среднего числа интратумо-ральных ТК в строме опухоли с прогностически важными клинико-анатомическими факторами ПКР позволило выявить некоторые важные корреляционные взаимосвязи. Плотность распределения ТК была взаимосвязана: с клинической стадией заболевания (г = 0,69; р = 0,0001), с размером опухолевого узла (г = 0,58; р = 0,0001), со степенью анаплазии опухоли по Fuhrman (г = 0,89; р = 0,001), с наличием регионарных и дистантных метастазов (г = 0,48; р = 0,0001) и с послеоперационной выживаемостью больных (г = 0,40; р = 0,001). Не было обнаружено взаимосвязей с полом (г = - 0,03; р = 0,8), возрастом (г = - 0,15; г = 0,25) больных и гистологическим вариантом опухоли (г = 0,16; р = 0,19) (таблица 1).
Таблица 1
Корреляционные взаимосвязи плотности распределения ТК с клинико-морфологическими параметрами ПКР
Клинико-морфологиче-ский параметр Коэффициент корреляции (r) Достоверность (р)
Клиническая стадия 0,69 0,0001
Размер опухолевого узла 0,58 0,0001
Степень анаплазии опухоли по Fuhrman 0,89 0,001
Наличие регионарных и дистантных метастазов 0,48 0,0001
Послеоперационная выживаемость больных 0,40 0,001
Пол пациентов 0,03 -
Возраст пациентов - 0,15 -
Гистологический вариант опухоли 0,16 -
Среднее значение интратуморальных ТК в опухолях у мужчин составило 2,6±0,2, у женщин - 2,4±0,2 (р = 0,6).
В зависимости от возраста пациентов средние показатели числа ТК составили: у больных в возрасте от 30-39 лет - 1,0±0,4; от 40 до 49 лет - 3,7±0,4; от 50 до 59 лет - 2,5±0,3; от 60 до 69 лет - 2,4±0,3, и от 70 до 79 лет - 1,8±0,25. Таким образом, наиболее высокие показатели интра-
туморальных ТК в строме опухоли наблюдали в возрастной группе больных от 40 до 49 лет, а наиболее низкие в группе от 30 до 39 лет.
При анализе содержания ТК в опухоли в зависимости от клинической стадии заболевания по TNM были получены следующие результаты: у пациентов с I клинической стадией среднее число ТК составило 1,85±0,15; со II стадией число ТК возрастало до 2,7±0,4 (р = 0,2); при III стадии количество ТК увеличивалось до 4,3±0,4 (р = 0,003), и при IV стадии оно равнялось 6,3± 0,6 (р = 0,005). Таким образом, в III и IV стадиях отмечали достоверное увеличение ТК по сравнению с I стадией, а в IV стадии число ТК значимо возрастало по сравнению с III стадией патологического процесса.
В зависимости от гистологического варианта ПКР наибольшее среднее количество интрату-моральных ТК было обнаружено в веретено-клеточной карциноме (6,3±0,6), а наименьшее значение имел папиллярный рак - 1,05±0,4. Промежуточное положение занимали светло-клеточный (2,2±0,2) и хромофобный (2,4±0,4)
раки и зернистоклеточный вариант светлокле-точного рака (6,1±0,8). Таким образом, наибольшее число ТК выявляли в веретеноклеточном варианте ПКР, а наименьшее - в папиллярном.
При сопоставлении степени ядерной ати-пии по Fuhrman с числом интратуморальных ТК были получены следующие данные: при GI число ТК составило 1,1±0,1, при GII оно возрастало до 2,0±0,2 (р = 0,000006), при GIII оно составило - 4,8±0,3 (р = 0,0000001) и при GIV было 6,3±0,5 (р = 0,007). Таким образом, обнаружено достоверное возрастание числа интратумораль-ных стромальных ТК при увеличении степени анаплазии клеток опухоли.
При размере опухолевого узла < 7,0 см число стромальных ТК равнялось 1,9±0,15, а при размере > 7,0 см количество ТК в опухоли достоверно увеличивалось до 4,7±0,4 (р = 0,0000001).
