CC BY
88© Коллектив авторов, 2014 УДК 616-092:612.017.1]:577.2
ИНТЕРЛЕЙКИН-15: СТРОЕНИЕ, СИГНАЛИНГ И РОЛЬ В ИММУННОЙ ЗАЩИТЕ
И.К. Малашенкова1, кандидат медицинских наук, Г.В. Казанова1, кандидат биологических наук, Н.А. Дидковский2, доктор медицинских наук, профессор
НИЦ «Курчатовский институт», Российская Федерация, 123182, Москва, пл. Академика Курчатова, д. 1; 2НИИфизико-химической медицины ФМБА России, Российская Федерация, 119992, Москва, ул. М. Пироговская, д. 1-а E-mail: didkovskinic@gmail.com
В обзоре представлены данные о первичной, вторичной и третичной структуре, а также о функциях интерлейкина-15 (IL15), который играет ключевую роль в реакциях врожденного и адаптивного иммунитета, обеспечивая активность клеточных факторов противовирусной защиты. Приводятся данные о роли альтернативного сплайсинга и гликирования в функционировании цитокина и сведения о строении рецепторного комплекса IL15. Важными особенностями IL15являются его структурное и функциональное сходство с IL2 и использование цитокином для сигналинга собственной а-цепи, а также в- и у-цепи IL-2R. Представлены данные об особенностях сигналинга IL15 в иммунокомпетентных и других клетках организма посредством JAK/ STAT-механизма и ERK МАРКпути сигналинга. IL15продуцируется антигенпрезентирующими клетками и активно участвует в их жизнедеятельности. Посредством транспрезентации рецепторного комплекса IL15 обеспечивает созревание, дифферен-цировку, активность и гомеостаз ЕК, Т-ЕК, CD^-T-клеток памяти, интраэпителиальныхлимфоцитов кишечника. Благодаря провоспалительному, пролиферативному и антиапоптотическому эффектам и экспрессии IL-15Ra на многих клетках организма IL15участвует в процессах созревания, выживания и дифференцировки различных клеток внутренних органов и кожи. Эти же свойства IL15 при нарушениях его продукции, расстройствах регуляции или сигналинга делают цитокин активным участником патогенеза воспалительных, аутоиммунных и лимфопролиферативных заболеваний.
Ключевые слова: IL15, IL-2RP, IL-15Ra, транспрезентация, дендритные клетки, ЕК, Т-ЕК, СБ8+-Т-клетки памяти, интраэпителиальные лимфоциты, гомеостаз, апоптоз
INTERLEUKIN-15: THE STRUCTURE, SIGNALING AND ROLE IN THE IMMUNE PROTECTION I.K. Malashenkova1, G.V. Kazanova1, N.A. Didkovsky2
'National Research Centre «Kurchatov Institute», Russian Federation, 123182, Moscow, Akademika Kurchatova Square, 1;
2Scientific-Research Institute of Physical Chemical Medicine, Russian Federation, 119992, Moscow, Malaya Pirogovskaya Str., 1-a
IL15 proves to be a cytokine that importantfor innate as well as for adaptive immunity. It is one of the key factors of cell-mediated antiviral response. In this review we touch upon its primary, secondary and tertiary structure and functions, characteristics of its receptor complex and features of its signaling in various subpopulations of immune cells. We also discuss the role of alternative splicing and glycosylation in its functioning. IL15 is structurally and functionally homological to IL2 and employs IL-2Re and IL-2Ry receptor chains for signaling. IL15 can affect various immune and non-immune cells via signaling cascades such as JAK-STAT and MAPK-ERK. For example, it is expressed by various antigen-presenting cells and plays an important role in their vital activity. IL15 trans-presentation signaling is essential for the development, functional activity and homeostasis of NK, Т-NK, immune memory CD8+ T-cells and intraepithelial lymphocytes. IL15 Ra is widely expressed by human cells, and anti-inflammatory, proliferative and anti-apoptotic effects mediated by IL15 are importantfor maturation, differentiation and survival of cells of various types of the skin and the internal organs. Thus, disturbances of IL15 expression, regulation, signaling make this cytokine an active a participant in pathogenesis of a number of inflammatory, autoimmune and lymphoproliferative diseases.
Key words: IL15, IL-2RP, IL-15Ra, trans-presentation, dendritic cells, NK, T-NK, immune memory CD8+ T-cells, intraepithelial lymphocytes, homeostasis, apoptosis
Интерлейкин-15 (IL15) был открыт в 1994 г. двумя независимыми исследовательскими группами. В феврале 1994 г. J. Burton и соавт. опубликовали статью, в которой описали новый цитокин IL-T, продуцируемый лимфомной Т-клеточной линией HuT-102, содержащей (Human T-lymphotropic virus Type I, HTLV-1). Оказалось, что супернатант, полученный от этой культуры клеток, при переносе его в IL2 зависимую культуру мышиной клеточной линии CTLL-2, стимулировал
пролиферацию Т-клеток и индуцировал активацию больших гранулярных лимфоцитов, при этом антисыворотка к IL2 не снимала обнаруженного эффекта. Кроме того, для проявления активности IL-T была необходима экспрессия ß-цепи IL-2R. IL-T был охарактеризован авторами как Т-клеточный ростовой фактор [1]. В мае того же года K. Grabstein и соавт. сообщили об открытии цитокина с биологической активностью, похожей на IL2, который также реализовал свою ак-
тивность через рецептор IL2 [2]. В ходе экспериментов на культуре эпителиальных клеток почки обезьяны CV-1/EBNA авторы обнаружили, что супернатант поддерживал пролиферацию IL2 зависимой клеточной линии CTLL. Из супернатанта был выделен и очищен белок массой от 14 до 15 кДа, охарактеризована его аминокислотная последовательность и показано структурное сходство с IL2 [3]. Антитела к ß-цепи рецептора IL2 (IL-2Rß) ингибировали биологическую активность нового ростового фактора, который был назван IL15 [4]. Дальнейшие исследования показали, что IL15 является гликопротеидом, состоящим из 114 аминокислот (а.к.) с дисульфидными связями в положении Cys42-Cys88 (аналогичными таковым в IL2, Cys58-Cys105 и Cys35-Cys85), которые стабилизируют его третичную структуру. Дисульфидная связь Cys42-Cys88 вместе с короткой петлей IL 15 стабилизирует его в области связывания с а-цепью рецептора, IL-15Ra. IL15 и IL2 характеризуются низкой гомологией — только 20,2% одинаковых а.к. последовательностей, однако имеют значимое структурное сходство [5].
Вторичная структура IL15 характеризуется сегментами, имеющими спиральное строение в регионах 1-17, 18-57, 65-78, 94-112. IL15 по пространственно-структурной классификации относится к семейству молекул с преобладанием а-спирализованных тяжей, содержащих 4 короткоцепочечных а-спиральных домена. IL15 формирует 4 спирали — А, В, С и D, причем в молекуле цитокина каждая спираль антипараллель-на 2 другим. К этому семейству принадлежат также IL2, IL3, IL4, IL5, IL7, IL9, IL10, интерферон (IFNa) и -у, M-CSF, GM-CSF, SCF. По структуре молекула IL15 наиболее сходна с IL2 и в меньшей степени с IL4. Наибольшее сходство между цитокинами (ЦК) наблюдается в 3 регионах, образующих спирали А, С и D, в которых формируются контакты с ß- и у-цепями рецептора (R) IL2. Структурное различие между IL15 и IL2 обусловлено пространственным расположением В-спирали и более длинным участком в области CD-петли [5, 6]. В исследованиях J. Bernard и соавт. показано, что области, ответственные за связывание IL15 с IL-15Ra, находятся в регионах 45—52 и 66—67 [7]. Аминокислотные остатки в положении Glu-64, Asn-65, Ile-68 обеспечивают связывание ЦК с IL-15Rß [8]. Val49 и Tyr26, окруженные Glu48, Glu53, Glu89 и Glu93, формируют относительно гидрофобный карман на вогнутой поверхности связывания IL15 с IL-15Ra, что в дальнейшем может явиться потенциально мишенью для терапевтического воздействия. IL15 имеет, как минимум, 3 места для N-гликирования (Asn71, Asn 79 и Asn 112). Процесс гликирования необходим для внутриклеточного трафика IL15 [5].
Экспрессия мРНК IL15 обнаружена в различных клетках организма: моноцитах (Мн), макрофагах (Мф), нейтрофилах (Нф), дендритных клетках (ДК), клетках костного мозга и вилочковой железы, скелетной мускулатуры, сердца, легких, почек, кишечника. На высоком уровне его экспрессия наблюдается в мезенхимальных стволовых клетках (СК) и их дифференцированных
потомках: остеобластах, адипоцитах, миобластах и эн-дотелиальных клетках. В центральной нервной системе (ЦНС) IL15 экспрессируется в астроцитах, микроглии и в ряде нейронов в коре головного мозга, мозжечке, гипокампе и таламусе. Нестимулированная микроглия (резидентные Мф ЦНС) конститутивно экспрессирует мРНК IL15 и IL-15Ra. На цитоплазматической мембране (ЦПМ) астроцитов, микроглии и нейронов ЦНС также экспрессируется гетеротримерный IL15/IL-2R-комплекс, необходимый для сигналинга IL15 [9, 10].