В опухолях больных без регионарных и отдаленных метастазов содержание ТК составило 2,0±1,2, а при наличии метастазов оно достоверно возрастало до 4,7±0,4 (р = 0,0000001) (таблица 2) (рисунок 1; а,б).
Таблица 2
Содержание интратуморальных стромальных ТК в опухоли в зависимости от клинико-морфологических параметров ПКР
Клинико-морфологический параметр Количество ТК Достоверность, р
Пол: мужчины Женщины 2,6±0,2 2,4±0,2 -
Возраст: 30-39 лет 40-49 лет 50-59 лет 60-69 лет 70-79 лет 1,0±0,4 3,7±0,4 2,5±0,3 2,4±0,3 1,8±0,25 р = 0,005
Стадия TNM: I стадия II стадия III стадия IV стадия 1,85±0,15 2,7±0,4 4,3±0,4 6,3± 0,6 р = 0,003 р = 0,005
Гистологический вариант опухоли: папиллярный светлоклеточный хромофобный зернистоклеточный веретеноклеточный 1,05±0,4 2,2±0,2 2,4±0,4 6,1±0,8 6,3±0,6 р = 0,01
Градация по Fuhrman: GI GII GШ GIV 1,1±0,1 2,0±0,2 4,8±0,3 6,3±0,5 р = 0,000006 р = 0,0000001 р = 0,007
Размер опухолевого узла: < 7,0 см > 7,0 см 1,9±0,15 4,7±0,4 р = 0,0000001
Метастазы: N0 № 2,0±1,2 4,7±0,4 р = 0,0000001
Для оценки отдаленных результатов 5-летней послеоперационной выживаемости больных в зависимости от плотности распределения интратуморальных стромальных ТК в опухоли наблюдения нами были разделены на 2 группы. 1-ю группу составили карциномы с малым числом ТК (< 3), 2-ю группу составили карциномы c большим числом ТК (> 3). При анализе выживаемости больных по Каплан-Мейеру было обнаружено, что когда число ТК в опухоли было < 3, кумулятивная доля выживших к 1800-му дню составляла 1 (100%), а когда количество ТК в опухоли было > 3, то кумулятивная доля выживших к 1800-му дню снижалась до 0,62 (62%). При сравнении показателей выживаемости в группах больных с использованием логарифмического рангового критерия получено, что различия данных были достоверными (log-rank p = 0,00015) (рисунок 2).
Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что число интратумо-ральных стромальных ТК в опухоли было взаимосвязано с рядом важных прогностических клинико-анатомических факторов ПКР, и поэтому данный параметр может быть использован в качестве дополнительного фактора прогноза течения данного заболевания. Увеличение количества интратуморальных ТК в опухоли можно рассматривать как критерий вероятного возникновения метастазов опухоли. Выявлена взаимосвязь между числом стромальных ТК и выживаемостью больных. Высокий уровень содержания ТК в опухоли является неблагоприятным фактором 5-летней послеоперационной выживаемости больных при ПКР.
Список литературы
1. Лазарев А.Ф., Бобров И.П., Черданцева Т.М., Климачев В.В., Брюханов В.М., Авдалян А.М., Лубенников В.А., Гервальд В.Я. Тучные
5 0,8
ч
!§
log rank p = 0,00015
ТК > 3
800 1000 1200 Время (дни)
1400 1600 1800 2000 2200
Рисунок 2. Кумулятивная пропорция 5-летней послеоперационной выживаемости больных ПКР в зависимости от числа интратуморальных ТК в опухоли
клетки и опухолевый рост. Сибирский онкологический журнал. 2011; 4: 59-63.
2. Черданцева Т.М., Бобров И.П., Клима-чев В.В., Брюханов В.М., Лазарев А.Ф., Авдалян А.М., Гервальд В.Я. Тучные клетки при раке почки: клинико-морфологические параллели. Медицина в Кузбассе. 2011; 2: 48-51.
3. Conti P, Castellani ML, Kempuraj D. et al. Role of mast cells in tumor growth. Ann Clin Lab Sci. 2007; 4: 315-322.
4. Maltby S, Khazaie K, McNagny KM. Mast cells in tumor growth: angiogenesis, tissue remodelling and immunemodulation. Biochim Biophys Acta. 2009; 1: 19-26.
5. Liu J, Zhang Y, Zhao J, et al. Mast cell: insight into remodeling a tumor microenvironment. Cancer Metastasis Rev. 2011; 2: 177-184.
6. Rigoni A, Colombo MP, Pucillo C. The role of mast cells in molding the tumor microenvironment. Cancer Microenviron. 2015; 3: 167-176.
0.S
0,7
0.6
0.5
7. Roberts IS, Brenchley PE. Mast cells: the forgotten cells of renal fibrosis. J Clin Pathol. 2000; 11: 858-862.
8. Ehara T, Shigematsu H. Mast cell in kidney. Nephrology. 2003; 8: 130-138.
9. Tuna B, Yorukoglu K, Unlu M, Mungan MU, Kirkali Z. Association of mast cells with microvessel density in renal cell carcinomas. Eur Urol. 2006; 3: 530-534.
10. Mohseni MG, Mohammadi A, Heshmat AS, et al. The lack of correlation between mast cells and microvessel density with pathologic feature of renal cell carcinoma. Int Urol Nephrol. 2010; 1: 109-112.
11. Guldur ME, Kocarslan S, Ozardali HI, et al. The relationship of mast cells and angiogenesis with prognosis in renal cell carcinoma. J Pak Med Assoc. 2014; 3: 300-303.
12. Sobin LH, Wittekind Ch. UICC - TNM Classification of malignant tumors. New York: Wiley-Liss; 2002: 193-195.
13. Fuhrman SA, Lasky LC, Limas C. Prognostic significance of morfologic parameters in renal cell carcinoma. Am J Surg Pathol. 1982; 6: 655-663.
Контактная информация
Автор, ответственный за переписку: Бобров Игорь Петрович, с.н.с. морфологической лаборатории Центра медико-биологических исследований Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. Тел.: (3852) 669927. E-mail: science@agmu.ru
Информация об авторах
Черданцева Татьяна Михайловна, д.м.н., профессор кафедры онкологии, лучевой терапии и лучевой диагностики с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул.
656045, г. Барнаул, Змеиногорский тракт, 110. Тел.: (3852) 632620. Email: science@agmu.ru
Крючкова Наталья Геннадьевна, ассистент кафедры судебной медицины имени профессора В.Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656038, г. Барнаул, пр-т Ленина, д. 40. Тел.: (3852) 408439. Email: science@agmu.ru
Лепилов Александр Васильевич, д.м.н., заведующий кафедрой судебной медицины имени профессора В.Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО Алтайского государ-
ственного медицинского университета, г. Барнаул.
656038, г. Барнаул, пр-т Ленина, д. 40. Тел.: (3852) 408439. Email: science@agmu.ru
Лазарев Александр Федорович, д.м.н., профессор, заведующий кафедрой онкологии, лучевой терапии и лучевой диагностики с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656045, г. Барнаул, Змеиногорский тракт, 110. Тел.: (3852) 632620. Email: science@agmu.ru
Авдалян Ашот Меружанович, д.м.н., с.н.с. Алтайский филиал РОНЦ им. Н.Н. Блохина Минздрава России, г. Барнаул. 656045, г. Барнаул, Змеиногорский тракт, 110. Тел.: (3852) 632620. Email: science@agmu.ru
Климачев Владимир Васильевич, д.м.н., профессор кафедры судебной медицины имени профессора В.Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул.
656045, г. Барнаул, Змеиногорский тракт, 110. Тел.: (3852) 632620. Email: science@agmu.ru
Климачев Илья Владимирович, ординатор кафедры судебной медицины имени профессора В.Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656045, г. Барнаул, Змеиногорский тракт, 110. Тел.: (3852) 632620. Email: science@agmu.ru
Мяделец Дмитрий Николаевич, ассистент кафедры урологии и андрологии с курсами специализированной хирургии Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул.
656056, г. Барнаул, пр-т Комсомольский, 73.
Тел.: (3852) 364737.
Email: dmyadelec@yandex.ru
Казарцев Артем Владимирович, ассистент кафедры судебной медицины имени профессора В.Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656045, г. Барнаул, Змеиногорский тракт, 110. Тел.: (3852) 632620. Email: science@agmu.ru