В результате альтернативного сплайсинга образуются 2 изоформы IL15: с длинным (IL15 LSP) и коротким (IL15 SSP) сигнальными пептидами. LSP состоит из 48 а.к. и обеспечивает секрецию IL15. Наибольшее количество IL15 LSP обнаруживается в эндоплазма-тическом ретикулуме (ЭР) и аппарате Гольджи, откуда ЦК в эндосомах доставляется к ЦПМ клетки и затем секретируется на ее поверхность. Для успешной транспортировки к поверхности ЦПМ IL15 подвергается посттрансляционному N-гликированию, не-гликированный ЦК останется в цитоплазме и деградирует в протеосомах. Экспрессия мРНК IL 15 LSP обнаружена в скелетных мышцах, плаценте, сердце, легких, печени, вилочковой железе, почках. IL15 SSP состоит из 21 а.к., его присутствие ограничено цитоплазмой и ядром клетки. Считается, что в отличие от IL15 LSP, IL15 SSP не попадает в ЭР клетки и не секретируется. Его роль еще не до конца понятна. Имеются данные, что с IL-15Ra может связываться не только IL15 с LSP, но и с SSP, в результате чего происходит конкуренция за место связывания R и осуществляется контроль активации транскрипции гена IL15 [11]. Экспрессия IL15 в основном контролируется на уровне трансляции и секреции, а альтернативный сплайсинг участвует в контроле его активности [12].
Рецептор IL15 представляет собой комплекс, состоящий из 3 полипептидных цепей, каждая из которых имеет свои особенности строения и свои функции. В первых работах К. Grabstein и соавт. было продемонстрировано, что IL15 не только схож по биологической активности с IL2, но и использует ß-цепь его R для реализации своего действия [4]. Впоследствии было установлено, что IL15 для передачи сигнала использует и у-цепь IL-2R (рис. 1). Рецепторный комплекс IL15 состоит из собственной a-цепи IL15, а также ß- и у-цепей IL-2R. Таким образом, 2 ЦК во многом с идентичными биологическими свойствами реализуют их через общий RC. Этот факт объясняет частичное перекрывание эффектов IL15 и IL2. В то же время функциональное различие ЦК, по-видимому, обусловлено свойствами a-цепей их R. Так, связь IL15 с IL-15Ra основана не на гидрофобном, а на ионном взаимодействии, что вызывает их высокое сродство друг к другу.
ß-цепь рецептора IL2 (CD122, р75) принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов и представляет собой трансмембранный пептид, состоящий из 525 а.к. с молекулярной массой 70—75 кДа. Первоначально мРНК ß-цепи содержит рамку считывания для пептида, состоящего из 551 а.к., в котором 26 а.к. представ-
ляют сигнальную последовательность. 1Ь-2Яр содержит 214 а.к. во внеклеточном пространстве и имеет довольно большой цитоплазматический домен (ЦПД) из 286 а.к., его гидрофобный трансмембранный домен состоит из 25 а.к. Цитоплазматический участок обогащен пролином (24/286) и серином (30/286) и содержит 40 отрицательно заряженных а.к. и только 18 положительно заряженных а.к. (лизин и аргинин).
В ЦПД условно выделяют 3 субрегиона: серин-богатый регион, кислый и пролин-богатый. Серин-богатый регион необходим для проведения митоти-ческого сигнала, кислый регион — для связывания с тирозинкиназами, а богатая пролином область обеспечивает межмолекулярные взаимодействия Ю5. 1Ь-2Яр конститутивно экспрессируется на поверхности большинства лимфоидных клеток: Т- и В-лимфоцитов (лф), ЕК-клеток, Мн, Мф. Таким образом, 1Ь-2Яр является важной составляющей ЯС для реализации сигнала 1Ы5 и 1Ь2.
Гамма-цепь 1Ь-2Я (CD132, р64) также принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов, имеет молекулярную массу 64 кДа. Белки р- и у-цепей являются членами гематопоэтинового семейства рецепторов клеточной поверхности и характеризуются наличием внеклеточных доменов с пентапептидными последовательностями Тгр-Бег-Хаа-Тгр-Бег (WSXWS) и 4 молекулами цистеина. Эти белки не обладают энзима-тической активностью и, связываясь с ЦК, вызывают их олигомеризацию и передачу сигнала с помощью Р-цепи ЯС. Надо отметить, что что у-цепь является также составной частью Я других цитокинов: Ю5, 1Ь4, 1Ь7, 1Ь9 и 1Ь21. Генетически обусловленное отсутствие (дефектность) р- и у-цепей приводит к тяжелому комбинированному иммунодефициту ^СГО). Так, мутация гена у-цепи 1Ь2 вызывает полное отсутствие или значительное уменьшение количества Т-клеток, гипоплазию тимуса, нарушение функций В-лф [13].
Как уже упоминалось, представительской частью 1Ь-15Я является а-цепь (р55), она состоит из 263 а.к., из которых 32 а.к. являются сигнальным пептидом, 173 а.к. представляют внеклеточный домен, 21 а.к. является трансмембранным доменом и 37 а.к. составляют внутриклеточный участок (он длиннее, чем у а-цепи 1Ь2, которая составляет 11 а.к.). а-цепи Я Ю5 и 1Ь2 во многом имеют сходное строение и отличаются друг от друга длиной внутриклеточного участка и количеством контактирующих областей. Ю5 связывается с 1Ь-15Яа с высокой аффинностью (даже при отсутствии р- и у-цепей Я) примерно в 1000 раз выше, чем для 1Ь-2Яа. Установлено, что в основе столь высоких различий в кинетических константах связывания между 1Ь15 и 1Ь2 лежит характер взаимодействия областей при образовании комплекса Я — 1Ь. Так, контактирующая поверхность у 1Ь2 с 1Ь-2Яа больше, чем у Ю5. Площадь контакта 1Ь2 структурно состоит из гидрофобного региона, окруженного гидрофильными остатками, защищающими его от молекул воды. В то же время взаимодействие Ю5 с 1Ь-15Яа происходит благодаря разнице зарядов связывающихся поверхностей.
Так, положительно заряженный БшЫ-домен а-цепи связывается с отрицательно заряженной областью Ю5, это формирует значительно более высокое сродство Ю5 к своему рецептору, чем у 1Ь2 [5]. Через БшЫ-домен 1Ь-15Яа осуществляется 90% связывания с цитокином. Sushi-домен играет решающее значение в процессе транспрезентации Ю5. Растворимая реком-бинантная форма sushi-домена ведет себя как мощный агонист Ю5, совместно с которым она активирует р- и у-комплекс цепи 1Ь-2Я без участия 1Ь-15Яа [14].
Как уже упоминалось, для внутриклеточного транспорта ЦК должен быть гликирован, поэтому внутри клетки 1Ь-15Яа N и О-гликирована. Предполагают, что ^гликирование играет роль при транспорте ЦК в ЭР, в то время как О-гликирование — в аппарат Гольджи [15]. 1Ь-15Яа не играет прямой роли в передаче сигнала в клетку, но благодаря высокой степени аффинности прочно и надежно связывает Ю5 для преобразования сигнала, которое происходит в присутствии Р- и у-цепей ЯС. а-цепь необходима для внутриклеточного переноса Ю5 к ЦПМ после трансляции пептида. Кроме того, образуемый комплекс служит стабилизирующим фактором для молекулы 1Ы5 и защищает его от внутриклеточной деградации. Также 1Ь-15Яа может являться естественным антагонистом Ю5, ограничивающим проявление его активности [15]. Передача сигнала Ю5 возможна через гетеродимерный комплекс и в отсутствие его высокоаффинной а-цепи, при этом аффинность рецептора 1Ь-2Яр, у будет низкой. Интересно, что сигналинг 1Ы5 в отсутствие 1Ь-2Яр не приводит к стимуляции пролиферации клеток. На поверхности тучных клеток (Тк) 1Ь-12Яр не экспрессируется, поэтому они не реагируют на сигнал 1Ь2, при этом Ю5 при участии 1Ь3 вызывает пролиферацию Тк и стимулирует продукцию 1Ь4.
J. ^епошеШ и соавт. [16] на культуре клеток костного мозга обнаружили, что ТЬ15 также может пере-
(аТ) &Г) Моноцит или дендритная клетка
и12; I 3 1Ь-15Яа
1Ь-2Яа (^Х м
1Ь-2/15Яр ус 1Ь-2/15Яр Тс
Натуральные
киллеры и Т-клетки
Рис. 1. Взаимодействия ^2 и ^15 с субъединицами их рецепторов (по [49])
давать сигнал в отсутствие у-цепи ЯС. Таким образом, механизм передачи сигнала внутрь клеток может быть достаточно селективным и зависеть от условий, в которых они находятся. мРНК 1Ь-15Яа экспрессирует-ся в клетках тимуса, костного мозга, Т- и В-лф, Мф, а также в различных типах клеток — печени, скелетных мышц, сердца, легких, кишечника, почек, головного мозга и др. Для многих типов клеток 1Ы5 является мощным антиапоптотическим фактором, также он вызывает пролиферацию кератиноцитов, индуцирует гипертрофию миокарда, ангиогенез, а в адипоцитах стимулирует липолиз [17]. Кроме того, 1Ы5 является важным регулятором нейрогенеза [18].
Для 1Ь15, как и для 1Ь2, существует растворимая форма 1Ь-15Яа, которая конститутивно генерируется из мембранной формы Я путем его протеолитическо-го расщепления. В экспериментах с использованием ингибиторов протеаз было установлено, что в этом процессе принимают участие матрикс-разрушающие ферменты — металлопротеиназы ММРб и ADAM17 (TNF-конвертирующий фермент).
В результате протеолиза отщепляется полипептид с молекулярной массой 42 кДа, на 13 кДа легче своего предшественника (55 кДа), который ^гликирован. Сайт протеолитического расщепления находится близко к поверхности ЦПМ. Растворимая форма а-цепи имеет высокую степень сродства к Ю5 и может предохранять молекулу от деградации в межклеточном пространстве [19]. Однако при очень низких концентрациях Ю5 она может ингибировать его биологическую активность. Таким образом, 1Ь-15Яа участвует в регуляции активности Ю5. Увеличение концентрации растворимой формы 1Ь-15Яа обнаружено при лейкемии, воспалительных заболеваниях кишечника, в том числе при болезни Крона, ревматоидном артрите. Ю5 находится в крови в незначительных количествах и присутствует в основном в виде гетеродимерного комплекса, что может искажать точность определения ЦК при использовании тест-систем иммуноферментного анализа (ИФА), выявляющих уровень свободного Ю5. В клетке синтез Ю5 происходит параллельно с синтезом 1Ь-15Яа, и на поверхность ЦПМ поступает комплекс, уже собранный в ЭР. Часть комплексов 1Ь-15Яа/ Ю5 остается на поверхности клетки, а другая подвергается протеолитическому расщеплению и в растворимой форме доставляется к определенным клеткам в организме. Растворимые комплексы 1Ь-15Ка/Ю5 находили в культуральной среде ДК мышей, стимулированных ТЬЯ, в сыворотке крови пациентов с болезнью Крона и другими заболеваниями. р-цепь 1Ь-2Я также конститутивно подвергается протеолизу и существует в растворимой форме. На культуре клеточной линии человеческой лейкемии было показано, что в растворимую форму переходят 10—15% молекул 1Ь-2Яр и 60% молекул 1Ь-15Яа. Растворимую 1Ь-2Яр нередко считают маркером клеточного роста и дифференцировки, так как под влиянием ФГА стимулируется ее синтез.
Взаимодействие Ю5 с его ЯС на различных типах клеток приводит к серии сигнальных событий
внутри клетки. Прежде всего активируются Янус-киназы (JAK), непосредственно связанные с пролин-богатыми внутриклеточными доменами R. Члены семейства JAK (JAK1, JAK2, JAK3 и Tyk2) являются тирозинкиназами, состоящими из более чем 1000 а.к. JAK1, JAK2 и Tyk2 экспрессируются на большинстве клеток, в то время как экспрессия JAK3 ограничена клетками миелоидного и лимфоидного ряда. Янус-киназы содержат 7 JH-доменов. Концевой JH1-домен называется киназным, JH2 — псевдокиназным доменом. JHS-7-домены и половина JH4-домена объединены общим названием FERM, они непосредственно связаны с внутриклеточной областью R. Функция JH4-домена ясна не до конца. JAK1 связана с IL-2Rß-RC, JAK3 — с его у-цепью. Помимо IL-15R и IL-2R, JAK1 ассоциирована с R интерферонов (а, ß и у) и IL6. Нужно отметить, что нокаутные по JAK1 мыши погибают перинатально с признаками повреждения нервной и иммунной систем, что может быть обусловлено дефектом в сигналинге LIF. JAK3 ассоциирована только с IL-2Ry, ее мутационные изменения приводят к тяжелому комбинированному иммунодефициту, так как передача сигнала по этой цепи связана с рядом других ЦК. У нокаутированных по JAK3 мышей имеются различные дефекты лимфопоэза, а также серьезные изменения Т-клеток при функционально нормальных В-лф. CD4+-клетки этих животных экспрессиру-ют активационные маркеры, но имеют ограниченный репертуар Т-клеточного рецептора (TCR).
После того, как IL15 связывается с R на мембране клетки, происходят конформационные изменения в его цитоплазматической части и инициируется активация JAK, связанных с R. Янус-киназы фосфори-лируют RIL по остаткам тирозина, в результате чего происходит связывание сайтов STATs, находящихся в цитоплазме клетки, и сигнальных молекул через SH2-фосфотирозиновый сайт с R. STATs становятся субстратами для JAK, что приводит к их фосфори-лированию. Активированные STATs освобождаются от R, после чего Sffi-домен одного STAT связывает антипараллельный тирозин другого STAT, что приводит к димеризации молекул, и комплекс транс-лоцируется в ядро клетки, вызывая активацию соответствующих генов.
Семейство STAT-транскрипционных факторов у млекопитающих состоит из 7 членов: STATs 1, 2, 3, 4, 5а, 5б и 6. Их размер колеблется от 750 до 900 а.к. Молекула включает в себя 7 консервативных доменов: аминоконцевой (NH2), биспираль-ный, ДНК-связывающий (DBD), линкерный (Lk), (SH2), тирозинактивационный (Y) и домен активации транскрипции (TAD). NH2-домен регулирует ядерную транслокацию белка, биспиральный домен ответственен за связывание с фосфорилированным R ЦК, DBD-домен — область связывания с ДНК, он может принимать различную структурную конфор-мацию. ДНК-связывающая способность STAT может регулироваться структурными изменениями в SH2-домене, кроме того, этот домен играет важную роль
в передаче сигнала, так как способен распознавать и взаимодействовать с фосфотирозиновыми сайтами R, определяя, таким образом, нужный R. TAD-домен ответственен за регуляцию транскрипции.
Транскрипционная активность различных STATs может быть модулирована посредством серин-фосфорилирования, что приводит к активации транскрипции некоторых генов, а также к изменению сродства для других транскрипционных регуляторов. IL15 реализует свое действие через факторы транскрипции STAT3 и STAT5. STAT3 экспрессируется в большинстве тканей, а также на ранней стадии посттрансляционного периода. С нарушением его структуры и функций связаны различные патологические процессы в организме. Конститутивно активированный STAT3 может усиливать опухолевый рост. STAT5 экспрессируется во всех тканях.
Мыши, нокаутные по STAT5, имеют дефекты развития молочных желез и являются бесплодными. Возможны и другие альтернативные пути передачи сигнала IL15. Так, в популяции миелоидных клеток при отсутствии у-цепи RC, IL15 вызывал продукцию RANTES независимо от наличия IL15/IL-2Rß и JAK/STAT-сигналинга. При этом сигнал ЦК передавался через IL-15Ra с последующей активацией JNK и NF-кВ [20]. В Нф IL15 активирует NF-кВ, но не AP-1, в то время как стимуляция лимфоцитов приводит к активации обоих факторов. CD34+-клетки конститутивно секретируют IL15, при этом активируется ядерный фактор NF-кВ.
В культуре В-клеточной линии Raji было показано, что IL-15Ra реализует сигнал через ассоциацию с про-теинкиназой семейства Syk [21]. Через Syk-зависимый механизм IL15 повышает способность Нф к фагоцитозу. В тучных клетках IL15 активирует JAK2/STAT5 или Tyk2 /STAT6 сигнальные механизмы [22]. IL15 индуцирует фосфорилирование STAT6, который, в свою очередь, связывается с сайтом STAT на промоторе гена Bcl-x и индуцирует экспрессию мРНК антиапоптоти-ческого белка Bcl-XL. Обнаружено, что в фибробластах мыши IL-^Ra-цепь конститутивно ассоциирована с R тирозинкиназы Axl. Стимуляция IL-15Ra активирует Axl, сигнал реализуется через активацию PI3K/Akt и стимуляцию антиапоптотических Bcl-2 и Bcl-XL [23]. Интересно, что в гиппокампе IL15 регулирует нейро-генез не только посредством JAK/STAT-механизма, но и использует ERK МАРК путь сигналинга.
На культуре нервных СК показано, что дефицит IL15 приводит к недостаточной активации сигнальных путей внутри клетки; это влечет за собой негативную регуляцию промоторов клеточного цикла ци-клинов D1-D3 и циклинзависимых киназ CDK 4-6, что уменьшает пролиферацию, дифференцировку и выживаемость СК [24]. На другой культуре клеток — (WT) LGL показано, что IL15 может реализовать свое действие через Мус-опосредованную регуляцию Aurora-киназ, это приводит к аберрациям центросом и анеуплоидии. Одновременно он подавляет мРНК-29Ь, индуцируя Myc/NF-KBp65/Hdac-1, приводящую к избыточной экспрессии Dnmt3b, и спо-
собствует гиперметилированию ДНК [25]. Таким образом, внутри клетки IL 15 активирует различные сигнальные каскады, используя при этом разные цепи IL-15Ra/IL-2Rßy RC, но основным путем сигналинга для ЦК является JAK/STAT-механизм.
Ген IL15 человека находится на длинном плече хромосомы 4q31 и занимает 34 kb. кДНК содержит довольно длинный 5'' нетранслируемый участок из 316 пар оснований. Кодирующая последовательность молекулы имеет 486 п.н. и 3''-UTR — содержит 400 п.н. В структуре гена IL15 находятся 9 экзонов, из них 7 кодирующих и 8 интронных областей. Зрелая форма IL15 кодируется только 4 экзонами. На этой же хромосоме расположены гены IL8, IL2, факторов роста FGFs, EGF и др.
Как отмечалось выше, IL15 может транскрибироваться в 2 изоформах: IL15 SSP и IL15 LSP [26]. Классический вариант мРНК IL15 LSP кодируется с участием 3-5 экзонов гена IL15 и представлен 1,6 kb мРНК. Ген, кодирующий IL15 SSP, имеет дополнительный альтернативный 4а экзон между экзонами 4 и 5. Таким образом, транскрипт IL15 LSP содержит 3,4,5 экзонные последовательности в сигнальной области, а транскрипт IL15 SSP — 4а и 5 экзонных последовательностей. Ген IL-15Ra локализуется на коротком плече хромосомы 10р14-15, в том же регионе, что и IL-2Ra. Хотя ген IL-15Ra экспрессируется во многих тканях, число обнаруживаемых транскриптов не коррелирует с уровнем экспрессии гена, что может быть связано с особенностями сплайсинга мРНК для образования этого пептида.
Сплайсинг играет важную роль в дальнейшей судьбе молекул. Было показано, что транскрипты, содержащие экзон-2, локализуются в ядерной мембране, ЭР и аппарате Гольджи, в то время как транскрипты, лишенные этого экзона, не встречаются в ядерной мембране клетки [27]. Установлено, что при сплайсинге a-цепи может формироваться несколько ее изоформ, при этом изоформы, имеющие в своем составе Ех2А домен, способствуют реализации транспрезентационных свойств комплекса IL15. Напротив, изоформа a-цепи, не содержащая этот домен, функционирует как растворимый секретируемый комплекс [28]. Благодаря этому механизму может осуществляться регуляция процесса транспрезентации ЦК.
В регуляции транскрипции большое значение имеет метилирование ДНК, которое влияет на структуру хроматина, а также на процессы альтернативного сплайсинга. Для клеток иммунной системы этот факт особенно важен, так как в конечном итоге метилирование и альтернативный сплайсинг определяют направление дифференцировки Т-клеток, изменяя их субпопуляционный статус в сторону Th1 или Th2.
Регуляция экспрессии IL15 может осуществляться на уровне транскрипции, трансляции, внутриклеточного трафика и транслокации в ЦПМ. На уровне транскрипции контроль осуществляется через сайты связывания в промоторной области гена IL15 для транскрипционных факторов INF-a2, IRF-1,
NF—IL6, y-IRE, Myb, NF-kB и GCF. NF-kB сайт, локализованный в 75 и 65 регионах в промоторной области, выше сайта инициации транскрипции, играет роль в трансактивации гена IL15 Tax белком HTLV-1, а также липополисахаридом в Мф. Этот факт предполагает связь IL15 с HTLV-1-ассоциированными заболеваниями: Т-клеточным лейкозом и миелопа-тическим спастическим парапарезом. Регуляторный фактор интерферона IRF-1 индуцирует экспрессию IL15, контролирует развитие ЕК, ЕК-Т клеток и ин-траэпителиальных лф. Активация гена IL15 наблюдается при инфекциях, вызванных Candida albicans, токсоплазмами, Mycobacterium tuberculosis, вирусами герпеса 6-го и 7-го типов и др.
Важен также уровень отрицательной регуляции IL15 на этапе трансляции белка. Установлено 3 основных пути регуляции трансляции предшественника IL15. Первый путь связан с несколькими стартовыми кодонами (AUGs), локализованными в 5'-UTR области мРНК. Их удаление повышает продукцию IL15 в 10—15 раз.
Второй путь связан с трансляцией IL15 с разными сигнальными пептидами, при этом эффективность процесса зависит от длины его сигнальной области. В культуре клеток мартышки COS-7 было показано, что при замене сигнального пептида в эндогенном IL15 на ^2-сигнальный пептид человека уровень IL15 в супернатанте повышался в 15—20 раз. В то же время транскрипты IL2 с ^15-сигнальным пептидом, напротив, нарабатывали протеин в 30—50 раз меньше (по сравнению с диким типом). Секреция IL15 также повышается при замене сигнального пептида на сигнальный пептид CD33-молекулы. IL15 LSP имеет более низкий уровень трансляции, чем IL15 SSP, т.е. несекретируемая форма ЦК (IL15 SSP) транслируется более эффективно, чем секретируемая (IL15 LSP).
Третий путь регуляции на уровне трансляции связан с изменениями в С-терминальном конце пептида. Так, при введении искусственного FLAG эпитопа в ген IL15 и изменении С-конца пептида продукция IL15 повышается в 5—10 раз, что предполагает существование дополнительных элементов негативной регуляции в 3'-кодирующей последовательности. На уровне внутриклеточной передачи сигнала регуляция уровня IL15 осуществляется, как уже упоминалось, благодаря транскрипции ЦК с разными сигнальными пептидами. Уровень регуляции посредством транслокации в ЦПМ клетки отчасти связан с механизмом протеолитическо-го расщепления IL-15Ra и дальнейшей судьбой рецеп-торного комплекса. Важным фактором отрицательной регуляции IL15 является также SOCS1 (Suppressors of cytokine signaling 1) — белок группы внутриклеточных ингибиторов сигнальных каскадов, инициируемых связыванием цитокинов с рецепторами [24].
IL15 использует все сигнальные пути для проявления своей активности. Являясь по сути плейотропным цитокином, IL15, попадая в кровоток, достигает отдаленных клеток мишени, проявляя тем самым свойства эндокринного гормона. Как уже было упомянуто,
1Ы5 циркулирует в кровотоке в комплексе с 1Ь-15Яа, который предохраняет ЦК от деградации и обеспечивает его надежную доставку к клеткам реципиентам. 1Ы5 может реализовать свое действие аутокринно, воздействуя на секретирующую его клетку. Аутокрин-ным путем Ю5 оказывает влияние на антигенпрезен-тирующие клетки (АПК), стимулируя в них секрецию определенных ЦК, а также индуцирует окислительного стресс. Такой путь распространения сигнала связан с экспрессией на поверхности клеток-продуцентов 1Ы5 ЯС. Юкстакринный (контактный) путь сигна-линга наиболее важен для реализации иммунных механизмов. Благодаря этому пути мишенями для ЦК становятся ЕК-клетки, различные популяции Т-лф, В-лф, тучные клетки, АПК, а также Нф и эозинофи-лы. С юкстакринным путем сигналинга тесно связан механизм цис- и транспрезентации сигнала 1Ь15.
Обнаружено, что в культуре Мн на клеточной поверхности экспрессируется Ю5 и 1Ь-15Яа, которые могут вызывать пролиферацию Т-лф [29]. Транспрезентация является идеальным механизмом доставки 1Ы5 к лимфоцитам для непрерывного их развития и выживания (рис. 2). Циспрезентация предполагает наличие свободного ЦК либо его растворимого комплекса для захвата клеткой мишенью и реализации сигнала. При транспрезентации передача сигнала происходит при непосредственном контакте клеток между собой, когда АПК представляет клетке-мишени Ю5/ 1Ь-15Яа комплекс, связанный с ее поверхностью, при этом на клетке-мишени экспрессирован 1Ь-2 Яру ЯС для передачи сигнала. Выбор между цис- и транспередачей может быть частично обусловлен особенностью строения а-цепи ЦК. При наличии в изоформе 1Ь-15Яа определенных последовательностей она может подвергаться гликированию, что, в свою очередь, определяет судьбу 1Ь15/1Ь-15Яа комплекса.
Кроме того, методом рентгеновской кристаллографии в молекуле 1Ь-15Яа проксимальнее области связывания с ЦК, обнаружен регион, придающий молекуле гибкость, что может быть определяющим при выборе клеткой сценария сигнального пути [6]. Стимуляция клетки посредством механизма транспрезентации в 100 раз более мощная, чем при циспрезентации. Кроме того, мембраносвязанный 1Ь15/1Ь-15ЯаЯС активирует ЕК-клетки быстрее, чем растворимые комплексы. Протеолитическое отщепление с поверхности клетки 1Ь15/1Ь-15Яа наряду с альтернативным сплайсингом может служить механизмом отрицательной обратной связи, регулирующим сам процесс транспрезентации. Уровень экспрессии мРНК 1Ы5 более низкий, чем мРНК 1Ь-15Яа. Среди Ю5 презентирующих клеток только ДК имеет более высокий уровень экспрессии ЦК, который активируется после стимуляции ТЬЯ.
Путем транспрезентации Ю5 участвует в формировании CD8+-T-клеток памяти, при этом в зависимости от типа АПК, CD8+-T-клетки дифференцируются в клетки-памяти CD62L+ или CD62L- [30]. Процесс транспрезентации играет большую роль в развитии и функционировании ЕК и ЕК-Т-клеток [31].
Экспрессия IL15 на поверхности клетки может модулироваться IFN-y. Через реверс-сигнал в АПК стимулируется продукция IL6, IL8, фактор некроза опухоли-а (TNF-а), а также повышает трансмембранный белок-лиганд проявляет собственную ре-цепторную активность, и его связывание со своим R вызывает передачу сигнала не только в клетке, несущей R, но и в клетке, несущей лиганд. Этот механизм обеспечивает двустороннее взаимодействие клеток.
Мембраносвязанная, активная форма IL15 конститутивно экспрессируется на Мн, кератиноцитах, фибробластах и эпителиальных клетках. Предполагают, что IL15 может быть захвачен RC другой клетки и выполнять функцию мостика между ними, инициируя сигнал в обоих направлениях [32, 17]. Также IL15 использует интракринный механизм передачи сигнала (действие ЦК внутри клетки-продуцента) через связывание ЦК со специфическими внутри -клеточными R. При эндокринном пути транспрезентация IL15 может реализоваться в различных органах и тканях организма.
ВЛИЯНИЕ ИЛ15 НА КЛЕТКИ ЕСТЕСТВЕННОГО И АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА
На рис. 3 представлен спектр влияния IL15 на им-мунокомпетентные клетки.
Антигенпрезентирующие клетки. IL15 является ау-токринным регулятором продукции провоспалитель-ных ЦК для АПК — Мн/Мф и ДК, ключевых клеток, инициирующих и модулирующих адаптивный иммунный ответ. В ответ на бактериальную, вирусную, протозойную инфекции, липополисахариды, бактериальную ДНК в этих клетках активируется транскрипция и трансляция мРНК IL15. Показано, что в Мф высокие концентрации IL15 стимулируют продукцию TNFa, IL1 и IL6, а низкие — продукцию противовоспалительного IL10. IL15 увеличивает антибактериальную и антипаразитарную активность Мф.
Под влиянием IL15 и GM-CSF in vitro Мн дифференцируются в ДК и инициируют Th1- и Thn-типы ответов [3]. В Мн IL15 посредством реверс-сигналинга в результате активации FAK, Rho, p38, ERK1/2 может стимулировать продукцию IFNy, TNFa, IL6, IL8, IL-ip, IL15, IL23, CCL20, а также МСР-1. Так, альвеолярные и бронхиальные эпителиальные клетки при воздействии воспалительных стимулов продуцируют IL15, который вызывает дифференцировку Мн в ДК со зрелым фенотипом (HLA-DR+, DC-SIGN+, CD14+, CD80-, CD83+, CD86+, CCR3+, CCR6+, CCR7). При этом в Мн экспрессия гена IL-15Ra повышается в 300 раз [33].
В ДК IL15 увеличивается экспрессия CD11c и МНС I и II класса, а также CD40, CD80 и CD86. Рецептор CD40 важен для индукции, пролиферации, созревания и эффекторной функции АПК. Внутривенное введение мышам плазмид, содержащих ген СД40L, вызывало размножение ДК. Кроме того, IL15 служит фактором роста при экспансии ДК in vitro: он является одним из компонентов среды культивации, позволяющей достичь дифференцировки СК крови
в ДК с увеличением их числа более чем на 5 порядков. IL15 влияет на ДК (которые сами способны его продуцировать), участвует в их выживании, активации, пролиферации и дифференцировке. Показано, что обработка Мн IL15 в комбинации с GM-CSF вызывает их дифференцировку в ДК особого фенотипа CD1a+HLA-DR+CD14-. Эти клетки выделяют как IL^-ДК, в противоположность ^4-ДК. IL^-ДК проявляют некоторые свойства, характерные для клеток Лангерганса: они экспрессируют маркеры E-кадгерин, лангерин, и CCR6 и способны мигрировать по градиенту (MIP)-3a/CCL20 [9].
Также при обработке клеток костного мозга мышей IL15 и GM-CSF формировались ДК с высоким уровнем активационных R, способных стимулировать ал-логенные CD4+-лф. Эти IL^-ДК индуцировали более мощный антигенспецифичный Thi-ответ и продукцию в них ЦК по сравнению с ^4-ДК, обработанными только GM-CSF, GM-CSF и TGFp, GM-CSF и IL4. В ДК IL15 стимулирует синтез IL12 и через активацию CD40 — продукцию IL2 и таким образом опосредованно влияет на активацию и пролиферацию Т-лф.
Так, у мышей, дефицитных по IL15, понижена способность миелоидных ДК к продукции IL2 в ответ на микробные стимулы. ^15-презентирующие ДК индуцируют цитотоксичность и противоопухолевую активность ЕК-клеток, секрецию ими IFNy, экспрессию активационных рецепторов, в том числе CD69 [34]. Стимуляция CD69 на ЕК-клетках стимулирует их пролиферацию, экспрессию CD25, ICAM-1, TNFa и повышение уровня внутриклеточного Са2+. Введение CD69 in vitro вызывает продукцию TGFp как человеческими, так и мышиными лейкоцитами, что делает этот R важным участником иммунорегуляции. IL^-ДК могут проявлять цитотоксическую активность, опосредуемую гранзимом В, и иметь фенотип CD56+. Моноциты и ДК, помимо IL15, экспрессируют IL-15Ra, которая необходима для транспрезентации ЦК.
Аутокринным путем IL15 предотвращает апоптоз ДК, повышая тем самым их выживаемость. Синтез
Натуральные киллеры и Т-клетки
Рис. 2. Транспрезентация IL15 соседней NK или CD8+-T-клеткам (по[49])
— увеличение активности
— увеличение литического потенциала
— защита от апоптоза
— увеличение активности
— активизация фагоцитоза „ *
— защита от апоптоза
активизация фагоцитоза защита от апоптоза
- стимуляция пролиферации дифференцировки
- улучшение презентации АГ
- улучшение выживаемости
Мф
увеличение пролиферации, продукции гранзима и перфорина улучшение выживаемости
активация
стимуляция пролиферации, дифференцировка увеличение продукции перфорина, гранзима защита от апоптоза
поддержка активности защита от апоптоза
— увеличение активности
ДК-К — увеличение
продукции перфорина
— защита от апоптоза
— повышение цитотоксичности
Т-клетки
мяти | I — поддержка активности Р8+ / / — защита от апоптоза
| — увеличение активности В-клетка — увеличение продукции
иммуноглобулинов
Рис. 3. Влияние ^15 на клетки иммунной системы
^15 в ДК индуцируется также в ответ на стимуляцию и NFкBrelA — индукторов воспалительного ответа. У мышей, нокаутных по ^15 или по ^-15Яа, количество ДК понижено, и они легко подвергаются апоптозу. Показано, что трансгенные ДК, экспрес-сирующие повышенные уровни Вс12, менее подверженные апоптозу и более эффективно индуцируют CD8+CD44hi-клетки памяти. Интраперитонеальная инъекция нокаутным по ^15 мышам таких ДК увеличивала число клеток памяти указанного фенотипа с 4 (в контрольной группе) до 20%.
Стимуляция фолликулярных ДК — один из вероятных механизмов, посредством которых ^15 активирует гуморальный иммунный ответ. Транспрезентация ^15 киллерным ДК, продуцирующим №N7, увеличивает их пролиферацию, цитолитическую активность и способствует С^2-зависимому хемотаксису в тканевые ниши опухолевых клеток. Таким образом, ^15 не только продуцируется АПК, но сам может вызывать продукцию ими биоактивных молекул благодаря конститутивной экспрессии на ЦПМ ^15/^-2-ЯС.
Нейтрофилы играют важную роль в воспали -тельном процессе и экспрессируют все компоненты ^15-ЯС. ^15 взаимодействует с ^-15Яа и индуцирует фагоцитоз Нф через фосфорилирование Syk (важного фактора Fc-индуцированного фагоцитоза) и реализацию Syk-зависимого механизма. ЦК способствует перестройке цитоскелета Нф, повышая в них экспрессию актина. Сигнальный путь для ^15 в Нф включает активацию JAK2, р38 и ЕЯК1/2 МАР-киназ, Syk-киназы
и активацию NF-кB. IL15 через активацию NFkB и синтез ^8 увеличивает бактерицидность Нф [35].
Под влиянием ^15 в Нф повышается продукция хемокинов и ЦК, включая ^8, ^1р, ^18, IL-1ЯII и IL-1Яа. IL15 вызывает перераспределение молекул ГСАМ-3 и sPSGL-1, гликопротеинового лиганда-1 Р-селектина, что влияет на хемотаксис клеток. Стимулированная IL15 продукция ^8, TNFa, и ^18 в Нф вызывает продукцию каскада факторов, также обеспечивающих и усиливающих их хемотаксис: М№-2, MIP-1a, TNFa [32].
Предполагают, что цепь событий, вызванная антигеном и приводящая к миграции Нф в очаг воспаления, выглядит следующим образом: ^15 — ^18 - М№-2 - М№-1а - TNFa - ЕГВ4. Важно отметить, что эти события являются ^^независимыми. Показано, что Нф периферической крови и синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом после активации ^15 продуцируют значительные количества ^18 и ЦГВ4. Кроме того, ^15 повышает экспрессию Нф интегрина CD11b /CD18, необходимого для прилипания к эндотелию, а также для фагоцитоза частиц, покрытых комплементом. На поверхности клеток легочного эпителия в культуре человеческих А549-клеток ^15 повышал экспрессию CD54 (ICAM-1)-молекул адгезии, что улучшало прилипание Нф к этим клеткам и способствовало развитию воспалительного процесса в легочной ткани. ^15 индуцирует экспрессию МНС II класса на Нф, что дает им возможность функционировать как АПК.
Также в ответ на IL15, в Нф повышается экспрессия CD14 — рецептора, необходимого для распознавания ряда микробных антигенов, и CD64 — высокоаффинного рецептора для IgG; как следствие, увеличивается способность клеток реагировать на грамотрицательные микробы и связывать специфичные антитела [36]. IL15 ингибирует апоптоз в Нф путем увеличения синтеза антиапоптотических факторов Bcl-2, Bcl-XL, Mcl-1 и снижения активности апоптогенов Bax, Bid, Bim, Noxa, PUMA, каспаз-3 и -8. Супрессия каспаз-3 и -8 тормозит расщепление виментина и подавляет экспрессию проапоптотического белка Bax. В Нф в роли антиапоптотического белка выступает Mcl-1, член семейства Bcl-2. IL15 предотвращает потерю Нф Mcl-1, уровень которого обратно коррелирует со степенью апоптоза. Таким образом, IL15 участвует в регуляции многих процессов жизнедеятельности нейтрофилов.
ЕК-клетки. IL15 является основным фактором роста, ответственным за ЕК-клеточный онтогенез. Было показано, что у мышей, дефицитных по IL15 и IL-15Ra, наблюдалось значительное снижение числа периферических и тимусных ЕК и T-CD8+ клеток памяти. При введении животным экзогенного IL15 эти дефекты отменялись. У нормальных мышей введение IL15 повышает число EK-клеток в селезенке. Сами ЕК не продуцируют IL15, но экспрессируют на своей поверхности IL-15Ra и IL-2/Rßy-комплекс. CD1te+ ДК транспрезентируют IL15 ЕК-клеткам, а также через up-регуляцию Ly-49 R влияют на их диффе-ренцировку. Ранние предшественники ЕК не имеют известных на сегодняшний день специфических маркеров, они идентифицированы как нестромальные CD122+IL-15Ra+-клетки костного мозга, что указывает на важную роль IL15 в их дифференцировке.
Стромальные клетки костного мозга продуцируют IL15 при участии INF-1 — регулирующего фактора, воздействующего на промоторную область IL15. В свою очередь, IL15 стимулирует созревание предшественников ЕК и Т-ЕК-лф.; влияет на гомеостаз ЕК-клеток через индукцию экспрессии Bcl-2, супрессию транскрипционных факторов FOXO3a и экспрессию Bim через киназы Erk1 и Erk2. Кроме того, IL15 способствует экспрессии Mcl-1, необходимого для выживания ЕК-клеток [37]. Показано, что IL15 вместе с IL10 увеличивают их цитотоксическую активность [38]. Стимуляция ЕК-клеток IL15 и IL12 приводила к умеренной продукции IFNy, TNFa и GM-CSF. В культуре ЕК-клеточной линии человека IL15 повышал транскрипцию и экспрессию на мембране NKG2D лектиноподобного R и стрессиндуцируемого трансмембранного белка MICA, взаимодействие которых приводит к активации ЕК-клеток. Также IL15 повышает в них экспрессию TRAIL и перфорина [39].
Под влиянием IL15 происходит фосфорилирова-ние STAT1 и ERK1/2, что вызывает увеличение лити-ческой способности ЕК-клеток [40]. Было показано, что при кратковременном воздействии IL15/15Ra-RC на ЕК увеличивалось число активированных клеток с фенотипом CD69, повышались их эффекторные функ-
ции, увеличивалась экспрессия NKG2D и NKp46 R. Длительная же стимуляция приводила к заметному накоплению зрелых ЕК-клеток с нарушением их функциональной и пролиферативной активности.
J. Gosselin и соавт. показали, что IL15 сокращает продолжительность инфекционного процесса при HHV-1, HHV-6 и EBV-герпесвирусных инфекциях за счет повышения литического потенциала ЕК-клеток против вирусинфицированных клеток, а также увеличения синтеза IFNy как ЕК, так и CD4+-клетками. Стимуляция ЦК ЕК-клеток вызывает экспрессию CD11a+, увеличивает их адгезию к эндотелию сосудов, кроме того, на поверхности ЕК изменяется экспрессия хемокиновых рецепторов CX3CR1, CX3CR3, CX3CR4.
Таким образом, IL15 является ключевым регулятором ЕК-клеток, модулирующим все аспекты их биологии, включая развитие, созревание, пролиферацию и выживание, активацию, цитотоксичность и миграцию.
Т-лимфоциты (Т-лф) не продуцируют IL15, за исключением некоторых клеточных линий, которые экспрессируют на своей поверхности IL15/IL2 RC. У мышей, нокаутных по IL15 и IL-15Ra, отмечается 50% уменьшение числа СД8+-лф, преимущественно СД44ы-клеток памяти. В норме частично эффекторные СД8+-лф подвергаются апоптозу, а другие становятся клетками памяти, в отсутствие IL15 большая часть клеток претерпевает апоптоз.
Выживание СД8+-клеток памяти обусловлено также процессом гомеостатической пролиферации (самоподдержкой популяции в отсутствие стимуляции TCR) [41]. IL15 — единственный известный фактор, стимулирующий гомеостатическую пролиферацию СД8+-лф. Эти клетки экспрессируют все 3 компонента RCIL-15. В культуре человеческих CD8+-Т-клеток IL15 повышает чувствительность к IL12 и IL18, стимулирующим продукцию ИФНу [42].
Доставка IL^-ДК к Т-лф связана с механизмом транспрезентации [43]. Т-лф используют для проведения сигнала JAK1/JAK3 и STAT3/STAT5 — механизм передачи. Кроме того, сигнал может проводиться посредством МАР-киназного пути с индукцией Bcl-2, который очень важен для выживания Т-лф. Как и в ЕК-клетках, IL15 участвует во всех стадиях диффе-ренцировки Т-лф. Показано, что IL15 и IL2 являются практически равнозначными митогенами для CD8+-Т-лф, но при этом как ростовые факторы эти ЦК не равноценны. Антигенпраймированные Т-лф не могут самостоятельно осуществлять синтез белка de novo без экзогенной стимуляции ЦК. IL15 и IL2 индуцируют в них синтез белка, однако IL2 играет в этом процессе более существенную роль [44].
CD44 — многофункциональная адгезивная молекула, участвующая в событиях, связанных с иммунным воспалением и хомингом клеток. Она опосредует и усиливает активацию Т-лф, высвобождение ими ЦК и выход в очаг воспаления. IL15 повышает выживание CD44hiCD8+-Т-клеток памяти благодаря регуляции синтеза Bcl-2 и Вс1-х1 белков. IL15 также регулирует уровень Bcl-2 в наивных Т-клетках
с фенотипом CD44low. ^15 может осуществлять контроль пролиферации CD44hiCD8+-Т-клеток памяти посредством down-регуляции с-Мус [45]. Интересно, что высокие концентрации ^2 или ^15 активируют перфоринзависимый литический потенциал CD44 hiCD8+-Т-лф и увеличивают синтез гранзима В [46].
Кроме того, клетки памяти CD4+CD69+ и CD8+D69+ в костном мозге находятся в тесном взаимодействии с ^15-продуцирующими клетками, поддерживающими их активационный статус. Показано, что ^-15Яа должна экспрессироваться именно клетками микроокружения, а не самими СД8+-клетками. Основными клетками, представляющими ^15 СД8+-клеткам, являются ДК и Мф [47]. Для выживания СД8+-клеток памяти во вторичных лимфоидных органах (лимфатические узлы, селезенка) наиболее важна экспрессия ^-15Яа ДК, а для - выживания СД8+-лф в костном мозге важнее экспрессия ^-15Яа Мф.
Т-клетки памяти представляют собой важную линию защиты для обеспечения быстрого иммунного ответа против рецидивирующих инфекций. ^15 увеличивает экспрессию NKG2D рецепторов, не только на ЕК-клетках, но и на CD8+-Т-клетках памяти, а также их лиганд МНС Ькласса на опухолевых клетках. Благодаря этому действию ^15 повышает врожденный противоопухолевый иммунитет. CD4+-Т-клетки памяти в меньшей степени зависят от ^15, чем CD8+-Т-клетки памяти, что коррелирует с уровнем ^-2р-цепи рецептора. ^15 способен индуцировать CD154 на активированных CD4+-Т-лф без дополнительных сигналов от CD3- и CD28-молекул, повышая способность этих клеток взаимодействовать с АПК. Взаимодействие CD154 на Т-клетках с CD40 АПК активизирует реакции клеточного иммунного ответа. На поверхности активированных Т-лф CD154 участвует в их взаимодействии с ^М+-В-лф.
В процессе старения организма понижается количество наивных Т-лф и аккумулируются Т-клетки с низкой экспрессией молекулы CD28. К 80 годам около 50-60% CD8+-Т-лф лишены экспрессии CD28, в этот процесс могут вовлекаться и CD4+-Т-лф, что приводит к снижению иммунного ответа. Введение ^15 корректирует эту ситуацию, повышает функциональную активность Т-лф и число клеток с фенотипом CD4+ CD28+.
Под его влиянием повышается цитотоксическая активность киллерных CD4+CD28nullТ-клеток, в них накапливаются гранзим В и перфорин. ^15 является хемоаттрактантом для Т-лф. Он может индуцировать перераспределение межклеточных адгезивных молекул CD50 (ГСАМ-3) и в меньшей степени - ГСАМ-1, ГСАМ-2, CD43 и CD44 Т- лф. Ш5 также участвует в миграции Т-лф через эндотелий по LFA-1 (CD11a/ CD18)/ICAM -1-CD54) -механизму. Таким образом, ^15 принимает активное участие в гомеостазе Т-CD8+-лф, повышая их выживаемость, пролиферацию, цитотоксичность, регулируя процессы хоминга. ^15 ответственен за формирование и поддержание
CD8+-T-KneTOK памяти, а также сохранение приобретенного иммунного ответа на патогены.
Интраэпителиальные лимфоциты кишечника. Большая часть популяции лимфоцитов кишечного эпителия представлена СД8+-лф, для части из них важнейшим гомеостатическим фактором служит IL15. У мышей это в основном неклассические клетки, СД8аа, экспрессирующие либо TCRaP, либо TCRy5. В тимусе протекают только самые начальные этапы развития интраэпителиальных лимфоцитов кишечника (ILK), дальнейшая дифференцировка происходит в подслизистой оболочке кишечника. Число ILK резко понижается при нокауте гена IL15 [20].
Основным механизмом воздействия IL15 на ILK является транспрезентация негемапоэтическими клетками (уникальная особенность), при этом презентация гемопоэтическими клетками, в том числе циспрезен-тация, не является необходимой [48]. В эксперименте показано, что для поддержания популяции ILK необходимой и достаточной является экспрессия IL-15Ra энтероцитами кишечника, которые, по-видимому, и осуществляют презентацию цитокина in vivo [49]. При делеции гена IL-15Ra в эпителиоцитах кишечника на 50% снижается популяция TCRaP ILK и на 75% — TCRy5 ILK. IL15 влияет на выживание ILK: он увеличивает в них экспрессию Bcl-2, уровень которого коррелирует с количеством ILK. Предполагают, что IL15 может влиять на пролиферацию и созревание ILK.
Одной из черт фенотипа зрелых ILK является низкий уровень экспрессии Thy1. Экспрессия IL-15Ra на энтероцитах приводит к снижению экспрессии в ILK фенотипа CD8aa Thy1, также снижается экспрессия Thy1 предшественниками ILK, трансплантированными из тимуса. При отсутствии экспрессии IL-15Ra энтеро-цитами снижается экспрессия в ILK Tbet и эомезодер-мина. Эти эффекты не зависят от Bcl2. Данные факторы регулируют в классических CD8+- и в ЕК-клетках экспрессию IFNy, гранзима B, и перфорина, усиливая цитотоксичность. Вероятно, так же они действуют и в ILK, влияя на их функциональную активность.
Итак, IL15 регулирует ILK, влияя на их выживание, литическую активность, дифференцировку и, возможно, на пролиферацию. В то же время классические CD8+-клетки кишечного эпителия (СД44Ы-клетки памяти) мало чувствительны к IL15 за счет пониженной экспрессии IL2Rp. Нарушение гомео-стаза IL15 наблюдается при таких заболеваниях, как целиакия и неспецифические воспалительные заболевания кишечника [47].
В-клетки. IL15 не стимулирует покоящиеся В-лф, однако является костимулятором пролиферации активированных клеток. В сочетании с рекомбинант-ным CD40 он индуцирует секрецию поликлональ-ных IgM, IgG1 и IgA, но не приводит к продукции IgG4 и IgE. Стимуляция В-лф IL15 вызывает секрецию IFNy. В-лф способны сами вырабатывать IL15 под воздействием определенных факторов, таких, как IL12 и IL18. Установлено также, что стимуляция Ly49D-рецепторов у мышей запускает сигнальный
каскад активации транскрипции Ю2 и 1Ь18, которые через свои рецепторы стимулируют в В-лф продукцию 1Ь15. В конечном итоге все 3 ЦК регулируют секрецию №N7, который затем аутокринно ингиби-рует миграцию незрелых В-клеток в лимфатические узлы и в очаг воспаления [50]. Показано, что Ю5 понижает число В-лф в селезенке и костном мозге мышей. Так, у нокаутных по Ю5 мышей наблюдалось более высокое содержание В-лф, чем у мышей дикого типа. Эти результаты свидетельствуют о том, что 1Ы5 ингибирует В-клеточный гомеостаз и пролиферацию В-лф. Ю5 может регулировать В-лф посредством активации ЕК-клеток и секреции ими №N7 [51].
1Ы5 продуцируется фолликулярными ДК (ФДК), которые находятся в герминальных центрах и играют ключевую роль в регуляции выживаемости и диффе-ренцировки В-лф. 1Ы5 на поверхности ФДК захватывается 1Ь-15Яа и транспрезентируется В-лф через рецепторный комплекс 1Ь-2Яр и у на ЦПМ (1Ь-15Яа не экспрессируется на их ЦПМ), обеспечивая таким образом регуляцию активности В-клеток.
Эозинофилы. 1Ы5 регулирует выживаемость эо-зинофилов (Эо) путем снижения спонтанного апоп-тоза. В этих клетках ЦК индуцирует экспрессию NF-кB и стимулирует аутокринную продукцию ОМ-СБЕ Благодаря антиапоптотическому действию 1Е15 самостоятельно или в сочетании с TNFа способствует сохранению аллергического воспаления. Кроме непосредственного влияния на Эо, 1Е15 принимает опосредованное участие в процессе аллергического воспаления. В Т-лф (ТИ2) он индуцирует продукцию 1Е5, который в свою очередь рекрутирует и активирует Эо. При аллергических заболеваниях выявляли повышение уровня 1Е15 в сыворотке крови.
Тучные клетки. ТК происходят из предшественников CD34+-клеток в костном мозге, откуда они попадают в кровь и циркулируют как недифференцированные предшественники. 1Е15 может рекрутировать ТК из крови в ткани. ТК экспрессируют различные протеазы — химазы, триптазы и карбоксипептидазу А, которые в большом количестве находятся в секреторных гранулах клетки. Дегрануляция ТК приводит к выбросу активных продуктов — гистамина, гепарина, протеолитических ферментов. В развитии и пролиферации ТК принимают активное участие 1Е3 и БСЕ Установлено, что 1Е15 может служить ростовым фактором для этих клеток, поддерживать их пролиферацию. 1Е15 предохраняет ТК от апоптоза через БТАТ6-опосредованную экспрессию Ве1-ХЕ. Кроме того, через этот фактор транскрипции 1Е15 индуцирует продукцию 1Е4 ТК. Основной механизм проведения 1Е15-сигнала в ТК связан с активацией JAK2/STAT5- или Тук2/БТАТ6-механизмов в отличие от классического пути в Т-лф (ТАК1, JAK3, БТАТ3 и БТАТ5). Тучные клетки мигрируют в ответ на С5а, СЦ, БСЕ TGF-p, макрофагальный воспалительный белок (М1Р-1а), 1Е3, сывороточный амилоид-А(БАА). 1Е15 также является мощным хемоаттрактантом для ТК, но не вызывает их дегрануляцию. Анти-!Е15 антитела
блокируют миграцию ТК. Таким образом, 1Е15 является важным модулятором активности тучных клеток
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1Е15 — важнейший цитокин, играющий ключевую роль в реакциях врожденного и адаптивного иммунитета, особенно в противовирусной защите. Наибольшее влияние он оказывает на ЕК, Т-клетки и CD8+-T-клетки памяти. Благодаря провоспали-тельному и антиапоптотическому эффектам 1Е15 участвует в процессах созревания, выживания и диф-ференцировки не только иммунокомпетентных, но и многих других клеток. 1Е15 реализует свою биологическую программу, используя многообразные пути передачи сигнала, что, несомненно, важно для проявления его плейотропной активности.
Несмотря на то, что этот цитокин был открыт почти 2 десятилетия назад, остается много неясного в его биологии. Например: во всех ли случаях для реализации своих иммунных механизмов 1Е15 использует все цепи рецепторного комплекса? Не до конца понятна роль его транскрипта с коротким сигнальным пептидом. В каких случаях на поверхность цитоплазматической мембраны экспрессируется собранный внутри клетки комплекс цитокина с его а-цепью, а в каких случаях каждая молекула имеет свою историю? Несоответствие уровня экспрессии гена 1Е и количества его внутриклеточных транскриптов — еще одна загадка 1Е15. Является ли протеолитическое отщепление основным механизмом, регулирующим способ доставки 1Е15 к его мишеням?
1Е15 называют вездесущим цитокином, так как он активно экспрессируется множеством клеток в различных тканях и органах. Благодаря провоспалительному, пролиферативному и антиапоптотическому эффектам при нарушениях его продукции, расстройствах регуляции или сигналинга цитокин становится активным участником патогенеза многих заболеваний, включая инфекционные воспалительные, аутоиммунные и лим-фопролиферативные заболевания. Роль, которую 1Е15 играет при различных патологических состояниях, может быть диаметрально противоположной, поэтому и подходы к коррекции его активности различны.
В настоящее время разрабатываются и активно изучаются эффекты как рекомбинантной формы самого 1Е15, так и его антагонистов. В то же время надо отметить, что нередко изучаются только один или несколько параметров, отражающих продукцию цитокина, его кинетику, но не дающих полную картину функционирования 1Е15 (от экспрессии генов до транспрезентации рецепторного комплекса). Совершенно очевидна необходимость дальнейших фундаментальных и прикладных исследований 1Е15. Для этого чрезвычайно важно создание тест-систем нового поколения с широким спектром возможностей для оценки экспрессии как мРНК 1Е15, его а-рецептора, экспрессии мРНК р-и у- рецепторов 1Е2, изучения их полиморфизма, так и оценки содержания в биологических жидкостях не только свободной формы цитокина, его а-рецептора, но и рецепторного комплекса 1Е15.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Burton J.D., Bamford R.N., Peterset C. et al. A lymphokine, provisionally designated in-terleukin T and produced by a human adult T-cell leukemia line, stimulates T-cell proliferation and the induction of lymphokine-acti-vated killer cells. PNAS. 1994; 91 (11): 4935-9.
2. Giril J.G., Minoo A., Eisenman J. et al. Utilization of the beta and -y chains of the IL-2 receptor by the novel cytokine IL-15. The EMBO Journal. 1994; 13 (12): 2822-30.
3. Grabstein K.H., Eisenman J., Shanebeck K. et al. Monocytes differentiated with GM-CSF and IL-15 initiate Th17 and Th1 responses that are contact-dependent and mediated by IL-1. J. Leukoc. Biol. 2011; 90: 727-34.
4. Mami C., Hayashi C., Nakamura T. et al. Cloning of a T cell growth factor that interacts with the beta chain of the inter-leukin-2 receptor. Science 13 May 1994: Vol. 264 no. 5161 pp. 965-8.
5. Bergamaschi C., Jalah R., Kulkarni V et al. Crystal structure of the IL-15-IL-15R complex, a cytokine-receptor unit presented in trans. Nature Immunology. 2007, vol. 8, №9, p. 1001-7.
6. Olsen Shaun K., Naruhisa O., Seiichiro K. et al. Crystal Structure of the Interleukin-15'Interleukin-15 Receptor a Complex: insights into trans and cis presentation. J. Biol. Chem. 2007; 282: 37191-204.
7. Berard M., Brandt K., Bulfone-Paus S. et al. IL-15 promotes the survival of naive and memory phenotype CD8T cells. J. Immunol. 2003; 170: 5018-26.
8. Jérôme B., Harb C., Mortier E. et al. Identification of an Interleukin-15a Receptor-binding Site on Human Interleukin-15. J. Biol. Chem. 2004; 279: 24313-22.
9. Lee Y.B., Nagai A., Kim S.U. Cytokines, chemokines, and cytokine receptors in human microglia. J Neurosci Res. 2002; 69 (1): 94-103. 188.
10. Waldmann T.A. The biology of interleukin-2 and interleukin-15: implications for cancer therapy and vaccine design. Nature. Reviews Immunology. 2006; 6: 595-601.
11. Bergamaschi C., Jalah R., Kulkarni V. et al. Secretion and biological activity of short signal peptide IL-15 Is chaperoned by IL-15 receptor alpha in vivo. J. Immunol. 2009; 18: 3064-72.
12. Schluns K.S., Nowak E.C., Cabrera-Hernandez A. et al. Distinct cell types control lymphoid subset development by means of IL-15 and IL-15 receptor alpha expression. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2004; 101: 5616-21.
13. Noguchi M., Yi H., Rosenblatt H.M. et al. Interleukin-2 receptor gamma chain mutation results in X-linked severe combined immunodeficiency in humans. Cell. 1993; 73 (1): 147-57.
14. Mortier E., Quéméner A., Vusio P. et al. Soluble interleukin-15 receptor a (IL-15Ra)-sushi as a selective and potent agonist of IL-15 action through IL-15Rß/y: HYPERAGONIST IL-15'IL-15Ra FUSION PROTEINS. J. Biol. Chem. 2006; 281: 1612-9.
15. Bergamaschi C., Rashmi J., Viraj K. et al. Intracellular interaction of interleukin-15 with its receptor a during production leads to mutual stabilization and increased bio-activity. J. Biol. Chem. 2008; 283: 4189-99.
16. Chenoweth M.J., Mian M.F., Barra N.G. et al. IL-15 can signal via IL-15Ra, JNK, and NF-kB to drive RANTES production by myeloid
cells. J. Immunol. 2012; 188: 4149-57.
17. Bulfone-Paus S., Bulanova E., BudagianV. et al. The interleukin-15/interleukin-15 receptor system as a model for juxtacrine and reverse signaling. BioEssays. 2006; 28 (4): 362-77.
18. Weihong P., Xiaojun W., Yi H. et al. Brain interleukin-15 in neuroinflammation and behavior. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 2013; 37: 184-92.
19. Bergamaschi C., Bear J., Rosati M. et al. Circulating IL-15 exists as heterodimeric complex with soluble IL-15Ra in human and mouse serum. Blood. 2012; 5 (120 (1)): 1-8.
20. Castillo E.F., Stonier S.W., Acero L.F. et al. Thymic and peripheral microenvironments differentially mediate development and maturation of iNKT cells by IL-15 transpre-sentation. Blood. 2010; 116: 2494-503.
21. Bulanova E., Budagian V., Pohl T. et al. The IL-15Ra chain signals through association with Syk in human B cell. J. Immunol. 2001; 170: 5045-55.
22. Masuda A., Matsuguchi T., Yamaki K. et al. Interleukin-15 prevents mouse mast cell apoptosis through STAT6-mediated Bcl-xL expression. J. Biol. Chem. 2001; 276: 26107-13.
23. Budagian V., Bulanova E., Orinska Z. et al.
A promiscuous liaison between IL-15 receptor and Axl receptor tyrosine kinase in cell death control. EMBO J. 2005; 24: 4260-70.
24. Davey G.M., Starr R., Cornish A.L., Burghardt J.T., Alexander W.S., Carbone F.R., Surh C.D., Heath WR. SOCS-1 regulates IL-15-driven homeostatic proliferation of antigen-naive CD8 T cells, limiting their autoimmune potential. J. Exp. Med. 2005. Oct. 17; 202 (8): 1099-108. Epub. 2005. Oct. 10.
25. Mishra A., Liu S., Sams G.H. et al. Aberrant overexpression of IL-15 initiates large granular lymphocyte leukemia through chromosomal instability and DNA hypermethyla-tion. Cancer Cell. 2012; 22 (5): 645-55.
26. Kelemen O., Convertini P., Zhang Z. et al. Function of alternative splicing. Gene. 2013; 514: 1-30.
27. Diniz S.N., Pendeloski K.P., Morgun A. et al. Tissue-specific expression of IL-15RA alternative splicing transcripts and its regulation by DNA methylation. Eur Cytokine Netw 2010; 21 (4): 308-18.
28. Müller J.R., Waldmann T.A., Kruhlak M.J. et al. Paracrine and Transpresentation Functions of IL-15 Are Mediated by Diverse Splice Versions of IL-15Ra in Human Monocytes and Dendritic Cells. J. Biol. Chem. 2012; 287: 40328-38.
29. Dubois S., Mariner J., Waldmann T.A. et al. IL-15Ralpha recycles and presents IL-15 In trans to neighboring cells. Immunity. 2002; 17: 537-47.
30. Mortier E., Advincula R., Kim L. et al. Macrophage and dendritic-cell-derived interleukin-15 receptor alpha supports homeostasis of distinct CD8(+) T cell subsets. Immunity. 2009; 31: 811-22.
31. Castillo E.F., Kimberly S.S. Regulating the immune system via IL-15 transpresentation. Cytokine. 2012; 59: 479-90.
32. Budagian V., Bulanova E., Orinska Z. et al. Reverse Signaling through Membrane-bound Interleukin-15. J. Biol. Chem. 2004; 279:42192-201.
33. Regamey N., Obregon C., Ferrari-Lacraz S. et al. Airway epithelial IL-15 transforms monocytes into dendritic cells. Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 2007; 37 (1): 75-84.
34. Vujanovic L., Szymkowski D.E., Alber S. et al.
Virally infected and matured human dendritic cells activate natural killercells via cooperative activity of plasma membrane-bound TNF and IL-15. Blood. 2010; 116: 575-83.
35. McDonald P.P., Russo M.P., Ferrini S. et al. In-terleukin-15 (IL-15) induces NF-kB activation and IL-8 production in human neutrophils. Blood. 1998; 92: 4828-35.
36. Abdel-Salam B.K., Ebaid H. Upregulation of major histocompatibility complex class II, CD83, CD64, and CD14 on polymorphonuclear neutrophils stimulated with interleukin-15. J. Microbiol. Immunol. Infect. 2008; 41: 462-8.
37. Cooper M.A., Bush J.E., Fehniger T.A. et al. In vivo evidence for a dependence on interleukin 15 for survival of natural killer cells. Blood. 2002; 100: 3633-38.
38. Park J.Y., Lee S.H., Yoon S.R. et al. IL-15-in-duced IL-10 increases the cytolytic activity of human natural killer cells. Mol. Cells. 2011; 32: 265-72.
39. Verbist K.C., Klonowski K.D. Functions of IL-15 in anti-viral immunity: multiplicity and variety. Cytokine. 2012; 59 (3): 467-78.
40. Zhang C., Zhang J., Niu J., Zhang J. et al. Interleukin-15 improves cytotoxicity of natural killer cells via up-regulating NKG2D and cytotoxic effector molecule expression as well as STAT1 and ERK1/2 phosphorylation. Cytokine. 2008; 42 (1): 128-36.
41. Bianchi T., Gasser S., Trumpp A. et al. c-Myc acts downstream of IL-15 in the regulation of memory CD8 T-cell homeostasis. Blood. 2006; 107 (10): 3992-9.
42. Smeltz R.B. Interleukin-15 (IL-15) enhances, as well as increases the sensitivity of human CD8+ memory T cell subsets to stimulation by the pro-inflammatory cytokines IL-12 and IL-18. J. Immunol. 2007; 178: 95.3.
43. Stonier S.W., Ma L.J., Castillo E.F. et al. Dendritic cells drive memory CD8 T-cell homeostasis via IL-15 transpresentation. Blood. 2008; 112 (12): 4546-54.
44. Cornish G.H., Sinclair L.V., Cantrell D.A. Differential regulation of T-cell growth by IL-2 and IL-15. Blood. 2006; 108 (2): 600-8.
45. Bianchi T., Gasser S., Trumpp A. et al. c-Myc acts downstream of IL-15 in the regulation of memory CD8 T cell homeostasis. Blood. 2006; 107: 3992-9.
46. Tamang D.L., Redelman D., Alves B.N. et al. Induction of granzyme B and T cell cytotoxic capacity by IL-2 or IL-15 without antigens: Multiclonal responses that are extremely lytic if triggered and short-lived after cytokine withdrawal. Cytokine. 2006; 36 (3-4): 148-59.
47. Mori A., Suko M., Kaminuma O. et al. IL-15 promotes cytokine production of human T helper cells. J. Immunol. 1996; 156 (7): 2400-5.
48. Ma L.J., Acero L.F., Zal T. et al. Trans-presentation of IL-15 by intestinal epithelial cells drives development of CD8alphaalpha IELs. J. Immunol. 2009; 183: 1044-54.
49. Reinecker H.C., MacDermott R.P., Mirau S. et al. Intestinal epithelial cells both express and respond to interleukin 15. Gastroenter-ology. 1996; 111 (6): 1706-13.
50. Hart G., Avin-Wittenberg T., Shachar I. IL-15 regulates immature B-cell homing in an Ly49D-, IL-12 and IL-18 dependent manner. Blood. 2008; 111 (1): 50-9.
51. Gill N., Paltser G., Ashkar A.A. Interleukin-15 expression affects homeostasis and function of B cells through NK cell-derived interferon-gamma. Cell Immunol. 2009; 258 (1): 59-64.
Поступила 16 октября 2013 г.
